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ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA


PRACTICA N. O5
JESUS MEJIA TORBISCO
CURSO BIOQUIMICA MEDICA

INTRODUCCION
La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene
fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el
hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en
sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el
hgado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el
pncreas.
La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al
combinarlo con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la sangre se
eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora
que es la insulina producida por el pncreas (islotes pancreticos). Esta hormona hace
que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucgeno,
aminocidos, y cidos grasos. Cuando la glucosa en sangre est muy baja, en
condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagn que hace
lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre.
Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situacin se
mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos rganos. Esta es la razn
principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras
enfermedades y alteraciones que tambin la provocan.
El tejido ms sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones
muy bajas o muy altas aparecen sntomas de confusin mental e inconsciencia.

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CURSO BIOQUIMICA MEDICA

MARCO TEORICO
Experimento A:
DETERMINACIN DIRECTA DE LA GLICEMIA (concentracin de glucosa en suero)
FUNDAMENTO TERICO
Como se ha indicado, la diabetes dependiente de insulina cursa con un aumento de la
concentracin de glucosa en sangre (glicemia), que se produce de manera repentina y
adems es severa. Una hiperglicemia superior a 124 mg/dL detectada en ms de una
ocasin en ayunas, adems se considera tambin un valor mayor a 200 mg/dl en
cualquier momento son indicativos de posible diabetes, diagnstico que debe confirmarse
con otras pruebas.
La determinacin de glucosa sangunea es una prueba muy
frecuente en bioqumica y se puede llevar a cabo tanto por mtodos qumicos como
enzimticos, siendo estos ltimos los ms especficos.
Hay dos tipos de mtodos qumicos:
1. Reducimtricos, que se basan en la capacidad reductora de la glucosa. Debido a la
presencia en la muestra de otros compuestos reductores, estos mtodos dan cifras
superiores a las correspondientes a la glucosa verdadera. Ejemplos son el mtodo de
Folin-Wu y el de Somogy-Nelson. 2. Furfurlicos: se basan en la capacidad de la glucosa
para formar furfural al sufrir deshidratacin en un medio cido. Un ejemplo es el mtodo
que emplea orto-toluidina.
En cuanto a los mtodos enzimticos:
a. Mtodo de la hexoquinasa: emplea las enzimas hexoquinasa y glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa. Por cada molcula de glucosa se forma una de NADPH, que puede
medirse espectrofotomtricamente a 340 nm. Es el mtodo de referencia recomendado
por las organizaciones internacionales. b. Mtodo de glucosa oxidasa y peroxidasa
(GOD-POD): es el que se utiliza en esta prctica para medir los niveles de glucosa
sangunea de la muestra problema y de los standares. Se explica a continuacin:
En el mtodo GOD-POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la
D- glucosa a cido D-glucnico con formacin de perxido de hidrgeno. ste es utilizado
por la peroxidasa para oxidar a la 4-aminofenazona y al fenol, dando lugar a una
quinonaimina coloreada. La intensidad de color ser proporcional a la concentracin de
glucosa presente inicialmente. El esquema de la reaccin es el siguiente:

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OBJETIVO

Determinar experimentalmente cuantitativa e individualmente la glucosa en suero


con ayuda de la tcnica de espectrofotometra
Realizar experimental la determinacin de glucosa en la muestra de orina

MATERIALES
Tubos de ensayo de 10 ml.
Pipetas. Espectrofotmetro.
Agua destilada.
Solucin patrn de glucosa (100 mg/dl)
Reactivo de color de glucosa, que contiene: Glucosa oxidasa, peroxidasa, 4aminofenazona, fenol, tampn fosfato pH: 7.0

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PROCEDIMIENTO

RX
AGUA
ESTANDAR
MUESTRA

BLANCO
3ml
30ul
---------

ESTANDAR
3ml
----30ul
-----

Mezclar llevar a bao mara 75 s llevar y leer a 500nm

Resultados: Tubo I =
Tubo II =
Tubo III =

MUESTRA
3ml
--------30ul

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VALORES NORMALES
La glicemia normal en ayunas es de 70 a 110 mg/dl.
Para el diagnstico de diabetes se considera un valor mayor de glicemia en
ayunas de 124 mg/dl mayor de 200 mg/dl en cualquier momento. Los pacientes
cuyos niveles de glucosa se encuentren entre lo normal y lo diabtico, son
clasificados en una categora denominada tolerancia alterada a la glucosa y
requieren observacin y pruebas confirmatorias.

Experimento B:

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INVESTIGACIN CUALITATIVA DE GLUCOSA EN ORINA


FUNDAMENTO TEORICO
En estado normal no existen cantidades detectables de glucosa en orina, por lo menos
con los mtodos habitualmente utilizados en el laboratorio. La glucosuria (presencia de
glucosa en orina) se presenta en la diabetes mellitus pero cuando se supera el umbral
renal de glucosa que ocurre cuando la glicemia es mayor de 180 mg/dl.
Para la deteccin cualitativa de glucosa en orina se basa en la accin de la glucosa, que
reduce las sales de cobre en medio alcalino por ebullicin. Para ello utilizaremos el
reactivo de Benedict el cual contiene: sulfato de cobre, citrato de sodio y carbonato de
sodio.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo de 20 ml.
Pipetas. Mechero de Bunsen.
Reactivo de Benedict.
Pinzas porta tubos.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

MUESTRA
Orina normal
Orina DM
Rx benedic

I
5ml
--2ml

II
--5ml
2ml

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CONCLUSIONES
La prueba est por arriba de los niveles normales (70-11o mg/dl) mostrando en el donante
un valor de (71 mg/dl), Con esta prueba pudimos observar la facilidad con la que se
puede diagnosticar un problema en la regulacin de la glicemia y lo importante que resulta
en la clnica en especial para pacientes con Diabetes Mellitus para llevar un control ya que
es una enfermedad incurable solo es controlable a travs de sus niveles de glucosa
sangunea.
Se determin mediante la prueba cualitativa de glucosa en orina comprobar la presencia
de glucosa y hacer una comparacin del color que adopta la reacion frente a la presencia
de glucosa en la orina

CUESTIONARIO

1.- Qu es la diabetes mellitus y como se diagnostica desde el punto de vista del


laboratorio?
La diabetes es una enfermedad crnica que aparece cuando el pncreas no produce
insulina suficiente o cuando el organismo no utiliza eficazmente la insulina que
produce. La insulina es una hormona que regula el azcar en la sangre. El efecto de la
diabetes no controlada es la hiperglucemia (aumento del azcar en la sangre), que con
el tiempo daa gravemente muchos rganos y sistemas, especialmente los nervios y
los vasos sanguneos.
Diabetes de tipo 1
La diabetes de tipo 1 (tambin llamada insulinodependiente, juvenil o de inicio en la
infancia). Se caracteriza por una produccin deficiente de insulina y requiere la
administracin diaria de esta hormona. Se desconoce an la causa de la diabetes de
tipo 1, y no se puede prevenir con el conocimiento actual.
Sus sntomas consisten, entre otros, en excrecin excesiva de orina (poliuria), sed
(polidipsia), hambre constante (polifagia), prdida de peso, trastornos visuales y
cansancio. Estos sntomas pueden aparecer de forma sbita.
Diabetes de tipo 2
La diabetes de tipo 2 (tambin llamada no insulinodependiente o de inicio en la edad
adulta). Se debe a una utilizacin ineficaz de la insulina. Este tipo representa el 90% de
los casos mundiales y se debe en gran medida a un peso corporal excesivo y a la
inactividad fsica.
Los sntomas pueden ser similares a los de la diabetes de tipo 1, pero a menudo
menos intensos. En consecuencia, la enfermedad puede diagnosticarse slo cuando
ya tiene varios aos de evolucin y han aparecido complicaciones.
Hasta hace poco, este tipo de diabetes slo se observaba en adultos, pero en la
actualidad tambin se est manifestando en nios.

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Diabetes gestacional
La diabetes gestacional es un estado hiperglucmico que aparece o se detecta por vez
primera durante el embarazo.
Sus sntomas son similares a los de la diabetes de tipo 2, pero suele diagnosticarse
mediante las pruebas prenatales, ms que porque el paciente refiera sntomas.
2.- Explique en qu consiste el umbral renal y la tasa de reabsorcin de la glucosa
Cuando la glucosa en sangre aumenta hasta cifras relativamente altas, los riones
tambin ejercen un efecto regulador, los glomrulos filtran de manera continua la glucosa,
pero en circunstancias normales se resorbe por completo en los tbulos renales mediante
transporte activo. La capacidad del sistema tubular para resorber glucosa est limitada a
un ndice alrededor de 2mmol/min y en la hiperglucemia (como ocurre en la diabetes
mellitus mal controlada ) el filtrado glomerular puede contener ms glucosa que la que es
posible resorber lo que da por resultado glucosuria
3.- Describa los mtodos que existen para el dosaje de la glicemia.
Hay dos tipos de mtodos qumicos:
1. Reducimtricos, que se basan en la capacidad reductora de la glucosa. Debido a la
presencia en la muestra de otros compuestos reductores, estos mtodos dan cifras
superiores a las correspondientes a la glucosa verdadera. Ejemplos son el mtodo de
Folin-Wu y el de Somogy-Nelson. 2. Furfurlicos: se basan en la capacidad de la glucosa
para formar furfural al sufrir deshidratacin en un medio cido. Un ejemplo es el mtodo
que emplea orto-toluidina.
En cuanto a los mtodos enzimticos:
a. Mtodo de la hexoquinasa: emplea las enzimas hexoquinasa y glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa. Por cada molcula de glucosa se forma una de NADPH, que puede
medirse espectrofotomtricamente a 340 nm. Es el mtodo de referencia recomendado
por las organizaciones internacionales. b. Mtodo de glucosa oxidasa y peroxidasa
(GOD-POD): es el que se utiliza en esta prctica para medir los niveles de glucosa
sangunea de la muestra problema y de los standares. Se explica a continuacin:

4.- Explique el mecanismo de accin de los reactivos de Benedict y de Fehling.


Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes
suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo
carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos
azcares con un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los
que el grupo carbonilo se
Encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no reductores

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Existen varias reacciones qumicas que permiten determinar si se est en presencia de un


azcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la
reaccin o no de un azcar con el ion Cu2+
El fundamento de esta reaccin radica en que en un medio alcalino, el ion cprico
(otorgado por el sulfato cprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo Aldehdo del
azcar (CHO) a su forma de Cu +. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo
ladrillo correspondiente al xido cuproso (Cu2O).
FEHLING:
El reactivo de Fehling se utiliza para la deteccin de sustancias reductoras,
particularmente azcares reductores. Se basa en el poder reductor del grupo carbonilo de
un aldehdo que pasa a cido reduciendo la sal cprica de cobre (II), en medio alcalino, a
xido de cobre (I). ste forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta
reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy
pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice
que es un azcar reductor
5.- Que son la hemoglobina glicosilada y la fructosamina y cul es su importancia en la
diabetes?
Un gran porcentaje de los pacientes con diabetes, con tal de no recibir ninguna llamada
de atencin por parte de su mdico se cuidan das previos a sus exmenes de laboratorio,
provocando que sus niveles de glucosa sean menores a los que manejan da a da,
desconociendo que existe una prueba que puede indicar cual ha sido el promedio de
glucosa que han tenido en los ltimos tres meses. Esta prueba es la hemoglobina
glucosilada.
El examen de hemoglobina glucosilada (HbA1c) le sirve al mdico para determinar como
ha sido el control glucmico de una persona con diabetes en los ltimos tres meses. Por
esta razn se recomienda hacer esta prueba cada tres meses y una ventaja es que no se
requiere estar en ayuno para hacerla.
La glucosa se une a la hemoglobina para formar hemoglobina glucosilada o hemoglobina
A1c, esta unin se mantiene hasta que el glbulo rojo es desechado, lo cual ocurre en
aproximadamente 120 das. Cuando los niveles de glucosa aumentan, tambin se
incrementa la hemoglobina A1c.
FRUCTOSAMINA
El mismo mecanismo de incorporacin de la glucosa a la hemoglobina ocurre con otros
elementos presentes en el organismo.Uno de estos compuestos que tambin incorporan
glucosa
a
su
molcula
son
las
protenas
plasmticas.
Al unirse la glucosa a las protenas, stas modifican su estructura y sus propiedades,
convirtindose en otro producto distinto, que recibe el nombre de fructosamina. Por lo
tanto, la concentracin de fructosamina en el suero del paciente reflejar, igual que en el
caso de la hemoglobina glicosilada, el grado de control que ha tenido durante un tiempo
determinado.
En el caso de la fructosamina, como las protenas se renuevan cada dos o tres semanas,
conoceremos lo que ha ocurrido durante ese lapso ms corto.

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BIBLIOGRAFIA

1. Murray, Mayes, Granner, Rodwell. Bioqumica de Harper, Editorial Manual Moderno,


15ava. Edicin, 2001.Pginas consultadas: 243 a 254, 700 a 715.
2. Laguna Jos, Pia Enrique. Bioqumica, JGH Editores, 4ta. Edicin, 1990. Pginas
Consultadas: 218 a 223.
3. Guyton A.C., Fisiologa Mdica, Editorial Interamericana, 5ta Edicin, 1977. Pginas
Consultadas: 8980 a 902.
Edmundo Sterling

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