TECNOLGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES

DE ECATEPEC
Divisin de Ingeniera Bioqumica y Qumica

INGENIERA EN BIOERRACTORES.

Prctica N1: ESTUDIO CINTICO DE UNA ENZIMA.

Alumnos:

Contreras Rocha Diana Laura.

Garca Hernndez Mariana Daniela.

Lugo Barbosa Julieta Monserrat.

Monjaraz Bolaos Damian.

Prez Vzquez Carlos Eduardo Jacobo.

Rodriguez Lopez Dante Alexander

Soria Flores Mara Fernanda

Profesor: Martin Rogelio Cruz Daz

Grupo: 3701

01 de Marzo del 2016

ndice
INTRODUCCION................................................................................................... 4
OBJETIVO GENERAL............................................................................................. 5
OBJETIVOS ESPECIFICOS.................................................................................. 5
ANTECEDENTES.................................................................................................. 6
MATERIALES Y METODOS.................................................................................... 8
Material............................................................................................................ 8
Reactivos......................................................................................................... 8
Procedimiento experimental.......................................................................8
DISEO DE EXPERIMENTO.................................................................................. 9
Referencias Bibliogrficas................................................................................... 9

Introduccin
Una reaccin qumica puede ser reversible es decir la reaccin puede cumplirse
en una u otra direccin, o irreversible, en la cual unos de los productos abandonan
la reaccin. Por su parte tambin existen dos clases de reacciones: Endergonica,
en la que Se absorbe ms energa de la que se libera, o Exergonica, donde se
libera ms energa de la que se absorbe. En ambos casos las reacciones en las
que ocurre con una determinada velocidad se le conoce como cintica qumica o
enzimtica, la cual mide la velocidad de reaccin. A su vez la cintica Enzimtica
estudia la rapidez de una reaccin, la cual suele expresarse en trminos de un
cambio en la concentracin de un reactivo o de un producto en un intervalo de
tiempo. La rapidez de reaccin se puede expresar en trminos de la rapidez de
desaparicin de los reactivos o la rapidez de aparicin de producto(s). La reaccin
enzimtica aplicada experimentalmente en esta prctica ser la de la catalasa con
el perxido de hidrogeno. El perxido de hidrogeno es un producto qumico que se
produce continuamente como subproducto en las reacciones de las clulas vivas;
es toxico y la clula debe descomponerlo inmediatamente antes de que la
destruya, esta reaccin recibe ayuda de un catalizador, mismo conocido
enzimticamente como catalasa. La enzima catalasa se encuentra en la mayora
de los seres vivos: es un ejemplo de enzima que contiene una pared proteica y
otra no proteica. La pared proteica de la catalasa est unida a una molcula de
una sustancia que contiene hierro llamada Hem. Solo cuando el Hem est unido a
la protena especifica de la catalasa ayuda a catalizar la descomposicin del
Perxido de Hidrogeno. Es por esta razn que en esta prctica se llevar a cabo la
reaccin enzimtica de la catalasa con el perxido de hidrogeno midiendo las
concentraciones del producto en un determinado tiempo.
Objetivo general
Analizar la actividad de reaccin de la enzima catalasa en funcin de las diferentes
concentraciones de H2O2 suministradas.
Objetivos especficos

Medir la produccin de oxgeno gaseoso a medida que se destruye el

perxido de hidrgeno por la accin de la enzima catalasa.

Determinar la velocidad de la reaccin efectuada de acuerdo a los

resultados obtenidos.

ANTECEDENTES.
Las enzimas son protenas globulares responsables de la mayor parte de la
actividad qumica de los organismos vivos. Actan como catalizadores, que son
sustancias que regulan las reacciones qumicas sin ser destruidas o alteradas
durante el proceso.
Si el ambiente donde se encuentra la enzima es demasiado cido o demasiado
bsico, la enzima puede desnaturalizarse de forma irreversible o transformarse de
modo que su forma no le permita ms realizar su funcionamiento apropiado.
El perxido de hidrgeno se forma por la dismutacin del radical su perxido y
tambin en la reaccin de algunas oxidasas. Hay varias enzimas capaces de
degradar el perxido de hidrgeno. La catalasa es una de estas enzimas, la cual
se encarga de catalizar la descomposicin de perxido de hidrgeno, formado por
la reaccin del ion radical superxido (oxidacin metablica de grasas y
carbohidratos) y la enzima superxido dismutasa, en oxgeno y agua, ya que este
sigue siendo txico para el organismo.
Mediante la accin de la enzima el H 2O2 se convierte en oxgeno y agua segn la
siguiente reaccin:
2 H 2 O2 catalasa 2 H 2 O+O2

Las peroxidasas eliminan el H2O2 usndolo para oxidar otros sustratos. A

diferencia de las otras enzimas, que requieren de un sustrato reducido, las
catalasas dismutan el perxido de hidrgeno. Se han identificado tres grupos de
catalasas:

Las catalasas mono funcionales, que contienen hemo y estn presentes

tanto en los organismos procariotas como en los eucariotas.
el Mn-catalasa, que son enzimas hexamricas que no tienen hemo, tienen
Mn en el sitio activo y slo estn presentes en algunos organismos
procariotas anaerobios
Las catalasas-peroxidasas, que tienen actividad de catalasa y de
peroxidasa, contienen hemo y slo estn presentes en las bacterias y los
hongos.

Mecanismo de reaccin.
En la reaccin de la catalasa ocurre la transferencia de dos electrones entre dos
molculas de perxido de hidrgeno en la cual una funciona como donador y otra
como aceptor de electrones. El mecanismo de reaccin se lleva a cabo en dos
pasos.
En el primero la catalasa se oxida por una molcula de perxido formando un
intermediario llamado compuesto I. El compuesto I se caracteriza por tener un
grupo ferroxilo con FeIV y un radical catinico de porfirina. En esta reaccin se
produce una molcula de agua (Reaccin 1).
En el segundo paso de la reaccin, el compuesto I es reducido por otra molcula
de perxido regresando la catalasa a su estado inicial y produciendo agua y
dioxgeno (Reaccin 2).
Enz ( Por . Feiii ) + H 2 O2 Compuesto I ( Por+ . Feiv .O ) + H 2 O
Compuesto I ( Por+ . Feiv . O ) + H 2 O2 Enz ( Por . Feiii ) + H 2 O2+ O2
Compuesto I ( Por+ . Feiv . O ) +CH 3 CH 2 OH Enz ( Por . Fe iii ) +CH 3 CHO+ H 2 O

En ciertas condiciones el compuesto I puede captar un electrn originando el

compuesto II. El compuesto II tiene un estado de oxidacin intermedio a los
observados en el compuesto I y la catalasa en reposo. Al reaccionar con una
molcula de H2O2 forma el compuesto III, que tiene un estado de oxidacin FeVI.
El compuesto II y el compuesto III son inactivos cataliticamente.
En la reaccin de peroxidasa de la catalasa, el compuesto I puede oxidar el
metanol, el etanol, el formato o el nitrato utilizando una molcula de H 2O2 como
oxidante (5).
Esta reaccin de descomposicin es de orden cero con tiempos cortos de reaccin
a concentraciones relativamente altas de catalasa. La funcin de la catalasa se
lleva a cabo de mejor manera en un pH de 7, y se desnaturaliza arriba de un pH
de 10. As como el pH, existen otros factores que pueden alterar la reacciones, tal
como a temperatura, concentraciones e inhibidores
La rapidez de una reaccin puede estudiarse de muy diversas formas como:

Midiendo la presin de los productos que aparecen (en este caso, O 2)

Midiendo la velocidad de desaparicin del substrato (en este caso, H 2O2)

Midiendo la velocidad de aparicin del producto (en este caso, O 2 que se

desprende como gas).

A medida que se destruye el perxido, queda menos para reaccionar y el O 2 se

produce a menor velocidad. Cuando se termina el perxido ya no se produce ms
O2.
El procedimiento tpico para estudiar la cintica de la reaccin involucra medir los
cambios de la presin en la reaccin a travs del tiempo, a encontrar la rapidez
dela reaccin dada por:
rapidez=

1 P
RT t

Donde R es la constante del gas ideal y T la temperatura a la que se llev a cabo

la reaccin, como bien podemos observar en la ecuacin, porqu la velocidad est
dada por el cambio de la presin con respecto al tiempo, la mejor forma de medir
la rapidez es midiendo la pendiente de los datos medidos de estas variables.
Diseo experimental
Matraz
1
2
3
4
5

Catalasa
0.1

H2O2 ml
1
2
3
4
5

Metodologa
Procedimiento experimental

1. Para que el pH no sea un factor que altere la reaccin se prepara una solucin
amortiguadora de fosfato de potasio usando 1.08g del monobsico y 0.49g del di
bsico en 100ml de agua destilada, obteniendo un pH de7.
2. Se prepara una solucin de catalasa con 0.01g aforando a 50 ml de agua destilada
3. Se utilizaran diferentes volmenes de perxido de hidrgeno los cuales sern de 0
a 5ml.
4. En el matraz kitazato donde se lleva a cabo la reaccin, se conecta una manguera
de plstico; la cual servir para desplazar el agua de la probeta una vez liberado el
oxgeno de la reaccin
5. Aadir 50 ml de agua destilada y un mililitro de la solucin amortiguadora al matraz
kitazato

6. Montar el equipo necesario para medir el volumen del O 2 producido por la

reaccin.Se medir el volumen del gas mediante la tcnica volumendesplazamiento donde se llenar una probeta con agua, una vez llena se tapa con
una hoja de papel y se voltea en una tina de agua, sin dejar la probeta con
burbujas, una vez dentro se introduce una manguera que va conectada con el
matraz kitazato en donde se llevara a cabo la reaccin.

7. Una vez listo el material donde se medir el gas; se procede a llevar acabo la
reaccin, se pone el matraz kitasato en la parrilla de calentamientocon agitacin y
se le aade la solucin perxido de hidrogeno y catalasa de acuerdo al diseo
experimental, inmediatamente despus de combinarlos, poco a poco el gas pasar
por la manguera llenando as la probeta con oxgeno.
8. El experimento se realizara con diferentes concentraciones de perxido de
hidrogeno para posteriormente realizar los clculos necesarios para conocer la
velocidad de reaccin.
9. Se realizaran graficas con los datos obtenidos.

Materiales y equipo.
Parrilla de calentamiento
Matraz kitazato
Probeta
Tina de plstico
Manguera
Tapnde hule
Jeringas
Piseta
Vasos de presipitados

Reatictivos

Catalasa
Agua destilada
Perxido de hidrgeno
Sol. Amortiguadora

Resultados

2ml H2O2
Tiempo
(min)

Volumen
desplazado (L)

Presin
(atm)

0.99777

Temperatur
Volumen
n (moles)
a (K)
total (L)

[O2] (M)

298.15

0
0.027
0
3.2626E0.00012
0.1
0.00008
0.99777
298.15
06
0.027
08
0.000114
0.00422
0.2
0.0028
0.99777
298.15
19
0.027
93
0.000277
0.01027
0.3
0.0068
0.99777
298.15
32
0.027
12
0.000440
0.01631
0.4
0.0108
0.99777
298.15
45
0.027
31
0.000522
0.01933
0.5
0.0128
0.99777
298.15
02
0.027
41
0.000603
0.02235
1
0.0148
0.99777
298.15
59
0.027
5
0.000644
0.02386
1.1
0.0158
0.99777
298.15
37
0.027
55
0.000644
0.02386
1.2
0.0158
0.99777
298.15
37
0.027
55
Tabla 1: Se agregaron 2ml de sustrato (Perxido de Hidrogeno) obteniendo un
desplazamiento de 0L a 0.0158 en el minuto 1.2. En base a esto, por medio de
la ley de gases ideales se obtuvo la cantidad de moles obtenida en esta
reaccin dividiendo as por el volumen total de la reaccin, obteniendo las
concentraciones en Molaridad (Elaboracin propia, 2016).
3ml H2O2
Tiempo
(min)

Volumen
desplazado (L)

Presin
(atm)

0.99777

0.06

0.01

0.99777

0.12

0.018

0.99777

0.18

0.023

0.99777

0.2

0.026

0.99777

Tempertura
Volumen
n (moles)
(K)
total (L)
298.15
298.15
298.15
298.15
298.15

0
0.000407
83
0.000734
09
0.000938
01
0.001060
35

0.028
0.028
0.028
0.028
0.028

[O2] (M)
0
0.01456
53
0.02621
75
0.03350
02
0.03786
98

0.001305
0.04660
05
0.028
9
0.001468
0.05243
0.32
0.036
0.99777
298.15
18
0.028
51
0.001876
0.06700
0.38
0.046
0.99777
298.15
01
0.028
04
0.001916
0.06845
0.44
0.047
0.99777
298.15
79
0.028
69
Tabla 2: Se agregaron 3ml de sustrato (Perxido de Hidrogeno) obteniendo un
desplazamiento de 0L a 0.047 en el minuto 0.44. En base a esto, por medio de
la ley de gases ideales se obtuvo la cantidad de moles obtenida en esta
reaccin dividiendo as por el volumen total de la reaccin, obteniendo las
concentraciones en Molaridad (Elaboracin propia, 2016).
0.26

0.032

0.99777

298.15

4ml H2O2
Tiempo
(min)

Volumen
desplazado (L)

Presin
(atm)

0.99777

Tempertura
Volumen
n (moles)
(K)
total (L)

[O2] (M)

298.15

0
0.03
0
0.000815
0.02718
0.03
0.99777
0.02
298.15
66
0.03
86
0.001141
0.03806
0.06
0.028
0.99777
298.15
92
0.03
4
0.001590
0.05301
0.09
0.039
0.99777
298.15
53
0.03
77
0.001876
0.06253
0.12
0.046
0.99777
298.15
01
0.03
37
0.002324
0.07748
0.15
0.057
0.99777
298.15
62
0.03
74
0.002650
0.08836
0.19
0.065
0.99777
298.15
89
0.03
28
0.002936
0.09787
0.22
0.072
0.99777
298.15
37
0.03
88
0.002977
0.09923
0.27
0.073
0.99777
298.15
15
0.03
83
Tabla 3: Se agregaron 4ml de sustrato (Perxido de Hidrogeno) obteniendo un
desplazamiento de 0L a 0.073 en el minuto 0.27. En base a esto, por medio de
la ley de gases ideales se obtuvo la cantidad de moles obtenida en esta
reaccin dividiendo as por el volumen total de la reaccin, obteniendo las
concentraciones en Molaridad (Elaboracin propia, 2016).
5ml H2O2
Tiempo
(min)

Volumen
desplazado (L)

Presin
(atm)

Tempertura
Volumen
n (moles)
(K)
total (L)

[O2] (M)

0.99777

298.15

0
0.025
0
0.000815
0.03262
0.02
0.02
0.99777
298.15
0.025
66
63
0.000815
0.03262
0.04
0.02
0.99777
298.15
0.025
66
63
0.001386
0.05546
0.08
0.034
0.99777
298.15
0.025
62
47
0.001753
0.07014
0.11
0.043
0.99777
298.15
0.025
66
65
0.002202
0.08809
0.13
0.054
0.99777
298.15
0.025
27
1
0.002487
0.09951
0.18
0.061
0.99777
298.15
0.025
75
02
0.002814
0.11256
0.2
0.069
0.99777
298.15
0.025
02
07
0.002854
0.11419
0.27
0.07
0.99777
298.15
0.025
8
2
Tabla 4: Se agregaron 5ml de sustrato (Perxido de Hidrogeno) obteniendo un
desplazamiento de 0L a 0.07 en el minuto 0.27. En base a esto, por medio de la
ley de gases ideales se obtuvo la cantidad de moles obtenida en esta reaccin
dividiendo as por el volumen total de la reaccin, obteniendo las
concentraciones en Molaridad (Elaboracin propia, 2016).

Cintica de la Catalasa con el H2O2

0.1

f(x) = 0.37x
0.43x + 0.01
0.02

0.09
0.08

2ml H2O2

0.07

Linear (2ml H2O2)

f(x) = 0.16x + 0

3ml H2O2

0.06
[O2] (M)

Linear (3ml H2O2)

0.05

4ml H2O2

0.04

Linear (4ml H2O2)

0.03

5ml H2O2
Linear (5ml H2O2)

f(x) = 0.02x + 0

0.02
0.01
0
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

Timpo (min)

Grafica 1: Se grafico la cintica de la reaccin a diferentes concentracin de

perxido de hidrogeno con la enzima catalasa, obtenindose las pendientes de
cada una de las curvas (Elaboracin propia, 2016).
Sustrato H2O2
(ml)

Vp =
dP/dt

2
0.02
3
0.155
4
0.366
5
0.425
Tabla 5: En esta tabla se muestra la cantidad de sustrato aadida con respecto
a la velocidad del producto con respecto al tiempo (Elaboracion propia, 2016).

Velocidad de Reaccion de la enzima Catalasa

0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
Vp = dP/dt

Velocid

0.2
0.15
0.1
0.05
0
1.5

2.5

3.5

4.5

5.5

H2O2 (L)

Grafica 2: Grafica que muestra la velocidad del producto con respecto al

sustrato, por lo que se empieza a notar una recta horizontal de 0.4 a 0.45
(datos tomados del grafico 1 de las pendientes de cada curva) (Elaboracin
propia, 2016).

Conclusin
Se demostr que a mayor concentracin de sustrato (en el intervalo de
concentraciones manejadas) hay un efecto positivo en la velocidad de reaccin.
La catalasa en concentraciones de 0.002 es ineficaz con un sustrato al 3 % ya que
no se produjo ninguna cantidad de O2, por lo cual fue necesario aumentar la
concentracin de catalasa.
Se puedo calcular grficamente la Vmax obteniendo un valor de 4.3 mol / min.
Sera conveniente determinan la concentracin optima de sustrato debido a que la
reaccin se lleva a cabo en tiempos muy cortos y no se puede seguir la cintica
correctamente con el equipo utilizado.