Guía de Validación de Métodos Analíticoscolegio QFB

GUA DE VALIDACI
DE MTODOS A ALTICOS
EDITADA POR EL COLEGIO NACIONAL DE QUMICOS FARMACUTICOS BILOGOS MXICO, A. C.
OBJETIVO:
Establecer los lineamientos generales mnimos necesarios para llevar a cabo el proceso de
validacin de mtodos analticos.
JUSTIFICACI :
Un mtodo analtico es la descripcin de la secuencia de actividades, recursos materiales y
parmetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el anlisis de un componente
especfico(analito) de una muestra.
La validacin es el proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la
capacidad del mtodo satisface los requisitos para la aplicacin analtica deseada; esta actividad
se justifica por los siguientes aspectos:
Moral y tica,
Aseguramiento de calidad,
Econmica, y
Regulatoria.
DEFI ICIO ES:
Adecuabilidad del sistema.-Verificacin de que el sistema opera con base a criterios que
permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un mtodo analtico.
Analito.-Componente especfico de una muestra a medir.
Calibracin.-Conjunto de operaciones que determinan la relacin entre los valores
indicados por un instrumento de medicin y los valores conocidos correspondientes a
un patrn de referencia.
Documentacin.-Conjunto de informacin que sustenta una actividad realizada.
Especificaciones.-Descripcin del material que incluye la definicin de sus propiedades
y caractersticas, con las tolerancias de variacin de los parmetros de calidad.
Especificidad.-Capacidad de un mtodo analtico para obtener una respuesta debida
nicamente al analito de inters.
Estudio colaborativo.-Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios, por
diferentes qumicos.
Exactitud.-Concordancia entre un valor obtenido empleando el mtodo y el valor de
referencia.
Estabilidad analtica de la muestra.-Propiedad de una muestra preparada, de conservar
su integridad fisicoqumica y la concentracin del analito, despus de almacenarse por
un tiempo y condiciones determinadas.
Intervalo.-Concentraciones incluidas entre la concentracin superior e inferior del
analito (incluyendo stas), para las cuales se ha demostrado que el mtodo es preciso,
exacto y lineal.
Lmite de cuantificacin.-Concentracin mnima del analito que se puede determinar
con precisin y exactitud aceptables.
Lmite de deteccin.-Concentracin mnima del analito que puede ser detectada, pero no
necesariamente cuantificada.
Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por

una transformacin matemtica, son proporcionales a la concentracin del analito.
Metodologa de prueba.-Procedimiento para determinar si un producto o materia prima
cumple con las especificaciones establecidas.
Mtodo analtico.-descripcin de la secuencia de actividades, materiales y parmetros
que se deben cumplir para llevar a cabo el anlisis de un componente especfico de la
muestra.
Mtodo analtico desarrollado internamente.-Mtodo desarrollado por el propio
laboratorio.
Mtodo analtico indicativo de estabilidad.-Mtodo cuantitativo capaz de detectar
variaciones en las propiedades del material evaluado, debido a las condiciones de
almacenaje.
Mtodo analtico oficial.-Mtodo que aparece en la literatura oficial reconocida.
Mtodo analtico no oficial.-Mtodo que no aparece en la literatura oficial reconocida.
Muestra.-Porcin del material a evaluar.
Muestra analtica.-Porcin del material a evaluar de acuerdo al mtodo analtico.
Muestra adicionada.-Porcin representativa del material a evaluar, a la que se le
adicionan cantidades conocidas del analito.
Parmetros de desempeo.-Parmetro especfico a estudiar en un protocolo de
validacin.
Placebo analtico.-Muestra que contiene todos los componentes de un producto a
excepcin del analito.
Placebo adicionado.-Muestra e un placebo analtico al cual se le adiciona una cantidad
conocida del analito.
Precisin.-Grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el
procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra
homognea.
Precisin intermedia.-Precisin de un mtodo analtico, expresada como la
concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un
mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos das.
Proporcionalidad.-Relacin establecida por una ecuacin matemtica entre los
resultados obtenidos por dos mtodos analticos.
Protocolo de validacin,.Descripcin de pruebas especficas para demostrar que un
proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de manera
consistente.
Recobro.-Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando el
mtodo analtico.
Repetibilidad.-Precisin de un mtodo analtico, expresada como la concordancia
obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando
los mismos instrumentos y mtodos.
Reproducibilidad.-.Precisin de un mtodo analtico, expresada como la concordancia
entre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios.
Revalidacin.-comprobacin de que el mtodo analtico mantiene su desempeo cuando
existen cambios en la composicin del producto, en el mtodo analtico.
Robustez.-Capacidad del mtodo analtico de mantener su desempeo al presentarse
variaciones pequeas pero deliberadas, en los parmetros normales de operacin del
mtodo.
Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse en

comprobaciones analticas fsicas, qumicas o microbiolgicas en el transcurso de las
cuales se comparan con la sustancia en evaluacin.
Sustancia de referencia primaria.-Sustancia que es designada por tener la ms alta
calidad microbiolgica, cuyas propiedades se aceptan sin referencia a otras sustancias.
Sustancia de referencia secundaria.-Sustancia cuyas propiedades se asignan por
comparacin con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando es certificada
mediante un procedimiento cientficamente reconocido.
Tolerancia.-Reproducibilidad de los resultados analticos obtenidos por el anlisis de la
misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operacin. La robustez y la
tolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de
factores internos del mtodo, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos del
mtodo.
Validacin del mtodo analtico.-Proceso por el cual se demuestra, por estudios de
laboratorio, que la capacidad del mtodo satisface los requisitos para la aplicacin
analtica deseada.
CLASIFICACI DE MTODOS A ALTICOS:

Los mtodos se clasifican bajo los siguientes criterios:
En funcin de su estado regulatorio:
a) Mtodos farmacopeicos
b) Mtodos no farmacopeicos
En funcin de su aplicacin (-OM-059-SSA1 y -OM-073-SSA1):
a) Mtodos para producto a granel,
b) Mtodos para producto terminado,
c) Mtodos para muestra primaria, y
d) Mtodos indicadores de estabilidad.
En funcin de la naturaleza de la respuesta analtica:
a) Mtodos fsico-qumicos.- cuando la respuesta es de carcter fsico
(absorcin de luz, emisin de luz, voltaje, etc.) o qumico(consumo de
iones OH, consumo de un acomplejante, etc.)
b) Mtodos biolgicos.- cuando la respuesta es de carcter biolgico
(crecimiento de microorganismos, proteccin, muerte, etc.)
En funcin de su propsito analtico:
a) Mtodos para cuantificar el analito(contenido o potencia)
b) Mtodos para establecer la presencia del analito a un limite.
c) Mtodos para identificar el analito.
Esta clasificacin se utiliza para establecer los parmetros de desempeo a estudiar en la
validacin del mtodo analtico.
Cualquier mtodo analtico puede estar constituido por tcnicas de separacin, extraccin, etc.
, y por tcnicas de medicin (espectrofotometra, volumetra, colorimetra, potenciometra,
etc.) que permiten medir la respuesta del analito en la muestra. A esta tcnica se le denomina
Sistema de Medicin.
En funcin de la naturaleza del sistema de medicin:
a) Mtodos en los cuales el instrumento de medicin de la respuesta
analtica, permite medir una seal de ruido (cromatgrafo de
lquidos y de gases, espectrofotmetros, etc.)
b) Mtodos en los cuales el instrumento de medicin no permite medir
una seal de ruido (buretas, medidor de halos, potencimetros, etc.)
PARMETROS DE DESEMPEO:
En funcin de la aplicacin analtica de un mtodo, se indican los parmetros de desempeo a
estudiar.
PRUEBAS DE IMPUREZAS
PARMETRO DE
DESEMPEO
PRECISIN/ ADECUABILIDAD
DEL SISTEMA
LINEALIDAD DEL SISTEMA
ESPECIFICIDAD2
EXACTITUD Y REPETIBILIDAD
LINEALIDAD DEL MTODO
PRESICIN DEL MTODO O
PRECISIN INTERMEDIA2
ESTABILIDAD ANALTICA2
DE LA MUESTRA
LIMITE DE DETECCION
LIMITE DE CUANTIFICACION
ROBUSTEZ
TOLERANCIA
CO TE IDO/ CO TE IDO/
POTE CIA /
VALORACI
VALORACI
S
S
LIMITE
IDE TIFICACI
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
NO
S
NO
NO
NO
NO
S
NO
NO
NO
NO
NO
NO
NO
*
*
NO
S
*
*
S
NO
*
*
NO
NO
NO
NO
*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del mtodo.

1. La falta de especificidad de un mtodo analtico, puede ser compensada por otra
alternativa analtica de soporte, como por ejemplo cromatografa de capa fina.
2. Tambin es definido como un estudio de tolerancia.
3. Un mtodo que es exacto y lineal, por definicin es especfico al placebo analtico o a los
otros componentes de la muestra.
DETERMI ACIO ES, METODOLOGA Y CRITERIOS DE ACEPTACI :
Precisin del Sistema:

Metodologa.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la
concentracin del analito que represente la concentracin de la solucin de
referencia utilizada o en ciertos casos, la concentracin que represente el 100%
de la muestra procesada para su medicin; preparadas por dilucin o por pesadas
independientes. Medir la respuesta analtica bajo las mismas condiciones.
Calcular S y CV de la respuesta analtica;
Criterios de aceptacin:
CV 1.5% para mtodos fsico-qumicos
CV 3% para mtodos biolgicos
Valores superiores u otro criterio de aceptacin deben ser justificados.
Las formulas y el procedimiento se encuentra en el anexo 1.
Adecuabilidad del sistema (Mtodos cromatogrficos):

Metodologa.- Inyectar por quintuplicado la solucin de adecuabilidad,
reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para cada inyeccin:
Factor capacidad (K), resolucin (si procede, R), retencin relativa (si procede,
Rr), factor de coleo (T), nmero de platos tericos (N).
CV 2% para respuesta analtica.
Valores superiores deben ser justificados.
Para cada inyeccin, se recomienda:
K>2 ; R>2 ; T<2
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 2.
La evaluacin de adecuabilidad del sistema permite verificar que el sistema de
medicin funcione adecuadamente, independiente de las condiciones
ambientales.
Antes de la validacin del mtodo analtico deben establecerse los criterios para
la operacin del sistema para ser evaluados en la validacin y verificados de
manera rutinaria al emplear el mtodo analtico. Por ejemplo en el caso de
mtodo volumtricos, el volumen de la titulacin de blancos y/o de un volumen
especfico de la solucin de referencia; en el caso de mtodos fotomtricos la
lectura de soluciones blanco.
Linealidad del sistema:

Metodologa.- Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de concentracin
(intervalo) de la solucin de referencia ya sea por dilucin o por pesadas
independientes. La concentracin central debe ser igual a la que se prepara la
solucin de referencia en el mtodo o la que represente el 100% en la muestra
procesada para su medicin.
Medir la respuesta analtica bajo las mismas condiciones de medicin, reportar la
relacin concentracin vs respuesta analtica.
Calcular b1, b0, r2, IC(1).
El intervalo esta en funcin del propsito del mtodo y se expresa como % de la
concentracin de la solucin de referencia o en funcin del contenido del analito
en la muestra.
Para contenido/potencia/valoracin se sugiere un mnimo de 20%
Para contenido/valoracin de impurezas desde un nivel apropiado hasta un 20%
por arriba de la especificacin.
Para mtodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado hasta un 120%
Es critico que el intervalo no excluya valores de concentracin que
potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra.
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero
Otro criterio de aceptacin debe ser justificado.

Es conveniente trazar la grfica de la concentracin (x) vs la respuesta analtica
(y), incluyendo en ella la ecuacin, lnea de ajuste y el coeficiente de
determinacin.
Especificidad:
Metodologa.- Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionar
cantidades conocidas de stas, solas o combinadas a la muestra y evaluar su
respuesta bajo las mismas condiciones de anlisis.
En mtodos de identificacin seleccionar sustancias que potencialmente
interfieran en la determinacin con base en la estructura del analito.
Para mtodos de contenido/ potencia/ valoracin, se analizan placebos del
producto y cuando proceda sustancias relacionadas, precursores, homlogos y
una mezcla de ellos con el producto.
Para mtodos de contenido/ valoracin de impurezas, se adicionan stas al
analito en niveles que incluya la especificacin. Cuando no se dispone de las
impurezas, el analito se somete a condiciones que generen su inestabilidad
qumica y aplicar el mtodo.
Para mtodos de lmite de impurezas se analizaran las muestras de impurezas
individualmente, el producto y la mezcla de stos.
Para mtodos indicadores de inestabilidad, si se cuenta con los productos de
degradacin, preparar muestras con placebos adicionado de stos, el placebo
adicionado de analito, el placebo adicionado de analito y productos de
degradacin y se analizan con el mtodo.
Si no se cuenta con los productos de degradacin se puede favorecer la
inestabilidad del analito en la muestra:
1) Someter el analito, el placebo y la muestra a temperaturas de 20C por debajo
del punto de fusin del analito de 2 a 4 semanas.
2) Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o humedad
relativa.
3) Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12 y
someterlas a 60C 80C.
4) Adicionar perxido de hidrgeno para favorecer la oxidacin del analito.
El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al analito a
niveles del 15 al 30%. Estos estudios no se realizan en analitos con propiedades
reactivas.
Para mtodos no selectivos, la especificidad se sustenta con los resultados de
exactitud y linealidad, si el mtodo cumple con los criterios de aceptacin.
La respuesta del mtodo solo se deber al analito.
Exactitud y Repetibilidad del mtodo:

Metodologa:
A)Conociendo los componentes de la muestra se preparar el placebo analtico.
A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analtica por
sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de
este en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad por
sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de
este en la muestra. El mismo analista analizara los placebos adicionados
utilizando de referencia la sustancia empleada en la adicin al placebo analtico
en las mismas condiciones. Determinar la cantidad recuperada del analito.
B)Si no se conocen los componentes de la muestra, con el mtodo se determina
el contenido del analito y se preparan 6 muestras adicionadas del analito hasta
completar el 100% de ste en la muestra. Las muestras adicionadas se analizan
usando como referencia la sustancia empleada en la adicin de la muestra.
Determinar la cantidad recuperada del analito.
La adicin del analito debe ser en las primeras etapas del mtodo.
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analtico, al obtener el
cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada
en porcentaje.
Calcular , S, CV e IC() del porcentaje de recobro.
IC() debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del % de

recobro se incluya en el intervalo:
98-102% mtodo cromatogrfico
98-102% mtodo volumtrico
97-103% mtodo qumico o espectrofotomtrico
95-105% mtodo microbiolgico
CV del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en mtodo cromatogrfico
No mayor de 2% en mtodo volumtrico
No mayor de 3% en mtodo qumico o espectrofotomtrico
No mayor de 5% en mtodo microbiolgico
No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la
especificacin del analito en la muestra.
Linealidad del mtodo:
Metodologa:
A) Conociendo los componentes de la muestra se preparar el placebo analtico.
A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analtica por
triplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este

en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del
analito (intervalo) y preparar el placebo adicionado por triplicado a cada nivel
manteniendo constante la cantidad de placebo analtico en los tres niveles. El
mismo analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia la
sustancia empleada en la adicin al placebo analtico en las mismas condiciones.
Determinar la cantidad recuperada del analito.
B) Si no se conocen los componentes de la muestra, con el mtodo se determina
el contenido del analito y se preparan 3 muestras adicionadas del analito hasta
completar el 100% de ste en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e
inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar la muestra adicionada
por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de muestra en los
tres niveles Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la
sustancia empleada en la adicin de la muestra. Determinar la cantidad
recuperada del analito.
La adicin del analito debe ser en las primeras etapas del mtodo.
El intervalo de la concentracin del analito adicionado depende del propsito del
mtodo y debe incluir la especificacin. La siguiente tabla sugiere intervalos
para el estudio de linealidad, en la cual la especificacin se maneja como
porcentaje, por ejemplo el 100% puede representar 100mg/g de muestra, 10ppm,
5mg/ml, etc.
PROPSITO
CONTENIDO/ POTENCIA/
VALORACIN
ESPECIFICACI
LMITE INFERIOR (LI)
LIMITE SUPERIOR (LS)
I TERVALO M IMO
LI 10% A LS +10%
EJEMPLO
VALORACIN
90% - 110%
80% a 120%
Por lo tanto los niveles podran
Ser 80%, 100% y 120%
UNIFORMIDAD DE DOSIS
75% - 125%
60% a 140%
Por lo tanto los niveles podran
Ser 60%, 100% y 140%
DISOLUCIN
Q = 75%
40% a 130%
Por lo tanto
los niveles podran
En el caso conservador de llegar
a
tercera etapa, ninguna unidad es menor
Ser 40%,
a 100% y 130%
Q 25%
CONTENIDO/ VALORACIN
PARA PRUEBAS DE
IMPUREZAS
LIMITE SUPERIOR (LS)
LS 20% a LS +20%
EJEMPLO
Sustancias Relacionadas
80% a 120%
No debe contener ms de 100% Por lo tanto los niveles podran
Ser 80%, 100% y 120%
Reportar la relacin cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizar el

mtodo de estimacin por mnimos cuadrados y calcular b1, b0, r2, IC(1), IC(0)
y CVy/x.
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo o muestra adicionada al
obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada
expresada en porcentaje. Calcular , S, CV, IC() del porcentaje de recobro.
1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:

r2 > 0.98
El IC(1) debe incluir la unidad
El IC(0) debe incluir el cero

El CVy/x del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en mtodo es cromatogrfico
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificacin
del analito en la muestra.
2) Porcentaje de recobro:
El IC() debe incluir el 100% o el promedio aritmtico del % de recobro
se incluya en el intervalo:
98-102% mtodo cromatogrfico
98-102% mtodo volumtrico
97-103% mtodo qumico o espectrofotomtrico
95-105% mtodo microbiolgico
CV del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en mtodo cromatogrfico
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificacin
del analito en la muestra.
Otro criterio de aceptacin debe ser justificado.
Es conveniente trazar la grfica de la cantidad adicionada (x) vs la cantidad
recuperada (y), incluyendo en ella la ecuacin, lnea de ajuste y el coeficiente de
determinacin.
Precisin del Mtodo (Precisin Intermedia o Tolerancia interda / analista):

Metodologa.- Analizar por triplicado una muestra homognea del producto
que tenga un nivel cercano o igual al 100% (para contenido/potencia/valoracin)
o una muestra cuyo contenido este incluido en el intervalo lineal de
concentracin de linealidad de mtodo (para impurezas) en dos das diferentes y
por dos analistas diferentes. Reportar el contenido/potencia/valoracin del
analito de todas las muestras.
Calcular , S, CV del contenido/potencia/valoracin, utilizando todos los
resultados obtenidos.
CV 2% para mtodos cromatogrficos y volumtricos
CV 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos

No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificacin del
analito en la muestra.
Valores superiores deben ser justificados.
Los resultados pueden ser analizados utilizando otros mtodos estadsticos
apropiados que permitan sustentar que la precisin del mtodo es aceptable.
Puede ser utilizado un modelo estadstico lineal de diseo experimental ya que
es de utilidad cuando se quiere determinar el grado de tolerancia del mtodo a
fuentes de variacin como estimar la variabilidad entre analistas o entre das.
Estabilidad Analtica de la Muestra:

Metodologa.- Establecer la etapa de anlisis en la cual se desea evaluar la
estabilidad, determinar si en dicha etapa es posible fraccionar (muestras
dependientes) o no (muestras independientes) y las condiciones de almacenaje.
En muestras dependientes, determinar la estabilidad analtica procesando hasta la
etapa preestablecida por triplicado una muestra homognea, fraccionar cada
preparacin de acuerdo a las condiciones de almacenaje de inters. Terminar el
anlisis
de
una
de
las
fracciones
de
cada
preparacin
(contenido/potencia/valoracin), seguir el anlisis de cada una de las fracciones
al trmino de cada condicin de almacenaje utilizando una solucin de
referencia recientemente preparada. Reportar el contenido/potencia/valoracin
de cada fraccin.
En muestras independientes, determinar la estabilidad analtica a partir de una
muestra homognea, analizando por triplicado (contenido/potencia/valoracin
inicial). Simultneamente y de la misma muestra, procesar el nmero de
muestras necesarias para cada condicin de almacenaje hasta la etapa
preestablecida (preparaciones) por triplicado, seguir el anlisis de cada una de
las preparaciones al trmino de cada condicin de almacenaje utilizando una
solucin
de
referencia
recientemente
preparada.
Reportar
el
contenido/potencia/valoracin de cada preparacin.
Calcular 0, 1, di.
di 2% mtodos cromatogrficos y volumtricos
di 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos
di 5% para mtodos biolgicos
Cualquier otro criterio de aceptacin deber ser justificado.

Los resultados pueden ser analizados con otros mtodos estadsticos como la
distribucin t de Dunnett.
Lmite de Deteccin:
1)LD con base en seal de Ruido:
Metodologa.- Se aplica en mtodos que utilizan instrumentos para medir la
respuesta analtica y presentan una seal de ruido basal.
Determinar la respuesta de blancos (reactivos. Placebos analticos, etc.) y la
respuesta de muestras analticas (analitos, placebos adicionados, etc.) en un
intervalo del analito que incluya la especificacin de la prueba de impureza
limite. Determinar la cantidad del analito que genere una respuesta con respecto
al blanco en una proporcin de 3 a 1, lo que corresponde a la concentracin
asociada al limite de deteccin.
El LD debe ser menor a la especificacin de la prueba de impurezas limite.
2)LD con base en curva de calibracin y desviacin estndar de los blancos:
Metodologa.Se aplica tanto a mtodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de inters (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificacin de la prueba de impurezas
limite, ya sea por dilucin o pesada independiente del analito. Simultneamente
preparar 5 blancos. Medir las respuestas analticas. Para la curva de calibracin,
sin incluir los blancos, calcular b1, r2 e IC(1).
Para los blancos, calcular Sb de los blancos.
Calcular el lmite de deteccin:
LD=(3.3 Sb) /b1
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la seal
de ruido.
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
3)LD con base en la curva de calibracin y la desviacin estndar de regresin:

instrumentales.
limite, ya sea por dilucin o pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analticas.
Calcular b1, r2, Sy/x, IC(1).
LD=(3.3 Sy/x) /b1
de ruido.
r2 0.98
4)LD con base en la curva de calibracin y la desviacin estndar de la
ordenada al origen:
instrumentales.
limite, ya sea por dilucin o pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analticas.
Calcular b1, r2, Sbo, IC(1).
LD=(3.3 Sbo) /b1

de ruido.
r2 0.98
Limite de cuantificacin:
1)Seal de Ruido:
Metodologa.- Se aplica en mtodos que utilizan instrumentos para medir la
respuesta analtica y presentan una seal de ruido basal.
Determinar la seal de blancos (reactivos. Placebos analticos, etc.) y la seal de
muestras analticas (analitos, placebos adicionados, etc.) a concentraciones
conocidas del analito, inferiores o que incluya la especificacin del contenido /
valoracin de la prueba de impurezas. Determinar la cantidad del analito cuya
seal sea similar o mayor al blanco en una proporcin de 10 a 1, lo que

corresponde a la concentracin asociada al limite de deteccin. Verificar que
dicha cantidad corresponda al limite de cuantificacin, evaluando la exactitud y
Repetibilidad del valor estimado.
El LC debe ser menor a la especificacin del contenido/ valoracin de la prueba
de impurezas.
2)LC con base en curva de calibracin y desviacin estndar de los blancos:
instrumentales.
valores menores o que incluya la especificacin de contenido/ valoracin de la
prueba de impurezas, ya sea por dilucin o pesada independiente del analito.
Simultneamente, preparar 5 blancos. Medir las respuestas analticas. Calcular
b1, r2 e IC(1).
Para los blancos, calcular Sb de los blancos.
Calcular el lmite de cuantificacin:
LD=(10 Sb) /b1
Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de
cuantificacin.
Criterio de aceptacin:
r2 0.98
de impurezas.
3)LC con base en la curva de calibracin en la desviacin estndar de
regresin:
instrumentales.
Medir las respuestas analticas.
Calcular b1, r2, Sy/x, IC(1).
LC=(10 Sy/x) /b1
cuantificacin.
r2 0.98
de impurezas.
4)LC con base en la curva de calibracin y la desviacin estndar de la
ordenada al origen:
instrumentales.
Medir las respuestas analticas.
Calcular b1, r2, Sbo, IC(1).
LC=(3.3 Sbo) /b1
cuantificacin.
r2 0.98
de impurezas.
Robustez:
Metodologa.- Establecer los factores instrumentales (temperatura y presin
de la columna) y/o no instrumentales (pH de fases) relacionados al mtodo y
sean crticos. En condiciones normales y distintas de operacin, analizar la
muestra por triplicado. Reportar el contenido/potencia/valoracin del analito en
la muestra de condiciones normal y distintas, expresadas como %.
Calcular 0, 1, di.
di 2% mtodos cromatogrficos y volumtricos
di 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos
di 5% para mtodos biolgicos
Los resultados pueden ser analizados con otros mtodos estadsticos como la
distribucin t de Dunnett (para 3 o ms condiciones) o t de Student (para 2
condiciones), incluyendo la condicin normal.
Tolerancia:
Metodologa.- Establecer los factores ajenos al equipo (diferentes equipos,
lotes de reactivos) que se presentan al reproducir el mtodo en otras condiciones
de uso. Fijar 2 condiciones de uso y analizar la muestra por triplicado a cada
condicin. Reportar el contenido/potencia/valoracin del analito en todas las
muestras.
Calcular y, S y CV del contenido/potencia/valoracin.
CV 2% mtodos cromatogrficos y volumtricos
CV 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos
Los resultados pueden ser analizados con otros mtodos estadsticos. Uno de
ellos es aplicar un anlisis de varianza con un criterio de clasificacin para
determinar si al menos una de las condiciones de uso es diferente, si se concluye
que si, se realiza una prueba estadstica de comparaciones mltiples para
identificar aquellas condiciones que dan lugar a resultados diferentes.
SUSTA CIAS DE REFERE CIA:

Las sustancias de referencia constituyen un componente propio del mtodo y una herramienta
en la evaluacin de los parmetros de desempeo, lo que permite establecer la confiabilidad de
la metodologa. Para su adquisicin se debe contar con procedimientos para su manejo y
aplicacin, as como registros del uso y con la documentacin que avale una buena prctica de
manejo de dichas sustancias.
Manejo.- Cada sustancia de referencia debe almacenarse, manejarse y utilizarse de

acuerdo con las especificaciones correspondientes. Cualquier condicin especial de
almacenamiento debe indicarse en el marbete y (o) certificado analtico.
Todas las sustancias deben contar con su identificacin y registro, teniendo como
mnimo las siguientes:
Para sustancias de referencia primarias:
A) Nombre de la sustancia de referencia,
B) Cantidad,,
C) Lote del producto,
D) Clave (para uso interno)
E) Fecha de adquisicin,
F) Pureza (potencia),
G) Fecha de caducidad
H) Riesgo potencial de manejo, e
I ) Indicaciones especiales.
Para sustancias de referencia secundaria:
A) Nombre de la sustancia de referencia,
B) Cantidad certificada,
C) Lote interno,
D) Clave,
E) Fecha de certificacin, y
F) Potencia en relacin con la sustancia de referencia.
La informacin mnima para su registro es:
A) Nombre,
B) Lote,
C) Clave de identificacin interna,
D) Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.),
E) Fecha de adquisicin,
F) Fecha de empleo,
G) Uso,
H) Cantidad empleada,
I) Cantidad remanente,
J) Analista que la utiliza, y
K) Caducidad
Para las sustancias de referencia secundaria, conviene adems:
A) Nombre,
B) Lote,
C) Clculos para obtener la potencia,
D) Grficas,
E) Certificado de anlisis del material
En la validacin de mtodos, estos registros son crticos.
Se debe contar con lineamientos que aseguren la no-utilizacin de sustancias de
referencia caducas.
Tratamiento:
Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de referencia lo
debe contemplar la propia metodologa, o en su caso, debe especificarse en su
marbete.
Si la sustancia de referencia debe secarse antes de utilizarse, se debern seguir
las instrucciones de la etiqueta o certificado de anlisis; se realizar en otro
envase al original y el excedente se desechar.
Procedencia:
Algunos centros especializados que proveen sustancias de referencia son:
*British Pharmacopoeia (BP), European Pharmacopoeia (EP)
*European Pharmacopoeia Chemical Refernce Substances (EPCRS),
*Comit de Sustancias Farmacuticas de Referencia (COSUFAR)
*Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
*Secretara de Salud (SSA), y
*United States Pharmacopeia (USP)

REVALIDACI :
Se deben establecer y justificar criterios apropiados para revalidacin de mtodos analticos, as
como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crtico a un mtodo analtico da lugar
a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validacin como tal.
La siguiente tabla establece cambios en el mtodo, su impacto y el parmetro de desempeo a
revalidar:
CAMBIO
DISPOSITIVO DE MEDICIN
DEL INSTRUMENTO DE
MEDICIN
CONCENTRACIN DE LA
SOLUCIN DE REFERENCIA
FORMULACIN DEL
PRODUCTO
EQUIPOS
PROVEEDOR DE COLUMNAS
IMPACTA
VARIACIN EN SISTEMA
DE MEDICIN
PARMETRO A REVALIDAR
PRECISIN DEL SISTEMA
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA
EXACTITUD DEL MTODO
LINEALIDAD DEL SISTEMA Y

EXACTITUD DEL MTODO
DEL MTODO
ESPECIFICIDAD
TOLERANCIA
TOLERANCIA
EXACTITUD DEL MTODO
VARIACIN DEL MTODO

VARIACIN DEL MTODO
COMPARACI DE 2 MTODOS A ALTICOS:

Cuando se quieren comparar 2 mtodos para aplicaciones de contenido/potencia/valoracin, se
emplean los siguientes procedimientos:
Estudio de Comparacin de Parmetros de Desempeo:

Se utiliza cuando los dos mtodos han sido validados y se quiere comparar sus
parmetros de desempeo. En funcin a su aplicacin analtica se indican los
parmetros de desempeo a estudiar:
CAMBIO
PARMETROS
DE
DESEMPEO
CO TE IDO/POTE CIA/VALORACI
PARMETRO A REVALIDAR
ESPECIFICIDAD
PRECISION DEL MTODO O PRECISIN INTERMEDIA
Los parmetros analticos a comparar, as como los criterios para establecer la igualdad
de dichos parmetros, son los siguientes:
1) Especificidad:
Debe cumplir para cada mtodo analtico, demostrando su especificidad o
exactitud.
2) Repetibilidad en exactitud:
Metodologa.- De los datos de exactitud y Repetibilidad utilizar la informacin
del porcentaje de recobro. Calcular S2 del porcentaje de recobro de cada
mtodo.
El intervalo de confianza para la razn de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Cualquier otro criterio de aceptacin deber justificarse.
3) Repetibilidad en Linealidad del Mtodo:
Metodologa.- De los datos de linealidad del mtodo, utilizar la informacin
del porcentaje de recobro. Calcular la S2 del porcentaje de recobro de cada
mtodo.
4)Exactitud:
Metodologa.- De los datos de exactitud y Repetibilidad, utilizar la
informacin del porcentaje de recobro. Calcular la S2, del porcentaje de
recobro de cada mtodo.
El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del
porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
El anlisis estadstico de los resultados, presenta 2 situaciones:
a)Los mtodos tienen la misma Repetibilidad (varianzas iguales)
b)Los mtodos tienen diferente Repetibilidad (varianzas diferentes);
por lo tanto se tiene que realizar el estudio de comparacin de Repetibilidad de
ambos mtodos.
5) Linealidad del Mtodo:
Metodologa.- De los datos de linealidad utilizar la informacin del porcentaje
de recobro as como la cantidad adicionada y la cantidad recuperada de cada
mtodo. Calcular la
Anexo 15.
6) Precisin del Mtodo:
Metodologa.- De los datos de precisin del mtodo, utilizar la informacin del
contenido/potencia/valoracin del analito de cada mtodo. Calcular S21 y S22.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo16.
Estudio de Correlacin:
Se utiliza cuando se comparan dos mtodos cuyos resultados se expresan en
unidades diferentes.
Se aplica a mtodos de contenido/valoracin/potencia y los parmetros a evaluar
son:
1) Proporcionalidad:
No necesariamente establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad,

ya que en muchas ocasiones la respuesta analtica es diferente.
a) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo
analtico.
Metodologa.-Preparar una cantidad suficiente de placebo analtico con los
componentes que estn comnmente en la muestra, de tal modo que pueda ser
analizado por ambos mtodos en tres diferentes niveles del analito, que incluya
la especificacin.
Del placebo analtico preparado adicionarle analito al nivel inferior. Fraccionar
en tres muestras y analizar cada muestra por ambos mtodos bajo las mismas
condiciones de cada mtodo para determinar el contenido/valoracin/potencia.
Repetir este procedimiento con el nivel del 100% superior.
Reportar la relacin contenido/valoracin/potencia de cada mtodo en cada
muestra del mtodo a comparar (y), mtodo de referencia (x). Calcular b1, b0, r2,
IC(1), CVy/x.
b) No se conocen los componentes de la muestra.
Metodologa.- Seleccionar 9 muestras del producto cuyo nivel del analito
cumpla con la especificacin, fijar una etapa de los mtodos analticos en los
cuales transfiera una mayor o menor cantidad e la muestra con el objeto de poder
variar el nivel del analito. Tener 3 muestras con nivel bajo, 3 niveles
correspondientes al 100% y 3 con un nivel alto del analito. Las 9 muestras se
analizan por ambos mtodos en las mismas condiciones analticas de cada
mtodo. Determinar el contenido/valoracin/potencia de cada muestra.
Reportar la relacin contenido/valoracin/potencia del mtodo a comparar (y), el
mtodo de referencia (x). Calcular b1, b0, r2, IC(1), CVy/x.
El IC(1) no debe incluir el cero.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo17.
2) Precisin:
El mtodo no oficial deber tener una precisin igual a mejor que el mtodo
oficial, o que su precisin sea aceptable para la aplicacin analtica.
Inicialmente se debe establecer el mtodo de referencia y el mtodo a comparar.
Metodologa.-Tanto con el mtodo de referencia como el mtodo a comparar,
dos analistas en dos das deben analizar por triplicado muestras independientes
(pesadas o alcuotas) de un lote homogneo de producto, cuyo nivel de analito
est
incluido
dentro
de
la
especificacin.
Reportar
el
contenido/potencia/valoracin del analito de todas las muestras en % para ambos
mtodos.
El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razn de varianzas del
mtodo a comparar respecto del mtodo de referencia, no debe exceder el valor
de 1.
DOCUME TACI :
Las actividades de la validacin de un mtodo analtico deben ser sustentadas por los siguientes
documentos:
a) Protocolo, cuyo contenido es:
1. Titulo
2. Propsito u Objetivo,
3. Responsabilidades,
4. Plan de prueba describiendo los parmetros de desempeo que permitan
verificar la aplicacin analtica deseada,
5. Criterios de aceptacin para cada parmetro,
6. Formato de registro de resultados.
b) Reporte, cuyo contenido es:
1. Titulo,
2. Resultados,
3. Anlisis de resultados,
4. Confrontacin contra los criterios de aceptacin,
5. Conclusin
Es crtico documentar los registros analticos; dicha documentacin deber estar ordenada y
disponible, en responsabilidad del rea de calidad.
CO CORDA CIA CO GUIAS I TER ACIO ALES:
Esta gua es equivalente a:
Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures
ICH-Q2Q, March 1995
Guideline on the Validation of Analytical Procedures, Methodology,
Availability. Notice ICHQ2B.
USP24. Validation of Compendial Methods.
Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods CDER.
November 1994, CMC 3.
BIBLIOGRAFIA:
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7a Ed. Mxico (2000).
Mtodos Analticos Validacin Guas Generales de Validacin de la DGCIS,
SSA (1989).
Ley General de Salud (1997)
NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario
NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad- Gestin de Calidad, Gua para la

Seleccin, el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad.
Reglamento de Insumos para la Salud (1998).
Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993. Buenas prcticas de
fabricacin para establecimientos de la industria qumico farmacutica
dedicados a la fabricacin de medicamentos.
NOM-177-SSA1-1998 Que establece las pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es intercambiable
Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies,
December, 1998 FDA.
Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures ICH-Q2A,
March 1995.
Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods, CDER,
November 1994, CMC 3.
Guideline for Industry Analytical Procedures and Methods Validation, August
2000, FDA.
Guideline for submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation,
February 1987, FDA.
ICH Harmonised Tripartile Guideline Validation Analytical Procedures
Methodology 6 Nov 1996.
USP24, Validation of Compendial Methods.
Norma Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos.
Diseo y Anlisis de Experimentos, Montgomery D. C., Grupo Editorial
Iberoamrica, 3 Ed. Mxico (1991).
A EXOS:
UMERO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
A EXO 1.
CO TE IDO
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIN DEL SISTEMA
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y Repetibilidad
DEL MTODO
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MTODO
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISION DEL MTODO
(PRECISIN INTERMEDIA)
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ESTABILIDAD ANALTICA
DE LA MUESTRA
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIN
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACION
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ROBUSTEZ
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA TOLERANCIA
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD Y EXACTITUD
PARA COMPARACIN DE 2 MTODOS ANALTICOS
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN
LINEALIDAD DEL MTODO PARA COMPARACIN DE 2 MTODOS ANALTICOS
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIN
DE 2 MTODOS ANALTICOS
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MTODO
PARA COMPARACIN DE 2 MTODOS ANALTICOS
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIN DEL
MTODO PARA COMPARACIN DE 2 MTODOS ANALTICOS
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE
MTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACIN PARA COMPARACIN DE
2 MTODOS ANALTICOS
FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIN DEL MTODO
EN ESTUDIO DE CORRELACIN PARA COMPARACIN DE 2 MTODOS ANALTICOS
TABLA ESTADSTICA DE LA DISTRIBUCIN t DE Student
TABLAS ESTADSTICAS DE LA DISTRIBUCIN F DE FISHER
COMENTARIOS RESPECTO A LOS CLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO
FRMULAS Y PROCEDIMEIT O DE CLCULO PARA PRECISI

DEL SISTEMA.
A)FORMULAS:
Media Aritmtica
y=
y
n
Desviacin Estndar
S=
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
Coeficiente de variacin
CV =
S
* 100
y
B)PROCEDIMIENTO DE CLCULO:
Tabular los resultados
Calcular y, y2 y determinar n.
Calcular y S
Calcular el CV
A EXO 2.
FRMULAS
Y
PROCEDIMIE TO
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA.
A)FORMULAS:
Media Aritmtica
y=
DE
CALCULO
PARA
y
n
Desviacin estndar
S=
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
CV =
S
* 100
y
Calcular y S
Calcular el CV
A EXO 3.
FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LI EALIDAD

DEL SISTEMA.
A)FORMULAS:
Pendiente
b1 =
n xy x y
n x 2 ( x )2
Ordenada al origen
b0 =
yb x
1
n
Coeficiente de determinacin
(n( xy ) ( x )( y ))2
r2 =
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)
Intervalo de confianza para la pendiente
IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
1
Sb1 = Sy / x
( x )2
x2 n
Sy / x =
y 2 b xy b y
1
n2
t0.975, n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student.
Calcular x, y, x2, y2, xy, y determinar n.
Calcular b1, b0, r2
Calcular el Sy/x y Sb
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-2 y calcular IC(1)
A EXO 4.
FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA EXACTITUD

Y REPETIBILIDAD DEL MTODO.
A)FORMULAS:
Media aritmtica
y
y=
n
Desviacin estndar
S=
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
S
* 100
y
Intervalo de confianza para la media poblacional
CV =
S
n
Referirse al anexo 19 para determinar el valor de t de
IC ( ) = y t 0.975, n 1
t0.975, n-1
Student
n = numero de recobros.
Calcular y S
Calcular el CV
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC()
A EXO 5.
FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LI EALIDAD

DEL MTODO.
5.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA
A)FORMULAS:
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
Ordenada al origen
y b1 x
b0 =
n
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb
1
Sb ' = Sy / x
( x )2
x2 n
Sy / x =
y 2 b xy b y
1
n2
t0.975, n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student.
Intervalo de confianza para la ordenada al origen

IC(o) = bo t0.975,n-2Sbo
Sbo = Sy / x
x=
1
+
n
(x )2
x2
( x )2
n
n
Coeficiente de variacin de regresin
CVy / x =
y=
Sy / x
100
y
y
n
Calcular b1, b0, r2
Calcular x y Sbo
Calcular IC(b0)
Calcular el CVy/x
5.2 PORCENTAJE DE RECOBRO
A)FORMULAS:
Media aritmtica
y
y=
n
Desviacin estndar
S=
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
S
* 100
y
Intervalo de confianza para la media poblacional
CV =
IC ( ) = y t 0.975, n 1
S
n
Calcular y S
Calcular el CV
Determinar en el anexo 19 t0.975, n-1 y calcular IC()
A EXO 6.
FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA PRECISI

DEL MTODO (PRECISI I TERMEDIA).
A)FORMULAS:
Media aritmtica
y
y=
n
Desviacin estndar
S=
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
CV =
S
* 100
y
Calcular y S
Calcular el CV
A EXO 7.
FRMULAS
Y
PROCEDIMIE TO
DE
ESTABILIDAD A ALTICA DE LA MUESTRA.
A)FORMULAS:
Media aritmtica del anlisis inicial
y0 =
y1 =
CALCULO
PARA
no
no = nmero de muestras del anlisis inicial
Media aritmtica del anlisis de cada condicin de almacenaje
1
n1
n1 = nmero de muestras del anlisis de la i-sima condicin de almacenaje
Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin de
almacenaje respecto de la media aritmtica del anlisis inicial
di = y1 y 0
Calcular y0, y1, y2, y3 y determinar no, n1, n2, n3
Calcular o, 1, 2, 3
Calcular di
A EXO 8.
FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LIMITE DE

DETECCI .
8.1 SEAL RUIDO
Tabular los resultados.
8.2 CURVA DE CALIBRACIN BASADO EN LA DESVIACIN
ESTNDAR DE LOS BLANCOS
A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIN:
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 = Sy / x
x2
Sy / x =
( x )2
n
y 2 b xy b y
1
n2
b0 =
yb x
1
n
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student
B)FORMULA PARA LOS BLANCOS

Desviacin estndar de los blancos
Sb =
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
n = numero de blancos
C)FORMULA PARA EL LIMITE DE DETECCIN

LD =
3. 3 Sb
b1
D)PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIN

Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb1, bo
E)PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA LOS BLANCOS
Calcular y, y2, y determinar n.
Calcular Sb
Calcular el LD
8.3 CURVA DE CALIBRACIN BASADA EN LA DESVIACIN
ESTNDAR DE REGRESIN
A)FORMULAS
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
1
Sb1 = Sy / x
x2
Sy / x =
( x )2
n
y 2 b xy b y
1
n2
b0 =
yb x
1
t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Limite de deteccin
LD =
3. 3 Sy / x
b1
B)PROCEDIMIENTO DE CLCULO
Calcular b1, r2
Calcular el Sy/x y Sb, bo
Calcular el limite de deteccin
ESTNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN
A)FORMULAS
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 = Sy / x
x2
Sy / x =
( x )2
n
y 2 b xy b y
1
n2
b0 =
yb x
1
n
Desviacin estndar de la ordenada al origen
Sbo = Sy / x
1
+
n
x=
(x )2
x2
( x )2
n
x
n
Limite de deteccin
LD =
3.3 Sbo
b1
Calcular b1, r2
Calcular x y Sbo
Calcular el LD
A EXO 9.
FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LIMITE DE

CUA TIFICACI .
9.1 SEAL RUIDO
Tabular los resultados.
ESTNDAR DE LOS BLANCOS
A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIN:
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
Sb1 = Sy / x
x2
( x )2
n
y 2 b xy b y
1
Sy / x =
n2
b0 =
yb x
1
n
B)FORMULA PARA LOS BLANCOS
Desviacin estndar de los blancos
Sb =
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
n = nmero de blancos
C)FORMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACIN

LC =
10 Sb
b1
D)PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIN

Calcular b1, r2
E)PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA LOS BLANCOS
Calcular y, y2, y determinar n.
Calcular Sb
Calcular el LC
9.3 CURVA DE CALIBRACIN BASADA EN LA DESVIACIN
ESTNDAR DE REGRESIN
A)FORMULAS
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
1
Sb1 = Sy / x
x2
Sy / x =
( x )2
n
y 2 b xy b y
1
n2
b0 =
yb x
1
n
Limite de cuantificacin
LC =
10 Sy / x
b1
Calcular b1, r2
Calcular el LC
ESTNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN
A)FORMULAS
Pendiente
n xy x y
b1 =
n x 2 ( x )2
r2 =
(n( xy ) ( x )( y ))2
(n( x2) ( x )2)(n( y 2) ( y )2)

IC(1) = b1 t0.975,n-2Sb1
1
Sb1 = Sy / x
x2
Sy / x =
( x )2
n
y 2 b xy b y
1
n2
b0 =
yb x
1
n
Desviacin estndar de la ordenada al origen
Sbo = Sy / x
1
+
n
x=
(x )2
x2
( x )2
n
x
n
Limite de cuantificacin
LC =
10 Sb
b1
Calcular b1, r2
Calcular x y Sbo
Calcular el LC
A EXO 10. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CLCULO PARA ROBUSTEZ.

A)FORMULAS:
Media aritmtica de la condicin de operacin.
y0
yo =
n0
no = numero e muestras de la condicin normal de operacin
Media aritmtica del anlisis de cada condicin de operacin diferente a
la condicin normal
y1
y1 =
n1
n1 = numero de muestras de la i-esima condicin de operacin
Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada condicin respecto de
la media aritmtica de la condicin normal.
di = y1 - y0
Calcular y0, y1, y2, y determinar no, n1, n2.
Calcular o, 1, 2.
Calcular di
A EXO 11. FRMULAS

Y
PROCEDIMIE TO
TOLERA CIA
A)FORMULAS:
Media aritmtica
y
y=
n
Desviacin estndar
S=
n( y 2 ) ( y )2
n(n 1)
CV =
S
* 100
y
DE
CALCULO
PARA
Calcular y S
Calcular el CV
A EXO 12. FRMULAS

Y
PROCEDIMIE TO
DE
CALCULO
PARA
REPETIBILIDAD E EXACTITUD PARA COMPARACI DE 2
MTODOS A ALTICOS.
A)FORMULAS:
Varianza
n y 2 ( y )2
S2 =
n(n 1)
Nota: Calcular la varianzas de cada mtodo y para fines de clculo del intervalo de confianza
para la razn de varianzas, se debe establecer.
S12= varianza menor
S22= varianza menor
Intervalo de confianza para la razn de varianzas.
S 22
F 0.025, n 2 1, n1 1 22
12
S 12
S 22 F 0.975, n 2 1, n1 1
S 12
F0.025,n2-1, n1-1 y F0.975, n2-1, n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n1-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n1 = numero de recobros del mtodo de varianza menor
.n2 = numero de recobros del mtodo de varianza mayor
Calcular y, y2 y determinar n para cada mtodo analtico
Calcular la varianza de cada mtodo
Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12)
Determinar en el anexo 20 F0.025, n2-1, n1-1y F0.925, n2-1, n1-1
Calcular el intervalo de confianza para la razn de varianzas.
A EXO 13. FRMULAS

Y
PROCEDIMIE TO
DE
CALCULO
REPETIBILIDAD E LI EALIDAD DEL MTODO
COMPARACI DE 2 MTODOS A ALTICOS.
A)FORMULAS:
Varianza
S2 =
PARA
PARA
n y 2 ( y )2
n(n 1)
S12= varianza menor
S22= varianza menor
S 22
F 0.025, n 2 1, n1 1 22
12
S 12
S 22 F 0.975, n 2 1, n1 1
S 12
Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada mtodo (y), al
obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad
adicionada expresada en porcentaje.
Calcular Sy, Sy2 y determinar n para cada mtodo analtico
Determinar en el anexo 20 F0.025 n2-1, n1-1y y F0.925, n2-1, n1-1y
A EXO 14. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO E EXACTITUD

PARA COMPARACI DE 2 MTODOS A ALTICOS.
14.1 COMPARACIN DE Repetibilidad DE AMBOS MTODOS:
A)FORMULAS:
Varianza
S2 =
n y 2 ( y )2
n(n 1)
S12= varianza menor
S22= varianza menor
S 22
F 0.025, n 2 1, n1 1 22
12
S 12
S 22 F 0.975, n 2 1, n1 1
S 12
14.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES):

A)FORMULAS:
Media aritmtica del mtodo 1.
y1 =
n1
y2 =
n2
Varianza del mtodo 1.

S 12 =
n1 y12 ( y1)2
n1(n1 1)

S 22 =
n 2 y 22 ( y 2 )2
n 2(n 2 1)
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
IC ( 1 2 ) = (y1 - y2 ) t 0.975 n1 + n 22
Tabular otra vez los resultados.
Calcular y1, y2, y12, y22, y determinar n1 y n2.
Calcular 1, 2
Calcular S12, S22
Determinar en el anexo 19 t0.975, n1+n2 y calcular IC(1-2)
14.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):
A)FORMULAS:
Calcular 1, 2
Calcular S12, S22
Calcular gl
Determinar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(1-2)
A EXO 15. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO E LI EALIDAD

DEL MTODO PARA COMPARACI DE 2 MTODOS
A ALTICOS.
15.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y):
A)FORMULAS:
Sumatorias
Pendiente del mtodo 1.
Pendiente del mtodo 2.
Ordenada al origen del mtodo 1.
Ordenada al origen del mtodo 2.
Desviacin estndar de regresin.
Intervalo de confianza para la diferencia de las 2 pendientes.
Intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen
Calcular x1, x12, x2, x22, y1, y12, xy1, y2, y22, xy1 y
determinar n1 y n2.
Calcular b11, b12, b01, bo2
Calcular Sx/y y Sb11 Sb12
Determinar en el anexo 19 t0.97523, y calcular IC(1-2)
Calcular x1, x2, Sbo1-Sbo2
Calcular IC(01-02)
15.2 PORCENTAJE DE RECOBRO:
15.2.1 COMPARACIN DE Repetibilidad DE AMBOS MTODOS
A)FORMULAS:
Varianza
15.2.2 IGUAL Repetibilidad (VARIANZAS EQUIVALENTES)
A)FORMULAS:

15.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):
A)FORMULAS:
Calcular 1, 2
Calcular S12, S22
Determinar en el anexo 19 t0.975, gl y calcular IC(1-2)
A EXO 16. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO E PRECISI DEL

MTODO PARA COMPARACI DE 2 MTODOS A ALTICOS.
A)FORMULAS:
Varianza
A EXO 17. FRMULAS
Y
PROCEDIMIE TO
DE
CALCULO
PARA
PROPORCIO ALIDAD
DE
MTODOS
E
ESTUDIO
DE
CORRELACI PARA COMPARACI DE 2 MTODOS
A ALTICOS.
A)FORMULAS:
Pendiente
Ordenada al origen
Coeficiente de variacin de regresin.
Tabular los resultados (datos primarios)
Calcular b1, b0, r2
A EXO 18. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA PRECISI

DEL MTODO E ESTUDIOS DE CORRELACI PARA
COMPARACI DE 2 MTODOS A ALTICOS
A)FORMULAS:
Varianza del mtodo oficial.
Varianza del mtodo no oficial.
Limite unilateral inferior de confianza para la razn de varianzas.
Tabular los resultados (datos primarios)
Calcular la varianza del mtodo oficial y del mtodo no oficial.
Determinar en el anexo 20 F0.05
Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razn de
varianzas.
A EXO 19. TABLA ESTADSTICA DE LA DISTRIBUCI t DE Student.
GRADOS DE
LIBERTAD
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
t0.975
12.706
4.303
3.182
2.776
2.571
2.447
2.365
2.306
2.262
2.228
2.201
2.179
2.160
2.145
2.131
2.120
2.110
2.101
2.093
2.086
2.080
2.074
2.069
2.064
2.060
GRADOS DE
LIBERTAD
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
t0.975
2.056
2.052
2.048
2.045
2.042
2.040
2.037
2.035
2.032
2.030
2.028
2.026
2.024
2.023
2.021
2.020
2.018
2.017
2.015
2.014
2.013
2.012
2.011
2.010
2.009
GRADOS DE
LIBERTAD
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
t0.975
2.008
2.007
2.006
2.005
2.004
2.003
2.002
2.002
2.001
2.000
2.000
1.999
1.998
1.998
1.997
1.997
1.996
1.995
1.995
1.994
1.994
1.993
1.993
1.993
1.992

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GUA DE VALIDACI

Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por

Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse en

CLASIFICACI DE MTODOS A ALTICOS:

*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del mtodo.

Precisin del Sistema:

Adecuabilidad del sistema (Mtodos cromatogrficos):

Linealidad del sistema:

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 3.

La respuesta del mtodo solo se deber al analito.

Exactitud y Repetibilidad del mtodo:

IC() debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del % de

triplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este

LIMITE SUPERIOR (LS)

Reportar la relacin cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizar el

1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:

El IC(0) debe incluir el cero

Precisin del Mtodo (Precisin Intermedia o Tolerancia interda / analista):

CV 3% para mtodos qumicos o espectrofotomtricos

Estabilidad Analtica de la Muestra:

Cualquier otro criterio de aceptacin deber ser justificado.

Metodologa.Se aplica tanto a mtodos instrumentales como no

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la seal

seal sea similar o mayor al blanco en una proporcin de 10 a 1, lo que

SUSTA CIAS DE REFERE CIA:

Manejo.- Cada sustancia de referencia debe almacenarse, manejarse y utilizarse de

*United States Pharmacopeia (USP)

EXACTITUD DEL MTODO

LINEALIDAD DEL SISTEMA Y

EXACTITUD DEL MTODO

VARIACIN DEL MTODO

COMPARACI DE 2 MTODOS A ALTICOS:

Estudio de Comparacin de Parmetros de Desempeo:

No necesariamente establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad,

NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad- Gestin de Calidad, Gua para la

FRMULAS Y PROCEDIMEIT O DE CLCULO PARA PRECISI

FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LI EALIDAD

FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA EXACTITUD

FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LI EALIDAD

Intervalo de confianza para la pendiente

Intervalo de confianza para la ordenada al origen

FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA PRECISI

FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LIMITE DE

Intervalo de confianza para la pendiente

B)FORMULA PARA LOS BLANCOS

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE DETECCIN

D)PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIN

Intervalo de confianza para la pendiente

t0.975, n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Intervalo de confianza para la pendiente

FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO PARA LIMITE DE

Intervalo de confianza para la pendiente

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACIN

D)PROCEDIMIENTO DE CLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIN

Intervalo de confianza para la pendiente

Intervalo de confianza para la pendiente

A EXO 10. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CLCULO PARA ROBUSTEZ.

A EXO 11. FRMULAS

A EXO 12. FRMULAS

A EXO 13. FRMULAS

Intervalo de confianza para la razn de varianzas.

A EXO 14. FRMULAS Y PROCEDIMIE TO DE CALCULO E EXACTITUD

14.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES):