j

USO Y MANIPULACIN DE Mus musculus TIPO

Balb/c EN EL LABORATORIO: OBTENCIN DE
MACRFAGOS Y ESPLENOCITOS.
Llamuca, M., Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE. Departamento de
Ciencias de la Vida. Carrera de Ingeniera en Biotecnologa. Inmunologa.
Sangolqu Ecuador. Marzo 06, 2015.
RESUMEN
La experimentacin con animales de laboratorio, principalmente con ratones,
ha sido fundamental para los avances en el campo de la biomedicina y la
Inmunologa. El presente ensayo tiene como objetivo principal conocer la
tcnica correcta de manipulacin del ratn (Mus musculus) tipo Balb/c en el
laboratorio, y gracias a esto lograr la obtencin, observacin y cuantificacin
de macrfagos y esplenocitos. En el presente ensayo se han desarrollado
tcnicas de manipulacin, vas de administracin y necropsia en ratones de
laboratorio machos de seis semanas de vida, cuyo peso tuvo una variacin
desde la primera semana hasta la segunda con una reduccin del 15,29%.
Posteriormente se obtuvo macrfagos del lquido peritoneal con medio RPMI
1640 y condiciones de incubacin de 37C y al 5% de CO2 durante cuatro
horas. Se observ los macrfagos en el microscopio invertido con un conteo
celular obtenido en el ratn A de 5,5*10^6, en el ratn B de 2,25*10^6 y en el
ratn C de 1,5*10^6 clulas/mL. Posteriormente se obtuvo esplenocitos del
bazo y se realiz la observacin en microscopio invertido y el conteo celular en
cmara de Neubaer. El conteo de esplenocitos dio como resultado un promedio
de 8,75*10^5 clulas/mL.
Palabras clave: Inmunizacin, esplenocitos, macrfagos.

ABSTRACT
Experiments with laboratory animals, mainly mice, has been fundamental
advances in the field of biomedicine and Immunology. This paper's main
objective is to know the correct technique of manipulating the mouse (Mus
musculus) Balb / c in the laboratory type, and thanks to that achieved the
collection, observation and quantification of macrophages and splenocytes. In
this assay have been developed handling techniques, routes of administration
and autopsy in male laboratory mice six weeks of age, weighing had a
variation from the first week to the second with a reduction of 15.29%.
Peritoneal fluid macrophages subsequently with RPMI 1640 medium and
incubation conditions of 37 C and 5% CO2 for four hours was obtained.
Macrophages was observed in the inverted microscope with a cell count

j
obtained in the mouse A 5.5 * 10 ^ 6, mouse B 2.25 * 10 ^ 6 in the mouse C
and 1.5 * 10 ^ 6 cells / mL. Subsequently splenocytes of the spleen was
obtained and the observation was made in inverted microscope and camera
cell count Neubaer. Counting splenocytes resulted averaged 8.75 * 10 ^ 5 cells
/ mL.
Key words: Immunization, splenocytes, macrophages.

j
INTRODUCCIN.
La experimentacin con modelos
animales inici antes de los aos
1600 y se utiliz para estudios de
anatoma, fisiologa e histologa.
Actualmente, la investigacin con
animales sigue siendo de gran
importancia en diversas reas de
estudio, como: investigacin en
cncer
y
enfermedades
infecciosas, sanidad humana y
animal, desarrollo de procesos
biotecnolgicos,
investigacin
genmica,
neurociencias,
farmacutica
y
ensayos
inmunolgicos (Granados-Ziga,
2010). A pesar de la dificultad que
representa
extrapolar
los
resultados obtenidos a humanos,
la experimentacin con animales
representa varias ventajas, como:
fcil
manipulacin,
alta
fecundidad,
bajo
costo
y
reproducibilidad (Salguero et al.,
2007).
Mus musculus como modelo
experimental La especie ms
utilizada
en
la
investigacin
cientfica
es
el
ratn
(Mus
musculus). Posee un pequeo
tamao, peso adulto de 25-30 g. El
olfato es muy desarrollado y tiene
un sentido muy agudo de la
audicin y el tacto. Las funciones
de la cola son termorregulacin y
equilibrio. Son animales de hbitos
nocturnos La determinacin del
sexo se realiza observando la
distancia ano-genital, que en los
machos
suele
ser
aproximadamente el doble que en
las hembras (Santos, s.f.).
El ratn se sujeta con firmeza por
la base de la cola y se coloca una
superficie rugosa donde pueda

agarrarse. Se pinza la piel del

cuello con el pulgar y el ndice de
la otra mano. A continuacin se
levanta al animal y se atrapa la
cola entre el dedo anular y
meique. El ratn se debe sujetar
firmemente, con la finalidad de
que no muerda al investigador
(Ziga et al., 2001; Hedrich,
2004).
Las vas ms comunes para la
administracin de sustancias son:
subcutnea,
intravenosa
e
intraperitonial.
La
va
de
administracin peritoneal se aplica
en el cuadrante inferior derecho o
izquierdo del abdomen. La jeringa
se introduce con el bisel hacia
arriba, paralelamente a la columna
vertebral, para evitar penetracin
en las vsceras, con 10 respecto
al
abdomen.
Se
recomienda
introducir un volumen de hasta 3
ml (Hedrich, 2004).
Segn Ziga et al. (2001) la
eutanasia es el acto de sacrificar
animales mediante mtodos que
induzcan una inconsciencia rpida
y muerte con mnimo dolor y
estrs. Un mtodo de eutanasia es
la dislocacin cervical, la cual
produce inconsciencia inmediata y
muerte. En ratones se sitan
pulgar e ndice a cada lado del
cuello junto a la base del crneo o,
de modo alternativo, se presiona
una varilla junto a la base del
crneo, paralelamente con la otra
mano, se tira rpidamente de la
base de la cola, produciendo la
separacin
de
las
vrtebras
cervicales y el crneo (Banister et
al., s.f.)
Segn Strauss-Ayali et al. (2007)
citado por Larocca (2010), los

j
macrfagos
son
clulas
del
sistema
inmune
que
poseen
capacidad fagoctica y microbicida;
por lo tanto, desempean un rol
importante en la inmunidad antiinfecciosa. Se derivan de los
monocitos de la sangre, despus
de su migracin a travs del
torrente circulatorio. Son clulas
especializadas que se encuentran
en
la
mayora
de
tejidos
conjuntivos y en rganos, como:
hgado
(clulas
de
Kupffer),
sistema nervioso central (clulas
microgliales)
y
pulmones
(macrfagos alveolares). Adems
de
ingerir
microbios,
los
macrfagos
ingieren
clulas
muertas del anfitrin, secretan
citocinas, actan como clulas
presentadoras de antgenos (CPA)
y promueven la angiogenia y
fibrosis (Abbas, Lichtman & Pillai,
2012).
Los Esplenocitos segn Garca
(1994) los esplenocitos son clulas
del sistema inmune que se
encuentran principalmente en el
seno del bazo. Se encargan de
reconocer y fagocitar clulas
sanguneas
envejecidas
o
malformadas y microorganismos.
La cmara de Neubauer se emplea
para el conteo de clulas en un
medio lquido. Est adaptada al
microscopio de campo claro o de
contraste de fases. Est formada
por un portaobjetos de cristal en
cuyo tercio central se encuentran
tres plataformas de las cuales la
central, que est situada 0,1 mm
por debajo de las laterales,
presenta
una
cuadrcula
subdividida en 9 cuadrados de 1 x
1 mm cada uno (1 mm2 ). Para
facilitar el conteo celular, cada

cuadrado se divide nuevamente en

16. En la cmara de Neubauer
mejorada el cuadrado central se
divide en 25 cuadrados terciarios
(Fuentes, Castieiras & Queralt,
1998; Ramos & Martnez, 2008).
El objetivo del presente trabajo es
aprender
tcnicas
de
manipulacin,
vas
de
administracin de sustancias y
necropsia
en
ratones
de
laboratorio, para posteriormente
obtener macrfagos alveolares, de
la mdula sea, del lquido
peritoneal y esplenocitos del bazo
y realizar el conteo celular en
cmaras de Neubaer.

MATERIALES Y MTODOS.
Modelo animal
Se emple ratones de laboratorio
machos de aproximadamente seis
semanas de vida, cuyo peso
promedio inicial fue de 15.86 g.
Durante
el
perodo
de
experimentacin los animales se
mantuvieron
bajo
condiciones
controladas de alimentacin, cuya
dieta
estuvo
basada
en
zanahorias, gelatina sin sabor y
agua.
Manipulacin
Para la manipulacin de los
ratones se emple la tcnica de
restriccin a mano descrita en
Ziga et al., 2001 y Hedrich,
2004. En la figura 1 se observa el
mtodo de sujecin de los ratones
utilizado en los ensayos.
Se sujet el ratn por la base de
su cola y se coloc en una rejilla
donde pueda sostenerse. Se

j
agarr un pliegue de piel en la
parte posterior del cuello (cerca de
las orejas). Se fij la piel floja a lo
largo de la espalda y la cola del
ratn. Se coloc al ratn con el
lado ventral hacia arriba y se
atrap la cola entre el dedo anular
y meique.

Figura 2. Inmunizacin
intraperitoneal del ratn con
tioglicolato. (Llamuca, 2015).

Necropsia.

Figura 1. Manipulacin adecuada del

ratn. (Llamuca, 2015).

Control de peso
Se pes cada ratn dos veces por
semana por un periodo de dos
semanas. En la siguiente figura se
puede observar el procedimiento
empleado para determinar el peso
de los ratones
Inmunizacin.
Mediante la va de administracin
intraperitoneal
se
inyect
aproximadamente 0,2 ml de una
solucin tampn denominada PBS
(Phosphate
Buffered
Saline).
Posteriormente, se administr 0,2
ml de tioglicolato fluido de
concentracin 30 mg L-1 mediante
va intraperitoneal, con la finalidad
de estimular los macrfagos del
ratn. En la figura 2 se observa la
administracin de tioglicolato.

Se sacrific 2 ratones al azar

despus de 5 das de la
inmunizacin con tioglicolato para
proceder a la extraccin de
macrfagos y los otros 3 ratones
se los sacrifico a los 8 das
despus de la inmunizacin.
Se realiz la eutanasia del ratn
por dislocacin cervical. Se toma
al ratn de la cola y se lo hace
estirar en una rejilla y con el
mango de bistur de forma vertical
se hace presin en un solo
movimiento justo debajo de la
nuca para dislocar las vrtebras
cervicales. Una vez realizado el
procedimiento se comprueba el
reflejo del ojo para confirmar su
muerte.
Posteriormente se realiz una
diseccin del ratn, con la
finalidad
de
observar
los
principales rganos internos. Se
extrajo el intestino, el bazo, los
pulmones y el corazn realizando
cortes en las bases de los rganos.
C
A crneo se realiz un
Para abrir el
corte a nivel del hueso occipital,
posteriormente se cort el nervio
ocular y se extrajo el cerebro. Se

j
midi las
rganos.

dimensiones

de

los

hacia los pulmones a travs de la

trquea del ratn, realizando un
lavado de los mismos, para luego
ser recuperado el lquido que se
coloc
en
una
caja
Petri.
Inmediatamente se prosigui a
observar los macrfagos en el
microscopio invertido.

Figura 3. Diseccin anatmica del A)

abdomen, B) trax y C) crneo del
ratn. (Llamuca, 2015).

Obtencin y observacin
macrfagos
interperitonealmente.

de

Se realiz un lavado peritoneal de

2 ratones al azar, que consisti en
inyectar. Se coloc el ratn sobre
una superficie y se llen la cavidad
peritoneal con 10 ml de medio
RPMI (contiene L-glutamina, buffer
HEPES 25mM y bicarbonato de
sodio) fro. Se realiz cortes en el
pelaje para exponer el rea
abdominal y se recuper el lquido
inyectado con la misma jeringuilla,
a continuacin se verti en una
caja Petri y se adicion medio
RPMI fresco. Se lleva a incubacin
con 5% de CO2, a 37C por un
perodo de cuatro horas. Luego del
perodo de incubacin se observ
los macrfagos adheridos a la
placa Petri en el microscopio
invertido a 10X y 40X.

Obtencin y observacin
macrfagos alveolares.

de

Para la obtencin de macrfagos

alveolares se suministr 1 mL RPMI

Figura 4. Administracin RPMI hacia

los pulmones a travs de la trquea
del ratn. (Llamuca, 2015).

Obtencin y observacin de
macrfagos de la mdula sea.
Para la obtencin de macrfagos a
nivel de la medula sea, se cort
las cabezas del fmur y se
centrifug a 1000 rpm por 3
minutos, el pallet se mezcl con 1
mL de RPMI. Se prepar una
disolucin de 90 L de bluetripan y
10 L de la muestra, y se procedi
a observar en la cmara de
Neubauer.
Obtencin,
conteo
observacin de esplenocitos

Doce
das
despus
de
la
inmunizacin con tioglicolato se
sacrific tres ratones mediante la
tcnica de dislocacin cervical. Se
realiz la diseccin del ratn y se
extrajo el bazo. Posteriormente se
coloc el bazo en una caja Petri
con medio RPMI y se tritur con el
pistn de una jeringa estril, hasta

j
obtener fragmentos pequeos. A
continuacin se filtr el medio con
una gasa en tubos Falcon. Se llev
los tubos a centrifugacin a 1200
rpm por 8 minutos a una
temperatura ambiente. Debido a
que existe contaminacin por
glbulos rojos se aadi el buffer
lisis y se realiz aspiraciones
sucesivas por minuto, luego se
centrifug nuevamente por 10
minutos.
A
continuacin,
se
elimin el sobrenadante y el pellet
fue resuspendido en 5ml de medio
RPMI. Se tom 10 l del medio y se
diluy en 90 l de azul Tripn. Para
realizar el conteo se emple una
cmara de Neubauer. Se coloc 10
l de esta dilucin en el orificio de
la cmara, para distinguir las
clulas vivas de las muertas. Se
coloc la cmara de Neubauer en
el microscopio ptico a 40X y se
procedi a realizar el conteo de
esplenocitos. En la siguiente figura
se ilustra las regiones de la
cmara.

C . C=

Total de clulas contadas

de cuadrados

Donde:
C.C.= concentracin celular, F.D.=
factor de dilucin, Vo =volumen
final.
Se coloc una concentracin
celular de 5x106 esplenocitos en
una alcuota de 200 uL en cinco
pocillos
de
una
P96
y
posteriormente
se
llev
al
microscopio invertido para la
observacin de esplenocitos.

RESULTADOS
Pesos de los ratones
Los pesos de los ratones se
tomaron a los das 0, 5, 7 y 12. En
la siguiente tabla se observa el
peso promedio de los ratones
durante las dos semanas de
experimentacin.
Peso de ratones vs. Tiempo

Figura 5. Cmara de Neubauer

(Llamuca, 2015).

El conteo de clulas puede

realizarse en los cuadrados 1,2
3. En cada caso se aplicar una
frmula para la determinacin de
la concentracin celular. Se calcul
la
concentracin
de
clulas
mediante la siguiente frmula:

No.
rat
n

Tiempo
en das

15

5
0

13,2
14,6

15,5

13,8

12

12,7

13,9

14,3

13,5

12

12,5

D
F

Peso ratn
(g)

17

14,4

18,8

16,5

15,3

%
dismi
nuci
n
12,00

13,01

10,07
15,29

j
12
Tota
l

13,9

26,06

Promedio
inicial:
15,86

15,29

Tabla 2. Sobrevivencia de los ratones

durante las dos semanas del ensayo.

Tabla1. Cuadro de los diferentes

pesos de los ratones dentro de las dos
semanas del experimento.

Supervivencia

Nmero de ratones

1
0

10 15

En el grfico 1 se muestra el peso

promedio de los ratones durante el
perodo de experimentacin. Se
observa el mismo patrn de
crecimiento que en el anlisis del
peso individual.

Grfico 2. Sobrevivencia de los ratones

durante las dos semanas del ensayo.

Grfico 1. Porcentaje en peso promedio

vs tiempo en das de los ratones machos
usados en la experimentacin.

En el grfico 2 se observa que el

nmero de ratones se mantiene
constante
durante
los
siete
primeros das. Al da cinco se
sacrific dos ratones para realizar la
obtencin
y
observacin
de
macrfagos
obtenidos
intraperitonealmente. Al llegar al
da 12, se sacrific las especies
restantes para realizar el conteo de
esplenocitos
y
macrfagos
alveolares y de la mdula sea, por
lo que la poblacin se reduce a cero.

Sobrevivencia

Tamao de rganos

Se evalu la sobrevivencia de los

ratones diariamente durante todo el
perodo de investigacin. Cada una
de las especies fue sacrificada
mediante dislocacin cervical. No se
observ otras causas de mortalidad.
En la siguiente tabla se representa la
sobrevivencia de los ratones durante
las dos semanas de duracin del
ensayo.

En la Tabla 3 se presenta la
medida de los rganos (cerebro,
corazn,
bazo,
pulmones
e
intestino) de los ratones 0, 5,7 y
12 que fueron sacrificados el
quinto da para realizar el cultivo
de macrfagos.

Tiempo (das)

Mediciones de rganos de los

ratones
No. Ratn Estructuras Tamao
(cm)
Supervivencia de ratones (%) vs. Tiempo.
A
Cerebro
1,2
Tiempo (das) No. Ratones vivos Porcentaje de ratones vivos (%)
Intestino
34
0
5
100
Bazo
1,2
5
3
60
Corazn
0,8
7
3
60
Pulmones
1,7
12

j
D

Cerebro
Intestino
Bazo
Corazn
Pulmones

1
36
1,5
0,9
1,2

6000000
4000000
Numero de macrofagos
2000000

Tabla 3. Tamao de rganos de

estudio
de
los
ratones
de
experimentacin.

Obtencin y
macrfagos

observacin

de

Se
observ
los
macrfagos
adheridos en la caja Petri y teidos
con azul de Tripn. Adems se
observ restos celulares en la
mayora
de
cultivos
de
macrfagos. En la tabla 4 se
muestra el conteo de macrfagos
(clulas/ mL) existentes en el
lquido peritoneal y mdula sea
del ratn A, C y D.
N0
Ratn
A
C
D

0
RATONES

Grfico 3. Nmero de clulas/ml en

relacin de macrfagos
para los
ratones A, C, D.

Observacin de macrfagos.
Se realiz una tincin a los
macrfagos con azul Tripn y se
observ mediante microscopio
ptico e invertido.

Clulas/mL
MACROFAGOS

5,5*10^6
2,25*10^
6
1,5*10^6

Liquido
peritoneal
Mdula
sea
Liquido
peritoneal

Tabla 4. Conteo de macrfagos por

clulas/ml

En el grafico 3 se muestra una

comparacin
entre
las
concentraciones de macrfagos
existentes en el lquido peritoneal
y mdula sea del ratn A, C y D.

Figura 6. Macrfagos obtenidos del

lavado
intraperitoneal
previa
estimulacin
con
tioglicolato.
Observado en microscopio invertido.
Aumento 10x. (Guerra, 2015).

j
Figura 7. Macrfagos alveolares del
ratn. Observado en microscopio
invertido. Aumento 40x. (Torres,
2015).

Macrfag

Figura 8. Macrfagos obtenidos de la

mdula sea del ratn Aumento 10x.
(Llamuca, 2015).

Observacin y cuantificacin
de esplenocitos.
Se observ los esplenocitos en la
caja Petri y teidos con azul de
Tripn. Adems se observ restos
celulares en la mayora de cultivos
de macrfagos. En la tabla 4 se
muestra el conteo de macrfagos
(clulas/ mL) existentes en el
lquido peritoneal y mdula sea
del ratn A, C y D.

Los ratones 1, 3 y 5 fueron

sacrificados y se les extrajo el
bazo para obtener esplenocitos a
los 12 das despus de la
inmunizacin.

Figura 9. Esplenocitos obtenidos del

bazo del ratn. A) Clula viable. B)
Clula no viable. Observado en el
microscopio ptico. Aumento 40x.
(Llamuca, 2015)

En la tabla 5 se muestra el conteo

de esplenocitos (clulas/ mL) en
un volumen de 5ml de suspensin
celular. Se observa que el nmero
promedio
de
esplenocitos
obtenidos a partir de los ratones B
y E es de 8,75*10^5 Clulas/mL.
Ratn
B
E
Promed
io

Clulas/mL
ESPLENOCI
TOS

1*10^6
7,5*10^5
8,75*10^5

Tabla 5. Conteo de esplenocito por

clulas/ml

1000000
500000
Numero de esplenocitos
0

Ratones

Grfico 3. Nmero de clulas/ml en

relacin de esplenocitos
ratones B, E.

para los

DISCUSIN
Segn Soriguer & Lpez (1986)
citado por Medarde (2013) el
comportamiento social de los
ratones
vara
notablemente
dependiendo de la disponibilidad
de recursos alimenticios. Cuando
la disponibilidad de alimento es
abundante, los ratones tienden a
formar grandes grupos donde el
comportamiento agresivo no es
frecuente.
Adems,
existen
diferencias de comportamiento
entre machos y hembras, siendo
los machos ms territoriales y
agresivos.
En el presente ensayo todos los
ratones fueron sacrificados por
dislocacin cervical; por lo tanto,
no
se
observ
muertes
ocasionadas por comportamiento
violento, a pesar de que todos los
ratones
eran
machos.
Probablemente, no presentaron
conductas violentas debido a que
la disponibilidad de alimento y
espacio fue adecuada para cada
una de las especies. El peso
aproximado de un ratn de 6
semanas de vida es de 15-18g
(Pierce, 2009). El peso promedio
inicial de los ratones fue de 15.86g
(Tabla 1), lo cual est dentro del
intervalo
establecido
por
la
bibliografa. Sin embargo, si se
analiza el peso inicial de cada
ratn hasta la ltima semana del
experimento, se puede determinar
claramente que el peso promedio
de los ratones presenta una
variacin, con una reduccin del
15,29%. Segn Roitt (2008), el
tioglicolato es un estmulo no
inmunolgico
que
induce
la

activacin de los macrfagos y la

respuesta inmune en el ratn. Por
lo tanto, la disminucin de peso
observada est asociada con el
estrs ocasionado en los ratones
debido a la inoculacin de
tioglicolato. Adems, Jonas (1976)
citado por Fuentes (s.f.) define que
otros factores como: edad, sexo,
constitucin gentica, nutricin,
exposicin al ambiente y manejo
sanitario, producen cambios en el
estado fisiolgico de los ratones de
laboratorio, que conducen a un
incremento o prdida de peso.
Se observ que los rganos
internos de los ratones estaban en
buenas condiciones a excepcin
del intestino, ya que se observ
que los ratones restantes al da 12
presentaron
inflamacin
del
intestino delgado a nivel del leon,
adems las heces fueron de color
anaranjado.
Segn
Velasco,
(2012), la inflamacin causada en
el intestino delgado, impide la
absorcin
de
componentes
importantes de los alimentos,
razn por la cual se produjo la
perdida excesiva de peso. El dao
a la mucosa del intestino proviene
de una reaccin a la ingestin de
gluten, que se encuentra en el
trigo, la cebada, el centeno, y
posiblemente la avena, y en
alimentos elaborados con estos
ingredientes.
Esto
adems
ocasiona la falta de absorcin de
nutrientes debido a un dao en las
vellosidades intestinales. Por lo
tanto,
los
animales
resultan
desnutridos sin importar cunto
alimento consuma. Este trastorno
es ms comn en los organismos
de raza blanca.

j
Se determin las dimensiones del
bazo, intestino, corazn, pulmones
y cerebro, ya que segn Ziga et
al. (2001) son los rganos de
mayor
inters
en
las
investigaciones biomdicas. Las
medidas de los rganos fueron
semejantes entre los dos ratones
analizados; al igual que las
medidas del cerebro. (Tabla 3).
Segn Martnez (2008) existen
muestras de esplenocitos totales
aislados
mediante
la
misma
tcnica de esta prctica, que dan
como
resultado
25x106
esplenocitos/mL. Sin embargo en
los
resultados
obtenidos
se
observ
una
concentracin
promedio
de
8,75*10^5
(Clulas/mL) esplenocitos viables.
Probablemente una de las causas
que influenci en estos resultado
es que no se emple condiciones
totalmente estriles durante el
procedimiento (Porras et al.,
2003). Adems debido a la falta de
prctica de los estudiantes, el
tiempo de preparacin de la
cmara de Neubauer con la
suspensin celular, para llevarla al
microscopio ptico fue muy largo,
pudiendo ocurrir lisis celular.

CONCLUSIONES
El ratn (Mus musculus) es el
modelo animal ms empleado en
la investigacin biomdica. La
aplicacin correcta de tcnicas de
manipulacin,
vas
de
administracin
y
necropsia,
asegura en gran parte la fiabilidad
de
los
procedimientos
y
resultados.

Los ratones se encontraban en

buen estado al empezar el
experimento,
pues
su
peso
promedio fue de 15.86g, el cual
est dentro del rango aceptable
segn bibliografa.
Los ratones se mantuvieron bajo
condiciones controladas y no
presentaron
comportamientos
agresivos, por lo que no se
observ otras causas de muerte, a
parte de la dislocacin cervical.
Este patrn se observa en el
grfico 2, pues la sobrevivencia se
mantiene constante hasta los das
donde se sacrificaron los ratones.
El comportamiento no agresivo de
los ratones se explica en gran
parte a que no tenan que
competir entre ellos por conseguir
alimento, pues diariamente se les
suministr la cantidad adecuada.
Los
animales
restantes
presentaron
presentaron
inflamacin del intestino delgado a
nivel del leon al final del
experimento, producto de la
inadecuada alimentacin.
Los macrfagos son clulas que se
adhieren a la superficie donde se
cultivan.
Se
pudo
observar
macrfagos en el microscopio
invertido, con un conteo celular
obtenido en el ratn A de
5,5*10^6, en el ratn B de
2,25*10^6 y en el ratn C de
1,5*10^6 clulas/mL.
Al
realizar
el
conteo
de
esplenocitos en la cmara de
Neubauer, se observ un promedio
de clulas viables de 8,75*10^5
clulas/mL. Los resultados no
esperados se atribuyen a falta de
experiencia en los estudiantes y a

j
que no se realiz el procedimiento
bajo condiciones estriles.

RECOMENDACIONES
Los ratones de experimentacin
deben mantenerse en un bioterio
bajo
condiciones
estriles
y
controladas.
El investigador debe tomar las
medidas
de
bioseguridad
pertinentes al manipular ratones,
como el uso de guantes y mandil.
Las tcnicas de manipulacin
deben
ser
empleadas
con
precisin para evitar mordeduras o
comportamientos violentos del
ratn.

El trato hacia los animales de

laboratorio debe ser respetuoso
aplicando
los
principios
de
Biotica, por ejemplo: la tcnica de
dislocacin cervical debe ser
rpida para provocar una muerte
con el mnimo sufrimiento a la
especie.
Los procedimientos detallados en
el presente ensayo deben ser
realizados en una cmara de flujo
laminar, con la finalidad de tener
un medio asptico y de que no
haya interferencias que podran
afectar los resultados. As tambin,
para
proteger
la
salud
del
investigador.

BIBLIOGRAFA.

Abbas, A., Lichtman, A.,

Pillai S. (2012). Inmunologa
celular y molecular. 7
edicin. Elsevier. Espaa.

Banister
et
al.
(s.f.).
Recomendaciones para la
eutanasia de los animales
de experimentacin: parte
2. Disponible en el URL: <<
http://sea.umh.es/files/2011/
07/eutanasia2.p
df
>>
[Fecha de consulta: 06 de
marzo de 2015].
Fuentes, M. (s.f.). Peso de
los rganos en relacin al
peso corporal en ratones
NMRI/UCLA. Influencia de las
variables edad, sexo y su
combinacin. Disponible en
el URL [Fecha de consulta:
06 de marzo de 2015].
Garca,
F.
(1994).
Tratamiento de las lesiones
esplnicas
mediante
ultrasonidos y/o butilo-2cianoacrilato.
Estudio
experimental. Facultad de
Medicina.
Universidad
Complutense de Madrid.
Disponible en el URL: <<
http://biblioteca.ucm.es/tesi
s/19911996/D/0/
AD0049701.pdf>>
[Fecha
de consulta: 06 de marzo de
2015].
Granados-Ziga, J. (2010).
Uso
de
animales
de
experimentacin
en
la
investigacin biomdica en
Costa Rica.Disponible en el
URL:
<<
http://www.scielo.sa.cr/pdf/a
mc/v52n3/art0
2.pdf>>
[Fecha de consulta: 06 de
marzo de 2015].
Hedrich, H. (2004). The
Laboratory
Mouse
(Handbook of Experimental
Animals). Academic Press.
Larocca, L. (2010). Perfil de
activacin de macrfagos de

ratones nod: efecto de la

preez y modulacin por el
pptido
intestinal
vasoactivo
(VIP).
Universidad
de
Buenos
Aires. Facultad de Ciencias
Exactas
y
Naturales.
Disponible en el URL: <<
http://digital.bl.fcen.uba.ar/
Download/Tesis/
Tesis_4664_Larocca.pdf >>
[Fecha de consulta: 06 de
marzo de 2015].
Medarde, N. (2013). La zona
de
polimorfismo
cromosmico Barcelona de
Mus musculus domesticus
Schwarz y Schwarz, 1943:
dinmica espacio-temporal
de su estructura y efecto de
las fusiones robertsonianas
sobre la espermatognesis.
Universitat Autnoma de
Barcelona. Disponible en el
URL:
<<
http://www.tdx.cat/bitstream
/handle/10803/
116318/nemg1de1.pdf?
sequence=1>> [Fecha de
consulta: 06 de marzo de
2015].
Ramos, M., Martnez, A.
(2008). Curso de cultivos
celulares.
Universidad
Autnoma
de
Madrid.
Disponible en el URL: <<
http://www.uam.es/personal
_pdi/ciencias/ld
esviat/_private/BIOQ
%20EXPIII/Cursoculti
vosUAM2008.pdf>> [Fecha
de consulta: 06 de marzo de
2015].
Pierce, B. (2009). Gentica
Un enfoque conceptual. 3
edicin. Editorial Mdica
Panamericana. Espaa.

Porras, J., Zambrano, C.,

Echeverri, D., Fontanilla, M.
(2003),
Aislamiento
y
caracterizacin
de
macrfagos a partir de aorta
de
un
modelo
de
ateroesclerosis en conejo
hipercolesterolmico.
Disponible en el URL [Fecha
de consulta: 05 de marzo de
2015]
Roitt. (2008). Inmuniloga.
Fundamentos. 11 edicin.
Editorial
Mdica
Panamericana.
Buenos
Aires. - Salguero, E., Plaza,
D., Mario, A., Delgado, G.
(2007). Cuantificacin por
citometra
de
flujo
de
esplenocitos CD4+, CD8+,
CD19+ y CD14+ obtenidos
de cuatro especies murinas
empleadas en estudios de
inmunotoxicologa.
Disponible en el URL: <<
http://www.ciencias.unal.ed
u.co/unciencias/
datafile/farmacia/revista/V36N104.pdf>>
[Fecha
de
consulta: 06 de marzo de
2015].
Santos,
(s.f.).
Aspectos
Generales de roedor de
laboratorio (especies,cepas,
lneas).
Sistemas
de
produccin
paramantenimiento
de
condicin
gentica.
Disponible en el URL: <<
http://www.urbe.fmed.edu.u
y/cursos/animal
es_experimentacion/Roedor
es%20de%20la
boratorio.pdf >> [Fecha de
consulta: 06 de marzo de
2015].

Strauss-Ayali D., Conrad

SM., Mosser Dm. 2007.
Monocyte
subpopulations
and
their
differentiation
patterns during infection. J
Leukoc Biol 82: 244-52.
Soriguer, R., Lpez, M.
(1986). Estudio demogrfico
de dos poblaciones de

ratones
caseros
(Mus
musculus,Linnaeus). Alytes
4: 19-28.
Ziga et al. (2001).Ciencia
y Tecnologa en proteccin y
experimentacin
animal.
McGraw Hill Interamericana
Madrid.