DIAGRAMA DE FLUJO

Autoclave

En un matraz Erlenmeyer
preparar 20 mL de
suspensin bacteriana.

Esterilizar el matraz de suspensin

bacteriana en Autoclave bajo las
condiciones 121C/15 psi/15 min.
Realizando un purgado

Sembrar en Despus la
suspensin bacteriana con ayuda
de un hisopo estril, utilizando la
misma tcnica que con Antes.

En una placa de agar nutritivo dividir a la

mitad y rotularla como antes y despus

Sembrar en Antes la suspensin

bacteriana con ayuda de un hisopo
estril, rotulando inicialmente con una
lnea media prosiguiendo de un lado
hacia otro de modo curveado sobre la
lnea media.

Incubar de 24/48 hrs a 37C en

estufa bacteriolgica

Observar crecimiento

Horno Pasteur

Preparar caldo nutritivo

En 1 matraz Erlenmeyer de 125 mL poner

un tapn de aluminio
Y verter caldo nutritivo no estril e incubar
30 min/37C

Filtracin por membrana

Preparacin del medio de
cultivo (caldo nutritivo)

Rotular agar nutritivo

Con ayuda de un filtro de .20 m filtrar el

medio de cultivo recibindolo en una placa de
agar nutritivo
rotulando las gotas cadas.

Incubar 24/48hrs a 37C en estufa

bacteriolgica

Luz Ultravioleta (UV)

Sembrar caldo inoculado de

Escherichia coli en placas de agar
nutritivo rotuladas respectivamente
de 1min/ 5 min/10 min/ 15 min/30
min y 45 min que sern repartidas
por mesa

Exponer a Luz UV de acuerdo al

tiempo asignado para cada una
de las placas

OBJETIVO GENERAL:

Seleccionar los mtodos de esterilizacin adecuados para las diversas

necesidades del laboratorio de microbiologa y poder comprobar la efectividad del
proceso de esterilizacin.
OBJETIVOS PARTICULARES

Explicar el concepto de esterilizacin y su utilidad en microbiologa.

Preparar correctamente el material que se someter a esterilizacin.
Reconocer las caractersticas de cada mtodo de esterilizacin.

Resultados
UTILIZACIN DE LA AUTOCLAVE

FOTOGRAFA 1.0
ENCENDIDO Y PREPARACIN DEL
MATERIAL

FOTOGRAFA 1.1
NIVELACIN Y CERRADO DE LA
AUTOCLAVE

FOTOGRAFA 1.2
PURGADO

FOTOGRAFA 1.3
TOMA DE PRESIN Y TIEMPO

FOTOGRAFAS 1.0-1.4 UTILIZACIN

DE LA AUTOCLAVE
FOTOGRAFA 1.4
APERTURA

Esterilizacin por Autoclave

(UNIDAD FORMADORA DE
COLONIA)

2 UFC

DESPUS

ANTES
FOTOGRAFA 1.5 PLACA DE AGAR NUTRITIVO DIVIDIDO EN ANTES DE
SER LLEVADO A ESTERILIZAR Y DESPUS DE UNA ESTERILIZACIN.

FOTOGRAFA 1.6 MATRAZ CON CALDO NUTRITIVO DESPUS DE LA

ESTERILIZACIN POR AUTOCLAVE

HORNO PASTEUR

FOTOGRAFA 1.7 MATRAZ CON MEDIO NO ESTRIL DESPUS DE LA

INCUBACIN COMPARADO CON MATRAZ ESTERILIZADO DE AUTOCLAVE
FILTRACIN POR MEMBRANA

FOTOGRAFA 1.8 PLACA DE AGAR

NUTRITIVO DESPUS DE LA INCUBACIN

LUZ ULTRAVIOLETA (UV)

FOTOGRAFA 1.9 SECUENCIA DE TIEMPO DE AGARES NUTRITIVOS

DESPUS DE LA INCUBACIN.

FOTOGRAFA 2.0 SECUENCIA DE TIEMPO 1, 5, 10, 15, 30 MINUTOS

DESPUES DE LA INCUBACIN.

ANLISIS DE RESULTADOS
Durante la prctica esterilizacin se utiliz la suspensin bacteriana caldo nutritivo el cual es un
medio lquido, elaborado de acuerdo a la frmula del APHA y en el cul se pueden desarrollar gran
variedad de microorganismos que no son muy exigentes en cuanto a sus necesidades
nutricionales como lo es la
Se investigaron previamente para la realizacin de esta prctica conceptos bsicos de los tipos de
esterilizacin, que en este caso se utiliz 4 mtodos fsicos: Calor hmedo, calor seco, filtracin y
radiacin no ionizante

Calor hmedo (AUTOCLAVE)

La autoclave que posee los requisitos indispensables para eliminar los microorganismos que
pudieran haber quedado en el medio ya que la accin mortal del vapor se deriva del calor latente
que se libera cuando se condensa sobre una superficie enfriada y se eleva la temperatura de
dicha rea, la temperatura ptima del autoclave es de 121C/15 psi/15 min. Los microorganismos
mueren por la coagulacin de sus protenas. Es por eso que en la placa de agar nutritivo en el
antes hubo solo 2 UNIDADES FORMADORAS DE COLONIA (UFC) la mnima cantidad de
crecimiento bacteriano se debe a que la concentracin de la bacteria era mnima. En la parte del
despus

de haberse realizado una esterilizacin en la autoclave no hubo UFC (UNIDAD

FORMADORA DE COLONIA).

Calor seco (HORNO PASTEUR)

El horno Pasteur es un equipo que est dentro del grupo de esterilizaciones con el calor seco. El
air ardiente generado por el calentamiento a base de resistencia elctricas produce; La disecacin
de la clulas, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos. Por tal motivo provoca procesos
oxidativos, fusin de membrana, y desnaturalizacin de la membrana. Se le considera un mtodo
de estilizacin ya que alcanza temperaturas de hasta 250 C, considerando que los
microorganismos y las esporas se mueren a los 121C.
A diferencia de la autoclave, el horno Pasteur no utiliza presin y el tipo de calor que genera es
seco. Esto permite que gracias a que utiliza resistencias para generar el calor puede alcanzar
temperaturas mayores a comparacin del autoclave.
En nuestra prctica esterilizamos un matraz Erlenmeyer, con un tapn de aluminio; Debido que a
altas temperaturas el papel se calcinera.

Para poder tener una estilizacin eficiente y homognea solo se colocan dentro del horno Pasteur
en la carga, objetos iguales. Debido a que sino por la diferencia del tamao el calor no es
homogneo y no permite una estilizacin adecuada.
Las condiciones para la esterilizacin del Horno Pasteur son de:

100 C por 2 horas

180 C por 1 hora

250 C por 5 horas (despirogenacion)

Para corroborar que nuestro equipo fue esterilizado, se utiliza indicadores. En caso del Horno
pastear. Se utilizan indicadores biolgicos y certificaciones.
Las certificaciones las realiza un tcnico especializado, que coloca varios termmetros en puntos
clave del Horno Pasteur. Y corrobora que el calor circule a la misma temperatura en todos los
puntos del Horno (homogneo).
Los controles bilgicos para el Horno Pasteur son bacterias Extremopphilas: Se colocan en forma
de ampolletas que estn separadas en dos. De un lado contiene un medio ptimo para el
crecimiento de las bacterias y del otro tienen a la bacteria Bacillus Subtilis o Clostina. Se colocan
junto a la carga que se esteriliza. Cuando se sacan del Horno Pasteur que finalizo el tiempo. Se
rompe la ampolleta y se unen los dos compartimentos. Si las bacterias sobrevivieron crecern en el
cultivo a 37C en el medio. Se manifestara provocando un cambio de color en la ampolleta debido
a un cambio en el pH. Esto significar que la estilizacin no funciono.
Filtracin por membrana
En nuestra prctica utilizamos la tcnica de filtracin para esterilizar un caldo bacteriano. El
principio de la filtracin es eliminar por remocin completa los microorganismos particulares
dependiendo el dimetro del poro, que se encuentra en un lquido o en un gas.
En la esterilizacin por filtracin existen dos tipos; por profundidad. Que se utiliza para materiales
fibrosos o glndulas que se usan para formar una capa grasosa rellena de canales o, por
membrana. Que con una capa o gasa ligeramente superior a 0.1 mm fabricado a partir de acetato
de celulosa, nitrato de celulosa o policarbonato.
En nuestra filtracin utilizamos una membrana con un poro de 0.22 Nanmetros. Esto permite que
nuestras bacterias queden atrapadas. Y nuestro caldo sea esterilizado. Sin embargo los virus y
bacterias sin capa. Ya que estas son ms pequeas o se pueden escabullir entre los huevos. Para
eso se utilizan membranas mucho ms pequeas.

Radiacin no ionizante (Luz Ultra violeta)

El sembrado de caldo inoculado de Escherichia coli en placas de agar nutritivo rotuladas

respectivamente de 1min/ 5 min/10 min/ 15 min/30 min y 45 min fueron expuestas a luz UV la cual
es una radiacin no ionizante, esta luz lesiona el DNA de las clulas expuestas por que forman
enlaces entre bases de pirimidina adyacentes. La longitud de onda UV ms eficaz para eliminar a
los microorganismos es de alrededor de 260nm, el poder de penetracin de estoy rayos es muy
bajo por lo que los microorganismos deben estar expuestos directamente para que mueran. La
2

dosis que se requiere para matar 99.19% de E. Coli, es de 12,000 micro vatios/segundo/cm .
Las placas salieron con crecimiento bacteriano ya que el caldo nutritivo del que fueron extradas
era no estril.
CONCLUSIONES:

Por medio de esta prctica se logr identificar los tipos de esterilizacin realizando los mtodos
fsicos ms ptimos y accesibles con el fin de poder comprobar la efectividad de cada uno, ya que
posteriormente en las prcticas siguientes podamos utilizar la que ms nos convenga.

BIBLIOGRAFIA
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1999.
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