Guia 2016

URP
Facultad de Medicina
Microbiologa
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS
Dr. Nicanor Domnguez Navarrete

Coordinador del curso
AO 2016
Alumno:
.........................................................
INDICE
1
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Microbiologa
Prctica N 1 Instrucciones generales
Prctica N 2 Examen en fresco. Observacin de cpsula
Prctica N 3 Coloracin de Gram. Coloracin de Vag
Prctica N 4 Coloracin de Ziehl-Neelsen
10
Prctica N 5 Mtodos de estudio de las bacterias
12
Prctica N 6 Accin de agentes fsicos
17
Prctica N 7 Accin de agentes qumicos. Antibiograma
20
Prctica N 8 Staphylococcus
26
Prctica N 9 Streptococcus
27
Prctica N 10 Enterobacterias
29
Prctica N 11 Vibrio. Campylobacter. Helicobacter
32
Prctica N 12 Bacterias ambientales y saprofitas del ser humano
35
Prctica N 13 Bacterias anaerobias
38
Prctica N 14 Bartonella. Brucella. Listeria
39
Prctica N 15 Bacterias de transmisin sexual
43
Prctica N 16 Micobacterias
46
Prctica N 17 Estudio de los virus
48
Prctica N 18 Hongos ambientales
50
Prctica N 19 Hongos levaduriformes
52
Prctica N 20 Hongos dermatofitos
54
Prctica N 21 Hongos dimrficos
58
Protocolos de laboratorio (1 al 6)
60
Seminarios (1 al 4)
66
Relacin de bacterias patgenas para el hombre
70
PRCTICA N 1
A. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
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La Bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas de sentido comn para proteger la
salud y la seguridad del personal que trabaja en el laboratorio.
Principio de bioseguridad:
1. Contencin Primaria: es la proteccin del personal y del medio ambiente inmediato
contra la exposicin a agentes infecciosos y/o productos qumicos de riesgo. Es provista
por una buena tcnica microbiolgica y el uso apropiado del equipo del equipo de
seguridad. El uso de vacunas aumenta el nivel de proteccin personal.
2. Contencin Secundaria: es la proteccin del medio ambiente externo contra la
exposicin de material infeccioso. Se logra por una combinacin de las caractersticas
de la edificacin y prcticas operacionales. As prevenir el escape de stos agentes al
exterior.
Factores asociados con transmisin de infecciones o accidentes en el laboratorio.
1. Rutas de infeccin: Ingestin, Inhalacin, Inoculacin, Penetracin en mucosas y piel.
Mordedura y picadura.
2. Formas de transmisin: Contacto directo, Indirecto, vehculo comn y vector.
3. Tipos de lesin: cortadura, quemadura, microtraumas, envenenamiento e intoxicaciones.
4. Factores ambientales: ventilacin, tipo de equipo, procedimiento y hacinamiento.
5. Factores biolgicos: patogenicidad del microorganismo, dosis infectante, susceptibilidad
del hospedero y reacciones alrgicas.
Clasificacin de los microorganismos por grupo de riesgo
1. Grupo de Riesgo I : Agestes con escaso riesgo individual y para la comunidad. Ejemplo:
Bacillus subtilis, Plasmodium.
2. Grupo de Riesgo II :Agentes que tienen riesgo individual moderado, pero limitado para la
comunidad.
Ejemplo:
Acinetobacter, Bordetella,
Bartonella,
Clostridium,
Corynebacterium,
Escherichia
coli,
Listeria,
Mycoplasma,
Pseudomonas,
Staphylococcus, Treponema, Haemophylus, Campylobacter, Neisseeria, Salmonella,
Shigella, Streptococcus.
3. Grupo de Riesgo III . Agestes que presentan un riesgo individual elevado, pero limitado
para la comunidad. Ejemplo: Brucella, Histoplasma, Mycobacterium tuberculosis,
Paracoccidioides, yersinia pestis.
4. Grupo de Riesgo IV : Agestes que constituyen un alto riesgo para los indivisuos y para
la comunidad. Ejemplo: Virus de inmunodeficiencia humana. Virus de fiebres
hemorrgicas, Dengue
Tipos de laboratorios en relacin al nivel de riesgo
1. Laboratorio con nivel de Bioseguridad 1
Es un laboratorio bsico que permite el trabajo con agentes de bajo riesgo. El laboratorio
est dentro de un edificio. El trabajo se realiza con mesas de laboratorio. Ubicados en
Centros de salud, hospitales de nivel local, universidades y centros de enseanza,
laboratorios de diagnstico.
2.
Laboratorio con nivel de Bioseguridad 2
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Es un laboratorio bsico que cuenta con cmara de bioseguridad y otros dispositivos
apropiados de proteccin personal. Se puede trabajar con agentes de riesgo II y clase
III. Ubicados en hospitales regionales y salud pblica.
3. Laboratorio con nivel de Bioseguridad 3
Laboratorio que cuenta con rea de acceso restringido y barreras de contencin para
proteger al operador. Destinado para trabajar con agentes de clase III. Laboratorios
especializados.
Medidas de Bioseguridad para nivel local, en prcticas de rutina.
1. El ingreso al laboratorio est prohibido a personas ajenas al servicio
2. Las superficies de trabajo son descontaminadas por lo menos una vez al da y cuando
se produce cualquier salpicadura de material infeccioso.
3. Todo material infeccioso es descontaminado antes de ser eliminado.
4. No se permite pipetear con la boca
5. En las zonas de trabajo de los laboratorios no se permitir al personal comer, beber,
fumar, guardar alimentos, ni aplicarse cosmticos.
6. Todas las muestras deben ser tratadas como altamente infecciosas para evitar el posible
contagio.
7. Todas las personas se deben lavar las manos despus de haber manipulado material
infeccioso, animales o al salir del laboratorio.
8. Todos los procedimientos se realizan cuidadosamente para evitar la formacin de
aerosoles.
9. Se debe utilizar mascarillas y guantes, cuando sea neceario, por el tipo de riesgo.
10. Desarrollar el hbito de mantener las manos lejos de la boca, nariz, ojos y cara. Este
puede prevenir la auto inoculacin.
11. Evitar molestar en los laboratorios con sonidos de alto volumen
12. El operradfor es el responsable de desinfectar el rea de trabajo antes y despus de
cada actividad con Fenol al 5%, Cresol al 3% u otro desinfectante, dejar actuar durante
30 minutos.
13. El material contaminado debe colocarse en cajas de metal con tapa. Descontaminar las
muestras en el propio laboratorio.
14. Asegurarse que el material infeccioso descartado sea fcilmente identificado.
15. Las piezas de vidrio reusables, deben ser colocadas horizontalmente en un depsito con
desinfectante y esterilizadas.
Referencia: Manual de Normas de Bioseguridad. Ministerio de Salud. Instituto Nacional de
Salud. Normas Tcnicas N 1
MANEJO DEL MICROSCOPIO
En microbiologa el manejo del microscopio es de gran ayuda para el reconocimiento de los
microorganismos. En preparaciones en fresco se utilizan los objetivos secos de 10X
40X, y en preparaciones coloreadas el objetivo de inmersin de 100X con aceite.
Despus de usar el microscopio debe hacerse una limpieza con alcohol isoproplico.
B. ENTREGA Y LECTURA DEL SILABO. RECOMENDACIONES DEL CURSO
PRCTICA N 2
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A. EXAMEN EN FRESO
1. Introduccin
El examen en fresco tiene por finalidad apreciar el tamao de las bacterias, que es del
orden de la micra (milsima de milmetro), su relacin con las clulas humanas y algunas
caractersticas de inters para su identificacin, como la movilidad o presencia de cpsula.
Este estudio se realiza mientras las bacterias se encuentran viables, en cultivos lquidos
jvenes (menos de 18 horas de incubacin) o en muestras biolgicas recin obtenidas.
2. Materiales:
1. Suspensin de mezcla de bacterias, levaduras y hemates
2. Lminas portaobjetos y laminillas cubreobjetos
3. Suero fisiolgico (ClNa 8.5 G/l) en gotero
4. Asa de siembra o microgotero
5. Guantes descartables
6. Bocal con desinfectante
3. Procedimiento
1. Tomar dos a tres asadas o una microgota de la mezcla bacteriana y depositarla en un
portaobjetos.
2. Cubrir la preparacin con un cubreobjetos.
3. Observar al microscopio, utilizando objetivo de 40 X
4. Resultados
Anotar la proporcin del tamao de las clulas humanas y las bacterias.
Apreciar el tipo de movimiento bacteriano: vibratorio, polar o peritrico.
B. OBSERVACIN DE CPSULA
1. Introduccin
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Algunos microorganismos tienen la capacidad de producir una estructura que rodea a la
bacteria, denominada cpsula, que le otorga un factor de virulencia al germen ya que
impide la fagocitosis.
Esta estructura se puede observar con facilidad en forma indirecta utilizando tinta china, que
no penetra en las bacterias capsuladas, dejando un halo transparente alrededor del
microorganismo.
2. Materiales (Nota: las lminas se presentan preparadas)
1.
2.
3.
4.
Suspensin de cultivo de Cyptococcus neoformans

Tinta china
Lminas portaobjetos y laminillas cubreobjetos
Bocal con desinfectante
3. Procedimiento
1. Depositar una microgota de tinta china sobre un portaobjetos.
2. Depositar muy junto a la anterior una asada de la suspensin del cultivo de
Criptococcus neoformans
3. Seguidamente colocar una laminilla cubreobjetos sobre ambas muestras, de tal
manera que se junten y obtener una gradiente de la mezcla.
4. Observar al microscopio con objetivo de 40 X
4. Resultados
Registrar las levaduras redondeadas o gemadas del Cryptococcus neoformans, rodeadas
de un halo transparente, en un fondo oscuro proporcionado por las partculas de tinta china.
C. FROTIS Y COLORACIN DE AZUL DE METILENO

1. Introduccin
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La coloracin de las bacterias permite estudiar la morfologa (bacilar, redondeada o
espirilar) y las diferentes agrupaciones de ellas (pares, tetradas, racimos, cadenas),
caractersticas que son tiles para su identificacin.
Los colorantes con radical cido coloreado (eosina, fucsina cida, azul de anilina y
fluorescena) colorean el protoplasma de las clulas, y son usados como contrastes. En
cambio los colorantes con radical bsico coloreado (azul de metileno, violeta de genciana,
fucsina bsica, safranina) tien el ncleo de las clulas.
Frotis: Para proceder a colorear a las bacterias es necesario hacer un frotis, que es el
resultado de depositar la muestra sobre un portaobjetos y fijarla con calor suave. Cuando el
material es lquido, depositar una asada; pero cuando proviene de medio slido (agar), se
debe realizar una suspensin ligera de la colonia en solucin salina, y luego fijarla.
2. Materiales
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Suspensin de mezcla bacteriana y cultivos bacterianos en agar nutritivo.

Lminas portaobjetos
Asa de siembra
Solucin de colorante Azul de metileno
Microscopio con objetivo de inmersin
Guantes descartables
3. Procedimiento
1. Tomar una asada de la mezcla bacteriana (lquido) y depositarla en un portaobjetos.
2. Si se utiliza cultivos en agar: depositar previamente una pequea gota de solucin
salina en el protaobjetos. Luego tocar la colonia con el asa de platino y hacer una
suspensin homognea.
3. Fijar los frotices con calor suave (que soporte la mano), hasta que seque la preparacin
4. Cubrir la preparacin con Azul de Metileno y dejarlo actuar durante 10 minutos
5. Lavar la preparacin con agua corriente. Secar la lmina con calor suave
6. Observar al microscopio con objetivo 100x, aadiendo una pequea gota de aceite de
inmersin.
4. Resultados
Hacer esquema de las diversas formas bacterianas y agrupaciones observadas.
PRCTICA N 3
A. COLORACIN DE GRAM
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1. Introduccin
Es la coloracin mas empleada en bacteriologa, puesto que permite agrupar a las bacterias
en dos categoras, las Gram Positivas, que son las que retienen el colorante violeta de
genciana y las Gram Negativas, que pierden el colorante primario por accin del
decolorante (alcoho-acetona), para luego teirse con un colorante bsico de contraste
(rojo). Esta coloracin tiene relacin con la composicin qumica de la pared y se describen
varias modificaciones.
2. Materiales
1. Suspensin de mezcla bacteriana y cultivos bacterianos en agar nutritivo
2. Juego de colorantes para Gram
a. Violeta de Genciana al 1 %
b. Solucin de Yodo (Lugol)
c. Decolorante: alcohol-acetona al 50%
d. Fucsina bsica al 0.1 %
3. Lminas portaobjetos
3. Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Hacer un frotis a partir de la mezcla bacteriana o del cultivo slido en agar.

Fijarlo con calor suave.
Cubrir la lmina con violeta de genciana. Dejar actuar por 30 segundos
Lavar con agua. Cubrir con solucin Yodo. Dejar actuar por 30 segundos
Decolorar con Alcohol-Acetona durante diez segundos
Lavar con agua. Cubrir con solucin de Fucsina. Dejar actuar durante 30 segundos
Lavar la lmina con agua y Secar.
Observar al microscopio con objetivo de inmersin.
4. Resultados
Hacer esquema de la morfologa y coloracin de las bacterias. Las grampositivas se tien
de color violeta y las gramnegativas de color rojo.
B. COLORACIN DE VAG
1. Introduccin
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Las espiroquetas no toman con facilidad los colorantes ms usados en microbiologa. Para
colorearlas se emplean las tcnicas de Giemsa o impregnacin argntica. Una tcnica
sencilla es la de Vago, que se describe.
2. Materiales
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Mondadientes
Solucin de Mercuro cromo al 2 % ( mertiolate coloreado )
Solucin de Violeta de Genciana al 1 %
Lminas portaobjetos.
3. Procedimiento
1. Con la ayuda de un mondadientes obtener una muestra de sarro dental y hacer un
frotis.
2. Dejar secar al ambiente.
3. Cubrir con mercuro cromo y dejar actuar durante 3 minutos
4. Lavar con agua corriente.
5. Cubrir con Violeta de Genciana y dejar actuar durante 3 minutos.
6. Lavar con agua corriente y secar.
7. Observar al microscopio con objetivo de inmersin.
4. Resultados
Hacer esquema de las diversas morfologas bacterianas observadas (cocos y bacilos
delgados, fusiformes o curvados), buscar en especial los espirilos que corresponden a la
Borrelia microdentis.
C. OBSERVACIN DE ESPORAS
Algunos grupos bacterianos, como los miembros de los gneros Clostridium y Bacillus,
tienen la capacidad de formar esporas, estructura que les otorga resistencia y supervivencia
a la bacteria, en condiciones ambientales adversas de temperatura, de nutricin, de pH, etc.
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Las tcnicas de coloracin son un tanto engorrosas, pero se les puede observar en las
coloraciones de Gram o Azul de metileno, como espacios vacos dentro de la bacteria.
Se presentan lminas con frotices de heces, coloreadas con Gram, donde se observan
esporas que dilatan a los bacilos (deformantes), caractersticas del gnero Clostridium. As
mismo se presentan frotices de cultivos envejecidos de Bacillus, con esporas que no
deforman a los grmenes.
CUESTIONARIO
1. Seale tres bacterias que poseen cpsula y cul es su funcin.
2. Seale los tipos de movilidad bacteriana y su relacin a la posicin de los flagelos.
3. Esquematice las diferentes agrupaciones de los cocos.
4. Las espiroquetas, a qu gneros agrupa?
5. En las lminas observadas. De qu color se tieron las espora y qu ubicacin
tuvieron?.
DESARROLLO
PRCTICA N 4
A. COLORACIN DE ZIEHL-NEELSEN
1. Introduccin
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Algunos grupos bacterianos poseen un elevado contenido de lpidos en su estructura, que
impiden tomar los colorantes preparados en solucin acuosa; las Micobacterias y
Nocardias tienen sta propiedad.
La coloracin de Ziehl-Neelsen utiliza fucsina con fenol, que con la ayuda del calor se
facilita la penetracin del colorante en la pared celular de la bacteria. Como decolorante
emplea una mezcla de alcohol con cido clorhdrico. Luego las bacterias que retienen el
colorante se observan de color rojo, denominndoles bacilos cido alcohol resistentes. til
para el diagnstico de enfermedades como la tuberculosis y la lepra.
2. Materiales
1. Juego de colorantes para Ziehl-Neelsen
a. Solucin de Fucsina fenicada
b. Solucin de alcohol-cido al 3 %
c. Solucin de Azul de metileno 5%
2. Mechero de alcohol
3. Muestra de esputo
3. Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Hacer un frotis a partir de la muestra de esputo. Fijarlo al calor suave.

Colocar el portaobjetos con frotis sobre un soporte en el lavatorio
Cubrir la lmina con colorante Fucsina fenicada
Con la ayuda del mechero de alcohol, calentar suavemente la preparacin hasta que
se desprendan vapores, retirar la llama y repetir el procedimiento por tres veces. El
colorante NO debe hervir ni secarse.
Eliminar el colorante y lavar la lmina con agua.
Decolorar con alcohol-cido, cubriendo la preparacin y hacer movimientos de
vaiven durante 15 a 30 segundos, hasta que no se desprenda colorante.
Lavar con agua y cubrir la lmina con solucin Azul de metileno.
Dejar actuar durante 10 minutos.
Lavar con agua. Secar. Observar al microscopio con objetivo de inmersin
4. Resultados
Hacer esquema de las estructuras celulares observadas de color azul y resaltar los bacilos
cido alcohol resistentes, de color rojo con morfologa caracterstica.
CUESTIONARIO:
1. Escriba el fundamento de la coloracin de Gram
2. Seale cuatro gneros bacterianos Gram positivos y cuatro Gram negativos
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3. Qu bacterias no toman la coloracin de Gram?
4. Seale las diferencias entre la coloracin de Gram y de Ziehl Neelsen?
5. Describa usted la morfologa del bacilo tuberculoso observado:
DESARROLLO
PRCTICA N 5
A. MTODOS DE ESTUDO DE LAS BACTERIAS
1. Introduccin
La mayora de las bacterias son capaces de desarrollar in vitro, en medios inertes
provistos de sustancias nutritivas, y condiciones apropiadas de pH, temperatura, oxgeno o
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anhdrido carbnico. Los nicos grupos bacterianos que crecen in vitro solo en cultivos
celulares, son las Chlamydias y las Rickettsias. Se debe sealar que Treponema pallidum y
Mycobacterium leprae no desarrollan in vitro.
El inters de cultivar las bacterias in vitro es conocer las caractersticas biolgicas,
comportamiento metablico, produccin de enzimas, toxinas, sustancias con poder de
antgeno; elementos que contribuyen a la identificacin de cada especie microbiana
Medios de cultivo inertes: En la actualidad se conocen las necesidades nutricionales de los
diferentes grupos bacterianos, por lo tanto, se dispone de recetas con los componentes
necesarios para el aislamiento de la bacteria que uno desee.
De acuerdo a la consistencia, los medios de cultivo se agrupan en lquidos, slidos y
semislidos. Los lquidos se emplean para incrementar la poblacin bacteriana inicial, y el
desarrollo se observa por turbidez del medio. En cambio los medios slidos se obtiene
incluyendo el compuesto agar, que a temperatura de 50C se mantiene lquido y se
dispensa en placas petri, y al enfriarse a temperatura ambiente se solidifica; se utilizan para
individualizar las diferentes bacterias presentes en una muestra y obtener colonias. Los
medios semislidos se emplean para observar la movilidad bacteriana.
Segn la necesidad de oxgeno las bacterias pueden ser Aerobias estrictas, que desarrollan
slo en presencia de oxgeno, Anaerobias facultativas, que crecen en presencia o ausencia
de oxgeno, Anaerobias estrictas, que slo crecen en ausencia de oxgeno y las
Microaerfilas que desarrollan con bajas tensiones de oxgeno.
Tcnica de siembra: procedimiento por el cual se pone en contacto el microorganismo con
el medio de cultivo, para que en condiciones ptimas pueda desarrollarse la bacteria in vitro.
El dispositivo empleado para tomar la muestra e inocularla en el medio se denomina asa
de siembra, de platino o de Kolle, y se usan las tcnicas: puntura, estra o agotamiento.
Metabolismo bacteriano
Los microorganismos realizan diversas reacciones bioqumicas para su crecimiento.
Algunas de estas reacciones corresponden a sistemas enzimticos codificados por genes
cromosmicos, que permite la identificacin del gnero o especie bacteriano. Otras veces
excretan compuestos, enzimas o toxinas, que son dainos para el organismo humano y
amerita demostrar su presencia, para identificar la especie patgena.
La ubicacin de un grupo bacteriano como familia, gnero o especie, depende en gran
medida de la capacidad metablica frente a sustratos definidos (marcadores). A ste estudio
se denomina biotipo bacteriano. Dentro de una especie bacteriana puede haber
diferencias antignicas entre cepas, y constituyen los serotipos.
El uso de tcnicas moleculares para la identificacin bacteriana es de actualidad, sobre todo
en microorganismos que son de difcil aislamiento o que demoran mucho en desarrollar in
vitro. Tambin son tiles para el seguimiento de una cepa determinada durante un brote
epidmico. Desafortunadamente entre los grupos de bacterias que infectan al ser humano
hay cierta interrelacin de genes, que complican la interpretacin. Por lo cual se continan
utilizando los procedimientos clsicos de: microscopia, cultivo, biotipo y serotipo.
EN LA PRCTICA SE DEMOSTRAR ALGUNAS REACCIONES BIOQUMICAS:
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a) Utilizacin del carbohidrato lactosa: la bacteria lo transforma en cido pirvico, que
acidifica el medio; cambio de pH que puede ser demostrado a su vez, por cambio de color
del indicador rojo de fenol (amarillo en cido)
b) Utilizacin del aminocido triptfano, con la produccin del metabolito Indol. Que se
demuestra por la reacciona con el p-dimetil amino benzaldehdo, originando un compuesto
de color rojo soluble en alcohol amlico.
c) Produccin de hidrgeno sulfurado (SH2) al metabolizar un aminocido con azufre, que
se observa por la formacin de colonias negras, debido a la produccin de sulfuro de hierro.
c) Produccin de toxinas: algunas bacterias elaboran hemolisinas, sustancias que destruyen
los eritrocitos. Actividad hemoltica que se puede demostrar in vitro, cultivando la bacteria en
medios con sangre, para observar colonias rodeadas de halos de hemlisis.
d) Pocas bacterias productoras de pigmento son patgenas para el ser humano, luego esa
caracterstica es til para su reconocimiento. Ejemplo: Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa y Mycobacterium atpicos.
2. Materiales: (Demostrativo)
1. Cultivos de Bacillus subtilis, Escherichia coli y Staphylococcus aureus en placa
petri con agar nutritivo
2. Cultivos en medio lquido de Staphylococcus sp. y Bacillus subtilis.
3. Cultivos en medio semislido de Escherichia coli y Pseudomonas a..
4. Cultivos de Escherichia coli, Pseudomonas a y Proteus mirbilis, en medio de
TSI (con lactosa y aminocidos).
5. Cultivos de Escherichia coli y Pseudomonas a. en medio caldo peptonado
6. Placas petri con agar sangre, sembradas con bacteria hemoltica
7. Reactivo para Indol (p-dimetil amino benzaldehdo)
B. ESTUDIO DE COLONIAS BACTERIANAS

3. Procedimiento:
1. Observar y registrar las caractersticas de las colonias desarrolladas en los
medios de cultivo slidos en placas petri: formacin de colonia
Tamao: medido en milmetros.
Forma: circular, elptica, puntiforme, filamentosa.
Superficie: lisa, rugosa, granular.
Elevacin: plana, convexa, umbilicada.
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Borde: entero, ondulado, dentado, filamentoso.
Consistencia: cremosa, membranosa, mucosa.
Cromognesis: amarillo, rojo, verde, negro
2. Observar las caractersticas del desarrollo en los medios lquidos: turbidez
homognea, formacin de sedimento, presencia de nata.
3. Observar las caractersticas del desarrollo en los medios semi slidos: turbidez
uniforme (aero-anaerbico facultativo), turbidez slo en superficie (aerobio) o
slo en el fondo (anaerobio)
4. Observar el cambio de color en el medio con lactosa (TSI)
5. Observar el cambio de color a negro del medio TSI
6. Aadir al caldo peptonado, gotas de reactivo Erlich o Kovacs, apreciar el cambio
de color
7. Observar las placas de agar sangre y apreciar la ausencia de hemates en el
rea circundante a las colonias.
4. Resultados: Describir las colonias observadas.
COLONIA
BACILLUS
ESCHERICHIA
Tamao
Forma
Superficie
Elevacin
Borde
Consistencia
Cromognesis
C. METABOLISMO BACTERIANO
a. Medio semi slido

(uso del oxgeno)
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STAPHYLOCOCCUS
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b. Metabolismo de Lactosa
c. Metabolismo del triptofano
d.
Movilidad bacteriana
e. Produccin de H2S
f.
Observar la hemlisis
CUESTIONARIO:
1. Qu procedimiento se debe seguir para agrupar a las bacterias en un biotipo?
2. Qu inters tiene para el campo mdico evaluar la capacidad de una bacteria en
producir enzimas, toxinas o metabolizar determinado sustrato?
3. Cul es la finalidad de conocer las caractersticas de una colonia bacteriana?
4. Defina usted el concepto de colonia bacteriana.
5. D usted un concepto de medio de cultivo (caractersticas y utilidad)
DESARROLLO
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PRCTICA N 6
ACCIN DE AGENTES FSICOS SOBRE LAS BACTERIAS
1. Introduccin
El trmino esterilizacin implica un procedimiento, generalmente fsico, mediante el cual un
material determinado (instrumental quirrgico o material del laboratorio) queda libre de
microorganismos.
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El comportamiento de los microorganismos frente a diversos agentes fsicos es variable; en
algunas condiciones puede estimular la multiplicacin bacteriana, en otras inactiva su
metabolismo e incluso logra destruirlos. Este ltimo efecto es utilizado para obtener la
esterilizacin de instrumentos mdicos y material biolgico.
El calor seco (horno): se necesita temperaturas de 180C durante 60 minutos de exposicin
para obtener esterilidad.
El calor hmedo (bao mara hirviendo): necesita periodos superiores a 20 minutos para
destruir a las bacterias vegetativas.
El calor hmedo a presin (autoclave): es el procedimiento de esterilizacin ms confiable.
A una presin de 15 libras por pulgada cuadrada se obtiene 121C de temperatura, que
durante un periodo de 15 minutos se consigue la esterilizacin total, libre de bacterias
patgenas, esporuladas e incluso de virus.
A: CALOR HMEDO
1. Materiales:
1. Cultivo de Staphylococcus sp, Bacillus subtilis, Escherichia coli y Pseudomonas
sp. en medio lquido (tubos de 16x150 con 1 ml)
2. Placas petri con Agar nutritivo estril
3. Cocina elctrica para calentar agua hasta hervir
4. Asas de siembra
2. Procedimiento:
1. Poner agua en un depsito y calentarlo en la cocina hasta hervir
2. Dividir las placas petri con agar nutritivo en cuatro partes y rotular con: 0, 1, 2, y
5. que son los tiempos en minutos de exposicin.
3. Tomar de la suspensin bacteriana una asada y sembrar en la placa petri con
Agar en el rea marcada con 0, que ser el control de viabilidad de la bacteria y
de referencia.
4. Colocar la suspensin bacteriana en el bao mara hirviendo durante un minuto,
seguidamente tomar una asada y sembrarla en la zona rotulada con 1
5. Volver a colocar la suspensin bacteriana en el bao mara hirviendo y completar
el tiempo de exposicin de 2 minutos. Luego tomar una asada y sembrarla en la
zona rotulada con 2
6. Volver a colocar la suspensin bacteriana en el bao maria hirviendo hasta
completar el tiempo de 5 minutos. Luego tomar una asada y sembrarla en la
zona de la placa rotulada con 5
7. Rotular la placa petri con nombre y cepa utilizada.
8. Incubar la placa petri a 37C durante 24 48 horas
3. Resultados:
La presencia de colonias indica desarrollo bacteriano (viabilidad). Las zonas marcadas con
0, son los controles de viabilidad, donde siempre debe haber desarrollo.
Registrar el desarrollo bacteriano en funcin a la cantidad de colonias formadas:
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a) Escaso (menos de 10 colonias) 1+
b) Moderado (10 a 50 colonias)
2+
c) Abundante (incontables) 3+
.
Tiempo de
Staphylococcus
exposicin a 100C
Bacillus subtilis
Escherichia coli
Cero minutos
1 minuto
2 minutos
5 minutos
Anotar el nmero de colonias presentes en cada rea
B. RADIACIONES ULTRA VIOLETA

Son radiaciones de una longitud de onda de 300 nm, que tienen propiedad bactericida
cuando actan directamente sobre las bacterias. Se les emplea para esterilizar ambientes
quirrgicos y cubculos de laboratorio, para eliminar las bacterias suspendidas en el aire.
Estas radiaciones no tienen la capacidad de atravesar cualquier elemento que se interponga
(papel, vidrio, etc.), luego tienen su limitacin.
1. Material
1.
2.
3.
4.
Lmpara de mercurio que emite radiaciones ultravioleta (UV)

Placas petri con agar nutritivo estriles
Cultivo de Pseudomonas aeruginosa en medio liquido
2. Procedimiento
1. Con una asa de platino humedecida en el cultivo de P. aeruginosa sembrar por
agotamiento toda la superficie del agar.
19
URP
Microbiologa
2. Llevar la placa sembrada al cubculo que tiene una lmpara de mercurio (UV)
3. Destapar la placa y exponerla a las radiaciones, pero cubrir la mitad de la
superficie sembrada con un papel.
4. Dejar en exposicin durante 10 minutos
5. Retirar la placa del cubculo, rotularla e incubarla a 37 C durante 24 48 horas.
3. Resultados
La presencia de colonias indica desarrollo bacteriano (viabilidad), en cambio la ausencia de
colonias es expresin de muerte bacteriana.
Hacer un esquema de lo observado.
rea cubierta de
radiaciones
C. FILTRACIN (Demostrativo)
Algunos medios biolgicos no pueden ser sometidos a temperaturas elevadas, porque se
altera su composicin qumica, luego para liberarlos de las bacterias se le pasa por filtros
con poros muy pequeos: 0.45 a 02 micras.
Observar los filtros de Chamberland (porcelana) y Millipore (sinttico)
PRCTICA N 7
ACCIN DE AGENTES QUMICOS SOBRE LAS BACTERIAS
1. Introduccin:
Numerosos compuestos qumicos, tanto inorgnicos como orgnicos, tienen actividad lesiva
para los microorganismos, propiedad que se utiliza en medicina para destruir a las bacterias
potencialmente patgenas para el organismo. A los que se aplican tpicamente con la
finalidad de prevenir una infeccin, se les denomina antispticos. Los agentes qumicos
que destruyen grmenes patgenos se les denomina desinfectantes.
20
URP
Microbiologa
A. En la prctica se demostrar la actividad de los compuestos qumicos ms empleados en
medicina.
2. Materiales:
1. Suspensin bacteriana de Staphylococcus sp y Escherichia coli
2. Solucin de desinfectante Mertiolate, Aseptil rojo y Alcohol 70, (5 ml cada uno).
Dos juegos
3. Dos placas petri con Agar nutritivo, divididas en cuatro reas.
4. Pipetas Pasteur estriles (goteros)
3. Procedimiento:
1. Dividir una placa petri con Agar en cuatro reas : Control (C), Mertiolate (M) ,
Aseptil Rojo (AR) y Alcohol (A)
2. Con la ayuda de asa de siembra, depositar una asada de la suspensin
bacteriana y dispersarla zona marcada con C control de viabilidad
3. A cada solucin de desinfectante, aadirle 5 gotas de la suspensin bacteriana.
Dejar actuar durante 5 minutos dicha mezcla.
4. Seguidamente tomar una asada de cada mezcla y dispersarla en la superficie del
agar rotuladas con M, ARy A, respectivamente.
5. Esperar unos minutos hasta que el inculo se seque e incubar la placa a 37C
durante 24 a 48 horas.
4. Resultados:
Registrar el desarrollo bacteriano por la formacin de colonias.
Comparar el desarrollo y nmero de colonias de la zona de control con los de la mezcla con
desinfectantes.
Microorganismo: Staphylococcus sp
CONTROL
ASEPTIL ROJO
MERTIOLATE
Microorganismo: Escherichia coli
21
ALCOHOL
URP
Microbiologa
CONTROL
ASEPTIL ROJO
MERTIOLATE
ALCOHOL
Comentario
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------B. EVALUAR LA CONCENTRACIN DEL ANTISPTICO
1. Material
1. Cultivos de Escherichia coli o Staphylococcus sp en medio lquido
2. Frascos con tapa roca que contienen Mertiolate concentrado, y diluido al 1/5,
1/25 y 1/125
2. Placas petri de cuatro divisiones con agar nutritivo
3. Gotero
2. Procedimiento
2. Aadir 05.ml (5 gotas) de un cultivo de 18 horas de incubacin (Escherichia coli o
Staphylococcus sp)
3. Luego de 1 minuto de exposicin, sembrar una asada de cada uno de los frascos
con antisptico en la superficie de un cuadrante del agar nutritivo
4. Incubar a 37 C durante 24 a 48 horas.
3. Resultados:
Concentrado
Dilucido 1/5
Diluido 1/25
Diluido 1/125
1 minuto
Comentario
--------------------------------------------------------------------------------------------------------C. ANTIBIOGRAMA
1. Introduccin
La actividad de los antibiticos y quimioterpicos debe ser evaluada in vitro para obtener la
informacin que permita decir si un microorganismo es susceptible o resistente a
determinado producto y pueda ser utilizado con xito en el paciente.
La concentracin mnima inhibitoria (MIC) es una medida que representa la mnima
cantidad de quimioterpico necesaria para impedir el desarrollo bacteriano.
22
URP
Microbiologa
Dos son los procedimientos empleados para obtener sta informacin, el mtodo de
dilucin en tubo o placa y el de disco difusin en agar.
C-1- Mtodo del Tubo Dilucin (Demostrativo)
2. Material
1. Se presenta una gradilla con diez tubos en los que se han realizado diluciones
sucesivas, al medio, a partir de una solucin de antibitico con 200 microgramos.
Con ello se han obteniendo concentraciones decrecientes de 100 50 25
12,5 6,25 3.12 1.56 0.78 y 0.39 mcg/ml. del antibitico.
El ltimo tubo no contiene antibitico. (control de viabilidad de la bacteria)
A cada tubo se le ha aadido 0.5 ml de un cultivo de 18 horas de la bacteria en
estudio. Toda la gradilla de tubos ha sido incubada a 37C durante 24 horas.
3. Procedimiento
1. Leer el desarrollo bacteriano como turbidez. (resistencia bacteriana)
2. En los tubos transparente no hay desarrollo: sensible al quimioterpico.
3. El ltimo tubo transparente representa la dilucin de quimioterpico denominada
MIC
4. Resultados: Hacer esquema de lo observado
Tubo
10
control
Concentraci
n de
antibitico
mcg/ml
100
50
25
12.5
6.25
3.12
1.56
0.78
0.39
----
desarrollo
MIC:
C-2- Mtodo de Disco Difusin en agar:

1. Materiales
1. Placas petri con Agar Mueller Hinton
2. Suspensin bacteriana a estudiar con una turbidez equivalente a 4 de escala
Mac Farland.(100,000/ml)
3. Hisopo de algodn estril.
4. Discos de papel de filtro embebidos en antibiticos.
23
URP
Microbiologa
2. Procedimiento:
1. Humedecer el hisopo estril en la suspensin bacteriana.
2. Frotar el hisopo en la superficie del agar Mueller Hinton en forma radiada, de tal
manera que toda la superficie reciba uniformemente el inculo.
3. Con la ayuda de una pinza, depositar los discos con antibiticos en la superficie
del agar, con una separacin superior a 2 cm.
4. Incubar el cultivo a 37C durante 24 horas.
5. Resultado
1. El desarrollo bacteriano se lee por la presencia de colonias.
2. Observar alrededor de los discos la formacin de halos transparentes sin
desarrollo bacteriano, indica que la bacteria es sensible a dicho producto.
3. El dimetro de los halos de ausencia de desarrollo deben ser medidos y llevados
a la tabla de Bauer y Kirby para catalogar los resultados.
4. Si hay desarrollo bacteriano alrededor del disco, se deduce que es resistente a
dicho antibitico. (no vlido para uso clnico)
Hacer esquema de lo observado:
Tabla de Bauer y Kirby:
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URP
Microbiologa
Quimioterpico
Concentracin
del disco mcg
Ampicilina
AM
Amikacina
AK
Ac nalidxico AN
Cefalotina
CF
Cefoxitina
CTX
Ceftriaxona
CRO
Cloranfenicol
C
Kanamicina
K
Nitrofuranos
FD
SulfatrimetoprimS
XT
Ciprofloxacina
CIP
Tetraciclina
T
Penicilina
P
10
30
30
30
30
30
30
30
300
231
5
30
Halo de inhibicin de desarrollo

Resistente
- 13
+ 17
- 15
+ 17
- 13
+ 19
- 14
+ 18
- 15
+ 21
- 13
+ 21
- 14
+ 18
- 13
+ 18
- 14
+ 17
- 10
+ 16
- 15
+ 21
- 14
+ 19
25
Intermedio
14 16
16 16
14 - 18
15 17
16 20
14 20
15 17
14 17
15 16
11 15
16 20
15 18
Sensible
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CUESTIONARIO:
1. Diga usted el procedimiento y temperatura conveniente para esterilizar los medios de
cultivo.
2. Al esterilizar en bao de mara hirviendo, Cul es la duda de la esterilidad?
3. Enuncie el concepto de MIC y cul es la utilidad?
4. Seale los factores que pueden alterar el resultado en un antibiograma.
5. En la prctica dnde se utilizan las radiaciones ultravioletas?
DESARROLLO
26
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PRCTICA N 8
STAPHYLOCOCCUS
1. Introduccin
Estos microorganismo se encuentran distribuido en la naturaleza y forma parte de la flora
normal del hombre. La especie Staphylococcus aureus es causante de diversos procesos
infecciosos como la forunculosis, imptigo, abscesos, intoxicaciones alimentarias, etc. Otras
especies son patgenos oportunistas.
Las caractersticas del gnero Staphylococcus corresponden a cocos gran positivos,
agrupados en racimos, desarrollan en medios hipertnicos y producen una potente enzima
catalasa o peroxidasa.
2. Materiales (Demostrativo)
1. Cultivo de Staphylococcus sp. en caldo nutritivo
2. Cultivo de S. aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus en medio hipertnico con
manitol (MH) y en agar nutritivo con un disco de Novobiocina.
3. Plasma humano
4. Agua oxigenada 30 volmenes
3. Procedimiento
1. Observar el desarrollo con turbidez uniforme del Staphylococcus en caldo.
2. Hacer un frotis del medio lquido o slido y colorearlo con Gram.
3. Observar las caractersticas de las colonias y el comportamiento frente al manitol
de las tres especies de Staphylococcus.
4. Observar el comportamiento de las tres especies frente a la Novobiocina.
Depositar una gota de agua oxigenada sobre un portaobjetos. Con el asa de
siembra tomar una pequea colonia de Staphylococcus y ponerla en contacto
con el agua oxigenada, apreciar la formacin de burbujas (enzima catalasa).
5. Depositar 1 ml de plasma en tubo pequeo. Con el asa de siembra tomar una
pequea colonia del cultivo y depositarla en el plasma. Incubar a 37C durante 4
horas. Observar la formacin de cogulo por accin de la enzima coagulasa.
4. Resultados: Registrar las observaciones
Gram
Novobiocina
27
Manitol
Catalasa
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PRCTICA N 9
STREPTOCOCCUS
1. Introduccin
Este gnero comprende a un grupo numeroso de microorganismos, muchos viven como
comensales, pero algunos son patgenos para el hombre, como el S. pygenes, S.
agalactiae, S. pneumoniae. Producen infecciones focales como faringitis, imptigo,
endocarditis, escarlatina, neumona, meningitis, otitis y sndromes pos infecciosos como la
cardiopata reumtica y la glomrulo nefritis aguda.
El grupo corresponde a cocos esfricos o lanceolados, que se orientan en cadenas o pares,
gram positivos. La clasificacin ms prctica es la basada en el tipo de hemlisis que se
produce en el medio de agar sangre. S. pygenes produce hemolisina tipo beta o total y es
sensible a la bacitracina. S. viridans produce hemlisis tipo alfa o parcial, de los cuales S.
pneuminae es formador de cpsula y sensible a la etilhidrocupreina (optochin). Y
enterococo tiene la capacidad de desarrollar en medio salino (6.5 g % de Cl Na)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Cultivo de Streptococcus sp.en caldo nutritivo

Cultivo de Streptococcus pygenes en agar sangre , con disco de bacitracina
Cultivo de Streptococcus viridans en agar sangre con disco de optochin
Cultivo de Streptococcus pneumoniae en agar sangre con disco de optochin
Cultivo de Enterococcus en agar sangre y en caldo salino
Juego de colorantes para Gram
3. Procedimiento
1. Observar la caracterstica de desarrollo del Streptococcus en caldo nutritivo, con
formacin de sedimento y transparencia en el sobrenadante
Mezclar el tubo y hacer un frotis, colorearlo con Gram
2. Observar las placas de agar sangre, estudiar las caractersticas de las colonias y
su comportamiento con la sangre. Tipos de hemlisis alrededor de ellas.
3. Observar el comportamiento de cada especie bacteriana frente a la bacitracina y
el optochin
4. Apreciar el desarrollo uniforme del Enterococcus en el caldo salino.
4. Resultados
Gram
Cultivo en caldo
28
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Microbiologa
Agar sangre: hemlisis
Enterococcus
Caldo salino
Agar nutritivo
29
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PRCTICA N 10
ENTEROBACTERIAS
1. Introduccin
Son un grupo de microorganismos que habitan el intestino del hombre y de los animales, la
materia orgnica en descomposicin, el suelo y como contaminantes del agua. La mayora
de las especies son saprofitas u oportunistas; algunas especies son agentes causales de
infecciones sistmicas (Salmonella typhi) o intestinales (Shigella sp); y otras estn
relacionadas con las infecciones nosocomiales.
Estos grmenes son bacilos Gram negativos, no esporulados, que desarrollan fcilmente en
los medios de cultivo. Todas fermentan la glucosa y poseen una diversidad de enzimas que
permite clasificarlos en gneros de acuerdo al substrato metabolizado (biotipo). Carecen de
la enzima citocromo oxidasa.
Para el aislamiento e identificacin de las enterobacterias se emplean medios de cultivo
cuya composicin permite aislarlas slo a las especies de ste gnero.
A. AISLAMIENTO
2. Materiales
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Viales con muestra de heces en medio de transporte

Placas petri con medio de agar Mac Conkey
Placas petri con medio de agar SS
Lminas portaobjetos.
3. Procedimiento
1. Hacer un frotis a partir de la muestra contenida en el vial y colorearlo con gram
2. Con el asa de platino en anillo, tomar una pequea muestra y sembrarla, por
dispersin y agotamiento, en la superficie de los dos medios de cultivo.
3. Incubar las placas a 37C durante 24 a 48 horas.
4. Observar las placas de petri ya sembradas con cepas patrones.
Agar Mac Conkey
Agar SS
30
Gram
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Microbiologa
B IDENTIFICACIN
1. Tubos con medios diferenciales: TSI (tres azcares y hierro) y LIA (lisina hierro y
agar), Citrato y Urea y agar movilidad, sembrados con las cepas de Escherichia
coli, Klebsiella, Proteus, Salmonella y Shigella.
2. Procedimiento
1. Estudiar comparativamente las caractersticas de desarrollo de las diversas
especies bacterianas en los medios de Mac conkey y agar SS.
2. Estudiar las reacciones bioqumicas, producto del metabolismo bacteriano en los
medios diferenciales e identificar los biotipos.
TSI
LIA
Lactosa y sacarosa (pico)
Color Lila (alcalino)

decarboxilacin
Color negro:
produccin de SH2
Color negro (H2S)

Desaminacin (acidez)
Color guinda
Glucosa (fondo)
No utiliza Lisina
(incoloro en el fondo)
Color amarillo: acidez

3. Resultados
Registrar los cambios observados producto de la actividad metablica de la especie
bacteriana.
31
URP
Microbiologa
Escherichia
coli
Klebsiella
Proteus
Mac
Conkey
SS agar
Glucosa
Gas
Lactosa
H2S
Desaminacin
Decarboxilacin
Citrato
Urea
Movilidad
32
Salmonella
Shigella
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PRCTICA N 11
A. VIBRIOS
1. Introduccin
La familia Vibrionaceae comprende tres gneros de importancia mdica: Vibrio, Aeromonas
y Plesiomonas. Todos tienen como hbitat el medio acutico, luego la contaminacin
humana es consecuencia de la ingesta de agua o alimentos de dicho origen, con grandes
cantidades de microorganismos.
Todos ellos son de forma bacilar recta o curvada, gram negativos y con movilidad polar.
Desarrollan con facilidad en los medios de cultivo, fermentan glucosa y poseen una potente
enzima citocromo oxidasa. Las especies patgenas ms frecuentes en el ser humano son
Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolticus y Aeromonas.
1. Fritices de heces de pacientes con enterocolitis por clera, coloreados con gram.
2. Cultivo de Vibrio cholerae en caldo agar TCBS (sacarosa, bilis, citrato y
thisulfato)
3. Cultivo de Vibrio parahemolticus en agar TCBS
3.Procedimiento y resultados
1. Observar la forma curvada del vibrio cholerae en los frotices de heces.
2. Observar comparativamente el desarrollo de las cepas presentadas sembradas
en Agar TCBS, apreciar el cambio de color por la utilizacin de la sacarosa.
3. Realizar la reaccin de oxidasa de las cepas presentadas.
33
URP
Microbiologa
B. CAMPYLOBACTER
1. Introduccin
Este gnero agrupa a microorganismos de forma helicoidal, coma o en S. Campylobacter
se asocia con infecciones intestinales. Para el aislamiento in vitro requiere de medio de
cultivo selectivo, incubado en ambiente con 5% de CO2 y a temperatura de 42C. Otra
metodologa es hacer pasar la muestra por filtros millipore de 0.45 mu, ya que la bacteria
por su delgadez atraviesa el filtro.
1. Frotis de heces de lactantes, coloreados con Gram y Vag
3.Resultado
Gram
Vag
C. HELICOBACTER
1. Introduccin
La especie Helycobacter pylori se asocia con gastritis y lcera gstrica, para el diagnstico
se debe investigar su presencia en biopsias o por la produccin de ureasa.
2.Materiales:(Demostrativo)
1. Cortes histolgicos de mucosa gstrica
3. Procedimiento y resultados
1. Observar con objetivo de 40X y 100X, el corte histolgico de mucosa gstrica,
coloreado con hematoxilina-eosina
34
URP
Microbiologa
CUESTIONARIO
1. Seale el sustrato que divide a las enterobacterias en dos categoras.
2. Seale las especies de enterobacterias productoras de SH2, evidenciado por el
ennegrecimiento del medio.
3. Seale el agente de lceras gastro duodenales y la enzima til para identificarlo
4. Qu ocasiona el Campylobacter jejuni y cmo lo identifica?
5. Qu utilidad tiene el estudiar el metabolismo de la enterobacterias?
DESARROLLO
35
URP
Microbiologa
PRCTICA N 12
A. BACTERIAS AMBIENTALES Y COMENSALES DEL SER HUMANO
1. Introduccin
Microorganismos de diferentes gneros habitan en el medio ambiente o forman parte de la
flora normal del cuerpo humano. Son saprofitos, pero patgenos oportunistas. Un grupo de
ellos, tienen en comn la incapacidad para metabolizar los carbohidratos por va
fermentativa, e incluye a Pseudomonas, Acinetobacter, Alcalgenes, Cromobacterias,
Flavobacterias, etc.
1.
2.
3.
4.
Cultivo de Pseudomonas aeruginosa en caldo nutritivo y agar nutritivo.

Cultivo de Pseudomonas aeruginosa en medio TSI y agar movilidad
Cultivo de Acinetobacter en medio agar nutritivo, TSI y Agar movilidad
Reactivo para reaccin de oxidasa y juego de colorantes para gram
3. Procedimiento
1. Observar el desarrollo en superficie de la P. aeruginosa en caldo nutritivo y hacer
un preparado en fresco, observarlo a 40X.
2. Hacer frotis a partir del caldo con P. aeruginosa y colorearlo con Gram
3. Estudiar comparativamente las colonias de Pseudomonas y Acinetobacter en el
medio de agar nutritivo.
4. Apreciar formacin de pigmentos de P. aeruginosa: verde (en agar nutritivo),
negro (en TSI) y azul (luego de aadir cloroformo al caldo nutritivo).
5. Observar el comportamiento de ambas cepas en el medio de TSI (ausencia de
desarrollo en el fondo) y en el medio movilidad.
6. Realizar la reaccin para Oxidasa.
4. Resultados
Pseudomonas
Acinetobacter
36
URP
Microbiologa
B. FLORA BACTERIANA NORMAL: LACTOBACILLUS

1. Introduccin
Los Lactobacillus son un grupo de grmenes saprofitos, que tienen la capacidad de producir
cido lctico, como producto final del metabolismo de los hidratos de carbono. La especie
Lactobacillus acidphilus (bacilo de Doderlein) habita las vas genitales femeninas,
metaboliza el glucgeno y produce la acidez necesaria para evitar la contaminacin vaginal
por bacterias entricas.
Cuando el pH vaginal se modifica hacia la neutralidad, las bacterias oportunistas pueden
proliferar. Un ejemplo tpico es el cuadro clnico denominado vaginosis, que se inicia con la
disminucin de la produccin de estrgenos, disminucin de glucgeno y desaparicin del
bacilo doderlein; permitiendo la proliferacin de microorganismos intestinales como
Gardnerella o Mobiluncus.
Gardnerella: son bacilos que colorea variablemente con el gram, anaerobio facultativo, que
invade las clulas epiteliales vaginales, dando una imagen caracterstica denominada
clulas clave (clu cells).
Mobiluncus: son bacilos curvados, en hoz, gram variable, anaerobios.
1. Frotis de flujo vaginal normal, coloreado con Gram
2. Frotis de flujo vaginal correspondiente a vaginosis, coloreado con Gram
Hacer esquema de lo observado en el microscopio
Frotis vaginal normal (Gram)
Frotis vaginal con vaginosis
37
URP
Microbiologa
C. FLORA BACTERIANA NORMAL: CORYNEBACTERIUM

1. Introduccin
El Corynebacterium diphtheriae es la nica especie patgena de ste gnero, su rol
patgeno est ntimamente relacionado con la produccin de exotoxina y la transmisin es
inter-humana. Este gnero tambin la integran especies saprofitas que habitan la piel y
mucosas.
Son microorganismos de forma bacilar, irregular, con los extremos dilatados y en
agrupaciones irregulares en letras chinas, gram positivos. Desarrollan con facilidad en los
medios de cultivo que contengan plasma o sangre.
1. Frotis de cultivo de Corynebacterium sp para colorear con Gram
2. Cultivo de Corynebacterium sp. en Agar sangre
1. Procedimiento
Colorear los frotices presentados con Gram y observar con lente de inmersin. Apreciar la
forma bacilar corta, gruesa y en empalizada
1. Describir las colonias del cultivo en Agar sangre
2.
Resultados. Hacer esquema de lo observado en el microscopio
38
URP
Microbiologa
PRCTICA N 13
BACTERIAS ANAEROBIAS
1. Introduccin
Son microorganismos ampliamente distribuidos en la naturaleza y en el intestino de los
animales. El gnero Clostridium representa al grupo de bacilos gram positivos, formadores
de esporas y productores de toxinas, que ocasionan patologa al ser humano posteriores a
un trauma (C. tetani, C. perfringes) o por la ingesta de alimentos con exotoxinas (C.
botulinum).
Otro grupo importante de anaerobios no esporulados, son los que habitan en el intestino
(Bacteroides), va respiratoria alta (Fusobacterium) o piel (Propionibacterium), que son
patgenos oportunistas.
Materiales (Demostrativo)
1. Frotis de secrecin de herida gangrenosa coloreada con Gram.
2. Cultivo de Clostridium sp, en medio de thioglicolato y agar semislido
3. Sistemas para obtener ambiente de anaerobiosis
Procedimiento
1. Observar con objetivo de inmersin los frotices coloreados, anotar las
caractersticas de los bacilos.
2. Observar la forma de desarrollo, alejada de la superficie, en el medio de
thioglicolato.
3. Evaluar los sistemas para obtener anaerobiosis.
Resultados
Observacin de esporas
39
URP
Microbiologa
PRCTICA N 14
BACTERIAS PRODUCTORAS DE SEPSIS
A. BARTONELLA
1. Introduccin
Los pases andinos (Per, Bolivia y Ecuador) comparten una enfermedad endmica en las
regiones andinas (zonas verrucgenas), que es transmitida por un mosquito hematfago
(Luszomia verrucarum) y produce la enfermedad de la bartonelosis.
La enfermedad tiene dos formas clnicas de presentacin: la fase hemtica, cuyo
diagnstico se hace mediante la bsqueda de los microorganismos en los hemates, por
microscopa, cultivos incubados a 29C o con tcnicas moleculares; y la fase histioide
drmica (verruga), que se diagnostica mediante biopsia y estudios con tcnicas
moleculares.
2.Materiales (Demostrativo)
1. Frotis sanguneo de paciente con bartonelosis, coloreado con Wright.
3.Procedimiento y resultados
1. Observar al microscopio con objetivo de inmersin y apreciar la variacin de
tamao de los glbulos rojos (anisocitosis), el diferente tono de color de los
hemates (policromatofilia) y la presencia de microorganismos coco-bacilares
dentro de los glbulos rojos.
40
URP
Microbiologa
B. BRUCELLA
1. Introduccin
La brucelosis es una zoonosis. El ser humano se infecta al ingerir productos lcteos
contaminados, luego se produce septicemia con localizacin bacteriana en el tejido retculo
endotelial (hgado, mdula sea y bazo). En los animales la infeccin es sistmica y de
localizacin en rganos genitales y glndulas mamarias, produce aborto.
El microorganismo tiene cierta especificidad de especie animal, asi: Brucella abortus es
selectiva para el ganado vacuno, Brucella mellitensis para el ganado caprino y lanar, y
Brucella suis para el porcino.
Este microorganismo es muy pequeo, tipo coco-bacilar, Gram negativo, desarrolla con
lentitud en los medios de cultivo (3 a 7 das) dando colonias caractersticas.
1.
2.
3.
4.
5.
Frotis de cultivo de Brucella mellitensis, coloreado con Gram

Hemocultivo en medio bifsico (Ruiz Castaeda) para aislar Brucella
Juego de colorantes para Gram
Suero de paciente con brucelosis
Antgeno de Brucella para aglutinacin en lmina
3. Procedimiento
1. Observar el frotis al microscopio y apreciar el diminuto tamao de ste
microorganismo.
2. Observar el medio de cultivo bifsico.
3. Sobre un portaobjetos depositar una microgota (0.04) del suero del paciente y
aadirle una microgota del antgeno, mezclar por rotacin durante 3 minutos y
apreciar la presencia de aglutinacin (presencia de anticuerpos).
4. Resultados: Registrar lo observado
Gram
Hemocultivo
41
URP
Microbiologa
C. LISTERIA
1. Introduccin
Listeria monocitgenes es una especie bacteriana saprofita, que habita en el intestino de los
animales y en los vegetales como contaminante. La infeccin humana est relacionada a la
ingesta de alimentos, que luego hace diseminacin sangunea con ubicacin en tero,
placenta y sistema nervioso. Los cuadros clnicos son aborto, sepsis neonatal y meningitis
en adultos inmuno comprometidos.
La identificacin se orienta por la morfologa bacilar corta, gram positivo, desarrolla en agar
sangre produciendo una discreta hemlisis. Lo ms caracterstico es la capacidad de
desarrollar a temperatura de refrigeracin (5C) y poseer movilidad slo a 22C y no a 37C
1. Frotis de cultivo de Listeria m, para colorear con Gram.
2. Cultivo de L. monocitogena en agar sangre
3. Cultivo de L. monocitogena en agar blando incubado a 22C y a 37C
3. Procedimiento
1. Colorear el frotis con Gram y observar con lente de inmersin.
2. Observar las caractersticas de las colonias del cultivo en Agar sangre
3. Observar el desarrollo mvil en agar blando a 22 oC, por la presencia de turbidez
en el tercio superior del tubo dando una imagen de paraguas.
4. Resultados: Hacer esquema de lo observado
37 C
22 C
Gram
42
URP
Microbiologa
CUESTIONARIO
1. Qu grupo humano es proclive a la listeriosis?
2. Cules son las muestras ideales para aislar Brucella?, Y que medio se utiliza?
3. Describa el concepto de vaginosis y agentes condicionantes.
4. A qu se denomina zona verrucgena?. Seale el agente transmisor de B. bacilliformis y
de B quintana.
5. Seale las diferentes especies de Brucella y su hospedero.
DESARROLLO
43
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Microbiologa
PRCTICA N 15
BACTERIAS DE TRANSMISIN SEXUAL
A. NEISSERIA gonorrhoeae
1. Introduccin
El humano es el nico reservorio de gnero Neisseria, la mayora habita el tracto
respiratorio alto como saprofito. Dos especies tiene un rol patgeno definido, la Neisseria
causa de la gonorrea o blenorragia y la Neisseria meningitidis causante de meningitis.
El gnero agrupa a cocos gram negativos, que se agrupan en pares y que poseen la
enzima citocromo oxidasa. Son exigentes para el desarrollo in vitro, para lo cual se emplea
el medio de Tayer Martn. N. gonorrhoeae es una bacteria que durante el proceso
infeccioso induce la respuesta inflamatoria intensa (pus).
1. Frotis de secrecin uretral, coloreado con gram, de paciente con Gonorrea.
2. Frotis de secrecin uretral, coloreado y Azul de metileno, de paciente con
Gonorrea.
3. Cultivo de Neisseria sp en agar Tayer Martn.
4. Reactivo tetrametil para fenil diamino al 1 % para detectar la enzima oxidasa
3. Procedimiento
1. Observar con objetivo de inmersin los frotices de secrecin uretral. Apreciar la
forma de diplococo y su ubicacin intracelular.
2. Realizar la reaccin de oxidasa: tomar una pequea porcin de colonias y
ponerla en contacto con el reactivo, observar de inmediato el cambio del color
por la oxidacin del reactivo.
4. Resultados: Registrar lo observado.
Gram
Azul de metileno
Citocromo oxidasa
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B. TREPONEMA pallidum
1. Introduccin
El Treponema pallidum, agente causal de la sfilis o Lues, es una espiroqueta que no cultiva
en medios inertes; luego el diagnstico se fundamenta en la observacin de la bacteria en
las lesiones y la demostracin de anticuerpos en sangre.
El examen microscpico con condensador de campo oscuro, se realiza a partir de las
lesiones drmicas, en la zona de inoculacin, denominado chancro duro (primera etapa) y
en las formaciones papulosas en toda la piel, denominada roseola (segunda etapa).
Para la demostracin de anticuerpos se dispone de dos categoras de pruebas, las que
usan antgeno NO treponmico: VDRL, RPR, Kahn, Wasserman, de gran sensibilidad pero
poca especificidad y las que utilizan un treponema como antgeno: fluorescencia (FTA),
inmovilizacin del treponema (ITP), denominadas confirmatorias. Las pruebas de ELISA
emplea antgeno de treponema.
2. Materiales
1. Suero pacientes con Lues
2. Antgeno no treponmico: RPR (rapid plasma reaction)
3. Lminas portaobjetos.
3. Procedimiento
1. Depositar una gota (0.05 ml) de suero problema en una lmina o tarjeta.
2. Aadir una gota de antgeno y mezclar por rotacin durante 3 minutos
3. Observar la formacin de grumos o prdida de la homogeneidad de la
suspensin cuando la reaccin es positiva (precipitacin)
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C. HAEMOPHILUS ducreyi
1. Introducin
Esta bacteria es el agente causal de la enfermedad denominada chancro blando o
chancroide, en razn a que la lesin de inoculacin semeja a la de sfilis, pero con diferencia
importantes como que es dolorosa, pueden presentarse varias lesiones y se asocia con
adenopata inguinal mltiple.
La historia clnica es muy orientadora para el diagnstico. En los frotices de la lesin,
coloreados con gram, se aprecian bacilos finos, pequeos, orientados en cadenas cortas,
gram negativos, pueden estar en el citoplasma de los neutrfilos. Los estudio serolgicos no
son contribuyentes.
2. Material (Demostrativo)
1. Frotices de secrecin de cancroide coloreados con gram.
3. Procedimiento
1. Observar el preparado con objetivo de inmersin.
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PRCTICA N 16
MYCOBACTERIUM
1. Introduccin
El gnero Mycobacterium incluye a dos especies patgenas para el hombre, que producen
enfermedades de importancia en Salud Pblica, son la tuberculosis y la lepra.
Estos micoorganismos tien con una coloracin especfica, la de Ziehl-Neelsen, por lo que
se utiliza como medio diagnstico en muestras clnicas, denominada baciloscopa. La
observacin microscpica nos aporta la presencia de bacilos cido alcohol resistentes.
El Mycobacterium tuberculosis (bacilo de Koch) desarrolla en medios de cultivo muy
nutritivos como el Lowenstein Jensen, Ogawa o Middlebrook y tarda ms de 15 das en
formar colonias. Estas caractersticas obligan, a que las muestras que van a ser cultivadas
(esputo, contenido gstrico), deban seguir un proceso de homogenizacin y
decontaminacin de los grmenes comunes de desarrollo rpido, lo que se consigue
aadiendo a la muestra hidrxido de sodio, fosfato trisdico o N acetil cisteina,
seguidamente se neutraliza la muestra con cido hasta obtener un pH de 7.2.
Adems del M. tuberculosis y M. bovis se describen los atpicos, que son clasificados en
cuatro grupos de acuerdo a la velocidad de desarrollo y formacin de pigmento:
1. Fotocromgenos, de desarrollo lento y forman pigmento con la luz (kansasii, simiae);
2. Escotocromgenos, de desarrollo lento pigmentados (gordonae, scrofulaceum);
3. No cromgenos, con desarrollo lento no pigmentados (avium, terrea); y
4. De desarrollo rpido, antes de los siete das (fortuitum, smegmatis, phlei).
A. MICROSCOPA
1. Materiales
1. Frotices de esputo para colorear con Ziehl-Neelsen
1. Colorear los frotices con el mtodo de Ziehl-Neelsen.
2. Contar los bacilos cido resistentes observados en 100 campos microscpicos.
3. Calificar la lmina de acuerdo a la siguiente tabla :
Negativo:
no se observan bacilos
Positivo 1 +
se observa de 1 a 10 bacilos en 100 campos
Positivo 2 +
se observan 10 a 100 bacilos en 100 campos
Positivo 3 +
se observan ms de 100 bacilos en 100 campos
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B. CULTIVO
1. Cultivo de Mycobacterium tuberculosis en medio Lowenstein Jensen
2. Cultivo de Mycobacterium atpicos en medio Lowenstein Jensen
2. Procedimiento. Observar los cultivos presentados.
Revisar los fundamentos del proceso de decontaminacin y concentracin de la muestra
clnica previa a ser cultivada.
Observar la caracterstica de las colonias y el pigmento de las cepas de Mycobacterium.
Sensibilidad o resistencia a los frmacos: La utilidad de estudiar ste comportamiento in
vitro, es de vigilancia en paciente que no han recibido tratamiento previo (resistencia
primaria) y en los paciente con recaidas o abandono del tratamiento (resistencia secundaria)
como indicador de multidrogo resistencia (MDR)
PRCTICA N 17
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ESTUDIO DE LOS VIRUS
1. Introduccin
El diagnstico de las enfermedades producidas por virus se ha fortalecido con los avances
en los conocimientos y las tcnicas en inmunologa y biologa molecular. La informacin que
se obtiene al confeccionar la historia clnica del paciente es de mucha importancia, ya que
permiten llegar a un diagnstico presuntivo, orientador para los estudios en el laboratorio.
2. Examen microscpico
Si bien los virus tienen un tamao muy pequeo que no pueden ser observados con el
microscopio de luz, algunos virus tienen la capacidad de formar estructuras intracelulares
denominadas cuerpos de inclusin, que se pueden reconocer con el microscopio
corriente, y son patognomnicas de ciertos virus. Se pueden observar directamente en el
tejido afectado (rabia) o en cultivos celulares, para lo cual se empelan las coloraciones
histolgicas clsicas, o con la ayuda de anticuerpos especficos marcados con fluorescena.
Virus
Nombre
Ubicacin
Caracterstica
Viruela /Vacuna
Guarnieri
citoplasma
Acidfilo
Rabia
Negri
citoplasma
Acidfilo
Molusco
contagioso
Henderson Paterson
citoplasma
Basfilo
--
citoplasma
Basfilo
Fiebre amarilla
Margarino Torres
nuclear
Acidfilo
Herpes simples
Lipschutz
nuclear
Acidfilo
Citomegalovirus
--
nuclear
Acidfilo
Conjuntivitis
inclusin
Citomegalovirus
de
Rabia
3. Cultivo
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Herpes
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Para cultivar los virus in vitro y aislarlos, se requiere previamente preparar cultivos de
clulas donde se puedan multiplicar, y poder observar los cambios celulares producto de la
infeccin viral, denominado efecto citoptico. Cuando tienen efecto ltico se observan
cambios: a) disminucin del tamao celular, b) redondeamiento, c) picnosis y d) lisis.
El primer tejido utilizado para el desarrollo de un virus fue la membrana corioalantoidea del
embrin de pollo (Virus de influenza, Herpes). Los cultivos celulares primarios, son los que
provienen de clulas de fibroblastos de embrin, rin o placenta, que se reproducen in vitro
slo uno o dos pasajes, y luego mueren. En cambio los ms usados son los de lneas
continuas, que provienen de clulas tumorales adaptadas en el laboratorio y se multiplican
indefinidamente (Hela, Hep2, Vero, etc.).
4. Identificacin
Para identificar un virus que ha producido efecto citoptico en un cultivo celular, debemos
disponer de los anticuerpos especficos de cada especie viral, el cual al aadirlo a un nuevo
cultivo, inhibir el efecto citoptico u otra propiedad de dicho virus (hemaglutinacin).
Las tcnicas de inmuno fluorescencia permiten reconocer la presencia del virus en forma
especfica. Pueden ser en forma directa (virus + anticuerpo) o en forma indirecta (virus +
anticuerpo del paciente + antiglobulina humana marcada con fluoresceina). Con ste
concepto se empelan diversas tcnica inmunolgicas: aglutinacin de latex, enzima inmuno
ensayo, radio inmuno ensayo e inmuno precipitacin.
Las tcnica moleculares (reaccin en cadena de la polimerasa, sondas de ADN, etc.) son de
gran ayuda, por su especificidad, sensibilidad y rapidez.
Cultivo de clulas (normal)
Efecto citoptico (ltico): virus Polio
PRCTICA N 18
HONGOS AMBIENTALES
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1. Introduccin
Los hongos ambientales son los que viven a expensas de la materia inerte, no dependen de
clulas vivas. La mayora son saprofitos, algunas especies son fuente de antibiticos,
enzimas, y otros pueden actuar como alergenos ocasionando sensibilizacin.
1. Cultivo de Penicillium, Aspergillus, Fusarium y Ryzopus en medio de Sabouraud
2. Microcultivos en lmina de cada una de los hongos en estudio.
3. Cultivo de Rhodotrula en medio Sabouraud.
3. Procedimiento
1. Estudiar las caractersticas macroscpicas de las colonias (aspecto, color,
consistencia, pigmento difundido etc.).
2. Con objetivo de menor aumento (10X) observar los microcultivos y describir la
caracterstica de los micelios, conidias y conidiforos.
4. Resultados
PENICILLIUM:
colonias pulverulentas de color azul verdoso.
Hifas tabicadas con conidiforos ramificados
en el extremo distal.con la apariencia de pincel
y conidias dispuestas en cadena .
ASPERGILLUS:
colonias filamentosas de color blanco, amarillo,
verde, marrn o negro.
Hifas tabicadas con ensanchamiento en su extremo
distal que da origen a esterigmas de donde nacen
las conidias en cadena.
FUSARIUM:
colonias algodonosas de color rosado.
Hifas tabicadas que dan origen a
conidiforos y macroconidias multiseptadas
fusiformes y curvadas.
RHIZOPUS :
colonias algodonosas blanco grisceas con puntos
negros (esporangios).
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Hifas no septadas agrupadas como raices, a partir
de las cuales se proyectan filamentos largos
(esporangiforo) formando en su extremo una estructura
redonda oscura que contiene gran cantidad de esporas.
RHODOTRULA:
colonias cremosas de color rosado.
Al microscopio se observan clulas ovoides o redondas.
PRCTICA N 19
HONGOS LEVADURIFORMES
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1. Introduccin
Las levaduras son hongos que se caracterizan porque sus clulas fundamentales son
redondas u ovoides, y se multiplican por gemacin. Algunas especies forman parte de la
flora normal del ser humano, algunas colonizacin un tejido y pueden producir infeccin.
En patologa humana se reconocen a los agentes: Cndida albicans, que produce micosis
superficiales y sistmicas, Criptococcus neoformans, que produce meningoencefalitis y
Pityrosporum ovale, causante lesiones superficiales o pitiriasis versicolor.
1.
2.
3.
4.
5.
Frotis de flujo vaginal de paciente con candidiasis. coloreado con Gram

Cultivo de Cndida albicans en medio Sabouraud.
Suspensin de Cndida albicans en suero incubado a 37C / 4 horas
Cultivo de Critococcus neoformans en medio Sabouraud
Preparaciones en fresco de C. neoformans con tinta china.
3. Procedimiento
1. Observar con objetivo de inmersin el frotis de flujo vaginal. Apreciar las levaduras
y los pseudomicelios.
2. Describir las caractersticas del cultivo de Cndida albicans.
3. Hacer una preparacin en fresco a partir de la suspensin de cndida en suero.
Observar con objetivo 40X y apreciar las prolongaciones digitiformes, caracterstico
de la Cndida albicans
4. Observar las preparaciones en fresco con tinta china, apreciar la presencia de
cpsula del Critococcus neoformans como un halo transparente alrededor de las
esporas.
4. Resultados
Tubo germinativo
Cultivo de Cndida
Cultivo de Criptococcus neoformans
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Frotis de secrecin vaginal
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Cultivo
Examen en fresco con tinta china
PRCTICA N 20
HONGOS DERMATOFITOS
1. Introduccin
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Los hongos filamentosos se caracterizan porque la clula base es tubular, llamada hifa, el
conjunto de stas forman el micelio. Algunas hifas se especializan y se transforman en
elementos reproductores, las conidias. Las caractersticas morfolgicas de hifas y conidias
dan el nombre del hongo.
Los dermatofitos son los hongos filamentosos que tienen predileccin por la queratina (piel,
pelo y ua). Tres gneros patgenos son de inters: Trichophyton, Microsporum y
Epidermophyton, agentes causales de tia corpis, capitis, cruris, pedis y onicomicosis.
1. Muestras patolgicas de piel, pelo y ua en preparaciones en fresco con KOH
2. Cultivo de T. rubrum, T mentagrophytes, T tonsurans, M canis, M gypseum y E
floccosum en agar sabouraud.
3. Microcultivos de los mismos hongos con azul de lactofenol, para estudio de
microconidias y macroconidias.
3. Procedimiento
Toma de muestra: En lesiones de piel se obtiene por raspado de los bordes de la lesin.
En cuero cabelludo se retiran los pelos de la zona afectada. Las uas son previamente
humedecidas con alcohol, luego son recortadas y como raspar el lecho ungueal.
Examen directo: Se prepara un examen en fresco con hidrxido de potasio al 20%. Se
observa al microscopio con objetivo 40X buscando la presencia de esporas
redondeadas aisladas o agrupadas en racimos, refringentes, hifas cortas o largas
cilndricas, con los extremos redondeados. En los pelos se puede observar esporas
ubicadas en el interior del pelo (endotrix) o alrededor del pelo (exotrix).
Cultivo: El medio de cultivo de eleccin es el Sabouraud que contiene 40 g/L de dextrosa.
La siembra se hace por puntura e incuba a medio ambiente, esperando desarrollo entre
el 7mo y l5vo da.
4. Resultados.
A) Examen en fresco
de escamas de piel
B) Examen en fresco
pelo infectado
TRICHOPHYTON rubrum:
Colonias algodonosas de color blanco
con pigmento rojo en el reverso del tubo.
Hifas septadas con microconidias
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Piriformes, ssiles.
TRICHOPHYTON mentagrophytes:
Colonias pulverulentas granulosas
yesosas, blanquecinas con pigmento
amarillo pardusco en el reverso.
Hifas septadas con abundantes
microconidias esfricas en racimos
TRICHOPHYTON tonsurans:
Colonias membranosas crateriformes,
acartonadas.
Hifas septadas en raqueta, microconidias
piriformes y clamidosporas.
MICROSPORUM canis:
Colonia blanquecina con pigmento
amarillo naranja en el reverso.
Hifas septadas con macroconidias
elpticas o fusiformes, con tabiques
transversales y excrecencias en la
superficie.
MICROSPORUM gypseum:
Colonia algodonosa o finamente
pulverulenta de color blanco cremoso.
Hifas septadas con macroconidias de
superficie lisa con tabiques transversales.
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EPIDERMOPHYTON floccosum:
Colonias aterciopeladas o finamente
pulverulentas, con pliegues en el centro,
de color amarillo azufre.
Hifas septadas con macroconidias grandes
con el extremo distal romo y ancho,
tabicadas transversalmente.
CUESTIONARIO:
1. Seale la Importancia de obtener un diagnstico etiolgico mictico de una lesin
drmica.
2. Indique: Cundo le dara importancia clnica, que amerite tratamiento, la presencia de
Cndida albicans en una parte del cuerpo humano?
3. Seale los hongos saprofitos productores de antibiticos
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4. Qu hongo produce meningo encefalitis y seale un mtodo prctico y rpido para
diagnosticarlo?
5. Qu funcin tiene el KOH al 20 % en las preparaciones en fresco para investigar hongos?
DESARROLLO
PRCTICA N 21
HONGOS DIMRFICOS
1. Introduccin
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Se denomina hongo dimrfico a aquel que tiene doble comportamiento. En el husped y en
incubacin a temperatura de 37C, se comporta como levadura. En cambio en el medio
ambiente a temperatura de 22C a 26C, se comporta como filamento. Estos hongos se
encuentran distribuidos en la naturaleza (suelo, fragmentos de vegetales, excretas de aves
y murcilagos). Las personas y animales se contaminan con los hongos dimrficos por
inhalacin de las micro conidias de la forma filamentosa y presentan infeccin sistmica.
Representan a ste grupo el Paracoccidioides brasiliensis y el Hystoplasma capsulatum.
Algunos hongos ambientales dimrficos producen micosis subcutneas, siendo el ms
frecuente el Sporothrix schenckii, que se transmite por inoculacin traumtica con espinas
o restos de plantas, produciendo infeccin crnica del sistema linftico.
2.Materiales (Demostrativo)
1. Cultivo de P. brasiliensis, H. capsulatum y Sporotrix s. en agar Sabouraud
incubado a 26C. (forma de filamento)
2. Cultivo de P. brasiliensis, H. capsulatum y Sporotrix s. en agar cerebro corazn
(BHI), incubado a 37C (forma de levadura)
3. Preparaciones en fresco con azul de lactofenol de los hongos en estudio.
4. Frotis de esputo, coloreado con Wright, de paciente infectado con P. brasiliensis
5. Preparacin histolgica de tejido heptico infectado con H. capsulatum
3. Procedimiento y Resultados
1 Observar las caractersticas de las colonias de cada una de las tres especies de
hongos dimrficos presentados.
2 Observar al microscopio, con objetivo de 40X, las preparaciones en fresco
presentadas.
3 Observar con objetivo de inmersin las preparaciones histolgicas presentadas
Paracoccidioides brasiliensis
A. Esputo coloreado con Wright
Observar las esporas grandes de 10-60 mu
de pared gruesa con varias gemaciones
B. Examen en fresco con Azul de lactofenol

Cultivo en BHI a 37C
Esporas multigemadas como
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timn de barco u orejas de Mickey
Histoplasma capsulatum
A. Corte histolgico (hgado):
Observar levaduras pequeas
(1 a 3 micras) en el citoplasma
de los histiocitos.
B. Examen en fresco con azul de lactofenol

Cultivo en Sabouraud a 26C
Hifas con macroconidias tuberculadas
Sporotrix schenkii :
Examen en fresco con azul de lactofenol
Cultivo en Sabouraud a 26C
Hifas con conidias dispuestas en margarita
PROTOCOLO 1
CULTIVO DE EXUDADO NASAL
Introduccin
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En la mucosa nasal se ubican numerosas bacterias y virus saprofitos. Tambin es la puerta
de entrada de bacterias y virus patgenos, donde muchos de ellos colonizan el rea y condicionan
al husped a ser un portador sano de dicho patgeno. Es el caso de la especie Staphylococcus
aureus. El presente estudio permitir conocer la poblacin de estudiantes que son portadores
sanos de sta bacteria patgenaMateriales
Hisopo de algodn de 6 pulgadas, estril

Placas petri con agar hipertnico (manitol salado)
Mascarilla
(1)
(1)
Procedimiento
Se tomar a varios alumnos muestra de exudado nasal, para lo cual el profesor har la
demostracin respectiva.
Frotar (siembra) el hisopo en un tercio de la superficie de los medios de cultivo, luego
con ayuda del asa de platino concluir la siembra por agotamiento.
Rotular e incubar a 37C durante 48 horas.
Interpretacin
Observar el desarrollo de colonias en el medio Hipertnico, selectivo para

Staphylococcus
Apreciar la coloracin de las colonias (blanco o amarillo), cambio de color del medio de
cultivo (amarillo) y percibir algn olor en especial.
A partir de ellas hacer un frotis y colorearlo con Gram. Observar al microscopio.
Depositar en un portaobjetos una (01) gota de agua oxigenada, luego poner en contacto
una colonia bacteriana. Apreciar la formacin de burbujas por la actividad de la catalasa.
Seleccionar las colonias que han cambiado de color a amarillo (metabolismo del
manitol) y sembrarlas en plasma humano, para detectar la produccin de la enzima
coagulasa, incubar 37C x 24 horas. Tambin se puede realizar la coagulasa en lmina,
mezclando la colonia en una gota de plasma y se apreciar, en forma inmediata,
formacin de grumos gruesos.
Conclusiones
Los alumnos a los que se les ha aislado colonias manitol y coagulasa positivas, son
portadores sanos de Staphylococcus aureus.
Estos alumnos debern tomar medidas personales higinicas y preventivas, necesarias
cuando se relacionen con personas debilitadas, en tratamiento inmuno supresor o estn
hospitalizadas en cuidados intensivos, con la finalidad de evitar contagiarlos.
Registro:
PROTOCOLO 2
CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO
61
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Introduccin:
En la mucosa farngea habitan, normalmente, numerosas bacterias
(aerobias y
anaerobias), as como virus; incluso hay bacterias presentes que pertenecen a gneros patgenos,
pero sin factores de virulencia, como la cpsula. El cuadro clnico faringitis es una patologa muy
frecuente, y en la mayora de casos el agente causal es un virus. El estudio microbiolgico del
exudado farngeo se justifica plenamente cuando se sospecha en la presencia de Streptococcus
beta hemoltico del grupo A (pygenes), por su agresividad de virulencia y la capacidad, de algunos
serotipos, de ocasionar la enfermedad post estreptoccica denominada Fiebre reumtica.
Materiales
Hispo de algodn de 6 pulgadas, estril

Tubo con 15 ml con agar nutritivo licuado (50C)
Tubo con 5 ml de caldo nutritivo estril
Tubo con 1.0 ml de sangre estril
Placa de petri estril
Mascarilla
(1)
(1)
(1)
(1)
(1)
Procedimiento
Se tomar a un alumno muestra de exudado farngeo, para lo cual deber abrir la
boca y pronunciar la letra A, para exponer la zona faringo-amigdaliana.
Con la ayuda del hisopo frotar la zona expuesta y luego depositar el hispo en el tubo
con 5 ml de caldo nutritivo, rotarlo enrgicamente (muestra). Incubarlo a 37C
durante 30 minutos.
Retirar del bao mara el tubo con agar licuado, aadirle una asada de la muestra,
taparlo y rotarlo entre las manos.
Inmediatamente aadir 1.0 ml de sangre al tubo con agar licuado y muestra.
Taparlo. Rotarlo enrgicamente entre las manos, hasta la homogenizacin.
En condiciones adecuadas (junto al mechero, sin hablar ni toser, etc.), destapar la
placa de petri vaca estril y verter en ella el agar licuado con sangre y muestra.
Tapar y esperar que se solidifique.
Rotular e Incubar a 37C durante 48 horas.
Interpretacin
Observar el desarrollo de colonias dentro de agar.

Con ayuda del microscopio estereoscpico, buscar colonias aisladas, describirlas y
apreciar el comportamiento con la sangre, si hay hemlisis total (beta) o parcial
(alfa).
Las colonias beta hemolticas deben resembrarse en caldo nutritivo, incubar a 37C
por 24 horas y luego subcultivarlas en agar sangre, depositar una disco con
bacitracina, incubar a 37C por 24 horas. S. pygenes es sensible a la bacitracina.
Registro
PROTOCOLO 3
CULTIVO DE ORINA (UROCULTIVO)
62
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Microbiologa
Introduccin:
La orina normalmente es estril, al ser evacuada de la vejiga, pasa por la uretra y genitales
externos, donde se contamina con bacterias saprofitas habitantes de la zona. Por esa razn, para
realizar un cultivo de orina, se debe lavar los genitales externos de manera prolija y el nmero de
bacterias cultivadas debe ser superior a 100,000 por mL de orina. Cuando el nmero de bacterias
es inferior a 10,000 por mL, se debe considerar como bacterias contaminantes de toma de
muestra. Y cuando la cifra encontrada est en el rango intermedio, la interpretacin debe
considerar factores clnicos (fiebre, disuria, piuria, etc.), de otra manera el estudio debe repetirse.
Materiales
Frasco estril de boca ancha, de 50 ml de capacidad, estril

Placas petri con medios de agar Mac Conkey (MC) y agar sangre (AS)
Asa de siembra calibrada, de 0.001 ml
Procedimiento
Toma de la muestra: La muestra debe ser obtenida previa higiene genital. Debe ser
procesada en las dos primeras horas de emitida, de no ser posible conservarla a 5 C
hasta por 48 horas.
Siembra: Tomar una asada de la orina y sembrarla, haciendo estras, en la superficie de
los medios de cultivo.
Observacin microscpica: hacer un frotis de la orina y colorearla con Gram.
Interpretacin
En el frotis de orina coloreado con Gram, normalmente no debe observarse

grmenes.
Estudiar las colonias desarrolladas: contarlas e identificarlas.(*) Resembrarlas en
medios diferenciales (TSI, LIA, Citrato, Agua de peptonal, Urea)
Desarrollo homogneo del mismo tipo de colonias es indicador de infeccin urinaria.
Desarrollo de dos o ms tipos de colonias, es indicador de contaminacin por mala
toma de la muestra.
Un desarrollo inferior a 10 colonias, en toda la placa, es indicador de contaminacin
por bacterias uretrales.
Identificar las colonias asiladas.(*)
Registro
63
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PROTOCOLO 4
AGUA POTABLE
Introduccin: El agua de bebida debe tener caractersticas organolpticas, qumicas y
bacteriolgicas aceptables, para no producir dao al humano, denominndole potable.
Desde el punto de vista microbiolgico el agua potable debe reunir las siguientes
caractersticas:
1. Bacterias mesfilas : En nmero inferior a 500 UFC en 100 ml de agua
2. Bacterias coliformes: En nmero inferior a 3 UFC en 100 ml de agua
3. Escherichia coli:
Ausente en 100 ml de agua
4. Pseudomonas aeruginosa: Ausente en 100 ml de agua
Procedimiento: sembrar el agua en medio lquido, depositar 10 ml en tres tubos, 1.0 ml en
tres tubos y 0.1 ml en tres tubos. Incubar a 37C por 24 horas. Observar la turbidez de los
cultivos, contar el nmero de ellos en cada columna y referirlos a la Tabla de Hoskins.
10 ml
agua
1.0 ml
agua
0.1 ml
agua
NMP en
100 ml
agua
---
---
---
---
---
10 ml
agua
1.0 ml
agua
0.1 ml
agua
---
---
23
---
39
---
---
64
---
---
43
---
75
11
120
---
11
---
93
---
---
150
14
210
---
15
---
240
20
460
21
1,100
28
Superior a
1,500
NMP: nmero ms probable de bacterias en 100 ml de agua.
PROTOCOLO 5
CULTIVO DE SECRECION DE HERIDAS.
64
NMP en
100 ml
agua
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Microbiologa
Introduccin:
Los procesos infecciosos bacterianos son muy frecuentes en la prctica mdica, El
tratamiento est estrechamente ligado al diagnstico etiolgico o el agente causal de la infeccin.
El presente protocolo pretende demostrar los pasos a seguir para llegar a demostrar in vitro el
microorganismo causal de la infeccin.
Materiales
Hisopo de algodn o sinttico estril (2)

Tubo con tapa de rosca estril conteniendo 2 ml de medio de transporte
Medios de cultivo: Caldo Thioglicolato (CTh), Agar Sangre (AS), Agar Mac Conkey
(MC), Medio Hipertnico (MH) y Agar Sabouraud (SAB)
Lmina porta objetos
Procedimiento
Es recomendable que el paciente no est tomando antibiticos

La lesin donde se va a tomar la muestra no debe tener cremas o antimicrobianos
Humedecer los dos hisopos con la secrecin, teniendo cuidado de no tocar
superficie de piel sana; con un hispo hacer un pequeo frotis en el portaobjetos,
luego introducir los dos hisopos en el tubo con medio de transporte.
La siembra debe ser inmediata, de no ser posible el tubo con medio transporte y la
muestra deben conservarse a 5C hasta su procesamiento (menos de 48 horas).
Siembra: Un hisopo introducirlo en el medio de thiglicolato (anaerobios). Con el otro
hisopo depositar la muestra en los medios de cultivo, para luego con el asa de
siembra distribuirla por agotamiento.
o Incubar las placas a 37C por 24 a 48 horas.
Interpretacin
La observacin del frotis de la secrecin, coloreado con Gram, es de suma

importancia para interpretar el cultivo.
La lectura de los cultivos se har con la ayuda del profesor
Identificar las colonias aisladas, con ayuda de la gua de prcticas, realizar las
pruebas bioqumicas o enzimticas necesarias para llegar a un diagnstico.
Registro
PROTOCOLO 6
FLORA BACTERIANA NORMAL DEL HOMBRE
65
URP
Microbiologa
Materiales
Hisopo de algodn estril

Tubo con 1 ml suero fisiolgico
Placas petri con agar sangre
Procedimiento
Humedecer el hisopo en el suero fisiolgico
Frotar la superficie de la piel (palma de manos) que se ha elegido, en forma enrgica
Seguidamente inocular en la superficie del agar sangre, por dispersin y
agotamiento.
Incubar la placa petri a 37C durante 48 horas
Interpretacin
Observar el desarrollo de colonias en la superficie del medio de agar sangre

Evaluar nmero y diversidad de colonias
Hacer frotis de cada colonia diferente y colorearla con Gram
Con ayuda del profesor hacer el esquema a seguir para identificar cada colonia
Interpretar la importancia de cada bacteria asilada
Registro
66
URP
Microbiologa
SEMINARIO 1
RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ANTIBACTERIANOS.
Temario:
1. Sealar los mecanismos no genticos de resistencia bacteriana.
a) Estado de la bacteria
b) Ubicacin de la infeccin
c) Relacin bacteria-antibitico
2. Sealar, en las diversas estructuras de la bacteria, los antimicrobianos que actan en
cada uno de los niveles.
a) Pared celular
b) A nivel de la membrana citoplasmtica.
c) Sobre las molculas de cido nucleico
d) En la sntesis de las protenas.
e) Mecanismos competitivos.
3. Explicar los mecanismos genticos de resistencia bacteriana
a) Seleccin de mutantes (cromosmico)
b) Intercambio gentico (extra cromosmico)
4. Mecanismos bioqumicos de resistencia bacteriana
a) Permeabilidad celular a la droga, ejemplo
b) Inactivacin de la droga, ejemplo
c) Modificacin del receptor (zona blanco), ejemplo
d) Sntesis de metabolito, ejemplo
5. Mecanismos de resistencia a los betalactmicos
6. Mecanismos de resistencia a los aminoglucsidos
7. Mecanismos de resistencia a los macrlidos
8. Mecanismos de resistencia a las tetraciclinas
9. Mecanismos de resistencia al cloranfenicol
10. Mecanismos de resistencia a las quinolonas
11. Mecanismos de resistencia a las sulfas
CONCEPTOS:
1. Bactericida
2. Bacteriosttico
3. Resistencia cruzada
67
URP
Microbiologa
SEMINARIO 2
VACUNAS
Temario:
1. Historia de la vacuna. Definicin y finalidad
2. Clasificacin,
3. Indicaciones. Contraindicaciones. Riesgos de la vacunacin. Cadena de fro
4. Vacunas preparadas con agente vivo (atenuadas), caractersticas y ejemplos.
5. Vacunas preparadas con agente muerto (inactivadas), caractersticas y ejemplos.

6. Vacunas preparadas con fracciones antignicas y conjugadas, caractersticas y ejemplos.
7. Vacunas elaboradas a partir de toxinas, caractersticas y ejemplos.
8. Vacunas elaboradas por ingeniera gentica, caractersticas y ejemplos.
9. Esquema de vacunacin del Ministerio de Salud
10. En qu consiste la vacunacin contra el neumococo?
11. En qu consiste la vacunacin contra el Haemphylus influenzae?
12. En qu consiste la vacunacin contra la tuberculosis?
13. En qu consiste la vacunacin contra la difteria y el ttanos?
14. En qu consiste la vacunacin contra el meningococo?
15. En qu consiste la vacunacin contra la Hepatitis B?
16. En qu consiste la vacunacin contra el Virus de la Rabia?
17. En qu consiste la vacunacin contra la Fiebre Amarilla?
18. En qu consiste la vacunacin contra el Virus de la Poliomielitis?
SEMINARIO 3
68
URP
Microbiologa
TUBERCULOSIS
Temario:
1. Caractersticas generales de las micobacterias

2. Clasificacin de las micobacterias
3. Caractersticas biolgicas de importancia mdica del M. tuberculosis
4. Baciloscopa: Microscopa de luz y de luz ultravioleta
5. Mtodos para el aislamiento in vitro del M. tuberculosis
6. Describa el MOD en el diagnstico de la tuberculosis
7. Describa un procedimiento molecular para el diagnstico de tuberculosis
8. Seale los mecanismos de accin de los antituberculosos
9. Seale el mecanismo que utiliza el M. tuberculosis para adquirir resistencia.
10. Por qu el tratamiento antituberculoso es tan largo?
11. Rol de la microbiologa en el manejo de la tuberculosis
12. La tuberculosis en el Per
SEMINARIO 4
VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA
Temario:
69
URP
Microbiologa
1. Definicin de retrovirus. Historia del conocimiento del VIH
2. Clasificacin de los Retrovirus. Importancia de cada grupo.
3. Describa la estructura del virus de inmunodeficiencia humana.(VIH).
4. Importancia del conocimiento de los antgenos del virus
5. Patogenia de la enfermedad por el VIH
6. Definicin de SIDA.
7. Vas de transmisin del VIH.
8. Pruebas de laboratorio para diagnosticar una infeccin por VIH.
9. Haga un esquema de la reaccin ELISA
10. Marcadores serolgicos para diagnosticar infeccin por VIH
11. Qu investigamos en la prueba de Western blott?
12. La infeccin de VIH en el Per.
PATOGENOS - BACTERIANOS
Ref.: Murray, Patrick et al.
Microorganismo
Clnica
Epidemiologa
1. Enterococcus
Bacteriemia, abscesos,
faecalis, faecium Inf. urinaria, endocarditis
Pacientes hospitalizados
2. Staphylococcus Infecciones cutneas,
Coloniza piel y mucosas,
70
URP
Microbiologa
aureus
diseminadas, shock txico,

Intoxicacin alimentaria.
3. Staphylococcus Patgeno oportunista con

coagulasa negat. cuerpo extrao e infec.
urinarias.
prolifera a temperaturas extremas y en reas hipertnicas.

Coloniza piel y mucosas,
prolifera a temperaturas extremas y en reas hipertnicas.
4. Streptococcus
pygenes
Infecciones supurativas Poblaciones diversas

de piel, mucosas, partes blandas, shock txico.
No supurativa: fiebre reumtica
5. Streptococcus
agalactiae
Infecciones urinarias,
Enfermedad neonatal
Bacteriemias.
Gestantes. Neonatos,
Pacientes con afecciones
crnicas.
6. Streptococcus Infecciones cutneas,

beta hemolticos partes blandas y ORL
Poblaciones diversas
7. Streptococcus
bovis
Bacteriemias, endocarditis
Adultos con Ca. de colon
8. Streptococcus
viridans
Endocarditis subaguda.
abscesos, septicemias,
Infecciones odontgenas
Pacientes con alteraciones

en vlvulas cardiacas.
9. Streptococcus
Pneumoniae
Neumona. Meningitis.
Bacteriemia. Infecciones
respiratorias. Endocarditis.
Neonatos, adultos, ancianos
10. Bacillus
anthracis
Carbunco cutneo,
Poblacin que trabaja con
respiratorio y digestivo ganado, consumo de carne
y terrorismo.
11. Bacillus cereus Gastroenteritis,

Infecciones oculares
Alimentos contaminados,
trauma ocular con tierra
12. Corynebacterium
diphteriae
Difteria
Contagio va respiratoria
13. Corynebacterium
jeikeium
Infeccin de heridas a
cuerpo extrao.
Septicemias.
Pacientes inmunodeprimidos
con mayor riesgo.
Microorganismo
Clnica
Epidemiologa
14. Corynebacterium
urealyticum
Infecciones urinarias.
Septicemia.
Pacientes inmunodeprimidos,
con factores de riesgo, o post
quirrgicos.
15. Erysipelothrix
Rhusiopathie
Lesin cutnea inflamatoria prurtica.
Manipuladores de carne,
pescado. Granjeros.
Veterinarios.
71
URP
Microbiologa
16. Listeria
monocytgenes
Neonatos. Gestantes. Ancianos

Inmunodeprimidos.
17. Mycobacterium
avium/intracelular
Enfermedad neonatal.
Bacteriemia en adultos.
(gestantes)
Enfermedad pulmonar y
y diseminada.
18. Mycobacterium
leprae
l
Lepra tuberculoide o
epromatosa
Contacto ntimo con enfermo
18. Nocardia sp.
Infecciones cutneas,
broco pulmonares y
abscesos.
Patgeno oportunista
19. Neisseria
gonorrhoeae
Gonorrea.
inflamatoria plvica.
Artritis.
Enfermedad
Transmisin sexual.
Sintomtica / Asintomtica
20. Neisseria
meningitidis
Meningitis. Bacteriemia
Estado de portador sano.

Contagio via respiratoria.
Nios y adultos jvenes.
21. Acinetobacter
Neumona. Septicemia.
Infecciones diversas
Patgeno oportunista.
Infecciones nosocomiales
22. Aeromonas
Gastroenteritis.
Infeccin de heridas.
Patgeno oportunista
23. Bartonella
bacilliformis
Fiebre y anemia aguda

verruga numular
Exposicin en zona
verrucgena
24. Bartonella
henselae
Enfermedad del araazo

del gato. Angiomatosis
bacilar. Endocarditis.
25. Bartonella
quintana
Angiomatosis bacilar
Fiebre de las trincheras
26. Bordetella
pertussis
Tos ferina
Contagio va respiratoria
27. Brucella sp.
Brucelosis
Ingesta de leche o derivados

de vaca, cabra u ovejas
infectados. (zoonosis)
Microorganismo
Clnica
Epidemiologa
28. Campylobacter
jejuni / coli
Gastroenteritis
Zoonosis. Ingesta de alimentos

o agua contaminados.
29. Campylobacter
fetus
Septicemia. Aborto.
Paciente anciano e
inmuno deprimidos
72
Pacientes con enfermedad

cnica (VIH, Inmundeficien.)
URP
Microbiologa
30. Cardiobacterium
hominis.
Eikenella corrodens
Kingella kingae
Endocarditis sub aguda
31. Escherichia coli

uropatgena
Infecciones urinarias
Cistitis, pielonefritis
Endocarditis sub aguda
32. Escherichia coli

contaminadas
a) enteropatgena
b) enterohemorrgica
c) enterotoxignica
d) enteroagregadora
e) enteroinvasiva
33. Francisella
tularensis
conejos
Patgeno oportunista
Pacientes con dao valvular
Nios, adultos, gestantes,

Alimentos y aguas
Diarrea acuosa y vmitos de preferencia en nios.

Diarrea acuosa con sangre y Uremia
Diarrea acuosa
Diarrea en viajeros.
Diarrea con moco
Diarrea acuosa con sangre
Tularemia ulcero glandular Picadura de garrapata

neumona.
Contaminacin con
Infectados.
34. Haemphilus
Influenzae
Capsuladas: septicemia
meningitis
No capsuladas: sinusitis,
otitis, bronquitis, neumona.
Contagio via respiratria
35. Helicobacter
pylori
Gastritis. lcera duodenal
Frecuente.
36. Klebsiella
pneumoniae
Neumona.
Infecciones urinarias
37. Legionella
pneumophila
Neumona
Proceso seudo gripal
38. Moraxella
Catarrhalis
Infecciones de ojo, oido

y respiratorias.
39. Proteus
Microorganismo
41. Salmonella:
typhi
enteritidis
Nios y adultos
Infecciones urinarias y
de heridas.
40. Pseudomonas
aeruginosa
Pacientes ancianos,
inmuno deprimidos.
Contaminacin?
Anomala del tracto
Infecciones cutneas,
ticas, oculares, urinarias,
bacteriemia.
Clnica
Fiebre tifoidea
Diarrea
42. Serratia /
Infeccions urinarias y
Enterobacter de heridas
73
Epidemiologa
Alimentos contaminados
URP
Microbiologa
43. Shigella
Disentera bacilar
Alimentos contaminados
44. Streptobacillus
moniliformis
Fiebre por mordedura

Mordedura de roedor
Ingesta de alimento contaminado
45. Vibrio cholerae

contaminados
Diarrea acuosa intensa
46. Vibrio
Diarrea acuosa
parhaemolticos
47. Vibrio
vulnificus
Agua y alimentos
Ingesta de mariscos
Infeccin de heridas
Septicemia.
Pacientes con enfermedades

crnicas.
48. Actinomyces Actinomicosis crvicofacial, torcica, abdominal,

plvica.
Coloniza mucosas
49. Bacteroides
fragilis
Infecciones en abdomen,
zona pelviana y cutnea.
Habitante normal del

Intestino.
50. Cstridium
botulinum
Botulismo alimentario
Ubicuitario en aguas residuales
51. Clostridium
difficile
Diarrea asociada a uso de

antibiticos.
Coloniza tracto intestinal
52. Clostridium
perfringes
Infecciones de partes blandas Habitat: suelo, aguas residuales

Mionecrosis. Septicemia.
Intestino de animales y hombre
Intoxicacin alimentaria.
53. Clostridium
tetani
Ttanos
54. Propinibacterium
Habitat: suelo, aguas residuales

Intestino de animales y hombre
Acn. Prtesis
Coloniza piel y mucosas
55. Chlamydia
pneumoniae
Neumona
Nios y adultos
56. Chlamydia
psitaci
Neumona
Exposicin a pjaros
57. Chlamydia
Trachomatis
Tracoma: conjuntiva, uretra,

crvix, trompas.
Linfogranuloma venreo
Microorganismo
Tracoma.
Transmisin sexual.
Clnica
Epidemiologa
58. Coxiella burnetii Fiebre Q
Personas expuestas a ganado

Infectado.
59. Micoplasma
pneumoniae
Nios y adultos
Neumona atpica
74
URP
Microbiologa
60. Rickettsia
prowatzekii
Tifus exantemtico
Transmitido por picadura del

piojo infectado.
61. Ricketrsia
rickettsii
Fiebre manchada
Por mordedura de garrapata
62. Borrelia
burgdorferi
Eritema migratrio y
compromisos diversos
Transmitido por garrapatas
63. Borrelia
recurrentis
Fiebre recidivante
Transmitida por el piojo
64. Lepstospira
interrogans
Enfermedad de Weil
fiebre e ictericia
Exposicin a orina de roedores

perros, animales salvajes.
65. Treponema
pallidum
Sfilis
Transmisin sexual y congnita
--------------------------------------------------------------
75

Guia 2016

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URP

GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS

Dr. Nicanor Domnguez Navarrete

Prctica N 2 Examen en fresco. Observacin de cpsula

Prctica N 3 Coloracin de Gram. Coloracin de Vag

Prctica N 4 Coloracin de Ziehl-Neelsen

Prctica N 5 Mtodos de estudio de las bacterias

Prctica N 6 Accin de agentes fsicos

Prctica N 7 Accin de agentes qumicos. Antibiograma

Prctica N 11 Vibrio. Campylobacter. Helicobacter

Prctica N 12 Bacterias ambientales y saprofitas del ser humano

Prctica N 13 Bacterias anaerobias

Prctica N 14 Bartonella. Brucella. Listeria

Prctica N 15 Bacterias de transmisin sexual

Prctica N 17 Estudio de los virus

Prctica N 18 Hongos ambientales

Prctica N 19 Hongos levaduriformes

Prctica N 20 Hongos dermatofitos

Prctica N 21 Hongos dimrficos

Relacin de bacterias patgenas para el hombre

Laboratorio con nivel de Bioseguridad 2

Suspensin de cultivo de Cyptococcus neoformans

C. FROTIS Y COLORACIN DE AZUL DE METILENO

Suspensin de mezcla bacteriana y cultivos bacterianos en agar nutritivo.

Hacer un frotis a partir de la mezcla bacteriana o del cultivo slido en agar.

Hacer un frotis a partir de la muestra de esputo. Fijarlo al calor suave.

B. ESTUDIO DE COLONIAS BACTERIANAS

a. Medio semi slido

c. Metabolismo del triptofano

B. RADIACIONES ULTRA VIOLETA

Lmpara de mercurio que emite radiaciones ultravioleta (UV)

Microorganismo: Escherichia coli

C-2- Mtodo de Disco Difusin en agar:

Tabla de Bauer y Kirby:

Halo de inhibicin de desarrollo

Cultivo de Streptococcus sp.en caldo nutritivo

Agar sangre: hemlisis

Viales con muestra de heces en medio de transporte

Color Lila (alcalino)

Color negro (H2S)

Color amarillo: acidez

Cultivo de Pseudomonas aeruginosa en caldo nutritivo y agar nutritivo.

B. FLORA BACTERIANA NORMAL: LACTOBACILLUS

Frotis vaginal normal (Gram)

Frotis vaginal con vaginosis

C. FLORA BACTERIANA NORMAL: CORYNEBACTERIUM

Resultados. Hacer esquema de lo observado en el microscopio

Frotis de cultivo de Brucella mellitensis, coloreado con Gram

Cultivo de clulas (normal)

Efecto citoptico (ltico): virus Polio

Frotis de flujo vaginal de paciente con candidiasis. coloreado con Gram

Cultivo de Criptococcus neoformans

Frotis de secrecin vaginal

Examen en fresco con tinta china

B. Examen en fresco con Azul de lactofenol

B. Examen en fresco con azul de lactofenol

Hisopo de algodn de 6 pulgadas, estril

Observar el desarrollo de colonias en el medio Hipertnico, selectivo para

Hispo de algodn de 6 pulgadas, estril

Observar el desarrollo de colonias dentro de agar.

Frasco estril de boca ancha, de 50 ml de capacidad, estril

En el frotis de orina coloreado con Gram, normalmente no debe observarse

NMP: nmero ms probable de bacterias en 100 ml de agua.