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Microbiologia
Geral
(MIG)
Introduo Microbiologia
O que voc pensa quando ouve as palavras germe e micrbio? Pequenas criaturas que
causam MAL e no se encaixam em nenhuma categoria da diviso: animal, vegetal ou mineral.
Os micrbios, tambm chamados de microrganismos, so minsculos seres vivos,
individualmente muito pequenos para serem vistos a olho nu. O grupo inclui bactrias, fungos
(leveduras e mofos), protozorios e algas microscpicas. Tambm inclui vrus, os quais so
acelulares, muitas vezes considerados como sendo o limite entre seres vivos e no-vivos.
Voc ser apresentado a cada um desses grupos no decorrer das aulas.
Microbiologia o estudo de organismos microscpicos. Esse nome deriva de trs palavras
gregas: mikros (pequeno), bios (vida) e logos (cincia). Assim, microbiologia significa o estudo
da vida microscpica.
Os cientistas deduziram que os microrganismos originaram-se aproximadamente h quatro
bilhes de anos, a partir de um material orgnico complexo em guas ocenicas, ou
possivelmente de nuvens que circundavam nossa primitiva Terra. Como os primeiros indcios de
vida na Terra, os microrganismos so considerados ancestrais de todas as outras formas de vida.
Embora os microrganismos sejam antigos, a microbiologia uma cincia jovem.
Pesquisadores observaram microrganismos pela primeira vez somente h 300 anos e eles foram
pouco compreendidos durante muitos anos aps sua descoberta. Existe um perodo de quase 200
anos entre as primeiras observaes at o reconhecimento de sua importncia.
Em meio a muitas tentativas cientficas de se obter novos conhecimentos sobre
microrganismos, algumas merecem ser mencionadas por terem contribudo mais intensamente ao
reconhecimento da microbiologia como cincia.
A primeira delas surgiu na segunda metade do sculo XIX, quando os cientistas provaram
que os microrganismos originaram-se de pais iguais a eles prprios e no de causas
sobrenaturais ou de plantas e animais em putrefao. Mais tarde, os cientistas provaram que os
microrganismos no so o resultado, mas sim a causa dos processos fermentativos no suco de
uva para a produo de vinho.
Eles tambm descobriram que um tipo especfico de microrganismo causa uma doena
especfica.
Estas informaes foram o incio do reconhecimento e da compreenso da influncia
destas novas formas de vida sobre a sade e o bem-estar do homem. Durante o incio do sculo
XX, os microbiologistas aprenderam que os microrganismos so capazes de realizar muitas
reaes qumicas, que envolvem a quebra de substncias e a sntese de novos compostos.
Igualmente importante foi a observao de que o mecanismo pelo qual as reaes
qumicas so produzidas pelos microrganismos muito semelhante quele que ocorre em formas
de vida superiores.
Durante as ltimas dcadas, os microrganismos tm surgido como parte do eixo principal
das cincias biolgicas. Entre as razes para isto, est o conceito de unidade em bioqumica,
que significa que muitos dos processos bioqumicos que ocorrem em microrganismos so
essencialmente os mesmos em todas as formas de vida, inclusive o homem. Alm disso, toda a
informao gentica de todos os organismos, dos microrganismos a seres humanos, codificada
pelo DNA.
Em virtude da relativa simplicidade em realizar experimentos com microrganismos,
associada rpida velocidade de crescimento e de sua variedade de atividades bioqumicas, os
microrganismos tornaram-se o modelo experimental de escolha para o estudo da gentica e de
fenmenos biolgicos fundamentais.
Para compreender o atual estgio da cincia da microbiologia, precisamos conhecer como
ela chegou at onde estamos atualmente.
A descoberta do mundo microbiano inclui histrias sobre orgulho, nacionalismo, clamor
pblico para curas e questes sobre tica. Os primeiros cientistas que optaram por estudar
microbiologia foram motivados, no decorrer de suas descobertas, por competio, inspirao e
sorte. Houve conceitos errneos que levaram a verdade, e verdades que no foram inicialmente
reconhecidas. Tudo comeou com indivduos fascinados pelo que os outros no podiam ver...
Needham respondeu que a fora vital necessria para a gerao espontnea tinha sido
destruda pelo calor e foi mantida fora dos frascos pelos lacres.
A fora vital recebeu mais crdito quando Laurent Lavoisier mostrou a importncia do
oxignio para a vida. Criticaram que no havia oxignio suficiente nos frascos lacrados de
Spallanzani para sustentar a vida mirobiana.
5. Contra a abiognese: Franz Schulze (1815-1873) e Theodor Schwann (1810-1882) 60 a 70
anos depois: realizaram experincias onde aeraram infuses fervidas, fazendo o ar
atravessar solues cidas (Schulze), e outra que forava o ar atravs de tubos aquecidos
ao rubro (Schwann).
Os defensores da gerao espontnea no se
convenciam. Em nenhum dos casos surgiram
microrganismos mas eles argumentavam que o
cido e o calor alteravam o ar, fazendo com que o
meio no permitisse o crescimento.
POSTULADOS DE KOCH
1. O microrganismo deve estar sempre presente
nas leses das plantas ou animais doentes
(ASSOCIAO CONSTANTE)
2. O microrganismo deve ser isolado e cultivado
em CULTURA PURA
3. O microrganismo isolado deve REPRODUZIR
OS SINTOMAS quando inoculado em uma
planta ou animal sadio
4. O microrganismo deve ser REISOLADO da
planta ou animal inoculado artificialmente e
corresponder, em todas as suas caractersticas,
com o isolado da primeira leso.
Vacinao
Frequentemente, um tratamento ou uma medida preventiva desenvolvido antes que os
cientistas saibam como funciona. A vacina contra varola um exemplo disso. Em 4 de maio de
1796, quase 70 anos antes de Koch estabelecer que um microrganismo especfico era o causador
do antraz, Edward Jenner, jovem mdico britnico, iniciou experimento para encontrar uma
maneira de proteger as pessoas contra a varola.
As epidemias de varola eram muito temidas. A doena aparecia periodicamente por toda
Europa, matando milhares e liquidou 90% dos nativos na Costa Oeste norte-americana quando os
colonizadores europeus levaram a infeco para o Novo Mundo.
1. Na vacinao, a imunidade (resistncia a uma determinada doena) conferida pela
inoculao com uma vacina.
2. Em 1798, Edward Jenner demonstrou que a inoculao com material de vacnia
proporciona imunidade aos seres humanos contra varola.
Quando uma jovem que trabalhava na ordenha de vacas informou a Jenner que ela no
contrairia varola porque j havia estado doente de vacnia doena muito mais amena
que a varola ele decidiu testar a histria da garota. Primeiro, ele coletou amostras de
feridas de vacnia. Ento inoculou um voluntrio saudvel de 8 anos de idade com o
materia retirado das feridas de vacnia por meio de pequenos arranhes no brao do
garoto com uma agulha contaminada. Os arranhes deram origem s bolhas, tpicas da
doena. Em poucos dias, o voluntrio estava medianamente doente, mas se recuperou
rapidamente e nunca mais contraiu vacnia nem varola.
O processo foi chamado de vacinao, da palavra
latina vacca, significando gado. Pasteur deu esse
nome em homenagem ao trabalho de Jenner. A
proteo contra uma doena fornecida pela
vacinao (ou pela recuperao da prpria
doena) chamada de imunidade.
3. Por volta de 1880, Pasteur descobriu que uma
bactria no-virulenta poderia ser utilizada como
uma vacina para a clera em aves domsticas; ele
criou a palavra vacina.
Anos aps os experimentos de Jenner, por volta de 1880, Pasteur descobriu como
funcionava a vacinao. Ele descobriu que a bactria que causava a clera nas aves
domsticas perdia a capacidade de causar a doena (perdia a virulncia ou tornava-se
avirulenta) depois que era mantida por longos perodos no laboratrio. Entretanto, este e
outros microrganismos com virulncia diminuda eram capazes de induzir imunidade contra
infeces subsequentes de seus companheiros virulentos. A descoberta desse fenmeno
forneceu a chave para o sucesso do experimento de Jenner com vacnia. Ambas, vacnia e
varola, so causadas por vrus. Mesmo que o vrus que causa vacnia no seja um
derivado do vrus da varola produzido em laboratrio, sua semelhana com o vrus da
varola to grande que ele pode induzir imunidade para ambas as viroses. Pasteur usou
o termo vacina para as culturas de microrganismos avirulentos, utilizadas para inoculao
preventiva.
4. As vacinas modernas so preparadas a partir de microrganismos no-virulentos, de
patgenos mortos, ou de componentes de patgenos e pela tecnologia do DNA
recombinante.
O experimento de Jenner foi o primeiro que ocorreu na cultura ocidental que utilizou um
agente viral vivo o vrus da vacnia para produzir imunidade. Na China antiga, os
mdicos imunizavam seus pacientes pela remoo de escamas de pstulas ressecadas de
pessoas que estavam sofrendo de casos moderados de varola, transformavam essas
escamas em um p fino e inseriam esse p nas narinas das pessoas para serem
protegidas.
Algumas vacinas ainda so produzidas a partir de linhagens avirulentas de micrbios, que
produzem imunidade contra as linhagens virulentas. Outras vacinas so feitas a partir de
micrbios mortos, de componente isolados dos microrganismos virulentos ou pelas
tcnicas de engenharia gentica.
O nascimento da quimioterapia moderna: sonhos de uma bala mgica
Aps estabelecer relao microrganismos-doenas, mdicos microbiologistas direcionaram
suas pesquisas para as substncias que poderiam destruir os microrganismos patognicos sem
prejudicar os animais infectados ou os seres humanos.
1. Quimioterapia o tratamento qumico de uma doena. O tratamento das doenas
utilizando substncias qumicas chamado de quimioterapia. (Esse termo tambm referese geralmente ao tratamento qumico de doenas no-infecciosas como o cncer.)
2. Dois tipos de agentes quimioterpicos so as drogas sintticas (qumicos preparados em
laboratrio) e antibiticos (substncias produzidas naturalmente por bactrias e fungos
para inibir o crescimento de outros microrganismos). A base do sucesso da quimioterapia
est no fato de que alguns qumicos so mais venenosos para os microrganismos que
para os hospedeiros infectados por esses micrbios.
3. Paul Ehrlich utilizou um produto qumico contendo arsnico, denominado salvarsan, para o
tratamento da sfilis (1910). Ele disparou o primeiro tiro na revoluo da quimioterapia.
Como estudante de medicina, especulou a respeito de uma bala mgica, que poderia
combater e destruir um patgeno, sem prejudicar o hospedeiro infectado. Aps testar
centenas de substncias, encontrou o salvarsan, derivado de arsnico, efetivo no combate
sfilis. Salvarsan = salvao para a sfilis e por ter arsnico.
Antes da descoberta o nico composto qumico conhecido era um extrato retirado da casca
de uma rvore sul-americana, quinino, que havia sido utilizado pelos conquistadores
espanhis no tratamento da malria.
No final da dcada de 30, haviam sido desenvolvidas outras drogas para destruir
microrganismos. Muitas eram derivadas de corantes (testavam corantes sintetizados e
produzidos para tecidos na busca de propriedades antimicrobianas). As sulfonamidas
(drogas derivadas da sulfa) foram sintetizadas no mesmo perodo.
4. Alexander Fleming observou que o bolor (fungo) Penicillium inibia o crescimento de uma
cultura de bactrias. Ele chamou o ingrediente ativo de penicilina (1928).
O primeiro antibitico foi descoberto por acidente. Alexander Fleming quase estava
descartando algumas culturas em placas que haviam sido contaminadas por fungos
quando observou cuidadosamente o curioso padro de crescimento nas placas
contaminadas. Havia uma rea clara ao redor do fungo onde a cultura de bactria havia
sido inibida.
Ele observou que um tipo de fungo podia inibir o crescimento da bactria.
O fungo foi mais tarde identificado como Penicillium notatum e, em 1928, Fleming nomeou
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A penicilina tem sido utilizada clinicamente como antibitico desde a dcada de 40.
5. Os pesquisadores esto atacando o problema de resistncia dos micrbios s drogas.
PROBLEMA 1: Muitos antibiticos foram desenvolvidos. Infelizmente, antibiticos e outras
drogas quimioterpicas no esto livres de problemas. Muitos qumicos antimicrobianos
so muito txicos para os seres humanos para serem aplicados; matam os micrbios
patognicos mas tambm prejudicam o hospedeiro infectado.
A toxicidade para o homem um problema especfico no desenvolvimento de drogas para
o tratamento de doenas virais. O crescimento viral depende dos processos vitais de
clulas normais do hospedeiro. Portanto, existem poucas drogas antivirais usadas com
sucesso, uma vez que um droga interfere na reproduo viral provavelmente afeta tambm
as clulas saudveis do organismo.
PROBLEMA 2: Outro problema com as drogas antimicrobianas o aparecimento e a
disperso de variedades novas de microrganismos que so resistentes aos antibiticos. A
resistncia a drogas resulta de mudanas genticas nos micrbios que os torna tolerantes
a uma certa quantidade de antibitico que normalmente inibiria seu crescimento.
Progressos recentes na microbiologia
1. Bacteriologia o estudo das bactrias, micologia o estudo dos fungos, virologia o
estudo dos vrus e parasitologia o estudo dos parasitas e vermes protozorios.
2. Os microbiologistas esto usando a genmica, o estudo de todos os genes de um
organismo, para classificar os microrganismos. Era de ouro da classificao.
3. As novas tcnicas da biologia molecular e da microrcopia eletrnica forneceram
ferramentas para o avano do conhecimento na virologia. Desenvolvimento do microscpio
eletrnico em 1940 permitiu a observao detalhada da estrutura dos vrus.
4. O desenvolvimento da tecnologia do DNA recombinante tem promovido avanos em todas
as reas da microbiologia.
Os microrganismos podem ser geneticamente manipulados para produzir grandes
quantidades de hormnios humanos e outras substncias mdicas urgentemente
necessrias. No final da dcada de 60, Paul Berg mostrou que fragmentos do DNA de
seres humanos ou de animais que codificam protenas importantes (genes) podem ser
ligados ao DNA de uma bactria. A molcula hbrida resultante foi o primeiro exemplo de
DNA recombinante. Quando o DNA recombinante inserido dentro da bactria (e de outros
micrbios), pode ser utilizado para produzir grandes quantidades da protena desejada. A
tecnologia que se desenvolveu a partir dessa tcnica chamada de tecnologia do DNA
recombinante ou engenharia gentica. Ela teve sua origem em duas reas: gentica
microbiana, que estuda os mecanismos pelos quais os microrganismos herdam suas
caractersticas, e a biologia molecular, que estuda especificamente como a informao
gentica transmitida nas molculas de DNA e como o DNA direciona a sntese das
protenas.
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Exerccios
1. Qual o conceito de clula? Qual pesquisador empregou esse conceito pela primeira vez? Que
instrumento ele utilizou?
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2. Quem foi o primeiro a observar os microrganismos vivos atravs de lentes de aumento? Como ele
os chamava?
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3. Explique o conceito de gerao espontnea. Qual o outro nome dado a esse conceito? Cite
exemplos das crenas relacionadas a essa teoria.
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4. Explique o conceito de biognese.
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5. O que era a fora vital? Qual sua funo?
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6. Faa um resumo de cada pesquisador e do experimento por ele desenvolvido na busca de
comprovar a gerao espontnea ou a biognese.
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7. O que foi a Idade de Ouro da Microbiologia?
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8. Explique, em detalhes, qual foi a etapa fundamental que estabeleceu relao entre microrganismos
e doenas (qual experimento foi feito, por quem, qual a concluso).
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9. O que era a Teoria do Germe da Doena? Como a teoria da biognese abriu o caminho para a
teoria do germe da doena?
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10. Quais as principais contribuies dos seguintes pesquisadores:
a) Agostino Bassi:
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b) Joseph Lister:
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c) Robert Koch
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11. Explique como foi a descoberta da vacina. Qual pesquisador foi responsvel?
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12. O que significa bactria virulenta e bactria avirulenta?
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13. Como so feitas as vacinas modernas?
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14. O que quimioterapia? Cite e explique os dois tipos de agentes quimioterpicos.
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15. O que penicilina? Como ela foi descoberta? Por qual cientista?
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16. Cite e explique dois problemas atuais relacionados ao uso indiscriminado de antibiticos.
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17. Pesquise na Internet e faa a correspondncia entre pesquisadores e contribuies para o avano
da microbiologia.
___ Avery, MacLeod e McCarty
___ Berg
___ Ehrlich
___ Fleming
___ Hooke
___ Iwanowski
___ Jacob e Monod
___ Jenner
___ Koch
___ Lancefield
desinfetantes
nos
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Gato
Alga
Bactria
Animal
Plantae
Eubacteria
Chlorophyta
Gracillicutes
Chlorophyceae
Scotobacteria
Diviso
Filo
Chordata
Subfilo
Vertebrata
Classe
Mammalia
Subclasse
Eutheria
Ordem
Carnivora
Volvocales
Spirochaetales
Famlia
Felidae
Chlamydomonadaceae
Leptospiraceae
Gnero
Felis
Clamydomonas
Leptospira
Espcie
F. domesticus
C. eugametos
L. interrogans
O sistema de nomenclatura (nomeao) em uso atualmente para os organismos foi
estabelecido em 1735 por Carolus Linnaeus. Os nomes cientficos so latinizados porque o latim
era a lngua tradicionalmente utilizada pelos estudantes. A nomenclatura cientfica para cada
organismo designa para cada organismo dois nomes o gnero o primeiro nome, sempre
iniciado com letra maiscula; o epteto especfico (nome das espcies) segue o gnero e no se
inicia por letra maiscula. Assim, o nome de uma espcie sempre dado como uma combinao
latina de duas partes (binomial): nome do gnero + nome especfico que denota a espcie.
O organismo designado pelos dois nomes, o gnero e o epteto especfico, ambos sendo
sublinhados ou escritos em itlico. Por tradio, aps um nome cientfico ter sido mencionado uma
vez, ele pode ser abreviado com a inicial do nome do gnero seguido pelo epteto especfico. Por
exemplo, o homem pertence espcie Homo sapiens, enquanto a bactria que causa a doena
de Lyme pertence espcie Borrelia burgdorferi.
CERTO: Staphylococcus aureus.
ERRADO: Staphylococcus aureus, Staphylococcus Aureus, staphylococcus aureus, Estafilococos
aureus, etc.
Os nomes cientficos podem, entre outras coisas, descrever um organismo, homenagear
um pesquisador ou identificar os hbitos de uma espcie. Por exemplo, considerando
Staphylococcus aureus, uma bactria comumente encontrada na pele humana. O gnero
Staphylo descreve o arranjo agrupado das clulas; coccus indica que as clulas possuem forma
de esferas. O epteto especfico aureus significa ouro em latim, a cor de muitas colnias dessa
bactria. As bactrias do gnero Escherichia coli foram nomeadas por um cientista, Theodor
Escherich, enquanto que o epteto especfico, coli, lembra-nos que E. coli vive no clon ou no
intestino grosso.
No h consenso na nomenclatura e classificao de cada txon. Por exemplo, os
zoologistas e os botnicos concordam com o arranjo das plantas e dos animais em filos (os
botnicos preferem o termo diviso). J os microbiologistas ainda no estabeleceram um filo que
satisfaa aos bacteriologistas, ficologistas, protozoologistas e outros. Assim, em concordncia, o
gnero e a espcie permanecem como as duas taxas mais importantes entre as bactrias.
Classificao dos microrganismos
Durante a metade do sculo XVIII, todos os organismos vivos foram distribudos por
Carolus Linnaeus em dois reinos, Plantae e Animalia. Embora seu trabalho pioneiro tenha grande
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Plantae
Animalia
Haeckel (1865)
Plantae
Animalia
Protista
Whittaker (1969)
Plantae
Animalia
Protista
Fungi
Monera
Woese (1977)
Archaeobacteria
Eubacteria
Eucaryotes
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Evidncias para sustentar essa ideia vieram de estudos com o cido ribonuclico
ribossmico, ou rRNA, que essencial para a sntese protica e, portanto, para a sobrevivncia
da clula. Foi descoberto que nos ribossomos de todos os organismos vivos, o rRNA composto
de muitas unidades pequenas denominadas ribonucleotdeos. Existem 4 tipos de
ribonucleotdeos, arranjados em vrias combinaes para formar uma nica e longa cadeia de
centenas de unidades. O rRNA de qualquer organismo particular tem um arranjo distinto de
ribonucleotdeos, ou seja, uma sequncia nucleotdica especfica. (O RNA difere do DNA por ser
uma fita simples, apresentar ribose em vez de desoxirribose, e uracila (U) em vez de timina (T). As
outras 3 bases adenina (A), guanina (G) e citosina (C) ocorrem tanto em RNA quanto em DNA.)
Os genes que controlam a sequncia nucleotdica de rRNA variam lentamente durante
milhes de anos de evoluo. Portanto, o rRNA pode servir como um indicador de como os
organismos esto intimamente relacionados e algumas regies da molcula de rRNA de todos os
organismos vivos permanecem quase as mesmas. Esta constncia sustenta a ideia de que todos
os organismos tm se desenvolvido de formas ancestrais comuns.
Ao mesmo tempo, a quantidade de diferenas entre as outras regies de rRNA pode ser
usada para medir o grau de relacionamento entre os organismos. Por exemplo, se as sequncias
de ribonucleotdeos de dois tipos de organismos diferem em grande extenso, a relao entre
ambos muito distante; isto , os organismos divergiram h muito tempo de um ancestral comum.
Porm, se as sequncias mostram mais similaridades, os organismos esto intimamente
relacionados e tm um ancestral em comum relativamente recente.
Usando essas tcnica, Woese descobriu que as molculas de rRNA em grupos de
organismos diferem no arranjo e na sequncia de seus nucleotdeos. Os eucariotos possuem um
tipo geral de sequncia e o procariotos, um segundo tipo. Mas ele tambm descobriu que alguns
procariotos tm um terceiro tipo de rRNA e o arranjo desse rRNA difere dos outros procariotos e
dos eucariotos. Em outras palavras, existem dois tipos principais de bactrias, chamadas de
arqueobactrias e eubactrias, que so to diferentes uma das outras como tambm so dos
eucariotos.
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Exerccios
1) O que teoria celular?
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2) O que protoplasma? De que ele formado?
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3) Qual a diferena entre procariontes e eucariontes?
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4) Qual a funo do material que fica no ncleo de uma clula, envolto ou no por uma
membrana?
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5) Quais as 3 partes que compem a taxonomia e a funo de cada uma delas?
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6) Qual a unidade taxonmica bsica?
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7) Cite os taxa (categorias) a partir do mais especfico para o mais geral.
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8) O que uma cepa?
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9) Quais a regras para escrever o nome cientfico de um organismo?
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Metabolismo microbiano.
1. Metabolismo microbiano
- Metabolismo a soma de todas as reaes qumicas dentro de um organismo vivo. Como as
reaes qumicas liberam ou requerem energia, o metabolismo o balanceamento de energia.
- Metabolismo pode ser dividido em duas classes de reaes qumicas: reaes que liberam
energia e reaes que requerem (absorvem) energia.
- Nas clulas vivas, as reaes reguladas por enzimas que liberam energia esto envolvidas no
catabolismo, a quebra de compostos orgnicos complexos em compostos mais simples. So
reaes chamadas de catablicas ou degradativas. Essas reaes so geralmente de hidrlise
(reaes que usam gua e nas quais ligaes qumicas so quebradas) e so exergnicas
(produzem mais energia que consomem). Exemplo: clulas quebram acares em dixido de
carbono e gua.
- As reaes reguladas por enzimas que requerem energia esto envolvidas no anabolismo, a
construo de molculas orgnicas complexas a partir de molculas orgnicas mais simples. So
chamadas de reaes anablicas ou biossintticas. Essas reaes muitas vezes envolvem
reaes de sntese por desidratao (reaes que liberam gua) e so endergnicas (consomem
mais energia do que produzem). Exemplos: formao de protenas a partir de aminocidos, cidos
nuclicos a partir de nucleotdeos e polissacardeos a partir de acares simples. Essas reaes
biossintticas geram os materiais para o crescimento celular.
- As reaes catablicas fornecem os blocos construtivos para as reaes anablicas e a energia
necessria para dirigi-las. Esse acoplamento (juno) de reaes que requerem energia e liberam
energia possvel atravs da molcula de trifosfato adenosina (ATP). O ATP estoca energia
derivada de reaes catablicas e a libera mais tarde para dirigir reaes anablicas e realizar
outros trabalhos celulares.
- O ATP formado por uma adenina, uma ribose e trs grupos fosfato. Quando o grupo fosfato
terminal retirado do ATP, difosfato de adenosina (ADP) formado, e energia liberada para
dirigir as reaes anablicas.
ATP ADP + P + energia
A energia das reaes catablicas usada para combinar ADP e um P para sintetizar novamente
ATP:
ADP + P + energia ATP
- As reaes anablicas esto acopladas quebra do ATP e as reaes catablicas esto
acopladas sntese do ATP.
- A composio qumica de uma clula viva est constantemente mudando, algumas molculas
so quebradas enquanto outras esto sendo sintetizadas. Esse fluxo balanceado de compostos
qumicos e energia mantm a vida de uma clula.
- Vias metablicas que existem nas clulas so sequncias de reaes qumicas catalisadas por
enzimas.
23
2. Produo de energia
- Molculas nutrientes, como todas as molculas, tm energia associada com os eltrons que
formam as ligaes entre seus tomos.
- Quando essa energia est distribuda por toda a molcula, difcil para a clula utiliz-la.
- Vrias reaes em vias catablicas, contudo, concentram a energia dentro das ligaes do ATP,
que serve como um transportador de energia.
- ATP tem ligaes de alta energia, ou ligaes instveis. Embora a quantidade de energia
nessas ligaes no seja excepcionalmente grande, ela pode ser liberada rpida e facilmente.
- ATP = querosene (lquido altamente inflamvel), embora uma grande tora de madeira possa
eventualmente queimar e produzir mais calor que uma xcara de querosene, o querosene tem
ignio mais fcil e proporciona calor mais rpido. De forma semelhante, as ligaes instveis de
alta energia do ATP suprem a clula com energia prontamente disponvel para reaes
anablicas.
2.1 Reaes de oxidao-reduo (redox)
- Oxidao = remoo de eltrons de um tomo ou molcula, uma reao que muitas vezes
produz energia
- Reduo = ganho de eltrons de um tomo ou molcula
- Exemplo de uma oxidao em que a molcula A perde um eltron para a molcula B. A molcula
A sofreu oxidao (significando que ela perdeu um ou mais eltrons), enquanto a molcula B
sofreu reduo (significando que ela ganhou um ou mais eltrons).
reduo
A oxidada B reduzida
oxidao
- Reaes de oxidao-reduo sempre esto acopladas, cada vez que uma substncia
oxidada, uma outra simultaneamente reduzida.
24
- Os organismos liberam e armazenam energia de molculas orgnicas por meio de uma srie de
reaes controladas, ao invs de ser uma nica exploso. Se a energia fosse liberada toda de
uma s vez, como uma grande quantidade de calor, ela no poderia ser prontamente utilizada
para impulsionar as reaes qumicas e causaria, de fato, danos clula. Para extrair energia de
compostos orgnicos e a armazenar na forma qumica, os organismos passam eltrons de um
composto a outro por meio de uma srie de reaes redox.
3. Catabolismo de carboidratos
- Maioria dos microrganismos oxida carboidratos como fonte primria de energia celular.
Catabolismo de carboidratos para produzir energia de grande importncia no metabolismo
celular.
- Glicose a fonte mais comum de energia de carboidrato utilizada pelas clulas, mas
microrganismos tambm podem catalisar lipdios e protenas para produzir energia
- Para produzir energia a partir da glicose, os microrganismos usam dois processos gerais:
respirao celular e fermentao.
- Respirao ocorre em trs etapas: gliclise, ciclo de Krebs e a cadeia (sistema) de transporte de
eltrons.
- Fermentao tambm inicia com a etapa da gliclise, mas aps converter glicose em cido
pirvico, este convertido em um ou mais produtos diferentes, dependendo do tipo de clula, por
exemplo: lcool (etanol) e cido ltico. Rendimento de ATP menor.
25
26
- Fermentao:
- libera energia de acares ou molculas orgnicas, tais como aa, cidos
orgnicos, purinas e pirimidinas
- no requer oxignio (mas algumas vezes pode ocorrer na presena desse)
- no requer uso do ciclo de Krebs ou de uma cadeia de transporte de
eltrons
- usa molcula orgnica como aceptor final de eltrons
- produz pequenas quantidades de ATP, porque grande parte da energia
original da glicose permanece nas ligaes qumicas dos produtos finais orgnicos, como cido
ltico ou etanol.
4. Fotossntese
- em todas as vias anteriores, os microrganismos obtm energia para o trabalho celular pela
oxidao de compostos orgnicos. Mas onde os microrganismos obtm esses compostos
orgnicos?
- Muitos microrganismos e animais alimentam-se de matrias produzidas por outros organismos.
Ex.: bactrias podem catabolizar compostos de plantas e animais mortos ou podem obter alimento
de um hospedeiro vivo.
- Outros microrganismos sintetizam compostos orgnicos complexos a partir de substncias
inorgnicas simples. O principal mecanismo a fotossntese, usado por plantas e microrganismos.
- Fotossntese a converso da energia luminosa do sol em energia qumica. Energia qumica
ento usada para converter o gs carbnico da atmosfera em compostos de carbono como
acares.
6 CO2 + 12 H2O + energia luminosa C6H12O6 + 6 O2 + 6 H2O
5. Diversidade metablica entre os organismos
- microrganismos podem ser classificados metabolicamente de acordo com seu padro nutricional
de fonte de energia e fonte de carbono.
- Fonte de energia:
- fototrficos: usam luz como fonte de energia primria
- quimiotrficos: dependem de reaes de redox de compostos orgnicos ou
inorgnicos para energia
- Fonte de carbono:
- autotrficos: nutrio prpria, usam dixido de carbono
- heterotrficos: nutrio depende dos outros, requerem fonte de carbono
orgnica
- Combinando as fontes de energia e carbono, surge a seguinte classificao:
- fotoautotrficos
- foto-heterotrficos
- quimioautotrficos
- quimio-heterotrficos
Exerccio
1) Leia o texto abaixo e faa um resumo de cada grupo: fotoautotrficos, foto-heterotrficos,
quimioautotrficos e quimio-heterotrficos.
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Procariontes Monera
clulas procariontes ou
procariotas
no possuem carioteca
(membrana nuclear),
membrana que separa o
material gentico do citoplasma
Existe material gentico nas duas, mas nas procariontes este est boiando no
citoplasma, e na clula eucarionte o material gentico est no ncleo separado pela carioteca do
restante da clula.
BACTRIAS
1) Estrutura
- grego bakteria = basto
- so seres microscpicos menor ser vivo
- unicelulares
- clula bacteriana procariota (material gentico no envolto por membrana nuclear)
- ausncia de estruturas membranosas intracelulares
30
Citoplasma
Membrana
plasmtica
Parede celular
Cpsula
Fmbrias
DNA associado
ao mesossomo
Flagelo
a) Parede celular
- complexa, semi-rgida e responsvel pela forma da clula
- circunda a membrana plasmtica frgil
- componente principal uma rede de macromolculas chamada PEPTIDEOGLICANO
(glicoprotena)
PEPTIDEO = Filas adjacentes de polissacardeo so ligadas por polipeptdeos
GLICANO = Dissacardeo repetitivo formando polissacardeo - Esqueleto de carboidratos
N-acetil-cido murmico
Staphylococcus aureus
N-acetilglucosamina
Peptdeos
Classificao
- de acordo com suas respostas colorao de Gram, as bactrias se dividem em 2 grupos:
Gram positivas: 90 % da parede formada de peptideoglicana (at 20 camadas) 30-60 nm
Esquema de bactria com
parte da clula removida.
Parede celular
formada por camada
espessa de
peptidoglicano
Membrana plasmtica
Esquema de parte da parede celular e da membrana
plasmtica de bactria gram-positiva.
Exemplo: Estreptococos; Estafilococos; Enterococos
31
Protena
Camada lipoprotica
externa, espessa,
semelhante membrana
plasmtica, com
lipopolissacardeos
Parede celular
Lipoprotenas
Esquema de parte da parede celular e da
membrana plasmtica de bactria gram-negativa.
Membrana plasmtica
32
- Flagelos
- presena no obrigatria
- apndices longos, finos e helicoidais
- originam-se na membrana plasmtica
- distribudos em nmero varivel
- mobilidade por rotao (at 12.000 rpm)
- Fmbrias
- presena no obrigatria
- apndices proticos, pequenos e imveis
- adeso a substratos/superfcies, vrias unidades por clula, biofilmes
Fmbrias da bactria que causa gonorreia
ajudam sua fixao nas membranas mucosas
para causar a doena, se no existirem
(mutao gentica) no ocorre colonizao e
no aparece doena.
33
- Pili
- presena no obrigatria
- apndices proticos, pequenos e imveis
- unem clulas bacterianas na transferncia de DNA de uma clula para outra (conjugao),
geralmente 1 unidade por clula
- Endosporos
- clulas de repouso formadas por certas bactrias gram-positivas quando nutrientes essenciais
se esgotam
- estruturas de resistncia ao calor, radiaes, cidos, produtos qumicos e enzimas
- dormentes por milhares de anos, podem iniciar germinao
- exemplo 1: endosporos com 7500 anos de Thermoactinomyces vulgaris do lodo congelado do
lago Elk (EUA) germinou quando reaquecido e colocado em meio nutriente
- exemplo 2: endosporos com 25 a 40 milhes de anos, intestino de abelha sem ferro aprisionada
em mbar (resina de rvore endurecida) na Repblica Dominicana germinaram quando colocados
em meio nutriente.
- Gnero Clostridium (gangrena, ttano, botulismo, intoxicao alimentar); gnero Bacillus (antraz
ou carbnculo e intoxicao alimentar)
- indstria alimentcia
- Esporulao ou esporognese = germinao (retorno ao estado vegetativo)
34
2) Morfologia
- so unicelulares, exceto os actinomicetos
- de acordo com a forma que apresentam, as bactrias so classificadas em: cocos, vibries
- cada grupo possui subdivises.
COCO ESFRICO: forma arredondada oval, alongada ou achatada em uma extremidade
diplococos = em pares
ttrade = grupos de 4
sarcina = grupos de 8, cubo
estreptococos = cadeia
estafilococos = cacho
BACILO: forma de basto
diplobacilos = em pares
estreptobacilos = cadeia
VIBRIES: tem forma de vrgula
espirilos = helicoidal (saca-rolhas)
espiroquetas = helicoidal e flexvel
Exerccio - Nomeie as figuras abaixo de acordo com a forma das bactrias.
Chlamydia trachomatis
________________________________
________________________________
Streotococcus
________________________________
________________________________
________________________________
________________________________
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Mycobacterium tuberculosis
________________________________
________________________________
________________________________
Vibrio cholerae
________________________________
Treponema pallidum
________________________________
________________________________
RESUMINDO...
36
3) Reproduo
Assexuada, por bipartio ou diviso binria simples
- 2 clulas filhas iguais, multiplicao
4) Respirao
- Aerbias estritas: necessitam de O2 para sua sobrevivncia (ar contm 21% de O2)
- Aerbias microaerfilas: necessitam de O2 mas em concentrao menor que a encontrada no ar
- Aerbias facultativas: podem crescer tanto na presena como na ausncia de oxignio. No
necessitam de O2, crescem melhor com O2. Podem usar O2 quando disponvel, mas na sua
ausncia, so capazes de continuar seu crescimento atravs da respirao anaerbia ou da
fermentao.
- Anaerbias obrigatrias: no toleram O2 (letal).
- Anaerbias aerotolerantes: no necessitam de O 2, crescem melhor sem O2 pois no podem uslo para seu crescimento.
AERBIAS
ESTRITAS
ANAERBIAS AERBIAS
ANAERBIAS
MICRO
ESTRITAS FACULTATIVAS AERFILAS AEROTOLERANTES
37
5) Nutrio
- Hetertrofos (maioria):
- Saprfitos = decompem material orgnico de animais e plantas mortas e absorvem os
nutrientes. Reciclagem papel ecolgico
- Parasitas = absorvem os nutrientes de hospedeiros vivos. Patgenos de plantas e animais
- Mutualistas = associao ntima com outros organismos
- Auttrofos
- Fotoautotrficos = obtm a energia na forma de luz, para a fotossntese
- Quimioautotrficos = obtm energia pela oxidao de compostos qumicos: acar, protenas,
gorduras, celulose, petrleo, mangans, gasolina,
6) Importncia
- decompositoras, fazem a reciclagem e a fertilizao do solo
- fixadoras de nitrognio atmosfrico (N 2), so capazes de utilizar N gasoso diretamente da
atmosfera
* bactrias dos gneros Rhizobium e Bradyrhizobium = obteno de N para elas e para
plantas que convivem simbioticamente (leguminosas: soja, feijo)
* cultivo de leguminosas = maior fertilidade do solo sem a necessidade de implementao
de fertilizantes qumicos, liberam nitratos (NO-3) no solo
- alimentos = produo de iogurtes, queijos, pickles, chucrute, leites fermentados, vinagre,
bebidas, carnes curadas (salames e embutidos), molho de soja
- produtos de valor industrial = antibiticos, vitaminas, acetona, metanol, butanol,
- tratamento de esgotos = degradao dos resduos orgnicos
- usinas de reciclagem de lixo = produo de adubos de compostagem
- biotecnologia = ferramentas da engenharia gentica = bactrias capazes de produzir drogas
teraputicas (insulina), bactrias p/ biodegradao de lixos txicos (derrames de hidrocarbonetos)
- cirurgia plstica = toxina botulnica (espcie de Clostridium botulinum) paralisa musculatura,
relaxando-a = Botox, usado em pequenas quantidades p/ atenuao de rugas e marcas de
expresso
- bacterioses humanas = antraz, botulismo, crie, clera, coqueluche, febre tifide, gastroenterites,
gonorria, hansenase (lepra), intoxicao alimentar, meningite, pneumonia, sfilis, ttano,
tuberculose
Exerccios
1) Quais so as 3 formas bsicas das clulas bacterianas?
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__________________________________________________________________________________
2) Quais so os arranjos celulares comuns das bactrias cocides?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
3) Quais so os arranjos celulares comuns dos bacilos?
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__________________________________________________________________________________
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4) Qual o componente principal da parede celular bacteriana? Qual sua funo para a clula
bacteriana?
__________________________________________________________________________________
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__________________________________________________________________________________
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39
b) ribossomos.
d) DNA.
21) A meningite meningoccica, cuja profilaxia, principalmente entre escolares, se fez com vacinas
conhecidas como tipo A e tipo C, uma infeco causada:
a) somente por vrus.
b) por bactrias formadas por basto ou bacilos.
c) por bactrias de forma esfrica.
d) por vrus e bactrias.
e) por vrus e riqutsias
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22) Bactrias causadoras de infeco e que so vistas ao microscpio como grupamento de glbulos
em cacho certamente so:
a) estafilococos.
b) estreptococos.
c) diplococos.
d) micrococos.
e) bacilos.
23) Muitas doenas humanas so produzidas por vrus. Marque da relao seguinte a nica de origem
bacteriana:
a) gripe
b) caxumba
c) ttano
d) sarampo
e) varola
24) Numere a Segunda coluna de acordo com a primeira e de pois assinale a alternativa que contenha
a sequncia correta:
Coluna I
Coluna II
(1) bacilos
( ) cocos em grupos densos
(2) estreptococos
( ) cocos em grupos aproximadamente cbicos
(3) estafilococos
( ) cocos em fileira
(4) ttrades
( ) filamentos helicoidais
(5) sarcina
( ) bastonete reto em geral de 1 a 15 micra
(6) espirilos
( ) cocos em grupo de quatro
a) 3-2-5-6-1-4
b) 3-5-2-6-1-4
c) 3-5-2-1-6-4
d) 3-5-2-6-4-1
e) 3-5-1-2-4-6
25) Em relao a morfologia, as bactrias com formas esfricas, de basto, em cacho de uva e em
colar denominam-se, respectivamente:
a) cocos, bacilos, estafilococos, estreptococos.
b) bacilos, cocos estafilococos, estreptococos.
c) cocos, bacilos, estreptococos, estafilococos.
d) bacilos, cocos, estreptococos, estafilococos.
e) estreptococos, estafilococos, bacilos, cocos.
26) Bacilos so:
a) vrus em forma de bastonete.
c) bactrias em forma de bastonete.
e) fungos unicelulares e de forma alongada.
41
29) A gua oxigenada utilizada na limpeza de ferimentos, ao entrar em contato com o sangue, libera
gs oxignio, impedindo a sobrevivncia de bactrias, como as do ttano, por exemplo.
Pode-se dizer, ento, que a bactria Clostridium tetani :
a) Aerbica facultativa, pois utiliza o oxignio, quando disponvel, para a obteno de energia.
b) Anaerbica obrigatria, pois no utiliza o oxignio para a obteno de energia.
c) Anaerbica facultativa, pois, na falta de oxignio, fermentam acares.
d) Quimiossinttica, pois utiliza a energia proveniente das descargas eltricas.
e) Fotossintetizante, j que utiliza o Sol para a obteno de energia.
30) O principal tipo de reproduo das bactrias :
a) Homogonia
c) Cissiparidade
e) Isogamia
b) Brotamento
d) Segmentao
42
COLORAO DE GRAM
Coloraes simples tornam possvel a visualizao das bactrias ao microscpio, mas isso
no faz distino entre organismos de morfologia similar. Para tanto, necessrio realizar uma
colorao diferencial. Existem diversos mtodos de colorao utilizados para a anlise de
bactrias. Entre estes, o mais utilizado a colorao desenvolvida por Christian Gram em 1884.
Usando duas seqncias de colorao, com diferentes corantes, este mtodo permite a diviso
das bactrias em 2 grandes grupos.
O primeiro grupo, que retm a cor do primeiro corante (o cristal violeta), denominado
Gram positivo. O segundo grupo perde a cor do primeiro corante e retm a cor do segundo
corante utilizado (fucsina) e denominado Gram negativo.
Uma soluo de iodo (lugol) utilizada como mordente (um composto qumico que fixa um
corante ou outra substncia ao se combinar com o mesmo e formar um composto insolvel) para
a primeira etapa da colorao.
H tambm um agente descorante entre a utilizao de um e
outro corantes. Pode-se utilizar diferentes descorantes, de acordo com a velocidade de
descolorao desejada. O lcool etlico a 95% um agente descorante mais devagar, enquanto a
acetona agiliza essa etapa. Geralmente utiliza-se uma mistura de lcool etlico e acetona (95:5),
obtendo uma velocidade de descolorao intermediria.
A maioria dos cocos Gram positiva com exceo dos gneros Neisseria e Veillonella que
so os nicos Gram negativos. Assim tambm acontece com os bacilos, sendo a maioria Gram
negativos. Entre os bacilos Gram positivos incluem-se aqueles pertencentes aos gneros
Corynebacterium, Listeria, Bacillus, Lactobacillus e Clostridium. Os vbrios so Gram-negativos.
A investigao das caractersticas morfolgicas e de colorao (morfo-tintoriais) das
bactrias etapa inicial de grande importncia no isolamento e identificao de bactrias de
material clnico bem como de alimentos. No entanto, a identificao completa de uma bactria
sempre necessitar de dados fisiolgicos ou genticos da mesma.
A colorao de Gram baseia-se na diferena das paredes celulares das diversas bactrias
e como estas sero coradas de forma distinta. As bactrias denominadas Gram negativas
possuem uma fina camada de glicoprotena recoberta por uma espessa camada formada
principalmente por lipoprotenas e substncias lipdicas. J as consideradas Gram positivas
possuem uma nica e espessa camada de glicoprotena.
Antes de iniciar a colorao, necessrio fazer um esfregao, ou seja, pegar uma colnia
previamente isolada ou uma alada de uma cultura pura e transferir para uma lmina limpa. Se for
utilizada uma colnia, deve-se adicionar uma gota/alada de soluo salina a 0,9%,
homogeneizando-a. importante que o esfregao seja bem preparado, para que, ao final da
colorao, seja possvel a visualizao das bactrias. Tambm importante no esquecer de
fixaro esfregao na chama do Bico de Bunsen, evitando que a massa de clulas a ser analisada
se perca durante as etapas da colorao.
Na primeira etapa da colorao, o corante violeta adicionado sobre o esfregao. O
corante, ento, penetra na parede da bactria, independente se esta Gram positiva ou Gram
negativa. Ao adicionar o lugol, este se combina com o corante Cristal Violeta, formando um grande
complexo, o Cristal Violeta-Iodo (CV-I), fixando o corante na parede a bactria. O lcool tem papel
fundamental neste mtodo. Ao ser adicionado sobre o esfregao corado com o Cristal violeta vai
diferenciar as bactrias:
- as Gram positivas, com sua parede rica em complexas cadeias de peptidoglicano sero
desidratadas, e os poros na parede sero reduzidos, impedindo a sada do complexo CV-I e
tornando a parede permanentemente corada de roxo (a cor do complexo CV-I);
- as bactrias Gram negativas possuem uma fina camada de peptidoglicano, mas acima desta
camada encontra-se uma outra, de carter lipdico (rica em LPS, lipoprotenas e outros
componentes). Essa camada lipdica, em contato com o lcool, dissolve-se, deixando a camada
de peptidoglicano desprotegida e permitindo a sada do complexo CV-I, tornando a clula
descorada neste momento.
importante lembrar de lavar a lmina aps a etapa de descolorao, pois se restar algum
resduo de lcool, a prxima etapa no ser realizada adequadamente, e os resultados podero
ser alterados.
43
O esfregao ento tratado com fucsina, que no ter efeito algum sobre as clulas Gram
positivas, que esto com os poros de sua parede reduzidos; mas penetrar na parede das clulas
Gram negativas, corando-as de vermelho. Esta colorao utilizada para a maioria das
bactrias, mas h algumas que no se coram por este mtodo, como as micobactrias, as
bactrias espiraladas e as bactrias que no possuem parede celular. Para estes, h outros
mtodos de colorao, como o mtodo de Zihel-Neelsen, o de Fontana-Tribondeau e o mtodo de
visualizao em campo escuro.
Alguns fatores podem influenciar nos resultados obtidos na colorao:
- Os corantes empregados na tcnica, se no filtrados, podem deixar resduos (cristais) na lmina.
- Um descoramento excessivo ou insuficiente pode levar a uma incorreta diferenciao da bactria
pelo lcool.
- A idade da cultura bacteriana tem importncia fundamental na colorao de Gram. Em culturas
envelhecidas, clulas Gram-positivas freqentemente se tornam Gram-negativas.
Enzimas lticas excretadas normalmente por culturas envelhecidas podem causar danos
membrana e parede da clula, como por exemplo, alterando a permeabilidade aos solventes.
Conseqentemente, o complexo iodo-cristal violeta poder ser retirado da clula.
Na prtica:
Preparo e fixao do esfregao
Etapas
Observaes
44
Passar a lmina com o esfregao sobre a importante fixar o esfregao para que este
chama do Bico de Bunsen, at que este esteja no se perca durante as etapas de lavagem
completamente seco.
entre a utilizao de um e outro corantes
Colorao do esfregao
Etapas da colorao
O que est
bactria?
acontecendo
na pareda
da
Cobrir o esfregao com soluo de Cristal O Cristal Violeta penetra a parede de ambos os
Violeta por cerca de 1 minuto.
tipos de clulas (Gram + e Gram -)
A seguir, lavar em gua corrente com o pissete. A lavagem com gua importante aps cada
etapa para que uma substncia utilizada no
interfira na ao da prxima.
Nesse caso, a lavagem serve para retirar o
excesso de corante.
45
Cobrir o esfregao com soluo de Lugol fraco O Lugol uma soluo de Iodo e funciona
por cerca de 1 minuto.
como mordente neta etapa da colorao, ou
seja, ele fixa o corante Cristal Violeta na parede
da clula, pois forma um complexo grande: o
CV-I.
Novamente lavar com gua, e ento lavar com O lcool absoluto, ou soluo de lcoollcool absoluto at que no saia mais corante acetona, funciona como diferenciador da
da lmina (10 15 segundos).
colorao:
nas Gram +, o lcool desidrata a matriz
glicoproteica (peptidoglicano), reduzindo os
poros da parede e impedindo a sada do
complexo CV-I, corando a clula de roxo:
46
Lavar com gua corrente em abundncia, para importante prestar bastante ateno nesta
que no reste lcool sobre a lmina.
etapa, pois se restar algum lcool na lmina a
colorao no prosseguir, j que o prximo
corante no se fixar na lmina.
Cobrir o esfregao com fucsina por cerca de 30 A fucsina age de diferentes formas nas
segundos.
diferentes clulas:
nas Gram +, os poros esto reduzidos,
impedindo que a fucsina penetre na parede
celular, no alterando a cor roxa:
Lavar com gua e secar suavemente com Aps secar suavemente a lmina, observar ao
papel.
microscpio na objetiva de imerso (100x), com
leo de cedro/mineral e identificar a clula
corada.
SantAnna, R.S; Cerqueira, A.M.F. Apostila de Aulas Prticas Bacteriologia. Nutrio. Instituto biomdico.
Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Universidade Federal Fluminense, 2007.
47
Exerccios
Isso s porque
eu sou uma
Gram negativa?
48
Saccharomyces cerevisiae
Candida albicans
b) Bolores
Fungos filamentosos
- Maior parte dos fungos, pluricelulares, clulas multinucleares
- Corpo = miclio (massa de filamentos)
Miclio composto por filamentos tubulares longos de clulas conectadas hifas rpida
capacidade de crescimento
- Hifas:
- septadas com septos incompletos p/ separar as clulas (os poros dentro dos septos
permitem a livre circulao)
- cenocticas sem septos
49
- Hifas crescem por alongamento da extremidade, e quando um fragmento quebrado, ele pode
se alongar para formar uma nova hifa.
Hifa vegetativa = poro da hifa que obtm nutrientes
Hifa reprodutiva ou area = hifa que se projeta acima da superfcie sobre a qual o fungo
est crescendo
Fungos dimrficos
- Especialmente fungos patognicos
- Dimorfismo (duas formas de crescimento): forma de fungos filamentosos e forma de leveduras
- Forma de fungo filamentoso produz hifas vegetativas e reprodutivas
- Forma de levedura se reproduz por brotamento
- Dependente de temperatura: 37C forma de levedura e 25C forma de fungo filamentoso
* Caso especial:
Em alguns casos esporos sexuais so produzidos e o miclio se reorganiza em um corpo frutfero
(chamado de cogumelo).
Corpo de frutificao:
parte visvel do fungo,
responsvel pela
reproduo
Conjunto de filamentos
(hifas), parte invisvel do
fungo
esporos = estruturas de
disperso dos fungos
50
3) Estrutura
a) Membrana citoplasmtica
- lipoprotica
- regula trocas com meio ambiente
b) Parede celular
- rgida: polissacardeos, protenas e lipdeos
- proteo e resistncia s presses osmtica e mecnica
- reconhecimento: sexual, simbioses
c) Citoplasma
- organelas: vacolos, mitocndrias, retculo endoplasmtico, complexo de Golgi, ribossomos,
material de reserva (glicognio)
d) Ncleo
- nuclolo, vrios cromossomos e protenas, envolvidos por membrana nuclear (carioteca =
eucariontes)
4) Adaptaes nutricionais
a) Temperaturas de crescimento
- tima: 25-30C
- mnima: 10C
- mxima: 40C
- algumas espcies termfilas (> 50C) e psicrfilas (< 0C)
b) pH
- entre 4 e 7
c) Oxignio
- aerbios estritos (maioria): necessitam de O2 para sua sobrevivncia (ar contm 21% de O2)
- anaerbios facultativos (leveduras): podem crescer tanto na presena como na ausncia de
oxignio. No necessitam de O2 mas crescem melhor com O2. Podem usar O2 quando disponvel,
mas na sua ausncia, so capazes de continuar seu crescimento atravs da respirao anaerbia
ou da fermentao. Respirao e fermentao.
d) Luz
- desnecessria para o crescimento vegetativo
- pode ser importante para induo de estruturas reprodutivas
- orientao das estruturas para descarga dos esporos
e) Grau de umidade
- Podem crescer sobre substncias com baixo grau de umidade (to baixo que impede
crescimento de bactrias)
f) Metabolismo de substncias complexas
- Fungos podem metabolizar substncias complexas como lignina (componente da madeira) que
bactrias no usam como nutriente
5) Nutrio
a) Modo de vida: fungos so organismos quimio-heterotrficos:
- Saprfitas (absorvem os nutrientes da matria morta): principais decompositores de celulose e
lignina que so os componentes principais das paredes celulares vegetais
- Parasitas facultativos ou obrigatrios (absorvem os nutrientes de hospedeiros vivos)
- Predadores (adaptaes para capturar protistas microscpicos ou animais): secreo de
substncias mucilaginosas que levam adeso dos organismos. As hifas invadem a presa,
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espalhamse por todo o corpo, absorvem os nutrientes, e podem causar a morte do organismo.
- Mutualistas (vivem em associao ntima com outros organismos, ambos se beneficiam)
b) Nutrio por absoro
- partculas de alimentos so muito grandes para entrarem nas hifas e serem digeridas
- hifas liberam enzimas digestivas para o meio (exoenzimas), ocorrendo digesto extracelular,
quebra de diferentes molculas insolveis (carboidratos e lipdeos)
- aps digesto forma-se uma grande variedade de produtos metabolizados
- esses produtos so absorvidos, difundindo-se pelas hifas para todo o fungo
* necessidade de gua livre para difuso
corpo
frutfero
hifa
miclio
hifa
substncia
orgnica
complexa
enzimas
substncia
orgnica absoro
simples
6) Reproduo
- Muitos fungos se reproduzem sexuada e assexuadamente.
- Fungos filamentosos podem se reproduzir assexuadamente pela fragmentao de suas hifas.
- Reproduo assexuada e reproduo sexuada podem ocorrer pela formao de esporos.
- Leveduras se reproduzem de forma assexuada (diviso e esporos assexuais).
a) Reproduo assexuada
- sem cariogamia (fuso de ncleos)
- produo de esporos assexuais no interior de um saco (esporngio)
- produo de esporos assexuais nus nas pontas das hifas condios
- simples quebra do miclio (fragmentao das hifas)
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b) Reproduo sexuada
- esporos sexuais formados pela unio de 2 clulas com fuso de seus ncleos (cariogamia)
- sem diferenas morfolgicas entre estruturas e , apenas linhas + e pois fungos so
heterotlicos
- reproduo sexual s ocorre entre talos/hifas de linhagens + e , o que impede auto-fertilizao
- citoplasma de dois indivduos com linhagens sexuais distintas ligam-se (plasmogamia) muito
antes da fuso dos ncleos (cariogamia)
7) Divises
Reino Fungi dividido em 4 grupos, baseado no modo e nas estruturas de reproduo:
- Zigomiceto
- Ascomiceto
- Basidiomiceto
- Deuteromiceto
a) Zigomiceto
- fungos pequenos e simples, filamentosos com hifas cenocticas (sem septo)
- corpo de frutificao formado apenas por uma massa pequena de esporos sobre uma haste
- habitat: variado: solo, plantas e animais (parasitas)
- reproduo: assexual e sexual
- modo de vida: saprfitas:
- importncia
* mofo preto do po (Rhizopus nigrans)
* Rhizopus e Mucor: produo de enzimas amilolticas (amilases e glucoamilases) para a
produo de alimentos.
b) Ascomiceto
- fungos de saco
- grupo complexo e diversificado
* fungos com miclio septado e leveduras
* presena de ascos (sacos): estruturas com esporos
- habitat: variado: solo, gua, plantas, animais
- reproduo: assexual e sexual
- modo de vida:
* saprfitas: decompondo diferentes tipos de materiais (excrementos, madeira, folhas, ...)
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10) Os fungos filamentosos e as leveduras podem realizar reproduo assexuada. Explique quais as
formas para cada um dos grupos.
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11) Como ocorre a reproduo sexuada nos fungos?
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12) Quais so as divises do Reino Fungi?
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13) Cite dois benefcios e dois prejuzos causados pelos fungos ao homem.
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14) No processo de fabricao do po, um ingrediente indispensvel o fermento, constitudo por
organismos anaerbicos facultativos.
a) Que organismos formam o fermento?
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b) Por que o fermento faz o po crescer?
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15) "Engana-se quem acha que uma salada com cogumelos um prato vegetariano. Cientistas
descobriram que as caractersticas genticas dos fungos (categoria qual pertence os cogumelos)
esto muito mais prximas s dos animais do que s dos vegetais. Cite trs caractersticas dos fungos
que os tornam mais prximos de animais do que dos vegetais.
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__________________________________________________________________________________
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16) O molho de soja mofado vem sendo usado na China, h mais de 2.500 anos, no combate a
infeces de pele. Durante a 2a Guerra Mundial, prisioneiros russos das prises alems, que
aceitavam comer po mofado, sofriam menos infeces de pele que os demais prisioneiros que
recusavam esse alimento.
a) O que mofo?
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b) Por que esses alimentos mofados podem combater as infeces de pele?
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17) Planta ou animal? Os fungos no so nem uma coisa nem outra. Cite uma caracterstica dos
fungos que se assemelha aos animais e uma outra que se assemelha s plantas.
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18) Quanto a indivduos do Reino Fungi podemos afirmar que:
a) podem produzir antibiticos e fazer fotossntese.
b) podem formar micorrizas e fazer fermentao
c) so exclusivamente unicelulares e procariotos
d) so autotrficos e pluricelulares
e) so eucariotos e quimiossintticos
19) Certos fungos so empregados na produo de queijos, sendo responsveis por sabores
caractersticos. Os fungos Penicillium roquefortii e Penicillium camembertii, por exemplo, so utilizados
na fabricao de queijos tipos roquefort e camembert, respectivamente. Pela anlise dos nomes
cientficos acima citados, podemos concluir que esses seres NO pertencem ao () mesmo(a):
a) gnero.
b) classe.
c) famlia.
d) ordem.
e) espcie.
20) Os fungos esto presentes em nossa vida diariamente, tanto na fabricao de alimentos como
parasitando plantas e animais, inclusive o homem. Por apresentarem caractersticas particulares que
os diferem das plantas e dos animais, constituem um reino particular: o Reino Fungi. Dentre as
caractersticas a seguir, assinale aquela EXCLUSIVA dos fungos.
a) Reproduzem-se por esporos.
b) Armazenam glicognio.
c) So hetertrofos por absoro.
d) So aclorofilados e parasitas.
e) No apresentam tecidos condutores de seiva.
21) Entende-se por miclio:
a) um conjunto de hifas emaranhadas.
c) o mesmo que basidisporo.
e) nenhuma das anteriores.
22) Todos os itens indicam alguma importncia ligada atividade de fungos, exceto:
a) podem causar doenas chamadas micoses.
b) desempenham papel fermentativo.
c) produo autotrfica de substncias orgnicas para consumo de outros seres.
d) alguns produzem antibiticos.
e) participao na formao de liquens.
23) Assinale a alternativa incorreta a respeito dos fungos.
a) existem espcies parasitas
c) possuem reproduo sexuada e assexuada
e) as suas hifas contm basicamente celulose
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- A maioria dos pesquisadores da rea biolgica considera complexa a tarefa de definir se os vrus
so seres vivos ou seres no-vivos.
- Argumentos a favor
1. Os vrus apresentam reproduo; embora necessitem da ajuda da clula hospedeira para se
reproduzirem;
2. A presena de material gentico (DNA ou RNA), e consequentemente a capacidade de
sofrerem mutao;
3. Capacidade de adaptao.
- - Argumentos contra
1. O fato dos vrus serem acelulares.
2. A ausncia de metabolismo prprio,necessitando portanto, de constituintes celulares de outro
organismo.
2) Retrovrus transcrio invertida
- Seres vivos celulares: DNA como material gentico, transcreve para RNA que comanda a sntese
de protenas.
DNA
transcrio
RNA
tradu
o
protena
Em
alguns
vrus o material
gentico o RNA, eles tm uma enzima especial chamada transcriptase reversa para transformar
o RNA em DNA aps a infeco da clula hospedeira. S assim podem fazer a sntese de
protenas para se reproduzir. O caminho da transcrio invertido e por isso esses vrus so
chamados de RETROVRUS
RNA
transcrio
DNA
transcrio
RNA
tradu
o
protena
- Exemplo: HIV, vrus causador da AIDS (SIDA) um retrovrus com alta especificidade pois ataca
os linfcitos, clulas relacionadas defesa imunolgica
3) Bacterifagos DNA Vrus
- Bacterifagos (fagos) so vrus parasitas de bactrias
- Ao se instalar em uma bactria, o bacterifago inicia um ciclo vital que pode ser:
ciclo ltico
ciclo lisognico
a) Ciclo ltico: provoca a morte da clula hospedeira.
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4) Vrus e as doenas
- Algumas doenas humanas causadas por vrus: AIDS, sarampo, rubola, gripe, hepatite, herpes,
poliomielite, caxumba, varola, raiva (hidrofobia), dengue, febre amarela,
- Como os vrus causam doenas?
* causar lise da clula hospedeira quando eles se multiplicam
* induzir organelas das clulas chamadas lisossomos a liberar suas enzimas no citoplasma,
causando uma autodigesto da clula
* produzir certas substncias que atuam como toxinas, alterando o metabolismo celular
- Alguns vrus causadores de doenas podem permanecer por anos no indivduo, ficando ativos
em certas pocas e inativos em outras. Exemplo: vrus do herpes.
5) Nossas defesas contra os vrus
- Antibiticos - so eficientes contra os vrus como so contra as bactrias?
- Infelizmente eles no tm nenhuma ao contra os vrus.
- Os vrus dependem do equipamento bioqumico das clulas para se reproduzirem, dificilmente
podem ser atacados por substncias que interferem nas suas reaes qumicas, pois as clulas
parasitadas tambm teriam seu metabolismo prejudicado!
- Drogas antivirais: para a AIDS existe o AZT (inibidor da transcriptase reversa) e o Saquinavir
(inibidor de protease, que impede sntese das protenas componentes das cpsulas dos novos
vrus). Coquetel uma associao de drogas inibidoras de enzimas, reduz muito a taxa de vrus
no sangue de portadores quando iniciado logo que a doena diagnosticada.
- Vacinas: melhor soluo at o momento a imunizao pelas vacinas (sarampo, caxumba,
rubola, hepatite, poliomielite). Infelizmente no h vacina muito eficaz contra gripe vrus sofrem
mutaes muito rapidamente. O mesmo problema acontece com o vrus da AIDS, para o qual
ainda no h vacina.
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Exerccios
1) O que so os vrus?
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2) Como so constitudos (partes bsicas)?
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3) Onde se reproduzem os vrus?
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4) A que se deve a especificidade dos vrus?
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5) Alguns estudiosos consideram que os vrus so seres vivos. Em que se baseia essa ideia?
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6) Alguns estudiosos consideram que os vrus no so seres vivos. Em que se baseia essa ideia?
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7) O vrus responsvel pela Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (AIDS) um retrovrus. Qual o
tipo de cido nuclico que constitui o material gentico dos retrovrus? A denominao retrovrus
refere-se a que caracterstica desse vrus?
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8) O que um bacterifago?
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9) Quais os ciclos vitais que um bacterifago pode iniciar ao se instalar em uma bactria? Explique a
diferena entre os ciclos.
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10) Os antibiticos so eficazes contra os vrus? Por qu?
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11) Cite cinco exemplos de viroses humanas.
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12) A AIDS uma doena que, sem dvida, ameaa a humanidade. As tentativas para o
desenvolvimento de uma vacina tm sido infrutferas. Explique, do ponto de vista gentico, qual a
causa desse insucesso.
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13) Explique onde atua o AZT (droga que compem o coquetel contra o HIV), o que ela impede e qual
a consequncia de seu uso para o vrus.
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14) Em 1917, o sbio francs d'Herelle verificou que uma cultura de bacilos da disenteria estava sendo
destruda por um agente cuja visualizao no era possvel de ser feita. Essa foi a primeira
constatao da existncia de vrus que somente atacavam bactrias. Mais tarde esses vrus foram
genericamente denominados:
a) bacteriostticos
b) bacterifagos
c) bacterides
d) bactrios
e) bactericidas
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22) O grfico abaixo demonstra, no organismo humano, a relao entre os linfcitos T e o vrus da
imunodeficincia humana (HIV), ao longo de dez anos de curso da sndrome da deficincia
imunolgica adquirida (AIDS).Explique as razes das quedas das concentraes de:
a) linfcitos T
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b) HIV.
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23) VRUS E ANTIBITICOS
Considerados como uma das maiores conquistas da cincia moderna, os antibiticos, juntamente com
as vacinas e os soros, tm salvado muitas vidas. Substncias quimicamente muito diferentes entre si,
os antibiticos podem ser naturais quando produzidos por seres vivos, como fungos e bactrias
ou sintticos quando produzidos em laboratrio a partir de produtos qumicos.
Os antibiticos
atuam de diferentes maneiras sobre as clulas bacterianas: Podem bloquear a sntese da parede
celular; desorganizar estruturalmente a membrana plasmtica; agir sobre a atividade dos cidos
nuclicos, quando inibem a duplicao do DNA ou interferem na sntese de protenas, bloqueando, por
exemplo, a formao do RNA mensageiro (RNAm). Mas os vrus so organismos acelulares; no
possuem parede celular nem membrana plasmtica e se mostram absolutamente inertes quando fora
de uma clula viva. Assim, os antibiticos no fazem qualquer efeito sobre eles; os vrus so, pois,
"imunes" ao destas substncias. Porm, graas natureza protica da cpsula viral, que atua
como antgeno, um organismo infectado pode se defender contra os vrus produzindo anticorpos
especficos, como acontece na gripe. Em alguns casos, a produo de anticorpos especficos pode ser
"incentivada" atravs do uso de vacinas; o caso, por exemplo, das vacinas anti-rbica e
antipoliomieltica, de eficcia largamente comprovada.
Sobre o texto Vrus e antibiticos, responda:
a) Os antibiticos tm algum efeito sobre os vrus? Por qu?
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b) Como nosso organismo pode se defender contra as viroses?
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Crescimento microbiano
- Crescimento microbiano refere-se ao aumento no NMERO de clulas e no ao TAMANHO das
clulas.
- Microrganismos em crescimento esto, na verdade, aumentando seu nmero e se acumulando
em colnias (grupos de clulas que podem ser visualizadas sem o uso de microscpio)
- Uma clula dar origem a duas ao fim de um certo tempo, chamado de tempo de gerao ou de
duplicao.
- Por que estudar o crescimento microbiano?
* controlar o crescimento dos microrganismos patognicos
* controlar o crescimento dos microrganismos que contaminam e degradam os alimentos
* estimular o crescimento dos microrganismos que estamos interessados em estudar
1) Fatores fsicos
- Temperatura
- pH
- presso osmtica
a) Temperatura
Taxa de crescimento X temperatura
- Temperatura de crescimento mnima:
< temperatura onde a espcie capaz de crescer
- Temperatura de crescimento tima:
onde a espcie apresenta melhor crescimento
- Temperatura de crescimento mxima:
> temperatura, onde ainda possvel o crescimento
- Maioria dos microrganismos cresce dentro de variaes limitadas de temperatura, com somente
30 oC de diferena entre a temperatura mxima e a mnima de crescimento
- Maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres humanos
- Microrganismos so classificados em 3 grupos principais considerando as variaes nas
temperaturas de crescimento:
- PSICRFILOS: crescem em baixas temperaturas
- MESFILOS: crescem em temperaturas moderadas
- TERMFILOS: crescem em altas temperaturas
SURGIRAM MAIS DUAS CLASSES...
Curva de crescimento caracterstica de diferentes microrganimos
Termfilos
extremos
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Microrganismos
patognicos se
multiplicam em T
entre 5C a 60C
(zona de perigo).
Preferem T de vero
ou do nosso corpo
(37C). GELADEIRA!
Baixas temperaturas so
importantes para evitar o
crescimento de patgenos ou
de microrganismos que
degradam os alimentos.
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* Quando uma clula microbiana se encontrar em uma soluo contendo uma concentrao de
solutos superior quela do interior da clula (hipertnica), ocorrer a passagem da gua de dentro
da clula, por meio da membrana plasmtica, para o meio com alta concentrao de solutos. A
perda de gua por osmose causa a plasmlise ou a diminuio (encolhimento) do citoplasma da
clula.
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2) Fatores qumicos
- gua
- fontes de carbono, nitrognio, enxofre e fsforo
- fontes de potssio, magnsio e clcio
- oligoelementos
- oxignio
- fatores orgnicos de crescimento
a) gua
- Essencial para os microrganismos
- Disponibilidade varivel no ambiente
- Regulao da presso osmtica: em ambiente com baixa concentrao de gua, o
microrganismo usa mecanismos para obter gua atravs do aumento da concentrao de solutos
internos, seja pelo bombeamento de ons para o interior celular ou pela sntese de solutos
orgnicos (acares, lcoois ou aminocidos).
- Regulao trmica
b) Fontes de carbono, nitrognio, enxofre e fsforo
- Carbono:
- essencial para sntese dos compostos orgnicos para a viabilidade celular (elemento
estrutural bsico para os seres vivos)
- organismos quimio-heterotrficos: obtm C a partir de materiais orgnicos (protenas,
carboidratos e lipdeos)
- organismos quimio-autotrficos e os fotoautotrficos: obtm C a partir de dixido de
carbono (CO2)
- Nitrognio: sntese do grupo amino dos aminocidos (protenas), sntese dos cidos nuclicos
(DNA, RNA) e ATP (molcula energtica)
- Enxofre: sntese de aminocidos contendo S (protenas) e de vitaminas (tiamina e biotina)
- Fsforo: sntese dos cidos nuclicos (DNA, RNA), fosfolipdeos componentes da membrana
celular e ATP (molcula energtica)
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AERBIOS
- Estritos ou obrigatrios: necessitam de O2 para sua sobrevivncia (ar contm 21% de O2);
- Facultativos (ou anaerbios facultativos): no necessitam de O 2 mas crescem melhor com ele.
Na ausncia de O2 so capazes de continuar seu crescimento pela respirao anaerbia ou
fermentao. A eficincia na produo de energia diminui quando o O 2 no est disponvel. Ex:
Escherichia coli,
- Microaerfilos: necessitam de O2 mas em concentrao menor que a encontrada no ar. So
sensveis a algumas formas txicas de oxignio produzidas em concentraes letais quando em
altas concentraes de oxignio.
ANAERBIOS
- Aerotolerantes: no necessitam de O2 mas crescem melhor sem ele pois no podem us-lo para
seu crescimento. Ex: Lactobacillus;
- Estritos ou obrigatrios: no toleram O2 (letal). Ex: gnero Clostridium = ttano e botulismo.
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13) Explique e ilustre utilizando uma clula bacteriana os 3 tipos de solues osmticas existentes.
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14) Como o uso de sal ou de acar interfere no crescimento microbiano? Explique em detalhes. Cite 2
exemplos de alimentos preservados por esse mecanismo.
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15) De acordo com a quantidade de sal, descreva os 4 grupos de classificao dos microrganismos.
Desenhe o grfico para auxiliar na descrio.
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Meios de Cultura
- Definio de Meio de Cultura:
Associao equilibrada de agentes qumicos (nutrientes, pH, ) e fsicos (temperatura,
viscosidade, atmosfera, ) que permitem o cultivo de microrganismos fora de seu habitat natural.
OU
Material nutriente preparado no laboratrio para o crescimento de microrganismos.
- grandes variaes: bactrias que crescem em qualquer meio de cultura, outras precisam de
meios especiais e existem aquelas que no so capazes de crescer em nenhum meio de cultura
j desenvolvido.
- Inculo: microrganismos colocados em um meio de cultura para iniciar o crescimento (verbo
inocular)
- Cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam nos meios de cultura
- Aplicao:
- Isolamento
- Identificao
- Quantificao
- Conservao
- Multiplicao
- lquido
- slido: horizontal e inclinado
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d) gar ou agar
- gar = agente solidificante utilizado quando se quer um meio slido
- polissacardeo complexo obtido de algas marinhas
- usado para deixar alimentos como gelias e sorvetes mais espessos
- poucos microrganismos podem degrad-lo
- ele se liquefaz (torna-se lquido) a cerca de 100 oC (temperatura de ebulio da gua) e ao nvel
do mar permanece lquido at que a temperatura diminua at 40 oC
- para usar em laboratrio, gar mantido em banho-maria a uma temperatura de 50 oC, que no
causa danos as bactrias quando adicionados sobre elas
- aps solidificao o gar pode ser incubado at 100 oC sem perder suas caractersticas
e) Armazenamento dos meios de cultura
- Inicialmente devem ser guardados na geladeira dentro de plsticos para evitar a desidratao;
- Tubos de ensaio devem ser isolados com chuchus ou rolhas e alumnio na geladeira;
- Placas de petri devem ser mantidas invertidas para evitar condensao de gua na tampa da
placa;
- Aps a inoculao deve ser incubado em estufa a temperatura ambiente;
- Identificao do contedo, data de preparao e vencimento.
f) Inoculao dos meios de cultura
- Utilizar procedimentos asspticos, como:
- higienizao das mos, bancada ou fluxo laminar com lcool 70%,
- EPI's adequados,
- materiais previamente esterilizados,
- Alas de inoculao devem ser flambadas no Bico de Bunsen antes e depois da inoculao;
- Deve-se esperar o resfriamento da ala de inoculao antes de coloc-la em contato com o
inculo;
- Os recipientes contendo meios e inculo devero ser abertos somente na zona de esterilidade
gerada pelo Bico de Bunsen;
- A boca do tubo de ensaio deve ser aquecida na chama do Bico de Bunsen antes e depois de ser
retirado o tampo;
- O tampo nunca deve ser apoiado na bancada ou na mesa do fluxo laminar;
- Identificao do contedo e data de inoculao;
- Aps a inoculao as placas de Petri ou tubos de ensaio devem ser incubados em estufa na
temperatura adequada.
g) Mtodos de inoculao
1) Placas de Petri
Estriagem
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Esgotamento
- Tcnica mais usada para obter colnias puras de microrganismos.
- Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada.
- Faa estrias em cada diviso, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possvel toda a
superfcie da placa.
A direo da semeadura est indicada
por setas.
A semeadura na regio 1 realizada a
partir da cultura original da bactria.
A ala de inoculao deve ser
esterilizada entre as fases de
inoculao 1, 2 e 3.
Nas fases 2 e 3 a ala usada para
retirar bactrias das fases anteriores,
desta forma diluindo o nmero de
organismos a cada semeadura.
2) Tubos de ensaio
Semear - Meio lquido
- Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada.
- Mergulhe a ala carregada de bactrias no tubo com o meio de cultivo e agite a ala.
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Exerccios
1) Defina os seguintes termos:
a) meio de cultura
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b) inculo
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c) cultura
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2) Para que so usados meios de cultura?
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3) Se voc quer realizar o crescimento de uma determinada bactria, que critrios devem ser
observados na escolha do meio de cultivo?
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4) De modo geral, como feita a preparao de um meio de cultivo?
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5) Como so classificados os meios de cultura quanto origem? Explique.
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Colnias vermelhas
Ausncia de crescimento
Staphylococcus aureus
Ausncia de crescimento
Crescimento
S. epidermidis
Ausncia de crescimento
Crescimento
Salmonella enterica
Colnias incolores
Ausncia de crescimento
b) Diferencial
c) Seletivo e diferencial
b) Diferencial
c) Seletivo e diferencial
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a) Fases do crescimento
- Curva de crescimento microbiano demonstra crescimento das clulas durante um perodo de
tempo - 4 fases de crescimento:
Fase
estacionria
Fase log
Fase declnio
ou morte
celular
Fase lag
tempo
1) Fase lag
* bactrias no se reproduzem imediatamente quando colocadas em meio de cultivo novo
* pouca ou ausncia de diviso celular (fase de adaptao) pode durar at 1 hora
* clulas em estado de latncia, com intensa atividade metablica (sntese de enzimas e
molculas variadas)
2) Fase log ou de crescimento exponencial
* clulas iniciam processo de diviso e entram no perodo de crescimento ou aumento logartmico
* reproduo celular extremamente ativa e tempo de gerao atinge valor constante
* perodo de maior atividade metablica da clula e o estgio preferido para fins industriais
(produto produzido eficientemente)
* microrganismos so sensveis as mudanas ambientais e compostos antimicrobianos
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3) Fase Estacionria
* em determinado momento a velocidade de crescimento diminui, o nmero de morte celular
igual ao nmero de clulas novas e a populao se torna estvel = perodo de equilbrio
* n de clulas vivas = n de clulas mortas
* no so conhecidos os motivos que induzem a fase exponencial a diminuir sua atividade,
diversos fatores poderim influenciar: trmino de nutrientes, acmulo de produtos da degradao,
mudanas no pH, ...
4) Fase de Morte Celular ou de Declnio
* n de clulas mortas maior que o de clulas novas
* fase continua at que a populao tenha diminudo para uma pequena frao do nmero de
clulas da fase anterior, ou at que tenha desaparecido totalmente
b) Mtodos para quantificar o crescimento microbiano
Quantificao direta
1) Contagem direta ao microscpio do n. total de indivduos, vivos ou mortos. Usa cmaras de
contagem e microscpio para avaliar n. partculas presentes em um determinado volume
2) Contagem em placas de UFC (unidades formadoras de colnias), para bactrias e leveduras.
Faz diluies adequadas da suspenso e semeadura das alquotas na superfcie de meios
slidos, seguida de contagem das colnias que cresceram. Usa:
- Diluio seriada + Mtodo de espalhamento em placa
OU
- Diluio seriada + Mtodo de Pour plate
3) Mtodo do nmero mais provvel (MNP), para bactrias que no crescem em meio slidos. Faz
o crescimento em meio lquido com diferentes diluies de bactrias e usa tabelas (95% de
confiabilidade) para avaliar resultado.
4) Filtrao, para regies em que o nmero de bactrias se encontra muito pequeno (lagos e
fontes de gua)
Quantificao indireta
1) Determinao de peso seco ou mido
2) Determinao qumica de componentes celulares, como protena, cidos nuclicos
3) Turbidimetria. Medida da turvao de uma amostra microbiana pela absorbncia em
espectrofotmetro (massa de microrganismos presente)
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87
88
2) Filtrao
Aplicado para contar amostras em que o nmero de bactrias muito pequeno, como lagos e
fontes de gua. Esse mtodo permite que a bactria seja concentrada sobre a superfcie de uma
membrana de filtro de poros muito pequenos (bactria no passa pelos poros) aps passagem de um
volume de 100 mL de gua. Essa membrana transferida para uma placa de Petri com um suporte
embebido em nutriente lquido, que permite que as bactrias se desenvolvam sobre a membrana. Esse
mtodo usado para deteco e registro de coliformes (indicadores de poluio fecal) em amostras de
alimentos e guas. Coliformes podem ser identificados por meios de cultivo diferenciais.
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90
91
92
2) Atividade Metablica
Nesse mtodo feita a determinao da atividade metablica da populao microbiana. Ele
considera que a quantidade de um certo produto do metabolismo dos microrganismos, como cido ou
CO2, pode ter relao direta com o nmero de clulas presentes. DESVANTAGEM: uso restrito a
alguns ensaios e microrganismos.
3) Peso Seco
Os mtodos apresentados at agora no tm resultados bons quando usados em bactrias
filamentosas e fungos. A contagem em placa no capaz de quantificar o aumento da massa
(crescimento do miclio) dos fungos filamentosos. O nmero de esporos assexuais contado na
contagem em placa mas no uma determinao satisfatria do crescimento. A melhor maneira de
analisar crescimento de fungos filamentosos pela determinao do peso seco. Para isso, o fungo
removido do meio de cultivo por filtrao, para eliminar outros materiais. Depois ele seco em
dessecador e pesado. Pode-se usar a mesma metodologia com bactrias.
Exerccios
1) Como as bactrias normalmente se reproduzem?
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2) O que tempo de gerao? Ele igual para todos os microrganismos? Justifique sua resposta.
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3) Durante o preparo de um sanduche ocorreu acidentalmente a sua contaminao com seis clulas
de E. coli. Considerando que o tempo de gerao dessa bactria de 20 minutos, explique quantas
clulas deveriam existir no sanduche aps:
a) 20 minutos
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b) 1 hora
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c) 2 horas
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4) Como so chamadas as 4 fases de uma curva de crescimento microbiano?
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13) O que significa UFC? Por que ela foi escolhida no lugar de colnia como unidade para o mtodo
de contagem em placa?
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14) Qual o nmero de bactrias por mL encontrado em uma amostra de leite se a placa usada para
contagem apresentava 127 UFC em uma diluio seriada de 1:1000?
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15) Em que ocasio utilizado o mtodo de filtrao?
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16) O que o mtodo do nmero mais provvel? Em que ocasio esse mtodo usado? Qual o
nvel de confiabilidade deste mtodo?
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17) De acordo com a tabela de NMP (pag. 90) qual o nmero estatisticamente provvel de bactrias
presentes em uma amostra e os limites inferiores e superiores para as seguintes combinaes de
tubos positivos:
a) 4-2-1:
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b) 5-1-2:
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c) 5-3-0:
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18) Quais as desvantagens da contagem direta ao microscpio? Quando essa metodologia
empregada?
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19) Em que fato se baseia o mtodo da turbidimetria? Que instrumento usado nesse mtodo?
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O controle cientfico do crescimento microbiano comeou h cerca de 100 anos. Lembrese de que o trabalho de Pasteur sobre os microrganismos levou os cientistas a acreditarem que os
micrbios eram uma possvel causa de doenas. Na metade do sculo XIX, o mdico hngaro
Ignatz Semmelweiss e o mdico ingls Joseph Lister utilizaram essa ideia em algumas das
primeiras prticas de controle microbiano para procedimentos mdicos. Essas prticas incluam a
lavagem das mos com cloreto de cal, que matava os micrbios, e tcnicas de cirurgia asspticas
para impedir a contaminao microbiana das feridas cirrgicas. At aquele momento, as infeces
adquiridas em hospital, ou infeces nosocomiais, eram a causa mortis em pelo menos 10% dos
casos cirrgicos, e as mortes de porturientes eram to elevadas quanto 25%. A ignorncia a
respeito dos micrbios era tanta que, durante a Guerra Civil Americana, um cirurgio poderia
limpar seu bisturi na sola da bota, entre as incises. No ultimo sculo, os cientistas continuaram a
desenvolver uma sria de mtodos fsico e agentes qumicos para controlar o crescimento
microbiano.
A Terminologia do controle Microbiano
Objetivo do Aprendizado: Definir os seguintes termos-chave relacionados ao controle microbiano:
esterilizao, desinfeco, anti-sepsia, degerminao, sanitizao, biocida, germicida,
bacteriostase e assepsia.
Um termo frequentemente usado, e mal utilizado, ao discutir o controle do crescimento
microbiano a esterilizao. Esterilizao a destruio de todas as formas de vida microbiana.
O aquecimento o mtodo mais comum usado para matar micrbios, incluindo as formas mais
resistentes, como os endosporos. A remoo de micrbios de lquidos ou gases pode ser feita por
outra forma de esterilizao, a filtrao.
As pessoas pensam que os alimentos enlatados venda em supermercados so
completamente estreis. Na realidade, o tratamento com calor requerido para assegurar a
esterilidade absoluta iria degradar desnecessariamente qualidade do alimento. Ao invs disso, o
alimento e submetido somente ao calor suficiente para destruir os endosporos de Clostridium
botulinum, que pode produzir uma toxina mortal. Esse tratamento limitado de calor denominado
esterilizao comercial. Os endosporos de uma srie de bactrias termoflicas, capazes de causar
deteriorao do alimento, mas no doena humana, so consideravelmente mais resistentes ao
calo que C. botulinum. Se estiverem presentes, iro sobreviver, mas sua sobrevivncia
normalmente no tem consequncia prtica; eles no crescero nas temperaturas normais de
armazenamento do alimento. Se os enlatados de um supermercado forem incubados em
temperaturas na faixa de crescimento dessas termfilas (acima de 45 graus Celsius), uma grande
quantidade de alimentos iria se deteriorar.
A esterilizao completa muita vezes no necessria em outros cenrios. Por exemplo,
as defesas normais do corpo podem lidar com alguns micrbios que penetram em uma ferida
operatria. Um copo ou garfo em um restaurante necessita apenas de um controle microbiano
suficiente para prevenir a transmisso de micrbios possivelmente patognicos de uma pessoa
para outra.
O controle voltado para a destruio de microrganismos nocivos denominado
desinfeco. Normalmente refere-se destruio dos patgenos de vegetais (no formadores de
endosporos), o que no igual esterilidade completa. A desinfeco pode fazer uso de
substncias qumicas, radiao ultravioleta, gua fervente ou vapor. Na prtica, o termo aplicado
mais comumente ao uso de um produto qumico (um desinfetante) para tratar uma superfcie ou
substncia inerte. Quando esse tratamento dirigido ao tecido vivo, denominado anti-sepsia, e
produto qumico denominado um anti-sptico. Assim, na prtica, a mesma substncia qumica
pode ser denominada um desinfetante para uso e um anti-sptico para outro. claro que muitos
produtos aceitveis para lavar uma mesa seriam muito agressivos para usar sobre o tecido vivo.
Existem modificaes da desinfeco e da anti-sepsia. Por exemplo, quando algum
precisa receber uma injeo, a pele limpa com lcool o processo de degerminao, que
97
resulta principalmente da remoo mecnica, em vez da morte, da maioria dos micrbios em uma
rea limitada. Os copos, as louas e os talheres dos restaurantes esto sujeitos sanitizao, que
destinada a reduzir as contagens microbianas a nveis seguros de sade pblica e minimizar as
chances de transmisso de doena de um usurio para outra. Isso normalmente obtido por
lavagem em alta temperatura ou, no caso das louas em um bar, lavagem em uma pia seguida
por imerso em um desinfetante qumico.
A Tabela 1 resume a terminologia relativa ao controle do crescimento microbiano.
Os nomes dos tratamentos que causam a morte direta dos micrbios possuem o sufixo
-cida, significando morte. Um biocida, ou germicida mata os microrganismos (geralmente com
certas excees, como os endosporos); um fungicida mata os fungos; um viricida inativa os vrus;
e assim por diante. Outros tratamentos inibem o crescimento e multiplicao das bactrias; seu
nomes tm sufixo -sttico ou -stase, significando parar ou diminuir, como na bacteriostase. Uma
vez que o agente bacteriosttico removido, o crescimento pode ser retomado.
Sepse, do termo grego para estragado ou podre, indica contaminao bacteriana, como
nas fossas spticas para tratamento de esgoto. (O termo tambm usado para descrever uma
condio de sade). Assptico significa que um objeto ou rea est livre de patgenos. Assepsia
a ausncia de contaminao significativa. Tcnicas asspticas so importantes em cirurgia para
minimizar a contaminao dos instrumentos, da equipe cirrgica e do paciente.
TABELA 1
Comentrios
Esterilizao
Esterilizao Comercial
Desinfeco
Anti-sepsia
Degerminao
Sanitizao
Os
endsporos
mais
resistentes
das
bactrias
termfilas podem sobreviver,
mas no iro germinar e
crescer sob condies de
armazenamento normais.
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TABELA 2
Mtodo
Calor
1. Calor mido
a. Fervura
Desnaturao
Protenas
b. Autoclave
Desnaturao
Protenas
2. Pasteurizao
Desnaturao
protenas
das Mata
fungos
e
clulas bacterianas
vegetativas
patognicas
e
quase todos os
vrus em 10 min;
menos efetivo para
endsporos.
das Mtodo
muito
efetivo
de
esterilizao;
em
cerca de 15 psi de
presso (121 C),
todas as clulas
vegetativas e seus
endsporos
so
mortos em cerca de
15 minutos.
das Tratamento
com
calor para o leite
(72C por cerca de
15 seg) que mata
todos os patgenos
e a maioria dos
no-patognicos.
Meios
microbiolgicos,
solues, roupas de
cama,
utenslios,
curativos,
equipamento e outros
itens que podem
suportar temperatura
e presso.
Leite, creme e certas
bebidas
alcolicas
(cerveja e vinho).
3. Calor seco
a. Chama direta
Queima
os
contaminantes at
se tornarem cinzas.
Queima
at
se
tornarem cinzas.
b. Incinerao
c. Esterilizao
quente
Filtrao
com
Mtodo
muito Alas de inoculao
eficaz
de
esterilizao.
Mtodo
muito Copos
de
papel,
eficaz
de curativos
esterilizao.
contaminados,
carcaas de animais,
sacos e panos de
limpeza.
ar Oxidao
Mtodo
muito Vidros
vazios,
eficaz
de instrumentos,
esterilizao, mas agulhas e seringas
requer temperatura de vidro.
de 170C por cerca
de 2 horas.
Separao
das Remove
os til para esterilizar
bactrias do lquido micrbios atravs lquidos
(enzimas,
de suspenso
da passagem de vacinas) que so
um lquido ou gs destrudos pelo calor.
atravs
de
um
99
material
semelhante a uma
tela; a maioria dos
filtros
em
uso
consiste de acetato
de celulose ou
nitrocelulose.
Frio
1. Refrigerao
2. Congelamento
profundo
3. Liofilizao
Alta Presso
Dessecao
Presso Osmtica
Reduo
das
reaes qumicas e
possveis alteraes
nas protenas.
Reduo
das
reaes qumicas e
possveis alteraes
nas protenas.
Tem
efeito Conservao
dos
bacteriosttico.
alimentos, drogas e
culturas.
Reduo
das
reaes qumicas e
possveis alteraes
nas protenas.
Conservao
dos
alimentos, drogas e.
Culturas.
Um mtodo eficaz
para
conservar
culturas
microbianas,
em
que as culturas so
congeladas
rapidamente
a
-50C e -95C.
Mtodo eficaz para
a
conservao
prolongada
de
Conservao dos
alimentos, drogas e
culturas
microbianas;
a
gua removida
por alto vcuo em
baixa temperatura.
Conservao
de
cores, sabores e
valores nutricionais.
Alterao
da
estrutura molecular
de
protenas
e
carboidratos.
Interrupo
do Envolve a remoo
metabolismo.
de
gua
dos
micrbios;
principalmente
bacteriosttica.
Plasmlise
Resulta na perda
de
gua
das
clulas
microbianas.
Conservao
dos
alimentos, drogas e
culturas.
Sucos de fruta.
Conservao
alimentos.
dos
Conservao
alimentos.
dos
Radiao
1. Ionizante
Destruio do DNA.
2. No-Ionizante
Leso do DNA.
No-disseminado
Usado para esterilizar
na esterilizao de produtos
rotina.
farmacuticos
e
suprimentos mdicos
e dentrios.
Radiao
no Controle de ambiente
muito penetrante.
fechado
com
lmpada
UV
(germicida).
100
TABELA 3
Agente Qumico
Uso preferencial
Comentrio
2. Compostos
Fenlicos
Ruptura da membrana
plasmtica,
desnaturao
das
enzimas.
3. Bifenis
Superfcies
ambientais,
instrumentos,
superfcies cutneas
e
membranas
mucosas.
Provvel ruptura da Sabonete para as
membrana plasmtica.
mos
e
loes
hidratantes.
Biguanidas (clorexidina)
Halognicos
lcoois
O iodo um antisptico
eficaz
disponvel
como
tintura
e
como
iodofor; o gs cloro
usado
para
desinfetar
o
equipamento
de
fbricas de laticnios,
utenslios
para
refeies,
itens
domsticos
e
vidraria.
Desnaturao
das Termmetros
e
protenas e dissoluo outros instrumentos;
dos lipdeos.
ao limpar a pele com
lcool antes de uma
injeo,
a
maior
parte
da
ao
desinfetante
provavelmente
provm
de
simplesmente
remover
(degerminar) o p e
alguns micrbios.
Raramente
usado
como desinfetante ou
anti-sptico devido
possibilidade
de
irritao
e
odor
desagradvel.
Os derivados do fenol
so reativos mesmo
em
presena
de
material orgnico; um
exemplo o Ofenilfenol.
O triclosano um
exemplo
especialmente comum
de um bifenol, Ampla
utilizao, porm mais
eficaz contra grampositivos.
Bactericida
contra
gram-positivos
e
gram-negativos,
atxicos, persistente.
O iodo e o cloro
podem
agir
isoladamente ou como
componentes
de
compostos
inorgnicos
e
orgnicos.
Bactericida
e
fungicida, mas ineficaz
contra endsporos ou
vrus
noenvelopados; alcois
comumente
usados
so o etanol e o
isopropanol.
101
Inibio de enzimas,
) desnaturao
das
de protenas e ruptura das
membranas
plasmticas.
cidos Orgnicos
Inibio
metablica,
afetando principalmente
os bolores; ao no
relacionada
sua
acidez.
Aldedos
Desnaturao
protenas.
das
Esterilizantes Gasosos
Desnaturao
protenas
das
Peroxignios
Oxidantes)
(Agentes Oxidao
Degerminao
da Muitos
sabes
pele e remoo de antibacterianos
resduos.
contm
antimicrobianos.
Sanitizao
em Amplo espectro de
indstrias
de atividade;
atxicos,
processamento
de no-corrosivos e de
lacticnios
e ao rpida.
alimentos.
Anti-sptico para a Bactericidas,
pele, instrumentos, bacteriostticos,
utenslios, objetos de fungicidas e viricidas
borracha.
contra
vrus
envelopados;
exemplos de qual so
o
Cepacol
e
o
Zephiram.
cido srbico e cido Amplamente usados
benzoico efetivos em para controlar bolores
baixo pH, parabenz e algumas bactrias
muito usado em AM
alimentos
e
cosmticos, xampus; cosmticos.
propianato de clcio
usado em po.
O glutaraldedo Antimicrobianos muito
menos irritante que o efetivos.
formaldedo
e
usado
para
a
desinfeco
de
equipamentos
mdicos.
Excelente
agente O xido de etileno o
esterilizante,
mais
comumente
especialmente para usado.
objetos que seriam
danificados
pelo
calor.
Superfcies
O
oznio
contaminadas;
amplamente
usado
alguns
ferimentos como
suplemento
profundos, em que para a clorao; o
eles
so
muito perxido
de
efetivos
contra hidrognio um anti-
102
anaerbicos
sensveis
oxignio.
103
7. A autoclave (vapor sob presso) o mtodo mais efetivo de esterilizao com calor mido.
O vapor deve entrar em contato direto com o material a ser esterilizado.
8. Na pasteurizao HTST, uma alta temperatura usada por um curto perodo (72C por 15
segundos) para destruir os patgenos sem alterar o sabor do alimento, o tratamento com
temperaturas ultra-elevadas (UHT) (140C por 3 segundos) usado para esterilizar
laticnios.
9. Os mtodos de esterilizao com calor seco incluem a chama direta, incinerao e
esterilizao com ar quente. O calor seco mata por oxidao.
10. Diferentes mtodos que produzem o mesmo efeito (reduo no crescimento microbiano)
so denominados tratamentos equivalentes.
Filtrao
1. A filtrao a passagem de um lquido ou gs atravs de um filtro com poros pequenos o
suficiente para reter os micrbios.
2. Os micrbios podem ser removidos do ar por filtros de partculas de alta eficincia.
3. Os filtros de membrana compostos de nitrocelulose ou acetato de celulose so comumente
usados para filtrar bactrias, vrus e mesmo protenas de alta massa molecular.
Baixas Temperaturas
1. A eficcia das baixas temperaturas depende do microrganismo particular e da intensidade
da aplicao.
2. A maioria dos microrganismos no se reproduz em temperaturas comuns de refrigerador
(0-7C).
3. Muitos micrbios sobrevivem (mas no crescem) nas temperaturas abaixo de zero, usadas
para armazenar alimentos.
Alta Presso
1. Alta presso desnatura as protenas nas clulas vegetais.
Dessecao
1. Na ausncia de gua, os microrganismos no podem crescer, mas podem permanecer
viveis.
2. Vrus e endsporos podem resistir dessecao.
Presso Osmtica
1. Os microrganismos em altas concentraes de sais e aucares sofrem plasmlise.
2. Os bolores e as leveduras so mais capazes que as bactrias de crescer em matrias com
baixa umidade ou alta presso osmtica.
Radiao
1. Os efeitos da radiao dependem de seu comprimento de onda, intensidade e durao.
2. A radiao ionizante (raios gama, raios X e feixes de eltrons de alta energia) tem um grau
de penetrao e exerce seu efeito principalmente ionizando a gua e formando radicais
hidroxila altamente reativos.
3. A radiao ultravioleta (UV), uma forma de radiao no-ionizante, tem baixo grau de
penetrao e causa leso celular produzindo dmeros de timina no DNA, que interferem
com a replicao do DNA; o comprimento de onda germicida mais efetivo 260 nm.
4. As microondas podem matar os micrbios indiretamente medida que as matrias de
aquecem.
MTODOS QUMICOS DE CONTROLE MICROBIANO
1. Os agentes qumicos so usados em tecidos vivos (como anti-spticos) e em objetos
inanimados (como desinfetantes).
2. Poucos agentes qumicos atingem a esterilidade.
PRINCPIOS DA DESINFECO EFETIVA
1. Muita ateno deve ser dada s propriedades e concentrao do desinfetante a ser
usado.
2. A presena de matria orgnica, o grau de contato com os microrganismos e a
temperatura tambm devem ser considerados.
104
Avaliando um Desinfetante
1. No teste de uso-diluio, a sobrevivncia bacteriana (S.choleraesuis, S. aureus e P.
aeruginosa) na diluio de um desinfetante recomendado pelo fabricante determinada.
2. Vrus, bactrias formadoras de endsporos, microbactrias e fungos tambm podem ser
usados no teste de uso-diluio.
3. No mtodo de disco-difuso, um disco de papel filtro embebido com uma substncia
qumica e colocado em uma placa de agar inoculada; uma zona de inibio indica
efetividade.
TIPOS DE DESINFETANTE
Fenol e Compostos Fenlicos
1. Os compostos fenlicos exercem sua ao lesando as membranas plasmticas.
Bifenis
1. Bifenis, como o triclosano (venda liberada) e hexaclorofeno (prescrito) so amplamente
usados em produtos domsticos.
Biguanidos
1. A clorexidina lesa as membranas plasmticas das clulas vegetais.
Halognios
1. Alguns halognios (iodo e cloro) so usados isoladamente ou como componentes de
solues inorgnicas ou orgnicas.
2. O iodo pode ser combinado com certos aminocidos para inativar enzimas e outras
protenas celulares.
3. O iodo est disponvel como tintura (em soluo com lcool) ou como iodofor (combinando
a uma molcula orgnica).
4. A ao germicida do cloro baseia-se na formao de cido hipocloroso quando o cloro
adicionado gua.
5. O cloro usado como desinfetante em forma gasosa (Cl ou ClO) ou em um composto,
como o hipoclorito de clcio, o hipoclorito de sdio, o dicloroisocianurato de sdio e as
cloraminas.
lcoois
1. Os alcois exercem sua ao desnaturando as protenas e dissolvendo os lipdeos.
2. Em tinturas, eles aumentam a efetividade de outros produtos qumicos antimicrobianos.
3. O etanol aquoso (60 a 95%) e o isopropanol so usados como desinfetantes.
Metais Pesados e seus Compostos
1. Prata, mercrio, cobre e zinco so usados como germicidas.
2. Eles exercem sua ao antimicrobiana pela ao oligodinmica. Quando os ons de metal
pesado se combinam com os grupos sulfidrila (-SH), as protenas so desnaturadas.
Agentes de Superfcie
1. Os agentes de superfcie reduzem a tenso entre as molculas de um lquido; os sabes e
os detergentes so exemplos.
2. Os sabes possuem ao germicida limitada, mas auxiliam na remoo dos
microrganismos pela escovao.
3. Os detergentes possuem cido-aninicos so usados para limpeza do equipamento de
lacticnios.
Compostos Quarternrios de Amnio (Quarts)
1. Os quarts so detergentes catinicos unidos ao NH4+.
2. Ao romper as membranas plasmticas, eles permitem o vazamento dos constituintes
citoplasmticos para fora da clula.
3. Os quarts so mais efetivos contra as bactrias gram-positivas.
Conservantes Qumicos de Alimentos
1. O SO, o cido benzoico e o cido propinico inibem o metabolismo fngico e so usados
como conservantes de alimentos.
2. Os sais de nitrato e nitrito impedem a germinao de endsporos de Clostridium botulinum
na carne.
105
Antibiticos
1. A nisina e a natamicina so antibiticos usados para conservar alimentos, especialmente
no queijo.
Aldedos
1. Os aldedos como o formaldedo e o glurataldedo exercem seu efeito antimicrobiano
tornando as protenas inativas.
2. Eles esto entre os mais efetivos desinfetantes qumicos.
Quimioesterilizantes Gasosos
1. O xido de etileno o gs mais frequentemente usado para a esterilizao.
2. Ele penetra na maioria dos materiais e mata todos os microrganismos por desnaturao
protenas.
Peroxignios (Agentes Oxidantes)
1. O oznio, o perxido e o cido peractico so usados como agentes antimicrobianos.
2. Eles exercem seu efeito oxidando as molculas dentro das clulas.
CARACTERSTICAS E CONTROLE MICROBIANO
1. As bactrias gram-negativas geralmente so mais resistentes que as bactrias grampositivas aos desinfetantes e anti-spticos.
2. As microbactrias, os endsporos e os cistos e oocistos dos protozorios so muito
resistentes aos desinfetantes a aos anti-spticos.
3. Os vrus no0envelopados geralmente so mais resistentes que os vrus envelopados aos
desinfetantes e anti-spticos.
4. Os prons so resistentes desinfeco e autoclave.
Exerccios
1) Defina os seguintes termos:
a) esterilizao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
b) esterilizao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
c) desinfeco:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
d) antissepsia:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
e) degerminao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
f) sanitizao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
g) sepse:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
106
h) assepsia:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
i) assptico:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2) Os alimentos enlatados venda em supermercados so completamente estreis? Justifique sua
resposta.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
3) Qual a diferena entre tratamentos com sufixo -cida e os tratamentos com sufixo -sttico (ou
-stase)?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
107
Roteiros de
aulas prticas de
Microbiologia
Geral
(MIG)
108
Laboratrio de Microbiologia
A unidade curricular Microbiologia Geral (MIG) tem como principal objetivo o aprendizado
de tcnicas, representadas por uma srie de operaes executadas segundo normas
padronizadas, possibilitando o conhecimento e a manipulao de microrganismos.
As tcnicas microbiolgicas bsicas e essenciais podem ser resumidas em:
a) observao microscpica: observao de microrganismos em condies adequadas
visualizao em microscpio;
b) cultivo artificial: multiplicao dos microrganismos fora do seu habitat natural, utilizando meios
de cultura;
c) esterilizao: eliminao das formas vivas nos meios de cultura, utenslios e instrumentos;
d) prtica assptica: preveno do contato do material em estudo com formas microbianas
indesejveis.
Laboratrios de microbiologia so locais onde se manipulam os microrganismos com os
mais variados objetivos, tais como:
a) identificar os microrganismos responsveis por doenas em animais e vegetais;
b) avaliar a microbiota do ar, do solo, da gua, dos alimentos, entre outros;
c) identificar a presena de microrganismos indesejveis nos alimentos ou produtos
industrializados;
d) usar os microrganismos como modelos de estudo para a compreenso dos processos vitais;
e) descobrir substncias (remdios, vacinas, antibiticos, vitaminas, hormnios, ) que
combatam microrganismos patognicos ou favoream o crescimento e desenvolvimento de
plantas e animais.
Como no laboratrio de microbiologia trabalha-se com organismos que na sua grande
maioria so invisveis a olho nu, deve-se tomar o mximo cuidado para no contaminar:
a) o manipulante;
b) o ambiente;
c) o material em estudo.
Para isso necessrio que algumas medidas sejam tomadas e que regras de trabalho
sejam estabelecidas.
Normas de biossegurana no Laboratrio de Microbiologia
O sucesso de uma experincia no laboratrio depende da observao das regras
estabelecidas para a segurana pessoal e ambiental. No primeiro caso, as regras dizem respeito a
sua segurana pessoal de modo a evitar acidentes de laboratrio. No segundo, referem-se
manuteno de um laboratrio rigorosamente limpo para impedir a contaminao dos dispositivos
experimentais por microrganismos estranhos ao estudo. Desse modo, um dos procedimentos
mais comuns no laboratrio de microbiologia a aplicao de tcnicas asspticas.
Embora a virulncia dos microrganismos usados nas aula prticas seja mnima e ainda
diminua ao longo do tempo devido ao longo perodo de cultivo artificial, todos os microrganismos
devem ser tratados como potencialmente patognicos. Assim, os estudantes de microbiologia
devem executar tcnicas asspticas na preparao e manipulao de qualquer material.
Para reduzir a microbiota presente naturalmente no laboratrio e evitar acidentes e
infeco de pessoas, as seguintes regras devem ser sempre observadas:
1)
tratar todas as culturas de microrganismos como potencialmente patognicas;
2)
deixar materiais como bolsas, pastas, livros e cadernos na estante, na entrada do
laboratrio, e nunca sobre as bancadas do laboratrio;
3)
manter as portas e janelas fechadas durante as aulas prticas para evitar contaminao
com correntes de ar;
4)
lavar cuidadosamente as mos e o antebrao com detergente, certificar-se que todo o
sabo foi retirado, secar com papel toalha antes e depois da aula prtica;
5)
desinfetar mos e antebraos cuidadosamente, antes e aps os trabalhos no laboratrio
com lcool iodado. ATENO: O LCOOL 96 o GL NO BACTERICIDA e o lcool 70% ou lcool
iodado s completa sua ao ao secar e no deve ser jogado sobre mos ainda midas;
109
6)
se tiver algum ferimento nas mos, avise o professor e procure no tocar no material;
7)
prender cabelos longos para evitar exposio ao fogo da chama do bico de Bunsen;
8)
usar equipamento de proteo individual (EPI) adequado: guarda-p ou jaleco de mangas
longas, limpo e fechado durante toda a aula, para proteger as roupas de contaminao e manchas
ou descoloraes com solues; luvas cirrgicas descartveis; mscara, touca e culos de
proteo (estes quando necessrio);
9)
retirar joias, anis, relgios e pulseiras;
10)
usar calas compridas e sapatos fechados;
11)
usar culos de segurana nas tarefas que apresentarem riscos;
12)
nunca aplicar maquilagem / cosmticos ou colocar / retirar lentes de contato no laboratrio;
13)
expressamente proibido fumar, comer (nem balas e chicletes) ou beber no laboratrio;
14)
nunca colocar as mos na boca, olhos, ouvidos e cabelos durante a aula e, caso ocorra,
adotar os procedimentos de higienizao adequados;
15)
manter a caneta longe da boca;
16)
limpar com soluo desinfetante, no incio e no final de cada aula, a bancada onde voc
trabalhou e lavar as mos aps desinfetar a bancada ;
17)
nunca colocar instrumentos contaminados, como alas de platina, agulhas, pinas e
pipetas ou ponteiras sobre a bancada. Alas, agulhas e pinas devem ser esterilizadas na chama
(flambadas); pipetas, ponteiras e lminas usadas devem ser colocadas em recipientes contendo
desinfetante, especialmente designados pelo professor, NUNCA devem ser deixados sobre a
bancada ou a pia;
18)
alas, agulhas e pinas devem ser esterilizadas na chama (flambadas = aquecidas ao
rubro) antes e depois de serem usadas e, antes de tocar o material de cultura, deve-se esperar
que a ala esfrie prximo chama;
19)
deve-se trabalhar na zona de segurana do bico de Bunsen,
que compreende a rea mais prxima possvel do bico de Bunsen
onde o ar livre de microrganismos;
A utilizao do Bico de Bunsen essencial pois visa a diminuio de
microrganismos no campo de trabalho atravs do calor. Para isso ele
apresenta uma regulagem que torna possvel selecionar o tipo de
chama ideal para o trabalho. No caso da Microbiologia deve ser
utilizada a chama azul porque esta atinge maior temperatura e no
forma fuligem. importante ressaltar que a chama apresenta
diferentes zonas, e tal fato importante para que o processo de
Flambagem seja executado adequadamente, j que certas zonas da
chama devem ser evitadas. As zonas da chama so: Zona Neutra (
uma zona fria e, portanto, no deve ser utilizada para Flambagem), Zona Redutora e Zona
Oxidante (so zonas onde j ocorre a combusto e, portanto, j podem ser usadas para a
Flambagem).
20)
ao acender o Bico de Bunsen, verificar se no h vazamento de gs ou substncias
inflamveis (lcool, ter, acetona, ) por perto;
21)
tubos de ensaio e placas de Petri com meios de cultura, inclusive aqueles com crescimento
de microrganismos s podero ser abertos nas proximidades da chama para evitar contaminao;
22)
tubos de ensaio e placas de Petri devem ser manipulados adequadamente e NUNCA se
deve colocar o tampo de algodo sobre a bancada;
23)
transportar e manter os tubos de cultura (tubos de ensaio) em uma estante apropriada para
evitar acidentes e contaminaes de pessoas e ambiente, NUNCA colocar os tubos no bolso do
jaleco ou deitados sobre a bancada;
24)
manipular culturas de bactrias e fungos com muito cuidado;
25)
manipular as culturas de fungo rapidamente para evitar a disseminao de suas estruturas
reprodutivas (esporos) no ambiente do laboratrio;
26)
identificar de maneira clara e completa os materiais particulares (por exemplo: tipo de
amostra, data, nome da equipe, turma, mtodo, meio de cultivo, microrganismo inoculado, entre
outras informaes pertinentes);
27)
todo material contaminado deve ser obrigatoriamente esterilizado antes do descarte;
110
28)
todo material deve ser pipetado com cuidado, lentamente e com peras especficas;
29)
nunca pipetar com a boca qualquer que seja a natureza da soluo (mesmo que seja
gua);
30)
em caso de quebra ou derramamento de culturas, cobrir toda a rea com toalhas de papel
e derramar sobre elas o lquido desinfetante disponvel no laboratrio. Aps 15 minutos, remover
as toalhas e descart-las de forma indicada pelo professor;
31)
relatar imediatamente ao professor todo e qualquer acidente, ferimento, cortes, ocorridos
durante a aula;
32)
colocar, ao final de cada aula, todas as culturas e materiais no local indicado pelo
professor;
33)
falar claramente, manter ateno constante nas aes executadas, evitando
movimentao e conversas desnecessrias que possam causar distraes e provocar acidentes;
34)
ao sair do laboratrio fechar os registros de gs e as torneiras, desligar as luzes e
equipamentos (devidamente limpos), limpar todo o material e organiz-lo para equipes de trabalho
posteriores;
35)
trabalhar atentamente e com responsabilidade!!!
111
112
2.11- Erlenmeyer:
um frasco em balo, usado como recipiente no laboratrio. Feito de material de vidro, plstico,
policarbonato transparente ou polipropileno transparente, ideal para armazenar e misturar
produtos e solues, cultivo de organismos e tecidos e em titulaes.
2.12- Garrafa de Roux:
Garrafas achatadas usadas para multiplicao de clulas (cultivo) e de esporos fngicos.
2.13-Bquer
Recipiente usado para experimentos ou misturas. Pode ser feito de vidro, plstico, policarbonato
transparente ou polipropileno transparente. Pode ser usado, de modo grosseiro, para realizar
medidas, pois impreciso.
2.14- Tubos de Durham:
So tubos de vidro pequenos e cilndricos. Servem para captar o gs formado em uma
fermentao.
2.15-Termmetros:
So utilizados em estufas microbiolgicas, de secagem e esterilizao, banhos de gua (banhosmaria), etc. Deve-se dar preferncia a termmetros de lcool (bulbo vermelho).
2.16 Basto de vidro
Utilizado para auxiliar na dissoluo de sal, agitaes e na transferncia de um lquido de um
recipiente para outro, evitando perdas.
2.17 Tubos Capilares
um tubo de vidro de dimenses muitssimo mais pequenas. Tem esta designao uma vez que
s se podem introduzir no seu interior substncias que ocupem muito pouco volume semelhante
ao de um capilar. So usados em experincias que envolvam uma grande preciso e rigor e usam
quantidades microscpicas de substncias.
3. ACESSRIOS:
3.1 Bico de Bnsen:
um aquecedor a gs com chama, cuja temperatura varia de acordo com a regulagem. suprido
com gs liquefeito de petrleo (GLP) e proporciona uma chama que permite a realizao da
manipulao das anlises microbianas. Deve-se verificar com freqncia se no h vazamentos
de gs nas conexes.
3.2 Cabo de Kolle:
um cilindro metlico, contendo um material isolante trmico na extremidade, usado para
manipulao microbiana da ala de platina (ou nquel-cromo). Na outra extremidade metlica h
um orifcio onde colocada a ala ou agulha que so fixadas mediante encaixe rosquevel,
utilizado como suporte para este fim.
3.3 Ala de Platina e agulhas:
um fio de platina ou outra liga metlica, medindo aproximadamente cinco centmetros,
recurvado em uma de suas extremidades. adaptado ao cabo de Kolle. Este material utilizado
para transferir inculos slidos ou em suspenso. A agulha um fio de platina ou de outra liga,
que fixado ao cabo de Kolle, utilizada para semear meio slido em profundidade.
3.4 Esptulas e pinas:
Estes utenslios so normalmente produzidos em ao inoxidvel. A esptula utilizada para
pesagem de pequenas massas, enquanto a pina para manipulao de lminas, lamnulas, etc...
3.5 Grampo de madeira:
Utilizado para segurar e prender tubos de ensaio.
3.6 Lamparina:
Utilizada para aquecer pequenas coisas em laboratrio, que no exijam temperaturas muito altas,
por meio da combusto do lcool.
3.7 Pera de suco:
usada para auxiliar nos procedimentos de pipetagem ao ser acoplada as pipetas.
3.8 Tetina:
Instrumentos de borracha para retirar lquidos do interior de frascos com pipetas Pasteur.
3.9 Pisseta (Pissete ou Frasco Lavador):
Com jatos de lquido dirigido, utilizado para lavagem de precipitado, cristais, recipientes e para
113
114
mantidas sobre uma base slida protegidas de vibraes, e tambm de umidade e mudanas
bruscas de temperatura.
4.8- Autoclave:
um equipamento destinado esterilizao pelo calor mido (vapor dgua sob presso).
Normalmente, so utilizados para esterilizar guas de diluies, meios de cultura que suportem
temperaturas elevadas (115-120C), materiais contaminados que vo ser descartados e outros. O
autoclave de laboratrio pode ser do tipo horizontal ou vertical, contendo os seguintes acessrios:
caldeira cilndrica hermeticamente fechada por uma tampa de bronze ou cobre, dotada de
manmetro, vlvula de escape de ar e de segurana. Em seu interior existe uma cesta metlica
(mvel) onde so colocados todos os materiais a serem esterilizados. empregado o uso de
bioindicadores ou fitas de controle para se testar a eficincia deste equipamento.
4.9 Geladeiras e Congeladores (Freezers):
As geladeiras so utilizadas para a conservao de meios de cultura estreis, solues e
amostras de contra-prova. As culturas microbianas e solues no devem ser colocados no
mesmo equipamentos que as amostras. Jamais poder guardar refeies, lanches, bebidas ou
qualquer outro alimento que ir ser consumido. Se contiver material com risco biolgico dever ser
identificada com o pictograma adequado. Culturas vivas no devem ser congeladas. A verificao
diria da temperatura regra geral de controle destes equipamentos.
4.10 Agitador Magntico:
munido de uma plataforma metlica onde o recipiente contendo o meio lquido e uma barra
magntica revestida de material inerte colocado. O mesmo gira barra magntica de modo
circular, agitando o meio continuamente durante a incubao e tambm expondo maior superfcie
do meio fase gasosa,
4.11 Microscpio tico:
Equipamento utilizado para o estudo dos microrganismos. Os equipamentos mais usados
permitem o aumento de at 1.250 vezes e podem ser monocular ou binocular. Deve-se ter
cuidado para no utilizar preparaes a fresco com a objetiva de imerso.
4.12 Auxiliar de Pipetagem (pipeting aide):
Equipamento utilizado para pipetar lquidos viscosos tais como meios de cultura e culturas
microbianas. As pipetas devem ter uma proteo de algodo hidrfobo para proteger o auxiliar de
possveis contaminaes.
4.13 Cabines de Fluxo Laminar Horizontal (A) e Vertical (B):
As cabines de fluxo laminar podem ser horizontais ou verticais. So usadas para a manipulao
de materiais estreis como meios de cultura esterilizados, amostras de materiais estreis
(solues injetveis, nutrio parenteral, etc), culturas puras de microrganismos,.... As cabines de
fluxo laminar horizontais no devem ser usadas para materiais muito contaminados ou culturas
puras de microrganismos, pois o fluxo de ar direcionado no sentido do operador.
4.14 Lupa:
Instrumento ptico munido de uma lente com capacidade de criar imagens virtuais ampliadas.
utilizada para observar com mais detalhe pequenos objetos ou superfcies.
4.15 Espectrofotmetro:
Determinar a concentrao de uma espcie em soluo a partir do grfico da variao de
absorvncia (ou transmitncia) em funo da concentrao de vrias solues-padro.
4.16 Destilador
equipamento utilizado para a destilao de gua
4.17 Agitador mecnico
Promove agitao mecnica em fluido, lquidos semi-viscosos e material em suspenso atravs
de movimento circular de hlices.
4.18 Micro-ondas:
Utilizado para aquecer solues.
4.19 Meios de cultura
Utilizados para o crescimento e manuteno de microrganismos.
4.20 Corantes
As solues corantes so utilizadas para preparao de microrganismos para a observao
microscpica.
115
116
117
Microscopia
1. Introduo
Os microrganismos so seres vivos muito pequenos. O olho humano incapaz de v-los
de forma clara e individualizados. Para observ-los, preciso aument-los, o que se consegue
com o uso de um microscpio ptico composto.
O microscpio ptico composto ou microscpio de luz um instrumento de preciso que
permite a visualizao de microrganismos. Ele se constitui, basicamente, de uma parte mecnica
e de uma parte ptica.
1.1 Parte mecnica
A parte mecnica de um microscpio ptico composto representada pelo corpo ou brao
do microscpio, que se encontra apoiado pela extremidade inferior em uma base metlica de
tamanho e peso suficientes para assegurar o equilbrio do aparelho.
A extremidade superior do brao
articula-se com um tubo metlico conhecido
como canho que suporta as lentes. O
parafuso
macromtrico
possibilita
deslocamentos rpidos e de grande
amplitude, enquanto que o micromtrico se
restringe a pequenos movimentos.
Na parte inferior do tubo do
microscpio, so colocadas as objetivas.
De nmero varivel, elas so rosqueadas
em um dispositivo mvel especial
denominado revlver que permite o
intercmbio das objetivas. Entre o canho e
a base do microscpio, existe uma
plataforma metlica chamada mesa ou
platina do microscpio.
Sobre a platina colocada a lmina com a preparao a ser examinada, que ser fixada
por meio de presilhas, para que permanea imvel. Para correr todo o campo do microscpio,
existe um dispositivo especial denominado charriot que, por intermdio de dois parafusos, permite
o deslocamento da preparao.
1.2 Parte ptica
A parte ptica de um microscpio de luz constitui-se nas lentes e no sistema de iluminao.
As lentes so separadas da seguinte forma:
- lentes oculares: so adaptadas na extremidade superior do tubo do microscpio. atravs
delas que o observador olha. A ocular geralmente produz aumentos de 10x. H oculares que
produzem aumentos de 5x, 15x e 20x.
- lentes objetivas: so constitudas por um conjunto de lentes que se acham dispostas na
extremidade inferior do tubo do microscpio. A maioria dos microscpios possui trs objetivas
(pequena, com aumento de 4x; mdia, com aumento de 10x; e grande, com aumento de 40x) e
uma objetiva de imerso de 100x;
* objetiva de imerso: d maior aumento e permite ver o objeto com mais nitidez ao se
colocar uma gota de leo de cedro sobre a preparao e baixar a objetiva sobre a lmina, de
forma que esse lquido denso se interponha entre a objetiva e o objeto a ser examinado. Nesse
caso, os raios luminosos no sofrem desvio, pois o ndice de refrao do leo igual ou muito
prximo ao do vidro.
O aumento final da preparao dado pelo produto entre o valor da objetiva e o
valor da ocular.
Chama-se poder de resoluo de uma objetiva a capacidade de ver nitidamente o menor
espao compreendido entre dois pontos. O olho humano por exemplo, geralmente no consegue
distinguir por dois pontos que estejam separados por uma distncia menor que 0,1 mm (100 m).
118
Os bons microscpios pticos podem superar bastante esse limite, distinguindo em at 0,2 m.
O sistema de iluminao representado pelo condensador, que dirige os raios de luz para
o objeto, e por uma fonte de luz que pode ser direta ou refletida por um espelho. O condensador
possui um diafragma com a finalidade de controlar a quantidade de luz desejada. A refrao o
desvio da luz quando ela passa de um meio para outro de densidades diferentes.
1.3 Unidades de medida
Como a estrutura dos microrganismos muito pequena, ns necessitamos de medidas
especiais para elas:
- Micrmetro (m): que equivale milsima parte do milmetro. 1 m = 10-3 mm
- Nanmetro (nm): que equivale milsima parte do micrmetro. 1 nm = 10-3 m
- Angstron (A): que equivale dcima milsima parte do micrmetro. 1 A = 10-4 m
O micrmetro mais utilizado em microscopia ptica (m.o.), enquanto que o nanmetro e o
angstron so mais utilizados em microscopia eletrnica (m.e.)
2. Como usar o microscpio
Posio de descanso
Ao iniciar o trabalho o aparelho deve ser encontrado na sua posio de descanso: coberto
com a capa protetora, platina totalmente abaixada, lente objetiva 4x (a menor) apontada, boto
liga-desliga desligado, tomada sem conexo com a luz.
Incio do trabalho
1)
retirar a capa protetora do aparelho
2)
ligar o microscpio tomada
3)
ligar o boto liga-desliga
4)
regular a intensidade luminosa
5)
abrir o grampo
6)
colocar a lmina
7)
fechar o grampo
8)
erguer a platina at o ponto mximo usando o boto (ou parafuso) macromtrico
9)
regular a abertura interpupilar
10)
abaixar a platina, usando o macromtrico at ver o objeto da lmina em foco
11)
ajustar a focalizao com o boto micromtrico
12)
trocar para a lente objetiva de aumento imediatamente superior (10x)
13)
ajustar a focalizao somente com o boto micromtrico
14)
trocar para a lente objetiva de aumento imediatamente superior (40x)
15)
ajustar a focalizao somente com o boto micromtrico
16)
se necessrio, colocar uma gota de leo de imerso e trocar para a lente objetiva de
aumento imediatamente superior (100x)
17)
ajustar a focalizao somente com o boto micromtrico
Vale ressaltar que o aumento total dado pela multiplicao dos valores da objetiva e da
ocular. Os itens compreendidos entre 12 e 17 s devero ser feitos de necessrio.
3. Objetivos
- Reconhecer as partes e aprender a manusear o microscpio ptico;
- Aprender a focalizar preparados no microscpio;
- Observar atentamente os cuidados a serem tomados com o microscpio de luz;
- Observar e reproduzir na forma de desenhos a morfologia dos objetos examinados durante a
aula.
4. Materiais
Lminas; microscpio ptico composto; leo de cedro (leo de imerso); papel absorvente.
5. Mtodos
- Reconhecer as partes do microscpio;
- Focalizar as lminas, repetindo a focalizao tantas vezes quantas forem necessrias;
- Observar a morfologia dos objetos examinados.
119
Objeto:_________________________
Aumento final:___________________
Objeto:_________________________
Aumento final:___________________
Objeto:_________________________
Aumento final:___________________
Objeto:_________________________
Aumento final:___________________
120
PARA CASA
1) Descreva o procedimento de focalizar com leo de imerso.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
2) Qual a finalidade do leo de cedro na focalizao em imerso?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
3) Como se calcula o aumento final do objeto aps a focalizao?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
4) Qual o aumento final obtido quando:
a) so utilizadas: uma objetiva de 100x e uma ocular de 10x?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
b) so utilizadas: uma objetiva de 10x e uma ocular de 10x?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
c) so utilizadas: uma objetiva de 40x e uma ocular de 10x?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
5) O que poder de resoluo de uma objetiva?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
6) Qual a finalidade do condensador?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
7) Qual a finalidade do diafragma?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
121
Fsforo
Estufa bacteriolgica
Cronmetro
Rgua
4. Procedimento
4.1 Verificao de contaminao ambiental
Pegar duas placas de Petri com meio de cultivo e identific-las com nome do grupo, data e
nmero da placa (1 ou 2 que identificar a condio de inoculao) na parte de trs da placa
com canetinha, de modo que no comprometa a visualizao dos resultados (seguindo a
circunferncia da placa);
Remover o filme transparente de PVC ao redor de uma placa de Petri com BDA e exp-la em uma
determinada condio preestabelecida:
122
GRUPO 1:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: pele passar os dedos em vrios pontos da superfcie do meio de cultivo.
GRUPO 2:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: cabelo agitar vigorosamente os cabelos em direo superfcie da placa.
GRUPO 3:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: respirao inocular na placa, tossindo ou espirrando, diretamente sobre a superfcie do
meio de cultivo.
GRUPO 4:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: cabelo inocular na placa falando diretamente sobre a superfcie do meio de cultivo.
Colocar filme transparente de PVC ao redor das placa de Petri;
Utilizar como controle para o experimento uma placa com meio de cultivo estril fechada;
Fazer a incubao das placas a 35 oC, por 7 dias. As placas devem ser incubadas invertidas, para
evitar que o meio se desidrate e que a gua de condensao caia sobre a superfcie do meio;
Aps o perodo de incubao, anotar a presena e a diversidade morfolgica das colnias
microbianas que cresceram sobre a superfcie do meio de cultivo.
4.2 Experimento de Price
Pegar uma placa de Petri com meio de cultivo (BDA);
Dividir a parte inferior da placa de Petri em quatro partes (A, B, C e D) e identificar a placa,
anotando na tampa a data, o grupo e as iniciais do nome de quem vai fazer o teste;
Escolher um dedo da mo e, sem lavar, coloc-lo em contato com a superfcie do meio de cultivo
na rea da placa assinalada com A;
Lavar as mos com sabonete, vigorosamente, secar ao ar e, em seguida, colocar o mesmo dedo
em contato com a rea B;
Desinfetar as mos pr-lavadas com lcool 70%, secar ao ar e colocar o dedo em contato com a
rea C;
Manter a rea D como controle (testemunha), no inoculada;
Incubar a placa a 35oC, por 48 horas;
Avaliar os resultados, observando os tipos e a abundncia de colnias em cada parte.
Testemunha
Dedo desinfetado
Dedo lavado
123
RELATRIO:
1) Em relao s placas com meio de cultivo BDA inoculadas de diferentes formas pelos 4 grupos,
enumere e caracterize as colnias que cresceram na superfcie das placas, quanto a tamanho, cor
e forma, nos esquemas a seguir:
GRUPO 1 PLACA 1
GRUPO 1 PLACA 2
GRUPO 2 PLACA 1
GRUPO 2 PLACA 2
GRUPO 3 PLACA 1
GRUPO 3 PLACA 2
GRUPO 4 PLACA 1
GRUPO 4 PLACA 2
124
Grupo / nome
do aluno
Tratamentos
Avaliaes
A
T
Grupo 1
No de colnias
Grupo 2
No de colnias
Grupo 3
No de colnias
B
B
C
B
D
B
Grupo 4
No de colnias
T = total, F = fungos, B = bactrias
3) Interprete o resultado do experimento de Price do seu grupo.
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4) O que ocorreu com a rea de controle da placa de Petri usada no Experimento de Price
(onde o dedo no foi colocado)? Justifique seus resultados.
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5) O que ocorreu com a placa de Petri usada como controle no experimento Verificao de
contaminao ambiental? Justifique seus resultados.
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6) Qual a utilidade do bico de Bunsen ou da lamparina no laboratrio de Microbiologia?
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alcana 121 oC, que alta o suficiente para matar os esporos, como tambm organismos
vegetativos, e para romper a estrutura dos cidos nucleicos nos vrus.
Na tindalizao, o material submetido a trs sesses de exposio a vapor de gua a
100 oC, durante 20 a 45 minutos; durante 45 minutos; e durante 20 a 45 minutos, com um tempo
de repouso entre elas de 24 horas. Consegue-se a esterilizao visto que os esporos germinam
entre duas sesses e depois so destrudos. Essa tcnica usada para solues aucaradas ou
que contenham gelatina.
2. Objetivo
- Aprender a preparar materiais de forma correta para esterilizao;
- Observar o funcionamento de uma autoclave.
3. Materiais
1) placas de Petri
2) pipetas
3) erlenmeyer
4) bquer
5) tubos de ensaio
6) papel kraft
7) canetinhas
8) fita crepe
9) tesoura
10) algodo
11) gaze
12) barbante
13) elstico
14) folha de papel A4
15) autoclave
4. Mtodos
4.1 Preparao da vidraria para esterilizao
Placas de Petri
- Separar as placas limpas e secas;
- Embalar as placas (mnimo 4 e mximo 10) para facilitar a estocagem);
- Colocar as placas no centro do papel e comear a embrulh-las firmemente, para evitar a
absoro de umidade em excesso; fechar com fita crepe (Fig. 7).
Pipetas
- Colocar um pedao pequeno de algodo no bocal de cada uma das pipetas;
- Embrulh-las uma a uma, identificando-as de acordo com as orientaes do professor (Fig. 8).
Tubos de ensaio e erlenmeyers
- Preparar os tampes de algodo e gaze de acordo com o tamanho da boca de cada vidraria;
- Colocar os tampes na boca dos tubos de ensaio e dos erlenmeyers de forma que fiquem firmes
mas no muito apertados;
- Colocar um pedao de papel kraft sobre o tampo em cada tubo de ensaio e em cada
erlenmeyer, prender com elstico ou barbante (Fig. 4).
Bqueres
- Colocar um pedao de papel kraft sobre a boca do bquer e prender com elstico ou barbante.
Levar todo o material preparado para o local da esterilizao.
4.2 Esterilizao em autoclave (Fig. 9)
- Observar o nvel da gua, que deve estar at 1 cm abaixo da cruzeta (Fig. 10);
- Colocar o cesto da autoclave;
- Colocar o material a ser esterilizado dentro da autoclave, de acordo com a capacidade do
equipamento;
- Fechar a tampa, apertando os manpulos em cruz;
- Ligar a autoclave na potncia mxima e abrir o registro (vlvula de escape);
- Aguardar a sada do vapor por 3 a 5 minutos, fechando o registro aps esse tempo;
- Alcanada a temperatura de trabalho (121 oC), colocar a chave na posio mdia, ajustando,
quando necessrio, os pesos que controlam a quantidade de vapor;
- Marcar o tempo, que dever ser de 15 a 30 minutos, dependendo do material;
- Terminado o tempo de esterilizao, desligar a autoclave e deixar que o ponteiro do manmetro
atinja a posio zero;
- Abrir o registro aos poucos e aguardar a sada do vapor da autoclave de maneira que ele seja
escoado completamente;
127
No abrir o registro antes que o manmetro atinja a posio zero, para evitar que o
material esterilizado fique muito molhado e que os papis que o envolvem se rasguem;
lquido
rosa
lquido
amarelo
Fig. 10
vertical
Autoclave
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129
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10) Por que se deve esperar sempre que a autoclave escoe todo o vapor (posio zero do manmetro)
antes de proceder a abertura da tampa?
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EXERCCIOS DO LIVRO
1) Qual o significado e a definio de:
- PMT:
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- TMT:
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- TRD ou valor D:
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2) Para que servem o PMT e o TMT?
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3) O tempo de morte trmica para uma suspenso de endosporos de Bacillus subtilis de 30 minutos
em calor seco e menos de 10 minutos em autoclave. Que tipo de calor mais efetivo? Por qu?
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4) Se a pasteurizao no atinge a esterilizao, porque o alimento tratado por pasteurizao?
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5) Preencha a seguinte tabela:
Mtodo de
Temperatura
esterilizao
Tempo
Tipo de calor
Uso
preferencial
Tipo de ao
Autoclave
Ar quente
Pasteurizao
6) Por que os tratamentos pasteurizao clssica, HTST e UHT so chamados de tratamentos
equivalentes?
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7) Qual dos seguintes mtodos no mata endosporos?
a) autoclave
d) pasteurizao
b) incinerao
e) nenhuma das alternativas
c) esterilizao com ar quente
135
136
microscpio
lupa
estilete
durex
4. Procedimentos
4.1 Estrutura macroscpica e microscpica de fungos
- Selecione alguns tipos de fungos e observe sua estrutura macroscpica, faa pequenos cortes e
observe as estruturas em uma lupa.
- Para observao microscpica, faa lminas pela tcnica do Imprint e observe no microscpio.
137
5. Resultados e discusso
Estrutura macroscpica e microscpica de fungos
Desenhe os aspectos macroscpicos e as estruturas microscpicas dos fungos que voc
observou. Descreva as principais caractersticas observadas!
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gua
Acar
S. cerevisiae
50mL
5g
2,5g
50mL
10g
2,5g
50mL
20g
2,5g
50mL
10g
10g
50mL
10g
50mL
2,5g
139
140
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6. CONCLUSO
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142
3) Miclio fngico
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama da
lamparina;
- flambar a agulha de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar a placa de Petri com o miclio e, com auxlio da agulha, retirar uma pequena poro de miclio;
- fechar a placa;
- pegar a lmina e depositar em seu centro uma poro do miclio;
- pingar uma gota de azul de metileno a pequena distncia da suspenso e, sobre a lmina, colocar
uma lamnula;
- observar ao microscpio na objetiva de 40x.
Resultados
Desenhar e descrever as estruturas observadas nas 5 lminas!
LMINA 1
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LMINA 2
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LMINA 3
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2) Iogurte
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama
da lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar o bquer com iogurte e introduzir a ala de platina no interior dele at tocar o iogurte;
- transferir uma pequena alquota da cultura com a ala para a lmina e espalhar o material com
movimentos circulares (esfregao);
- secar ao ar;
- cortar lentamente a lmina na chama da lamparina 3 vezes para que o material fique bem
aderente lmina (fixao). A fixao feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano;
- corar a lmina pela Tcnica de Gram (descrita anteriormente);
- observar ao microscpio na objetiva de 100x com leo de imerso.
3) Leite fermentado (tipo Yakult)
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama
da lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar o bquer com Leite fermentado (tipo Yakult) e introduzir a ala de platina no interior dele
at tocar o Leite fermentado (tipo Yakult);
- transferir uma pequena alquota da cultura com a ala para a lmina e espalhar o material com
movimentos circulares (esfregao);
- secar ao ar;
- cortar lentamente a lmina na chama da lamparina 3 vezes para que o material fique bem
aderente lmina (fixao). A fixao feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano;
- corar a lmina pela Tcnica de Gram (descrita anteriormente);
- observar ao microscpio na objetiva de 100x com leo de imerso.
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Resultados
Desenhar e descrever as estruturas observadas nas 3 lminas!
LMINA 1
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LMINA 2
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LMINA 3
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Atividades extras
Microbiologia
Geral
(MIG)
147
148
Clulas procariticas:
* Glicoclice
* Flagelos
* Fmbrias
* Pili
* Parede Celular
* Membrana Plasmtica
* Citoplasma
* rea Nuclear
* Ribossomos
* Incluses
* Endosporos
Clulas eucariticas
* Flagelos
* Clios
* Parede Celular
* Glicoclice
* Membrana Plasmtica
* Citoplasma
* Ncleo
* Retculo endoplasmtico
* Ribossomos
* Complexo de Golgi
* Lisossomos
* Vacolos
* Mitocndrias
* Cloroplastos
* Peroxissomos
* Centrossomos
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150
151