TCNICAS

DETERMINACIN DE CCONTENIDO DE FENOLES TOTALES.

El contenido de fenoles totales se determin por el mtodo de Folin-Ciocalteu

mtodo de Stintzing et al (2005).

Con el fin de expresar los resultados como equivalentes de cido glico se

realiz una curva de calibracin con este reactivo. La curva se gener a partir
de una solucin madre de 400 mg/100 ml, se realizaron concentracin con un
intervalo de 0-30 mg/ml (anexo 4), cabe mencionar que la lectura del presente
anlisis se llev a cabo en un espectrofotmetro marca Thermo Fisher Scientific
modelo G1OS UV-Vis.

Se colocaron 100 L de muestra centrifugada en viales de eppendorf, se les

agregaron 500 L de solucin Folin-Ciocalteu y 400 L de solucin de
carbonato de sodio al 7.5%, en seguida, las muestras se agitaron en un vortex
marca Scientific Industries por un minuto y fueron incubados a temperatura
ambiente (26 2 C) durante 30 minutos.
Trascurrido este tiempo, se midi la absorbancia a una longitud de onda de 765
nm la cual refleja la cantidad total de polifenoles.
La concentracin total de fenoles presente en las diferentes muestras se
calcul con la ecuacin de la recta obtenida de la curva de calibracin de cido
glico ya elaborada.
Y= 0.0338x 0.0038

ACTIVIDAD INHIBIDORA DEL RADICAL LIBRE 2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZILO

(DPPH).

El radical DPPH es uno de los pocos radicales orgnicos nitrogenados estable y

adems comercialmente disponible. Presenta un color violeta intenso, que
disminuye en presencia en un antioxidante u otro radical. De esta manera la
capacidad antioxidante que tienen las muestras se cuantifica midiendo el
grado de decoloracin que estas provocan en una solucin etanlica de DPPH.
El reactivo DPPH es un radical libre estable, que en solucin etanlica su
mxima absorbancia se obtiene a una longitud de onda de 520 nm.

La actividad antirradical con base en el DPPH se evalu de acuerdo al

procedimiento reportado por Morales y Jimnez-Prez (2001). La actividad
antioxidante se expres en mol equivalente de Trolox/L. El trolox (Carboxilico
6-hidroxi-2,5,8-tetrametilcromo) es una molcula que presenta una fuerte
actividad antirradical.
La tcnica consisti en preparar una solucin de DPPH a una concentracin de
7.4 mg/100 ml en etanol, se agit durante 10 minutos.
Posteriormente se colocaron en viales de eppendorf 100 L de la muestra, se
agreg tambin 500 L de la solucin DPPH y se llev a agitacin en vortex por
1 minuto. Se dej reposar a temperatura ambiente (26 2 C) durante 1 hr,
transcurrido este tiempo, si exista turbidez en las muestras los viales se
centrifugaban a 3000 rpm por 10 min. Se ley absorbancia del sobrenadante a
una longitud de onda de 520 nm.
Con el fin de expresar los resultados como equivalentes de Trolox se realiz una
curva estndar con este reactivo solubilizado en etanol. La curva de calibracin
se gener en un intervalo de concentracin de 0 a 400 mol Trolox/L (anexo ).
La concentracin final del radical libre DPPH se calcul con la ecuacin de la
recta obtenida de la curva de calibracin de trolox solubilizado en etanol.

Y= -0.0041x + 1.5456

Cabe mencionar que las marcas de los reactivos utilizados fueron Aldrich,
Meyer y Analytyka.

ANEXO
CURVA DE CALIBRACIN DE TROLOX

ANEXO
CURVA DE CALIBRACIN DE CIDO GLICO

ESTAS SON ALGUNAS BIBLIOGRAFAS QUE TE PUEDEN SERVIR A LA HORA DE

DISCUTIR
Barahona, C. V. C. (2013). Evaluacin de la actividad antioxidante y valor
nutracutico de las hojas y frutos de la guanbana (annona muricata). Tesis.
Escuela Superior Politcnica de Chimborazo. Riobamba, Ecuador.
Floegel A, Kimb D, Chung S, Koo SI, Chun OK. (2011). Comparison of
ABTS/DPPH assays to measure antioxidant capacity in popular antioxidant-rich
US foods.
ICBF, Instituto Colombiano de Bienestar Familiar. (2005). Tabla de Composicin
de Alimentos.
Karadag A, Ozcelik B, Saner S. (2009), Review of methods to determine
antioxidant capacities. Food Anal Methods 2: 41 60.
Kuskoski EM, Asuero AG, Troncoso AM, Mancini- Filho J, Fett R. (2005).
Aplicacin de diversos mtodos qumicos para determinar actividad
antioxidante en pulpa de frutos.
Repo De Carrasco R., Encina Z. C. R. (2008). Determinacin de la capacidad
antioxidante y compuestos bioactivos de frutas nativas peruanas. Rev. Soc.
Qum. v.74 n.2. 108-124.