BIOQUIMICA Y FARMACIA

OBJETIVOS.Objetivo General. Reproducir un estudio analtico para el diagnstico de infecciones

de tracto urinario tomando en cuenta las limitaciones del caso.
Objetivos Especfico. Preparar medios de cultivo para facilitar el crecimiento de entero
bacterias presentes en las infecciones del tracto urinario.
Realizar el Anlisis microscpico de la muestra de orina.
Realizar un sembrado correcto tanto para aislamiento como
recuento.
Obtener el nmero de bacterias presentes en 10 l.
Realizar la identificacin de un cultivo aislado.
Categorizar el tipo de metabolismo que posee el microorganismo.

MARCO TEORICO.DEFINICION: La infeccin del tracto urinario (ITU) es considerada

generalmente como la existencia de microorganismos patgenos en el
tracto urinario con o sin presencia de sntomas. El origen bacteriano de
la ITU es el ms frecuente (80%-90%); en este caso, la definicin exacta
exige no solo la presencia de grmenes en las vas urinarias, sino
tambin su cuantificacin en al menos 105 unidades formadoras de
colonias (UFC)/ mL de orina. Sin embargo, varios estudios han
establecido que un tercio o ms de los pacientes, mayoritariamente
mujeres sintomticas, tiene conteos de UFC por debajo de este nivel y
presentan ITU. En los hombres tienen menor probabilidad de
contaminacin sintomtica, se considera como sugerente de infeccin
una cifra de 103 UFC/mL. El diagnstico de bacteriuria significativa en
pacientes cateterizados se hace con valores de 102 UFC/mL. Entre las
infecciones ms importantes del ser humano, la ITU constituye un
importante problema de salud que afecta a millones de personas cada
ao. Es la segunda causa de infeccin ms frecuente en los humanos.
Ms de mitad de todas las mujeres tiene al menos una ITU durante su
vida y su presentacin ms comn es durante el embarazo. La
proporcin de frecuencia de UTI entre mujeres y hombres jvenes es de
30:1; sin embargo, conforme el hombre envejece, esta proporcin tiende
a igualarse. En el adulto mayor, la ITU es la infeccin bacteriana ms
comn el origen ms frecuente de bacteriemias.
CLASIFICACION: Las ITU son clasificadas de diversas formas:
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ITU baja. Colonizacin bacteriana a nivel de uretra y vejiga que

normalmente se asocia a la presencia de sntomas y signos urinarios,
como urgencia, disuria, polaquiuria, turbidez y olor ftido de la orina.
Incluye a la cistitis y uretritis.
ITU alta. Presencia de signos y sntomas de ITU baja, asociada a
colonizacin bacteriana a nivel uretral y del parnquima renal, con
signos y sntomas sistmicos como, escalofros, fiebre, dolor lumbar,
nuseas y vmitos. En este grupo se encuentran las pielonefritis. La
distincin entre ITU baja y superior sigue siendo clsicamente aceptada.
Sin embargo, es solo de utilidad para el mdico si determina que la
infeccin est limitada las mucosas de la vejiga y la uretra o
compromete rganos slidos, como riones o prstata
ITU no complicada. La que ocurre en pacientes que tienen un tracto
urinario normal, sin alteraciones funcionales o anatmicas, sin una
historia reciente de instrumentacin (sondaje, uretrocistoscopia) y cuyos
sntomas estn confinados a la uretra y vejiga. Estas infecciones son
muy frecuentes en mujeres jvenes con una vida sexual activa.
ITU complicada. Ocurre debido a factores anatmicos, funcionales o
farmacolgicos que predisponen al paciente a una infeccin persistente
o recurrente o a fracaso del tratamiento. Estos factores incluyen
condiciones a menudo encontradas en ancianos ampliacin de la
prstata, obstrucciones y otros problemas que requieren la colocacin de
dispositivos urinarios y a la presencia de bacterias resistentes a
antibiticos mltiples. Su espectro comprende desde una cistitis
complicada hasta un uro sepsis con choque sptico.
ITU o bacteriuria asintomtica. Muchos pacientes pueden tener
una bacteriuria significativa ( 105 UFC/mL de orina) sin presentar
sntomas.
ITUrecurrente. Ms de tres episodios de ITU demostrados por cultivo
en un periodo de un ao.
ITU nosocomial. Aparicin de infeccin urinaria a partir de las 48
horas de la hospitalizacin de un paciente sin evidencia de infeccin,
asociada a algn procedimiento invasivo, en especial, colocacin de un
catter urinario.
Etiologa
En ms del 95% de los casos, un nico microorganismo es el
responsable de la ITU. El agente etiolgico ms frecuente de ITU en
ambos sexos es la Escherichia coli, responsable del 75% a 80% de casos;
el 20% a 25% restante incluye microorganismos como: Staphylococcus
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saprophyticus, Proteusmirabilis, Proteus vulgaris, Klebsiella sp.,

Streptococcusfaecalis, Pseudomonas aeruginosa
Especies uropatgenas comunes (crecen en 24 horas)

Escherichia coli
Klebsiella spp
Proteus spp
Pseudomonas aeruginosa
Enterobacter spp
Enterococcus spp
Staphylococcus saprophyticus
Staphylococcus aureus
Morganella morganii
Streptococcus agalactiae

DIAGNOSTICO
Presencia de uno de los siguientes signos o sntomas: fiebre (> 38C),
tenesmo, polaquiuria, disuria o dolor suprapbico y cultivo de orina con
105 UFC/mL con no ms de dos especies de organismos.
Presencia de dos de los siguientes signos o sntomas: fiebre (> 38C),
tenesmo, polaquiuria, disuria o dolor suprapbico, ms cualquiera de los
siguientes:

Nitratos o leucocito-estearasa positivo.

Piuria > 10 leucocitos/mL.
Visualizacin de microorganismos en la tincin de Gram.
Dos urocultivos con > 103 UFC/mL del mismo germen.
Urocultivo con 105 UFC/mL de orina de un solo patgeno en
paciente tratado con terapia antimicrobiana apropiada.

Paciente asintomtico (ausencia de fiebre, tenesmo, polaquiuria, disuria

y dolor suprapbico), al que se le detecta una concentracin bacteriana
105 UFC/mL con no ms de una o dos especies de microorganismos.
Infeccin de otras regiones del tracto urinario
Fiebre (> 38C), dolor o hipersensibilidad local (puo percusin lumbar,
masaje prosttico), aislamiento por cultivo o visualizacin por tincin
Gram de microorganismos a partir de biopsias o aspirados, a excepcin
de la orina, de los tejidos u rganos del tracto urinario con sospecha de
estar afectados.
TRATAMIENTO.-

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La eleccin de un antibitico, en diversa infecciones, depende de los

niveles de concentracin plasmtica que alcanza el antibitico para
lograr una susceptibilidad antimicrobiana alta. Pero, en el caso de la ITU,
lo importante es la concentracin del antibitico en el parnquima renal,
en la capa ms profunda de la pared de la vejiga y de la prstata.(14)
Por tanto, la excrecin concentracin urinaria y la determinacin de la
actividad del antibitico en la orina son importantes para la decisin de
si su uso se justifica o no en el tratamiento de la ITU.

SEMBRDO EN MEDIOS SLIDOS:

1 MATERIAL DE PREPARACION DE
MEDIOS
4 cajas Petri
Reactivo:
MATERIALES Y METODOS. 2. Matraz
Agua
Erlenmeyer
destilada
Papel madera
Agar Mc
Vidrio de reloj
Conkey
Varilla
Agar nutritivo
Mtodo.- la preparacin se realiza
segn el producto.

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2 MATERIAL DE SEMBRADO
PARA AISLAMIENTO Y
RECUENTO
micro pipetas
graduadas para 10l
1 caja de agar Mac
Conkey
1 caja de agar sangre
2 cajas de agar
nutritivo
Asa bacteriolgica
Hisopo estril
Mechero
Mtodo. Asa calibrada
Esparcido con hisopo
de 10 l de muestra
Agotamiento de estras

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FARMACIA
3
MATERIALYANALISIS
MICROSCOPICO
Centrifugadora
Muestra de orina
Porta objetos
Tubo de ensayo con tapa
MICROSCOPIO
METODOS.- Tcnica de
anlisis de partculas y
micro organismos.

4 MATERIAL DE IDENTIFICACION
GRAM Y CONTEO DEBACTERIAS
Portaobjetos
Lupa
Violeta cristal
Marcador
Lugol
Calculad
Alcohol-cetona
ora
Safranina
Agua destilada
Mechero
Asa
bacteriolgica
Mtodos. Tincin Gram
Conteo manual

5 PRUEBAS BIOQUIMICAS
Tubos de ensayo
Matraz Erlenmeyer de
100 ml
Hornilla
Mechero
Gradillas
Agar Citrato
Agar TSI
METODOS.-Tcnica de
identificacin bacteriana
por metabolismo.

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PROCEDIMIENTOS.Laboratorio de infecciones de tracto urinario

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PRUEBAS BIOQUMICAS
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AGAR TSI

AGAR CITRATO

0.847 g del agar

disolver en 35ml

2.19 g del agar

disolver en 35ml

Calentar el medio produciendo vapor

Llevar al auto clave junto con
Al sacarlos del autoclave se debe
vaciar 6ml de cada medio en cada
un tubo.

Para la prueba del citrato la

inclinacin debe ser 10% base y
90% superior.
Para la prueba TSI la inclinacin
debe ser 50-50

Para la inoculacin:

RESULTADOS.Medio de cultivo

Cantidad

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Crecimiento

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usados
Agar nutrivo
Agar mc conkey

X2
X1

Agar sangre

X1

Tcnica usada

Bueno
Falla en el
sembrado
Poco crecimiento

Numero de bacterias
por ml

Asa calibrada
Esparcido con hisopo
10l
Anlisis microscpico
Estructuras

inorgnicas

Estructuras

orgnicas

Cristales de oxalato de calcio

predominante.
Cristales de cido rico muy aislado.
Clulas de epiteliales, No bacterias,
esperar al cultivo.

Tincin Gram (muestra del cultivo de

agar sangre)
Gram positivo
presentes
Gram negativo
No muy
presentes
Prueba
bioqumica
Agar Citrato
Agar TSI

RESULTADO

CRECIMIENTO

Negativo
Negativo a lactosa y sacarosa
Formacin de precipitado
negro

NO
SI

CONCLUCION. Se realiz la preparacin segn las instrucciones del fabricante de

cada medio ya que cada fabricante puede tener una formula
distinta.
Al realizar el anlisis microscpico se encontr:
Cristales de oxalato que no denotan una patologa ya que se
forman gracias a una dieta rica en acido oxlico, pero

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cuando no es el caso puede denotar formacin de clculos

renales.
Cristales de cido rico su presencia en la orina no
necesariamente indica un estado patolgico. Estn presentes
en la orina en enfermedades como la gota, leucemia,
metabolismo de las purinas aumentado, enfermedad febril
aguda y nefritis crnica.
El nmero contado de bacterias no eran muy altas lo que nos
denota colonias transitorias que con el tiempo se desaparecern.
Al realizar la tincin Gram se pudo evidenciar la presencia de
bacilos gram positivos y no asi muchos gram negativos.
En tanto al realizar las pruebas bioqumicas del citrato y TSI se
cambio la muestra que se us por lo que el resultado de la
bacteria presente no esta muy relacionado con los anteriores
resultados
En el tubo de ensayo de agar Kliegler, luego de entre 18 y 24
horas de incubacin, se han observado las siguientes
caractersticas: formacin de un precipitado negro, superficie del
agar de color rojizo y con colonias bacterianas, y ausencia de
produccin de gases. El precipitado negro se debe a la formacin
cido sulfhdrico (H2S) como producto del metabolismo, debido a
que el mismo reacciona con el hierro del medio formando SFe
(precipitado negro). La superficie rojiza se debe a que las bacterias
sembradas no fermentan lactosa, ni sacarosa. Esta coloracin se
debe a una alcalinizacin del medio debido a la degradacin de las
peptonas. Debido a la ausencia de produccin de gas se determin
que las bacterias eran anaerognicas.
En esta prueba no se observ cambio de color en el medio de
cultivo, ni desarrollo de colonias bacterianas. Esto indica que las
bacterias no utilizaron citrato como fuente de carbono, por lo tanto
no tienen el complejo enzimtico citritasa.

A la hora de realizar el estudio analtico en la prctica se pudo

evidenciar las carencias de habilidad del practicante, las condiciones en
las se trabaj, muestra que no deberan ser un factor de impedimento a
la hora del trabajo.
Bibliografa.Madigan M.T., Martinko J.M. y Parker J. (2004) Brock: Biologa de los
Microorganismos 10ma Edicin ISBN:84-205-3679-2
Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiologa 4ta
Edicin
ISBN:84-486-0261-7

MICROBIOLOGIA CLINICA

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Simposio Infeccin del tracto urinario y manejo antibitico Juan

Echevarra-Zarate, Elsa Sarmiento Aguilar, Fernando Osores Plenge.
INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA Autores: GERARD J.
TORTORA, BERDELL R. FUNKE, CHRISTINE L. CASE CAPITULO
6CRECIMIENTO MICROBIANO

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