Nombre: Carolina Tituaa

Cdigo: 106061
INFORME PRCTICA 4
PRUEBA DE ELISA
1. Objetivo:
Realizar una prueba ELISA para la deteccin de anticuerpos IgM anti
Helicobacter Pylori
2. Resultados:
Tabla 1. Parmetros de control para el ensayo 1
Blanco

Control

Control

Diferencia

(1)

(2)

entre

Control +

Cutoff

duplicados
control
(%)
0.077

0.036

0.024

33%

3.92

0.28

Tabla 2. Interpretacin de resultados para el ensayo 1

Muestra

Muestra/Cutoff

Interpretacin de

1. 0.040

0.14

resultados
Negativo

2. 0.960

3.42

Positivo

Tabla 3. Parmetros de control para el ensayo 2

Blanco

Control

Control

Diferencia

(1)

(2)

entre

Control +

Cutoff

duplicados
control
0.134

0.077

0.095

(%)
18.95%

0.691

0.336

Tabla 4. Interpretacin de resultados para el ensayo 2

Muestra

Muestra/Cutoff

Interpretacin de

1. 0.005

0.014

resultados
Negativo

2. 0.054

0.16

Negativo

Tabla 5. Coloracin de los pocillos para el ensayo 2

Blanco

Blanco

Cont.-1

Amarill
o

Cont.-2

Amarill

Contr.+

Azul

Calibr.1

Calibr.2

Amarill

Amarill

Muestra

Muestra

Blanco

Celeste

Tabla 6. Parmetros de Control

Pocillo blanco

Control -

Diferencia entre

Muestra/Cut off

rplicas de control
<0.1

<0.150

<30%

>1.2= muestra
positiva
1-1.2= muestra gris
<1= muestra
negativa

3. Conclusiones y Discusin
Se realiz dos pruebas ELISA para la deteccin de anticuerpos IgM anti
Helicobacter Pylori. En la tabla 1 se muestra parmetros de control del primer
ensayo. Se determina que los resultados expuestos no son confiables debido a
que existe una diferencia superior al 30% en los duplicados del control negativo,
por lo que se recomienda la repeticin de la misma. El control negativo es de
suma importancia debido a que descarta falsos positivos por errores en la

tcnica. Esta diferencia puede ser causada por contaminacin, una incorrecta
medicin del volumen de las muestras o porque los reactivos se encontraban en
mal estado (Bi-x-act, 2015). Los resultados de las dos muestras se esperaban que
sean negativos debido a que en el Ecuador la tasa de infeccin es del 93.2% en
la niez, es decir la mayor parte de la poblacin adulta presentan anticuerpos
IgG, ms no IgM (Vallejo, 2008). En la prctica una de las muestras tuvo un
resultado positivo como se lo muestra en la tabla 2, lo que se le puede atribuir
principalmente a errores de la tcnica.
En relacin al segundo ensayo se tuvo varias falencias. Como se observa en la
tabla 3 el valor del blanco fue superior a 0.1, lo que indica que existe presencia
de contaminacin y por ende los dems resultados pudieran estar afectados. Las
dos muestran resultaron negativas, segn lo esperado, sin embargo estos
resultados tambin se encuentran influenciados debido al tiempo de incubacin
corto, ya que al no permitir que los posibles anticuerpos se pegaran a los
conjugados, no se permite que se d la reaccin colorimtrica esperada y por el
contrario sean eliminados con los lavados. Adems por error se aadi en los
tres primeros pocillos solucin de inici, lo que puede perjudicar en la
sensibilidad (Crowther, 2001).
Las placas de ELISA del ensayo que mostr color azul fue el control positivo,
mientras que la muestra dos revel un color celeste, lo que hizo predecir un
resultado de absorbancia superior, este color se presume que se da debido a que
estas dos muestras contenan anticuerpos especficos para Helicobacter Pylori
que al unirse con su antgeno correspondiente presente en el soporte slido, y
este conjugado a su vez con el anticuerpo secundario marcado convierte el
sustrato transparente en un producto coloreado. Sin embargo en este caso el
resultado para la muestra dos fue negativo, lo que muestra la importancia del
anlisis con espectrofotometra. El pocillo del blanco careca de color debido a
que no contena ningn reactivo, sino solo es utilizado para restar errores en el
pipeteo. Los dems pocillos tenan color amarillento debido a los reactivos que
contenan (Abbas et.al, 2015).
4. Bibliografa
Bi-x-act. (2015). Anti-HCV ELISA 96 and 480 WELL Plate Test Kit.
Hoja

tcnica

disponible

en

lnea

desde:

<

http://www.ekoweb.fi/images/pdf/Anti-HCV_ELISA_96_well_plate.pdf>

Consulta: 16/10/2015
Vallejo, V. (2008). Estudio de la relacin entre la infeccin por Cepas de
Helicobacter pylori Genotipo cagA+ y la patologa de la gastritis, en
pacientes del Ecuador. Tesis para la obtencin de ttulo de tercer nivel.
Documento

en

lnea

disponible

desde:

<

http://repositorio.espe.edu.ec/bitstream/21000/856/1/T-ESPE-026701.pdf

> Consulta: 16/10/2015

Abbas, A., Litchman, A., Pillai, S. (2015). Inmunologa, celular y

molecular. 8va ed. Elsevier, Barcelona.

Crowther, J. (2001). The ELISA Guidebook. 1era ed. Humana Press,
New

Jersey.

Libro

en

lnea

disponible

desde:

<https://books.google.com.ec/books?
id=e39weLL_FL8C&pg=PA22&dq=elisa+test&hl=es419&sa=X&ved=0CCsQ6AEwAGoVChMIs6Pt3LLHyAIVyV0eCh0JD
Acv#v=onepage&q=elisa%20test&f=false > Consulta: 16/10/2015