Espectros

LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 1
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS & TECNOLOGA
Qumica Inorgnica: LAB

Experimento #7:
Introduccin a la Espectroscopa*
Objetivo
En la Parte I de este experimento usted ser introducido a los fundamentos de la

espectroscopia. Aprender primero a como usar apropiadamente el instrumento
SPECTRONIC 20 y entonces usar el equipo para hallar el largo de onda () al cual
la absorbancia de luz por una solucin de colorante de alimentos (tintes vegetales)
tiene el mximo valor (max).
En la Parte II aprender como una ley de espectroscopia conocida como la Ley
Beer-Lambert, puede er utilizada para determinar la concentracin de colorante de
alimento en una solucin desconocida.
En este alimento usted har lo siguiente:
1.
Aprender a utilizar adecuadamente un espectrofotmetro (Parte I)
2.
Hallar max para dos diferentes soluciones de colorantes. (Parte I)
3.
Preparar soluciones de colorantes a varias concentraciones conocidas

diluyendo una solucin stock. (Parte II)
4.
Ajustar el SPECTRONIC 20 al valor de max obtenido en la Parte I, y

entonces producir una curva de calibracin que relaciona absorbancia
con concentracin. (Parte II).
QUMICA INORGNICA: LABORATORIO
HARRY ALICES-VILLANUEVA, PH.D.
5.
Utilizar la curva de calibracin y el SPECTRONIC 20 para determinar la

concentracin de un desconocido. (Parte II)
Introduccin
La palabra espectroscopia se utiliza para referirnos a un rea de la ciencia que trata

con absorcin, emisin o dispersin de radiacin electromagntica por molculas,
iones, tomos o ncleos. Las tcnicas espectroscpicas son uno de los mtodos
analticos ms usados hoy da. Estas tcnicas son tiles en determinar ambos: la
identidad de una sustancia desconocida y su concentracin en solucin. Diferentes
regiones del espectro electromagntico de radiacin tales como el infrarrojo, visible,
ultravioleta, o rayos X, pueden ser utilizadas para interaccionar con la materia. EL
instrumento SPECTRONIC 20 que usted habr de utilizar se puede clasificar
correctamente como un colormetro, porque mide la absorcin de luz en el espectro
visible que percibimos como color, y la tcnica utilizada se conoce como
colorimtrica.
Los electrones y los ncleos de los tomos y molculas pueden existir a solo ciertos
niveles especficos de energa; esto es, estn cuantitizados. Pueden absorber fotones
que tengan solo cierto nivel de energa o largo de onda. Las energas de luz
absorbidas por una molcula pueden relacionarse a movimiento molecular. Unos
ejemplos se ilustran en la tabla siguiente:
Movimiento
Molecular
Radiacin
Electromagntica
Absorbida
Energa
Rotacin
Microondas, infrarroja
Baja
Vibracin
Infrarroja
Moderada
Visible, ultravioleta
Alta
Transiciones de electrones
TABLA I
A pesar de que los instrumentos que se utilizan para medir la interaccin de varias
regiones de radiacin electromagntica con la materia difieren en diseo y
operacin, todos contienen los mismos componentes bsicos. Un diagrama
esquemtico de un simple instrumento que se utiliza para medir la absorcin de luz
se muestra en la FIGURA 1.
FIGURA 1.
La fuente provee la radiacin electromagntica que ser absorbida por la muestra.
Es usualmente una bombilla o lmpara. El monocromador selecciona un tipo
particular de energa (o largo de onda o color) de luz de la fuente. Un prisma o un
filtro coloreado y con rendijas pueden servir como monocromador. Estos separan la
luz blanca en los diferentes colores del arcoiris. El detector mide la cantidad de luz
que pasa a travs de la muestra. Un fototubo (o fotocelda) es usado usualmente
como detector. Todos estos componentes trabajan esencialmente basados en el
mismo principio: la luz que incide en la superficie del detector causa que corriente
fluya en u circuito elctrico circundante. La cantidad de corriente en el circuito es
proporcional a la cantidad de luz que entra al detector.
Todas las partes del instrumento trabajan juntas como sigue: luz de la fuente pasa a
travs del monocromador produciendo un rayo de una sola energa o de una estrecha
banda de energas. La intensidad de este rayo, I0, es medida por el detector. La
muestra es colocada entonces entre el monocromador y el detector. Si algo de la luz
incidente es absorbida por la muestra, la intensidad del haz de luz que llegue al
detector, I, ser menor a I0. El detector compara las dos intensidades y muestra el
resultado como porcentaje de transmitancia (%T) o absorbancia (A).
Estos trminos se definen como:
%T
I
100
I0
La fraccin de I0 que pasa a travs de la muestra se llama transmitancia.

A log T log
I
2 log(%T )
I0
Si el monocromador es un prisma, todas las energas (o largos de onda) estn

disponibles y se pueden variar a voluntad.
Las molculas no absorben todos los largos de onda de igual modo. Considere un
objeto con color. La visin humana en la interpretacin cerebral de los fotones de la
radiacin electromagntica en el rango visual (luminoso, luz) que entra al ojo. Si
todas las energas (o largos de onda, colores) se mezclan, estos se perciben como luz
blanca. Si no hay fotones entrando al ojo, vemosluz negra. Un color solamente es
percibido si solo fotones de una energa (luz de un solo color, luz monocromtica)
entra al ojo o si los fotones de un color complementario faltan en la mezcla usual de
luz blanca. Un objeto blanco se ve blanco porque no absorbe ninguna de la luz que
incide sobre este. Un objeto negro se ve negro porque absorbe toda la luz incidente.
Una rosa se ve roja si absorbe toda la luz excepto el rojo o si absorbe la luz del color
complementario al rojo; esto es, azul-verdoso. La TABLA II muestra una breve lista
de los colores que se absorben para producir los colores que se observan.
Largo de onda,
En nm
400 435
435 480
480 490
490 500
500 560
560 580
580 595
595 610
610 750
Color
(Absorbido)
Violeta
Azul
Verde-Azulado
Azul-Verdoso
Verde
Amarillo-Verdoso
Amarillo
Anaranjado
Rojo
Color Complementario
(Observado)
Amarillo-verdoso
Amarillo
Anaranjado
Rojo
Prpura
Violeta
Azul
Verde-azulado
Azul-verdoso
Para lograr los resultados ms precisos en la PARTE II en donde determinaremos la

concentracin de una especie coloreada en solucin, necesitamos maximizar la
absorcin de tal sustancia (PARTE I). Debemos seleccionar el color (energa, largo
de onda) de la luz de nuestra fuente que sea mejor absorbida por la molcula. Por
ejemplo, si una solucin es verde-azulada, absorber luz anaranjada y el largo de
onda de mxima absorbancia, max, estar entre 595 y 610 nm (ver TABLA II).
Cantidades de luz absorbida, an en el caso de soluciones concentradas, son muy
pequeas comparada a la cantidad disponible en la fuente. Para el instrumento es
ms fcil ver el cambio si lo hacemos lo ms grande posible. Muchos
espectrofotmetros tienen monocromadores variables lo que hace fcil seleccionar
el color complementario de la fuente pasando a travs de los largos de onda
disponibles y graficando la absorbancia (o porciento de transmitancia) contra el
largo de onda manualmente o permitir al instrumento scannear a travs del rango
automticamente. De la grfica (espectro) podemos determinar el largo de onda
exacto del color complementario, que es el largo de onda de absorcin mxima
(max). Valores para max de muchas sustancias se encuentran en la literatura
cientfica.
Precauciones
En este experimento no usaremos sustancias peligrosas. Tal vez la mayor precaucin

hay que tenerla al utilizar el espectrofotmetro. Recuerde que es un instrumento
costoso y sensitivo.
Materiales, Equipo y Soluciones
Cada pareja de estudiantes utilizar lo siguiente:

Un espectrofotmetro SPECTRONIC 20TM
Celdas para el espectrofotmetro
Soluciones de tinte vegetal rojo y amarillo
1 beaker de 250 mL
1 beaker de 50 mL
1 pipeta de 10 mL
1 pipeteador
6 tubos de ensayo de 18 150 mm
Gradilla para tubos de ensayo
Procedimiento
PARTE I: Funcionamiento del Spectronic 20 y Determinacin de max

El SPECTRONIC 20 es una pieza moderadamente cara de equipo cientfico y como tal
debe tratarse con el debido cuidado y respeto.
Un modelo rotulado del SPECTRONIC 20 de uso comn se ilustra en la pgina
siguiente.
Para todas las instrucciones refirase a la figura anterior.

Operacin del SPECTRONIC 20TM:
A.
1.
El SPECTRONIC 20 se prende rotando el botn de Power hasta escuchar

un clic y la lmpara o luz indicadora se encienda. El instrumento debe
calentarse por al menos 30 minutos antes de usarse.
2.
Utilice el botn para el control del largo de onda (5), para ajustar el
instrumento al largo de onda deseado. En la PARTE I el primer largo de
onda a usarse ser 340 nm. En la PART II usted utilizar el max que
determinar en la PARTE I.
3.
Con el contenedor de muestra vaco, cierre la puerta y ajuste la escala a

0% de transmitancia usando el botn de power. Asegrese de alinear la
aguja con su reflexin en el espejo detrs de la escala cuando lea la
misma; esto aplica si su espectrofotmetro no es digital.
4.
Obtenga una celda Spec 20. El tubo parece un tubo de ensayo comn y
corriente, pero est hecho de un cristal especial de alta calidad y es mucho
ms caro. Limpie el tubo y enjuguelo con agua destilada, y luego llene el
tubo hasta parte con la solucin blanco. El blanco en este experimento
ser agua destilada. Cuidadosamente limpie cualquier solucin y
huellas en el exterior del tubo usando un Kimwipe.
5.
Abra la cubierta del contenedor de muestra y deslice el tubo en la

apertura. Encuentre la marca (una lnea recta) en el tubo y alinelo
exactamente con una marca similar en el contenedor de muestra. Cierre la
puerta.
6.
Con la solucin blanco como muestra, ajuste la escala a 0% transmitancia

(0% absorbancia) con el botn control de luz (botn nmero 5).
7.
Remueva el tubo del contenedor de muestra y cierre la puerta. Si la escala

no lee 0% de transmitancia, repita el paso 3.
8.
Si fue necesario ajustar el botn #1, repita los pasos 6 y 7. Contine este
proceso hasta que se logren lecturas consistentes.
9.
Cuando se obtengan lecturas consistentes de 0 y 100%, eche a un lado el

blanco. Guarde el blanco hasta que todas las lecturas se hayan
completado.
10.
Limpie otro tubo o celda y enjuguela con una pequea porcin de la

solucin a la cual se le medir la absorbancia. Entonces llnela con la
solucin, lmpiela con Kimwipe y colquela en el contenedor de muestra
con las marcas alineadas. Lea el porcentaje de transmitancia y anote este
valor. Calcule la absorbancia del porcentaje de transmitancia utilizando

la ecuacin A = 2 log(%T).
11.
Repita el paso 10 para todas las soluciones a ser determinadas. Cuando

termine, limpie y seque los tubos de muestra cuidadosamente y
entrguelos al tcnico de laboratorio a cargo.
NOTA: La escala de porciento de transmitancia es lineal. Es fcil de leer a unidades

de 0.01 en cualquier posicin de la escala (0 a 100). La escala de absorbancia, no
obstante es logartmica y se lee solamente de derecha a izquierda. Las gradaciones a
lo largo de la escala varin y no pueden ser ledas con tanta precisin como la escala
de transmitancia. Por lo tanto, siempre lea la escala de transmitancia y calcule la
absorbancia: A = 2 log(%T).
Retenga estas instrucciones para futuros experimentos con el Spectronic 20.
B.
Determinacin de max
Para determinar max medir la absorbancia y transmitancia a 340 nm, aumentar el

largo de onda en 10 nm, tomar otra lectura, etc. Hasta llegar a 580 nm. Una grfica
de absorbancia contra largo de onda le mostrar el valor de max.
1.
Designe uno de los tubos Spec 20 como el blanco usando un lpiz

graso para escribir la letra B en la parte superior del tubo. Llene el
tubo con agua destilada y pngalo a un lado.
2.
Llene el segundo tubo al menos partes con una de la soluciones de

tintes vegetales a ser estudiadas. Pngalo a un lado.
3.
Ajuste el control de largo de onda a 340 nm, y cumpla con las

instrucciones 1 10 para operar el SPECTRONIC 20. Cuando haya
completado todas las instrucciones, tendr entonces la primera lectura
para la TABLA I en la pgina siguiente.
4.
Ahora ajuste el control de largo de onda a 350 nm, y vaya a travs de

las instrucciones nuevamente. Ser necesario ajustar la transmitancia a
0 con el compartimiento de muestra vaco y a 100% transmitancia con
el blanco cada vez que cambie el largo de onda.
5.
Contine incrementando el largo de onda de diez en diez nm y obtenga

su data de transmitancia y absorbancia hasta llegar a 580 nm.
6.
Repita los pasos 2 5 con la otra solucin de colorante, Ponga su data

en la TABLA II.
7.
Grafique absorbancia vs. largo de onda (absorbancia en la ordenada,

largo de onda en la abscisa) para ambas soluciones coloreadas. Utilice
el mismo conjunto de coordenadas para ambas grficas y rotule y
titule cada una apropiadamente. Conecte los puntos de tal forma que
obtenga una curva elegante.
LIMPIEZA
1.
Puesto que ha usado solamente tintes vegetales y agua en este

experimento, puede disponer de todos los desperdicios por el
vertedero.
2.
Limpie y enjuague las celdas Spec 20 y gurdelas bien. No use

cepillos para lavar las celdas, pues esto las puede rayar.
PARTE II. La Ley de Beer-Lambert

La cantidad de luz absorbida es dependiente en cuan bien la sustancia absorbe luz, la
longitud de la ruta por la cul transcurre la luz, y la concentracin. Estos parmetros
se combinan en una relacin matemtica llamada la Ley de Beer-Lambert.
La Ley de Beer establece una relacin entre la absorbancia de luz de una sustancia y
su concentracin. Usualmente se escribe como:
A = abc
Donde
A = Absorbancia de la solucin
a = absorbitividad o cun bien la sustancia absorbe luz
b = longitud del compartimiento de muestra
c = concentracin de la solucin
Debido a que a y b no cambian en nuestro experimento, podemos combinarlos en
una nueva constante, k. Por tanto, A = kc. Note que esta es la ecuacin de una lnea
recta de la forma y = mx + b, donde x = c, m = k y b = 0. Recuerde que m es la
pendiente de la lnea y b es el intercepto en y. La Ley de Beer dice que una grfica
de absorbancia vs. concentracin producir una lnea recta pasando a travs del
origen. Tal grfica se conoce como una grfica Beer-Lambert. La pendiente de la
recta es caracterstica de y depende de la solucin utilizada.
Suponga que una serie de soluciones de alguna sustancia se prepararon, cada una
con una concentracin conocida diferente. Si la absorbancia de cada solucin es
medida al mismo largo de onda, y se hace una grfica de absorbancia vs.
concentracin, una grfica bastante parecida a la siguiente deber resultar. Esta
figura es una grfica Beer-Lambert.
Grafica Beer-Lambert
Note que muy pocos puntos caen directamente sobre la lnea. La lnea constituye el
mejor arreglo de la data esto es, la lnea se dibuja lo ms cerca posible a todos los
puntos con el mismo nmero de puntos sobre y debajo de la recta. A pesar de que la
lnea dibujada es mucho ms precisa cuando los puntos de data son procesados
estadsticamente en una buena calculadora o en una hoja de Excel, se puede lograr
una buena aproximacin colocando una regla sobre los puntos y dibujando la lnea
que mejor promedia los puntos.
Demostrando una relacin lineal entre absorbancia, A, y concentracin, c, la grfica
Beer-Lambert no solo confirma que las soluciones que usted usa son conformes a
Beer-Lambert, pero tambin provee para una curva de calibracin que se puede usar
para determinar la concentracin de una solucin de la misma sustancia de
concentracin desconocida. Por ejemplo, si usted tiene un desconocido con
absorbancia de 0.43, usted determinara de su curva de calibracin que la
concentracin del desconocido es 0.00012 M (vea la grfica anterior).
A. Preparacin de una Curva de Calibracin
1.
Eche 40 mL de su solucin de tinte vegetal rojo o amarillo en un beaker

de 50 mL.
2.
Rotule los tubos de 18 x 150 mm con los nmeros del 1 al 6 usando un

lpiz graso. Enjuague la pipeta con agua destilada y usando la pipeta
coloque un volumen de agua como se indica en la TABLA I en los tubos
de ensayo.
3.
Enjuague la pipeta con la solucin stock, entonces use la pipeta para echar
los volmenes de solucin stock como se indica en la TABLA I.
Tubo de Ensayo #
1
2
3
4
5
6
mL de agua destilada
10.0
8.0
6.0
4.0
2.0
0
mL de solucin stock
0
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
4.
Coloque un poco de papel de parafina sobre el tubo 2 y agite para mezclar

bien. Repita con los tubos 5 6.
5.
Ajuste el largo de onda del espectrofotmetro al valor de max determinado

en la PARTE I. Coloque la solucin I (agua destilada) en el tubo o celda
Spec 20 para ser utilizado como blanco y calibrar el Spectronic 20.
6.
Coloque cada solucin en un tubo Spec 20 y mida el porciento de

transmitancia. Anote estos valores.
7.
Calcule la absorbancia usando la ecuacin matemtica dada en la PARTE

I.
8.
Calcule las concentraciones relativas en porciento de las soluciones 2-6.

Muestre sus clculos.
9.
Prepare una grfica de absorbancia (eje de y) contra concentracin relativa

(eje de x). Utilizando una regla dibuje la mejor recta posible a travs de
los seis puntos de data comenzando en (0,0).
10.
Calcule la pendiente de la lnea. Muestre sus clculos.
11.
Debido a que uno de los puntos es (0,0), cul es el intercepto en y?
12.
Escriba la ecuacin de la lnea que usted ha dibujado.
B. Determinado la Concentracin de una Solucin Desconocida.

1.
Obtenga una muestra de solucin de tinte vegetal de concentracin

desconocida (del mismo color con la cual prepar la curva de calibracin)
y anote el nmero de identificacin.
2.
Mida la absorbancia de la solucin desconocida. Refirase a las

instrucciones de la PARTE I del experimento segn sea necesario. Si otro
estudiante ha utilizado el Spec 20 desde que usted complet sus
determinaciones, re-calibre el instrumento antes de tomar medidas
adicionales. De nuevo, use agua destilada como su blanco.
3.
Use su curva de calibracin Beer-Lambert para encontrar la concentracin

del desconocido.
4.
Debido a que usted solamente ha usado tintes vegetales y agua en estos

experimentos, puede disponer de las soluciones por el vertedero.
5.
Limpie y seque toda la cristalera; no use cepillos para lavar las celdas del
Spec 20. Deje su rea de trabajo limpia.
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS & TECNOLOGA
Qumica Inorgnica: Reporte de Laboratorio

Experimento #7:
Introduccin a la Espectroscopa
Nombre(s)
____________________________________________________
____________________________________________________
____________________________________________________
___________________________________________________
2007
TABLA I. Color de la solucin colorante.

LARGO DE ONDA, NM
max:: __________
% TRANSMITANCIA
TABLA II. Color de la solucin colorante.

ABSORBANCIA
max:: __________
LARGO DE ONDA, NM
% TRANSMITANCIA
ABSORBANCIA
RESULTADOS
Color de la solucin stock de tinte usada: ____________

# Tubo de Ensayo
%Transmitancia
Abosorbancia
Concentracin
Relativa
1
2
3
4
5
6
Ejemplo de clculos de la concentracin relativa para el tubo #2
Calculo de la pendiente de la curva de calibracin:
Intercepto en y: _________
Ecuacin de la lnea: _________
Nm. Desconocido
%Transmitancia
Absorbancia
Concentracin
Relativa
CONTESTE
1.
La Ley de Beer-Lambert dice que a medida que la concentracin de una

sustancia en solucin aumenta, su absorbancia (aumenta, disminuye).
Explique.
2.
Una muestra estndar de hierro de 5 ppm dio una lectura para

transmitancia de 52.8%. Ser la concentracin de una muestra
desconocida de hierro mayor o menor a 5 ppm si su transmitancia es
61.7%?
3.
Si una solucin se ve lila,

a. Qu color de luz es absorbido por la sustancia?
b. Qu color de luz es transmitido por la sustancia?
4.
Conteste:
a. Qu absorbancia corresponde a un porcentaje de transmitancia de
46.7%?
b. Cul es el porcentaje de transmitancia para una solucin que tenga
una absorbancia de 0.883?
5.
Se mide la absorbancia a una serie de cinco soluciones coloreadas de

cobre. Grafique la data y determine la concentracin del desconocido.
Concentracin, ppm
Absorbancia
1
2
3
4
5
Desconocido
0.104
0.198
0.310
0.402
0.500
0.334
_____________
1
REFERENCIA:
http://intro.chem.okstate.edu/1515SP02/Laboratory/Exp2.pdf
Day, R. A., Jr. y A.L. Underwood. Quantitative Analysis, 3rd ed. Englewood Cliffs,
NJ. Prentice-Hall, Inc. 1974
ENE
/MAY, 2007

Espectros

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LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 1

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS & TECNOLOGA

Qumica Inorgnica: LAB

En la Parte I de este experimento usted ser introducido a los fundamentos de la

Aprender a utilizar adecuadamente un espectrofotmetro (Parte I)

Hallar max para dos diferentes soluciones de colorantes. (Parte I)

Preparar soluciones de colorantes a varias concentraciones conocidas

Ajustar el SPECTRONIC 20 al valor de max obtenido en la Parte I, y

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Utilizar la curva de calibracin y el SPECTRONIC 20 para determinar la

La palabra espectroscopia se utiliza para referirnos a un rea de la ciencia que trata

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La fraccin de I0 que pasa a travs de la muestra se llama transmitancia.

Si el monocromador es un prisma, todas las energas (o largos de onda) estn

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Para lograr los resultados ms precisos en la PARTE II en donde determinaremos la

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LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 5

En este experimento no usaremos sustancias peligrosas. Tal vez la mayor precaucin

Materiales, Equipo y Soluciones

Cada pareja de estudiantes utilizar lo siguiente:

PARTE I: Funcionamiento del Spectronic 20 y Determinacin de max

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LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 6

Para todas las instrucciones refirase a la figura anterior.

El SPECTRONIC 20 se prende rotando el botn de Power hasta escuchar

Con el contenedor de muestra vaco, cierre la puerta y ajuste la escala a

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LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 7

Abra la cubierta del contenedor de muestra y deslice el tubo en la

Con la solucin blanco como muestra, ajuste la escala a 0% transmitancia

Remueva el tubo del contenedor de muestra y cierre la puerta. Si la escala

Cuando se obtengan lecturas consistentes de 0 y 100%, eche a un lado el

Limpie otro tubo o celda y enjuguela con una pequea porcin de la

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LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 8

valor. Calcule la absorbancia del porcentaje de transmitancia utilizando

Repita el paso 10 para todas las soluciones a ser determinadas. Cuando

NOTA: La escala de porciento de transmitancia es lineal. Es fcil de leer a unidades

Para determinar max medir la absorbancia y transmitancia a 340 nm, aumentar el

Designe uno de los tubos Spec 20 como el blanco usando un lpiz

Llene el segundo tubo al menos partes con una de la soluciones de

Ajuste el control de largo de onda a 340 nm, y cumpla con las

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LAB #7: Introduccin a la Espectroscopa Pgina 9

Ahora ajuste el control de largo de onda a 350 nm, y vaya a travs de

Contine incrementando el largo de onda de diez en diez nm y obtenga

Repita los pasos 2 5 con la otra solucin de colorante, Ponga su data

Grafique absorbancia vs. largo de onda (absorbancia en la ordenada,

Puesto que ha usado solamente tintes vegetales y agua en este

Limpie y enjuague las celdas Spec 20 y gurdelas bien. No use

PARTE II. La Ley de Beer-Lambert