Resumo: O fungo Colletotrichum gloeosporioides uma espcie de patgeno causador da antracnose, uma

doena que acomete pessegueiros, inuenciando na produo e na qualidade dos frutos. No momento em que este
patgeno infecta o hospedeiro, leva-se um tempo at a vericao dos primeiros sintomas doena. Realizou-se um
experimento fatorial, o qual considerou os fatores temperatura e ferimento ou no da casca do fruto sadio, para
avaliar o tempo at o aparecimento dos sintomas de antracnose no fruto sadio, durante 10 dias, em ambiente com
umidade e iluminao constantes. As observaes dos frutos ocorreram a cada 24 horas para vericao ou no
do evento de interesse. Utilizou-se alguns modelos de anlise de sobrevivncia, dos quais o modelo log-normal
representou melhor o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena. Ainda, apenas a varivel ferimento
foi signicativa no modelo, com curvas de sobrevivncia signicativamente diferentes para ferimento, ou seja,
o tempo at o aparecimento dos sintomas de antracnose em frutos feridos na casca foi menor do que a curva de
sobrevivncia dos frutos no feridos.
Palavras-Chave:
cubao.
1

Anlise de sobrevivncia, Modelo log-normal, Antracnose, Tempo at a in-

INTRODUO

Um dos frutos produzidos em escala comercial no Brasil o pssego (Prunus persica L.), o qual
considerado uma cultura de clima temperado (SOUZA, 2012).
Algumas doenas podem acometer o pessegueiro e estas vm a ser responsveis por perdas signicativas na produo e na qualidade dos frutas. Dentre essas doenas, destaca-se a antracnose, a qual ataca
ores, frutos e ramos (MAY-DE MIO et al., 2004).
No fruto, o sintoma tpico da doena comea com uma mancha marrom-clara de forma arredondada,
ovalada ou irregular e tamanho aproximado de 0,10 a 0,15 mm, evoluindo para leses arredondadas,
grandes, necrticas, marrons e com anis concntricos (KIM AND HONG, 2008).
A partir do momento que o patgeno coloniza o hospedeiro, leva-se um tempo at o aparecimento
dos sintomas caractersticos da doena, o qual considerado perodo de incubao. O conhecimento do
perodo de incubao importante para avaliar a patogenicidade e agressividade do patgeno no fruto.
Com o objetivo de estudar a patogenicidade e agressividade da antracnose, realizou-se um experimento em laboratrio com uma amostra de frutos de pssego sadios e esterilizados, para avaliar o tempo
(em dias) at o aparecimento dos sintomas causados pelo fungo Colletotrichum gloeosporioides, controlando a variao de temperaturas diante da metodologia de introduzir o patgeno em frutos sadios
sem e com ferimento da casca.

Para analisar o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose, sero utilizados modelos probabilsticos abordados pela rea da estatstica conhecida como anlise de sobrevivncia. Ser
apresentado adiante o desenvolvimento terico para a realizao da anlise estatstica do experimento.
2

DESENVOLVIMENTO TERICO

A anlise de sobrevivncia uma das reas da estatstica que mais cresceu nas ltimas duas dcadas do
sculo passado. Em anlise de sobrevivncia, a varivel resposta , geralmente, o tempo at a ocorrncia
de um evento de interesse e este tempo denominado de tempo de falha (COLOSIMO AND GIOLO,
2006).
A principal caracterstica de dados de sobrevivncia a presena de censura, que a observao
parcial da resposta. A observao censurada informa que o tempo at a falha maior do que aquele
que foi registrado. No caso de ausncia de censuras, tcnicas estatsticas da anlise de regresso e
planejamento de experimentos poderiam ser utilizadas (LAWLESS, 1982).
Uma funo de probabilidade que leva em considerao o tempo que o indivduo levou at a falha
a funo de sobrevivncia S(t). Dene-se funo de sobrevivncia, S(t), como a probabilidade de um
indivduo sobreviver mais do que um determinado tempo t, ou seja, S(t) = P (T > t) = 1 F (t), onde
F (t) a funo de distribuio acumulada do tempo at a falha.
Uma abordagem no-paramtrica para estimar S(t) quando h indivduos censurados pode ser dada
pelo estimador de Kaplan-Meier (KAPLAN AND MEIER, 1958), denido como:
?
? ?
d
j
=
S(t)
1
(1)
n
j
j:t <t
j

onde
- t1 < < tk , os k tempos distintos e ordenados de falha;
- dj o nmero de falhas em tj , j = 1, , k; e
- nj o nmero de indivduos sob risco em tj , ou seja, os indivduos que no falharam e no foram
censurados at o instante imediatamente anterior a tj .
Segundo CARVALHO et al (2011), a presena de covariveis na estimao por Kaplan-Meier no
permite estimar o efeito da covarivel, mas apenas comparar e testar a igualdade entre as curvas de
sobrevivncia. Para essa nalidade, o teste logrank bastante utilizado na literatura e tem como hiptese
inicial que as curvas de sobrevivncia no se diferem signicativamente entre si.
Para investigar o efeito de covariveis no tempo at a falha, foram considerados alguns modelos
de regresso que assumem diferentes distribuies de probabilidades para a varivel resposta. Dentre
estes modelos, sero abordados modelos paramtricos, ou seja, modelos de regresso que assumem uma
distribuio de probabilidade para a varivel resposta.
Conforme COLOSIMO AND GIOLO (2006), alguns modelos probabilsticos ocupam destaque para
descrever o tempo at a falha, como os modelos exponencial (3), o de Weibull (4) e o log-normal (4).
? ?
??
t
S(t|x) = exp
x?
? ?
?1/ ?
t
S(t|x) = exp
exp(x? )
?
?
log(t) + x?
S(t|x) =

(2)
(3)
(4)

Para avaliar a adequao e realizar diagnsticos de modelos, alguns mtodos grcos podem ser utilizados alm de testes de hipteses e medidas para comparao de modelos (COLOSIMO AND GIOLO,

2006): (a) mtodo grco dado pela comparao da funo de sobrevivncia estimada sob o modelo proposto com a estimativa de Kaplan-Meier, assim o modelo mais adequado aquele cujos pontos da funo
de sobrevivncia estimada estiverem mais prximos dos valores obtidos pelo estimador de Kaplan-Meier;
(b) resduos de Cox-Snell e so utilizados para examinar o ajuste global do modelo haja vista que tais
resduos seguem uma distribuio exponencial padro se o modelo for adequado. O grco das curvas
de sobrevivncia desses resduos, obtidas por Kaplan-Meier e pelo modelo exponencial padro, auxilia
na vericao do modelo ajustado, pois quanto mais prximas elas se apresentarem, mais adequado ser
o ajuste do modelo aos dados; e (c) Critrio de Informao de Akaike (AIC) e valor objetivo da funo
de log-verossimilhana, para auxlio na escolha de modelos. Ser adotado para a escolha do modelo
aquele que tenha menor valor de AIC e maior valor de log-verossimilhana.
Uma forma de obter interpretao foi proposta por HOSMER AND LEMESHOW (1999), fazendo
uso de tempos medianos. Ao considerar uma covarivel binria, a razo de tempos medianos

t0,5 (x = 1, )

= e

t0,5 (x = 0, )

(5)

Essa forma de interpretao pode ser estendida para covariveis categricas e contnuas, as quais so
representadas por meio de variveis indicadoras.
3

MATERIAIS E MTODOS

Um experimento fatorial foi realizado com frutos de pssegos sadios e esterilizados para obter informaes sobre o tempo at o aparecimento dos sintomas causados pelo fungo Colletotrichum gloeosporioides, o qual pertence famlia de causadores da doena antracnose.
Censura
Falha

G
G

21 C
Com Ferimento
5
4
3
2
1

G
G
G
G

G
G
G

Pssegos

23 C
Sem Ferimento

G
G
G

G
G

G
G

5
4
3
2
1

10

G
G

25 C
Com Ferimento

25 C
Sem Ferimento

G
G

G
G

G
G
G

27 C
Com Ferimento
5
4
3
2
1

21 C
Sem Ferimento

23 C
Com Ferimento
5
4
3
2
1

27 C
Sem Ferimento

G
G
G

G
G

10

Dias

Figura 1: Grco de falhas e censuras do evento tempo at o aparecimento dos sintomas da doena
antracnose, em temperatura gradativa, utilizando frutos feridos e no feridos na casca

O experimento foi conduzido no Laboratrio de Epidemiologia e Manejo Integrado de Doenas LEMID do Departamento de Fitotecnia e Fitossanitarismo - DFF, no Setor de Cincias Agrrias da
Universidade Federal do Paran - UFPR, em Curitiba, no primeiro semestre de 2014. O delineamento
foi inteiramente casualizado e considerou-se dois efeitos de interesse: graduao da temperatura (21, 23,
25 e 27 C sob constante umidade e fotoperodo) e a metodologia de ferir ou no a casca do fruto com
um palito de madeira esterilizado em, aproximadamente, 3 mm de profundidade.
Os frutos foram inoculados com disco de misclio (5 mm) de bordas de colnias cultivadas a 7 dias a
25 C sob fotoperodo de 12h, e acondicionados em estufas com temperaturas de 21, 23, 25 e 27 C sob
constante fotoperodo, com 5 repeties para cada temperatura, sendo que cada repetio foi constituda
por um fruto. Os frutos foram mantidos nessas condies para a vericao do tempo at a ocorrncia
da incubao da doena antracnose, a cada 24 horas de observao. Determinou-se que o experimento
encerraria-se no dcimo dia. Utilizou-se o software R verso 3.1.1 para realizar as anlises dos dados (R
DEVELOPMENT CORE TEAM, 2009).
Por meio da Figura 1, observa-se que em cada categoria da varivel ferimento, o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose nas temperaturas consideras apresentaram comportamentos
parecidos, porm os frutos com ferimento aparentam ter menor perodo de incubao do que o dos
frutos sem ferimento. Ainda, houveram apenas 3 censuras no experimento, nos frutos sem ferimento,
que podem ter vindo a ocorrer devido ao experimento ter encerrado antes da vericao do perodo de
incubao da doena nesses frutos.
4

RESULTADOS

1.0

1.0

1.0

Como uma ferramenta auxiliar na escolha do modelo de regresso adequado, foi inicialmente ignorada a presena de covariveis nos modelos exponencial, Weibull e log-normal e comparados com a
funo de sobrevivncia por Kaplan-Meier. O modelo mais adequado aquele cuja curva de sobrevivncia mais se aproxima dos valores obtidos pelo estimador de Kaplan-Meier, conforme Figura 2.
G

0.8

0.8

0.8

0.6

0.6

0.4

S(t): lognormal

0.4

S(t): Weibull

0.6

0.4

S(t): exponencial

0.2

0.2

G
G

0.0

0.0
0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

0.0

G
G

0.0

0.2

G
G
G

0.2

S(t): KaplanMeier

0.4

0.6

0.8

1.0

0.0

S(t): KaplanMeier

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

S(t): KaplanMeier

Figura 2: Grcos das funes de sobrevivncia estimadas por Kaplan-Meier versus as funes de sobrevivncia estimadas pelos modelos exponencial, de Weibull e log-normal

Modelo
1
2
3

Distribuio
Exponencial
Weibull
Log-normal

Log-Verossimilhana
-89,76
-85,37
-79,42

AIC
181,53
174,74
162,85

Tabela 1: Valores de AIC e de Log-verossimilhana dos modelos Exponencial, Weibull e Log-normal

Aparentemente, os modelos exponencial e log-normal so candidatos a serem os modelos escolhidos.

10

0.8
0.6
0.4
0.0

0.2

0.4
0.2
0.0
0

KaplanMeier
Lognormal

S(t)

0.6

0.8

KaplanMeier
Weibull

S(t)
0.0

0.2

0.4

S(t)

0.6

0.8

KaplanMeier
Exponencial

1.0

1.0

1.0

O tamanho da amostra e as repeties so certamente a principal razo de no ter havido discriminao

entre os modelos exponencial e log-normal.
Pelo critrio de informao de Akaike (AIC) optou-se pelo modelo log-normal, pois o modelo que
apresentou menor AIC, alm de apresentar maior log-verossimilhana, conforme os resultados dispostos
na Tabela 1. Ainda, sobrepondo os modelos exponencial, Weibull e log-normal sobre a curva estimada
por Kaplan-Meier, observa-se que, pela Figura 3, o modelo log-normal a curva mais prxima a da
estimada por Kaplan-Meier.

Tempos

10

Tempos

10

Tempos

Figura 3: Curvas de sobrevivncia estimadas pelos modelos exponencial, Weibull e log-normal versus a
curva de sobrevivncia estimada por Kaplan-Meier
Logo, o modelo de sobrevivncia para o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose
(t) condicional as covariveis ferimento (X1 ) e temperatura (X2 ), expresso pela equao do modelo
log-normal (4). Assim, com base no modelo log-normal, ajustou-se desde o modelo mais simples at
aquele que considerasse o efeito de interao entre as covariveis ferimento e temperatura, conforme a
Tabela 2.
Modelo
1
2
3
4
5

Covariveis no modelo
Nenhuma
X1
X2
X1 e X2
X1 , X2 e X1 X2

Log-verossimilhana
-79,42
-73,93
-79,38
-73,88
-72,58

AIC
162,85
153,86
164,76
155,75
155,16

Tabela 2: Valores de AIC e de Log-verossimilhana de modelos log-normais propostos para ajustar o

tempo at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose
Analisando a Tabela 2, pelo valor de AIC, verica-se que apenas o ajuste com o modelo 2 melhor
em relao aos demais modelos propostos, embora o modelo 2 tenha log-verossimilhana muito prxima
a do modelo 4, diferindo-se apenas nas ltimas casas decimais. Na Tabela 3 encontra-se as estimativas
obtidas pelo ajuste. Por meio dessa tabela, verica-se que o efeito de ferimento signicativo no modelo,
ao nvel de signicncia de 5%.
Intercepto
Sem Ferimento
log()

Estimativa
0,86
0,63
-0,59

Erro padro
0,12
0,18
0,12

valor z
6,95
3,53
-4,94

p-valor
0,00
0,00
0,00

Tabela 3: Valores estimados para o modelo ajustado

1.0

A anlise global do ajuste foi realizada com base nos grcos de resduos dispostos na Figura 4.
KaplanMeier
Exponencial(1)

0.6

G
G

0.4

S(res): Exponencial(1)

0.6
0.4

G
G

0.2

0.2

S(res) estimada

0.8

0.8

0.0

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

0.2

Resduos

0.4

0.6

0.8

S(res): KaplanMeier

Figura 4: Anlise dos resduos de Cox-Snell do modelo de regresso log-normal para o tempo at o
aparecimento dos sintomas da doena antracnose

1.0

ei )KM ) representa o comportamento de um modelo exponencial padro

Nota-se na Figura 4 que (S(
ei )Exp ) e o grco dos pares de pontos (S(
ei )KM , S(
ei )Exp ) tendem a formar uma reta. Assim, esses
(S(
grcos evidenciam a adequao do ajuste pelo modelo de regresso log-normal.
O grco do modelo de sobrevivncia para o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena
antracnose (t) condicional a covarivel ferimento (X1 ), ajustado pelo modelo de regresso log-normal,
est representado na Figura 5, e sobrepe a curva de sobrevivncia estimada por Kaplan-Meier.

0.6
0.4
0.0

0.2

S(t) estimada

0.8

Com ferimento
Sem ferimento
Modelo lognormal

10

Tempo (dias)

Figura 5: Grco de sobrevivncia estimada por Kaplan-Meier com curva de ajuste do modelo de regresso log-normal.
A m de comparar as curvas de sobrevivncia para o tempo at o aparecimento dos sintomas da
doena antracnose, considerando o efeito dos dois nveis da covarivel ferimento (X1 ), a hiptese inicial
do teste logrank que curvas de sobrevincia para o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena
antracnose no fruto sem ferimento igual a do fruto com ferimento versus a hiptese de que essas curvas
diferem signicativamente entre si. Obteve-se para a estatstica de teste o valor 11,4 e um p-valor de

0,000735. Isto fornece evidncias para a rejeio da hiptese inicial, ou seja, verica-se que as curvas de
sobrevincia para o tempo at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose no fruto sem ferimento
signicativamente diferente da curva do fruto com ferimento.
possvel ainda fazer a interpretao dos coecientes do modelo em termos de razo de tempos
medianos, ou seja,

t0,5 (Sem ferimento, )

= e1 = e0,626 = 1, 87
(6)

t0,5 (Com ferimento, )

ou seja, o tempo mediano at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose nos pssegos sem
ferimento , aproximadamente, 1,9 vezes ao dos pssegos com ferimento.
5

CONCLUSES

A anlise do tempo mediano at o aparecimento dos sintomas da doena antracnose importante para
quanticar a patogenicidade e agressividade do patgeno, sendo que a patogenicidade tem a ver com a
incidncia da doena e a agressividade, com a severidade. Conhecendo o perodo de incubao de uma
doena, ou seja, quanto tempo aps a instalao do patgeno levar para o aparecimento dos primeiros
sintomas, possvel denir um manejo de controle da mesma.
Por meio da anlise, vericou-se que o efeito de temperatura no foi signicativo, evidenciando que
o patgeno tem comportamento parecido no intervalo de temperatura de 21 a 27o C, sendo signicativo
apenas o efeito de ferimento. Ainda, aps o ajuste com o modelo log-normal, os frutos feridos apresentaram menor sobrevivncia do que os no feridos, isso signica que deve-se evitar injrias nos frutos do
pomar e naqueles j colhidos, pois o ferimento pode antecipar o aparecimento de antracnose, causada
pelo fungo Colletotrichum gloeosporioides.
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