Un mecanismo por el cual la dieta

Grasas Trans Causa La aterosclerosis *

Abstracto
Las grasas trans en la dieta han sido causalmente relacionado con la
aterosclerosis, pero el mecanismo por el que causan la enfermedad siendo
difcil de alcanzar. Supresin de respuesta TGF- en el endotelio de la aorta se
ha demostrado que desempean un papel importante en la patognesis de la
aterosclerosis en los animales con hipercolesterolemia. Se investigaron los
efectos de una dieta alta en grasas trans (TF) en la capacidad de respuesta
TGF- en el endotelio de la aorta y la integracin de colesterol en los
tejidos. Aqu nos muestran que los ratones normales alimentados con una dieta
alta en TF durante 24 semanas exhibir lesiones aterosclerticas y suprimen la
capacidad de respuesta TGF- en el endotelio artico. La capacidad de
respuesta de TGF- suprimida se evidencia por una marcada reduccin de la
expresin de TGF- de tipo I y II receptores y profundamente disminucin de
los niveles de P-Smad2, un importante indicador de TGF--respuesta, en el
endotelio artico. Estos ratones presentan una mayor integracin en gran
medida del colesterol en las membranas plasmticas de los tejidos. Estos
resultados sugieren que las grasas trans en la dieta causa la aterosclerosis, al
menos en parte, por la supresin de la capacidad de respuesta TGF-. Este
efecto es probablemente mediada por el aumento de la deposicin de
colesterol en las membranas plasmticas celulares en el tejido vascular, como
en la hipercolesterolemia.
Palabras clave: las grasas trans, colesterol, endotelio artico, suprimi la
capacidad de respuesta de TGF-, la aterosclerosis

Introduccin

Las grasas trans se componen de -cidos trans (AGT), que son los
estereoismeros de los cis origen natural -fatty cidos (CFA). Se producen
industrialmente durante la hidrogenacin de aceites insaturados a travs de un
proceso llamado "endurecimiento"; ( 1 ). Este proceso reduce la mayor parte de
los dobles enlaces en restos de cidos grasos insaturados de los aceites pero
isomeriza algunos de los dobles enlaces cis a una configuracin trans, dando
como resultado una estabilidad mejorada, una vida til ms larga y la
adquisicin de tctil deseable, las propiedades funcionales y sensoriales
( 2 ). Pequeas cantidades de cidos grasos trans de origen natural tambin se
pueden encontrar en varios alimentos de origen natural y se forman en el
rumen de los animales poligstricos tales como ganado vacuno, ovejas y
cabras. Esto es debido al metabolismo bacteriano normal de cidos grasos

insaturados que se produce en el rumen ( 1 ). Grasas trans industriales son

ampliamente utilizados para producir una variedad de alimentos, incluyendo
margarinas, galletas, pastas, aderezos para ensaladas y aceites de cocina
( 2 ). Se ha estimado que las grasas trans pueden comprender 4-12% de la
grasa de la dieta, que es equivalente a 2-4% de la ingesta total de caloras, en
los EE.UU. ( 3 , 4 ).TFAs se sabe que estn incorporados en las lipoprotenas del
plasma y en las membranas celulares de diversos tejidos, incluyendo endotelio
artico ( 5 - 11 ). TFA incorporacin en las membranas celulares es
directamente proporcional a los niveles de Factor de Tejido de la dieta
( 8 - 11 ). Una alta concentracin de grasas trans en la dieta humana est
ligada a una variedad de trastornos y enfermedades, en particular la
aterosclerosis ( 12 ). Los mecanismos por los que las grasas trans causan la
aterosclerosis y otras enfermedades siendo difcil de alcanzar ( 13 ).
Factor de crecimiento transformante- (TGF-) es una familia de 25-kDa
protenas dimricas unidas por puentes disulfuro que tiene tres miembros en
mamferos (TGF-beta 1-3) ( 14 ). Es una citocina pleiotrophic y sus actividades
biolgicas incluyen la regulacin del crecimiento, el control de la quimiotaxis y
la regulacin de la sntesis y la deposicin de protenas de matriz
extracelular. TGF- se ha implicado en muchos procesos fisiolgicos y
patolgicos ( 14 ). La acumulacin de pruebas indica que el TGF- en la
circulacin protege contra la aterosclerosis ( 15 - 22 ). Recientemente, hemos
encontrado que la capacidad de respuesta suprimida TGF- en el endotelio de
la aorta juega un papel importante en la patognesis de la aterosclerosis en los
animales hipercolesterolmicos ( 23 , 24 ). Una alta concentracin de colesterol
en el medio de cultivo suprime la capacidad de respuesta TGF- en clulas
cultivadas, incluyendo las clulas endoteliales, causando acumulacin de
complejos de receptores TGF--TGF-beta de la superficie celular en balsas
lipdicas / caveolae de la membrana plasmtica, lo que facilita una rpida la
degradacin de estos complejos, y por lo tanto la atenuacin de la sealizacin
de TGF- y las respuestas relacionados ( 23 , 24 ). Se cree que este efecto del
colesterol estar mediada por el aumento de la formacin de, o la estabilizacin
de, balsas de lpidos / caveolae, presumiblemente a travs de la integracin
directa de colesterol en las membranas plasmticas de las clulas diana
( 23 , 24 ). El colesterol es un componente estructural importante de los lpidos
balsas / caveolas. Esto implica que el aumento de la afinidad de las
membranas plasmticas de colesterol (debido a cambios en la composicin de
la membrana) puede resultar en una mayor integracin del colesterol en las
membranas plasmticas (incluso en ausencia de un nivel alto de colesterol en
el medio o plasma) y la supresin de las respuestas a TGF -. Fosfolpidos de la
membrana que contienen cidos grasos trans han demostrado tener una
mayor afinidad para el colesterol ( 4 , 11 ). La hiptesis de que las grasas trans
en la dieta puede causar aterosclerosis mediante la supresin de las respuestas
de TGF-beta en las clulas vasculares a travs de la incorporacin de cidos
grasos trans de la dieta derivados en los fosfolpidos de la membrana
plasmtica, con el consiguiente aumento de la integracin del colesterol en las

membranas plasmticas. En esta comunicacin, aportar pruebas para apoyar

esta hiptesis.

Resultados y discusin

El C57BL / 6 de ratn es un modelo animal estndar para el estudio de la

patognesis de la aterosclerosis ( 20, 21 ). Para estudiar el efecto de una dieta
de grasas trans en el desarrollo de la aterosclerosis, ratones machos (5-6
semanas de edad; 10 ratones por cada grupo experimental) fueron
alimentados con una dieta occidental con las grasas trans (dieta TF) que
contiene un 45% de las caloras de la grasa en forma de aceite vegetal
parcialmente hidrogenado, de los cuales aproximadamente el 30% era de
grasas trans (grasas trans TD06303 dieta personalizada, Teklad- Halen)
( 25 ). Los ratones de control (n = 10) fueron alimentados con comida para
roedores estndar que contiene un 13,6% de las caloras de la grasa (dieta de
control). Despus de 16 o 24 semanas, se sacrificaron los ratones tratados con
TF-dieta y la dieta control. Otro grupo de ratones (n = 10) alimentados con la
dieta TF durante 16 semanas se alimentaron con la dieta de control durante 8
semanas adicionales, y luego se sacrific. Tejidos (plasma, corazones, hgados
aortas, y) se retiraron de los animales para el anlisis de transferencia
bioqumicas, histolgicas y occidental. Despus de 16 semanas, los ratones
alimentados con la dieta TF ganaron ms peso corporal en comparacin con los
alimentados con la dieta de control (37,2 3,2 g frente a 28,4 2,4 g en la
dieta TF vs. dieta de control). los niveles plasmticos de colesterol total fueron
65% mayor en los ratones alimentados con la dieta TF que los alimentados con
la dieta control (131 13 frente a 80 6 mg / dl; p <0,05). Sin embargo, los
niveles de triglicridos en plasma fueron similares en ambos grupos (59 8
frente a 61 14 mg / dl en la dieta control frente a la dieta TF).
Suprimido la capacidad de respuesta de TGF- en animales causada por un
nivel alto de colesterol en plasma se caracterizan por una baja relacin de 125ITGF-
vinculante para el tipo II de TGF- del receptor (TR-II) comparado
con 125 de unin-TGF- para el receptor de tipo I de TGF- (TR-I) (TR-II / TR-I
de unin) tal como se determina por medio del etiquetado de afinidad 125 I-TGF del endotelio artico y por la expresin atenuada de fosforilados Smad2 (PSmad2) en el mismo tejido ( 23 , 24 ). Una proporcin baja de TR-II / TR-I de
unin indica que el complejo receptor de TGF--TGF- se acumula
predominantemente en las balsas de lpidos / caveolae de la membrana
plasmtica. Esta media la degradacin rpida de complejos de receptores TGF-TGF-beta despus de la unin a los receptores de TGF- TGF-, lo que resulta
en la atenuacin de la sealizacin de TGF- y las respuestas de aguas abajo
( 23 , 24 , 26 - 30 ). Smad2 es una molcula de sealizacin importante dirigir
la respuesta celular TGF-beta estimulada ( 31 , 32 ). La fosforilacin de Smad2
por TR-I en el TR-ITR-II heterocomplejo estimulada por TGF- conduce a
efectos aguas abajo tales como la formacin y la translocacin de trimricas

Smad2 / 3/4 complejos al ncleo, que conduce a la regulacin de la expresin

de TGF- genes de respuesta ( 31 , 32 ).
Como se muestra en la Fig. 1A , los ratones alimentados con una dieta TF
durante 24 semanas mostr una baja relacin (0.95) de TR-II / TR-I de unin
como se determina por 125 I-TGF- de marcaje por afinidad del endotelio artico
en comparacin con la relacin (2.79) de TR -II / TR-I unin encontrado en los
ratones alimentados con la dieta de control para el mismo perodo de tiempo
(panel a, carril 2 vs carril 1 y el panel b). Curiosamente, la baja relacin de TRII / TR-I de unin podra ser normalizada a la de los ratones alimentados con la
dieta de control durante 24 semanas cuando los ratones alimentados con la
dieta TF durante 16 semanas se les dio la dieta de control durante 8 semanas
adicionales (la TF grupo de dieta de control en el panel a, carril 3 frente al
grupo de dieta de control en el panel a, carril 1 y el panel b). Los ratones
alimentados con la dieta TF durante 16 semanas mostr una relacin (~ 1,0)
de TR-II / TR-I de unin que era casi idntica a la encontrada en los ratones
alimentados con la dieta TF durante 24 semanas.(datos no mostrados). Para
definir mejor las consecuencias funcionales de la baja proporcin de TR-II /
TR-I vinculante en los ratones alimentados con la dieta del TF, se realiz un
anlisis de transferencia Western de TR-I, TR-II, p-Smad2 y VCAM-1 en la
aorta
endotelio. P-Smad2
es
un
indicador
de
TGF--respuesta
( 14 , 31 , 32 ). VCAM-1 es un marcador de lesiones tempranas de la
aterosclerosis ( 23 , 24 , 33 ).Como se muestra en la figura 1B , los ratones
alimentados con una dieta de control durante 24 semanas tena una relacin
(2: 1) de la protena TR-II en comparacin con la protena TR-I (TR-II /
protena TR-I) en el endotelio de la aorta (Panel A , carril 1), que es similar a la
relacin de TR-II / unin en el mismo tejido TR-I. Los ratones alimentados con
una dieta TF durante 24 semanas mostraron notablemente la reduccin de
expresin de TR-I y TR-II (a ~ 10% y ~ 5%, respectivamente, de los de los
ratones alimentados con una dieta de control) (panel A, carril 2 y el panel
b ). La proporcin de protena TR-II / TR-I en el endotelio de la aorta de los
ratones alimentados con la dieta TF durante 24 semanas se estim en ~ 0,9
(panel A, carril 2 y el panel b) que es muy similar a la de TR-II / TR-I de unin
como se determina por 125marcaje por afinidad I-TGF-. Los niveles de protena
P-Smad2 en el endotelio de la aorta de los ratones alimentados con la dieta TF
eran demasiado bajo para ser detectado (<3% de los encontrados en los
ratones alimentados con la dieta de control) (panel A, carril 2), en contraste
con los niveles significativos (~ 10%) de P-Smad2 que se detectaron en los
ratones alimentados con la dieta de control durante 8 semanas despus de la
dieta TF 16-semanas (panel a, carril 3 y el panel b). Los niveles relativos de la
protena total Smad2 en los ratones alimentados con diferentes dietas para un
total de 24 semanas, que se determinaron mediante anlisis cuantitativo
Western blot ( 23 , 24 ), fueron muy similares (datos no mostrados). La dieta de
24 semanas TF aument VCAM-1 de expresin por ~ 4 veces en comparacin
con la de los ratones alimentados con la dieta de control (panel a, carril 2 y el
panel b), correspondiente a las lesiones aterosclerticas significativas
encontradas en los ratones alimentados con la dieta TF. En los ratones

alimentados con la dieta de control durante 8 semanas adicionales despus de

16 semanas de la dieta TF, el endotelio artico exhiben una mayor expresin
de los niveles de protena TR-I y TR-II con una relacin de protena TR-II /
TR-I de ~ 2,2 ( Panel a, carril 3 y el panel b) que era muy similar a la relacin
(2.38) de TR-II / TR-I de unin como se determina por 125 marcaje por afinidad
I-TGF- en el endotelio artico de estos ratones. Sin embargo, los niveles de
protena TR-I y II-TR no eran completamente normalizado para el control de
la dieta-niveles en estos ratones. Los niveles de protena TR-I y TR-II fueron
~ 10% y ~ 6% de los niveles de control de la dieta en los ratones alimentados
con dieta (durante 24 semanas) TF y el aumento de ~ 35% y ~ 45% de los
niveles de control, respectivamente, en ratones alimentados con una dieta TF
durante 16 semanas, seguido de una dieta de control durante 8 semanas
(panel a, carril 3 y el panel b). Curiosamente, los niveles de VCAM-1 se
redujeron notablemente de la elevacin de 4 veces en los ratones alimentados
con TF-a 1,3 veces por encima del control en ratones cambiado a una dieta de
control despus de la dieta TF (panel b). El cambio a la dieta de control
tambin aument el nivel de P-Smad2 desde el nivel no detectable (<3%) (en
los ratones alimentados con la dieta TF durante 24 semanas) a ~ 10% del nivel
en ratones alimentados con una dieta de control (panel a, carril 3 y el panel b)
cuando el nivel de P-Smad2 en los ratones alimentados con la dieta de control
durante 24 semanas fue tomada como el 100%. Este aumento ~ 10% pareca
ser suficiente para disminuir notablemente el nivel de VCAM-1 a partir de 4
veces a 1,3 veces en el endotelio de la aorta de los ratones cambiado a la dieta
de control durante 8 semanas.
Para el anlisis de las lesiones aterosclerticas en ratones alimentados con una
dieta TF y una dieta de control, tambin se realiz un anlisis histolgico
despus de la fijacin de formaldehdo y hematoxilina y eosina (H & E) tincin
de secciones de tejido de corazn y la aorta. Como se muestra en la Fig. 2 , las
vlvulas del corazn y de la aorta en los ratones alimentados con la dieta TF
exhibi lesiones tempranas tpicos de la aterosclerosis mientras que los ratones
alimentados con la dieta control tuvo morfologa normal en estos dos tejidos
( Fig. 2B y 2D vs. Fig. 2A y 2C ). Espuma clulas acumulacin y proliferacin
fibro-intimal se encontraron en las vlvulas del corazn y de la aorta,
respectivamente, en todos los ratones alimentados con la dieta TF ( Fig. 2B y
2D vs. Fig. 2A y 2C ). Estos resultados tambin apoyan la hiptesis de que la
baja relacin de TR-II / TR-I de unin, lo que refleja la localizacin
predominante de TR-I y TR-II en las balsas de lpidos / microdominios
caveolae de la membrana plasmtica, en el endotelio de la aorta es una
excelente indicador de la susceptibilidad a la aterosclerosis ( 23 , 24 , 26 , 27 ).
La hiptesis de que las membranas de tejidos procedentes de ratones
alimentados con una dieta TF tendra una alta afinidad para el colesterol, lo
que lleva a una mayor integracin de colesterol. Al igual que en las clulas
cultivadas en un medio con un nivel de colesterol alto ( 23 , 24 ), esto puede
resultar en el aumento de la formacin de, o la estabilizacin de, balsas de
lpidos / caveolae en las membranas de plasma, la acumulacin de TR-I y TRII en las balsas de lpidos / caveolae, balsa de lpidos / caveolae mediada por la

degradacin rpida de los receptores de TGF- despus de la unin a estos

receptores TGF-, y posterior suprimi la capacidad de respuesta TGF- en las
clulas vasculares y otros tipos de clulas. Para probar esta hiptesis e
investigar la reversibilidad del efecto de grasas trans, se determin la cantidad
total de colesterol en el hgado y el corazn de los ratones alimentados con una
dieta TF o una dieta de control durante 16 semanas y en los hgados de los
ratones alimentados con una dieta de control y una dieta TF durante 24
semanas o alimentados con una dieta de control durante 8 semanas despus
de una dieta TF durante 16 semanas. La razn para el anlisis de estos dos
rganos es que los corazones e hgados proporcionan suficiente tejido para la
determinacin cuantitativa de colesterol. Como se muestra en la Fig. 3 , se
produjo un aumento pliegue ~ 2,0 en el contenido de colesterol en el corazn y
el hgado de los ratones alimentados con una dieta TF en comparacin con los
ratones alimentados con una dieta de control a las 16 semanas ( Fig. 3Ay la Fig.
3C , respectivamente). El contenido de colesterol aumentado volvi a los
valores de control cuando los ratones recibieron la dieta de control durante 8
semanas adicionales ( Fig. 3B ). Dado que los tejidos analizados no fueron
perfundidos antes del anlisis, el aumento del contenido de colesterol
detectado puede ser debido en parte a colesterol libre en la sangre y el tejido
de la matriz extracelular, pero no el colesterol asociado a membrana. Para
probar esta posibilidad, purificamos membranas plasmticas de los hgados de
estos ratones y se determin el contenido de colesterol de las membranas
plasmticas purificadas. Como se muestra en la Fig. 3D , la dieta TF aumento
del colesterol asociado a la membrana plasmtica por ~ 4 veces en
comparacin con el grupo de dieta de control a las 16 semanas. Estos
resultados sugieren que las membranas plasmticas cosechadas despus de la
alimentacin dieta TF poseen mayor afinidad por el colesterol que los
derivados de una dieta de control que contiene -cidos grasos
principalmente cis.
Aqu se demuestra que los ratones alimentados con una dieta TF haber
suprimido la capacidad de respuesta de TGF- y el desarrollo de lesiones
aterosclerticas en el endotelio artico. Supresin de respuesta TGF- en el
endotelio de la aorta se acompaa de una baja relacin de TR-I / TR-II de
unin, lo que indica que estos receptores se acumulan predominantemente en
lpidos balsa / caveolae, causando balsa de lpidos / rpida degradacin
caveolae mediada de TGF complejos de -TGF- del receptor, y la eventual
baja regulacin de la expresin de P-Smad2 ( 23 , 24 , 26 - 30 ). Las lesiones
aterosclerticas en ratones alimentados con una dieta TF van acompaados de
un gran aumento en la expresin de VCAM-1. La expresin VCAM-1 causada por
la dieta TF es en realidad mayor que la encontrada en los ratones ApoE nulo
hipercolesterolmicos (~ 4 veces vs ~ 1,7 veces) ( 23 , 24 ). Los ratones
normales o de tipo salvaje alimentados con una dieta TF y los ratones ApoEnulos hipercolesterolmicos exhibir baja regulacin de TR-II (a ~ 5% de lo
normal y ~ 40% de lo normal, respectivamente, en comparacin a la de los
ratones
normales
alimentados
con
una
dieta
de
control
)
( 23 , 24 ). Curiosamente, los niveles de TR-I en ratones alimentados con una

dieta normal de TF tambin se reducen en gran medida (a ~ 10% con respecto

a la de los ratones normales alimentados con una dieta de control). Por el
contrario, los niveles de TR-I no se alteraron significativamente en los ratones
ApoE-nulos hipercolesterolmicos en comparacin con los de los ratones
alimentados con una dieta normal de control ( 23 , 24 ). Estos resultados
indican que la dieta TF en ratones de tipo salvaje parece suprimir la capacidad
de respuesta TGF- con ms fuerza que la hipercolesterolemia en ratones
ApoE-nulos como lo demuestra notablemente disminucin de los niveles de
TR-I, TR-II y P-Smad2 de tipo salvaje ratones alimentados con una dieta TF
(en comparacin con los de los ratones ApoE nulo hipercolesterolmicos)
( 23 ). Sin embargo, las lesiones aterosclerticas en ratones de tipo salvaje
alimentados con una dieta TF son menos graves que los de los ratones ApoE
nulo con hipercolesterolemia como se evidencia por la alta expresin de VCAM1, un marcador de lesiones aterosclerticas tempranas, y el desarrollo de las
lesiones tempranas aterosclerticas en ratones alimentados con una dieta TF
( 23 , 24 ). Esto sugiere que otros factores tales como la lesin endotelial
continua por LDL de plasma de alta y / o los niveles de colesterol pueden
facilitar la progresin de la aterosclerosis en los animales hipercolesterolmicos
y que la combinacin de grasas trans en la dieta y la hipercolesterolemia se
amplificar los efectos sobre la progresin de la aterosclerosis y otras
enfermedades relacionadas . El laboratorio de Lichenstein ( 34 , 35 ) demostr
que el principal factor de riesgo para la enfermedad cardiovascular causada
por las grasas trans en la dieta es niveles de colesterol LDL y proporciones del
total / colesterol HDL-colesterol en el plasma. Sobre la base de estos
resultados, que postula que suprime la capacidad de respuesta de TGF- es un
primer paso importante en la progresin de la aterosclerosis causada por
hipercolesterolemia o grasas trans en la dieta. Esta hiptesis est apoyada por
nuestros recientes hallazgos que dynasore, un TGF- mimtica y potenciador,
no altera los niveles altos de colesterol en plasma, pero aminora efectivamente
aterosclerosis antagonizando la supresin inducida por el colesterol de la
capacidad
de
respuesta
de
TGF-
en
ratones
ApoE-nulos
con
hipercolesterolemia ( 36 ).
En base a los hallazgos en esta comunicacin, se propone un modelo ( Fig. 4 )
para ilustrar cmo la incorporacin de cidos grasos trans (por ejemplo, cido
eladico) en los fosfolpidos (posiblemente en syn-2) en los tejidos aumenta la
integracin del colesterol en la membrana plasmtica y la acumulacin de TRI y II-TR en balsas de lpidos / caveolas. En este modelo, la incorporacin de
cidos grasos trans (que se derivan de la dieta TF) en fosfolpidos aumenta la
afinidad de la membrana plasmtica de colesterol ( 37 , 38) y la formacin de,
o la estabilizacin de, balsas de lpidos / caveolae, facilitando la acumulacin
de TR-I y TR-II en este microdominios de membrana de plasma. Esto se
evidencia por una baja relacin de TR-II / TR-I unin observada en el
endotelio de la aorta de los ratones alimentados con una dieta TF. Por otra
parte, la incorporacin de cidos cis -fatty (CFA), que se derivan de la dieta
normal, en los fosfolpidos disminuye la formacin de, o desestabiliza, balsas
de lpidos / caveolae, lo que resulta en la acumulacin de TR-I y TR-II en la

no microdominios balsa -lipid. Esto se evidencia por una alta proporcin de

TR-II / I-TR unin encontr en el endotelio artico de ratones alimentados
con una dieta de control. En ausencia de cidos grasos trans en los fosfolpidos
de la endotelio artico en ratones alimentados con una dieta normal, TR-I y IITR acumular principalmente en microdominios balsa no lpidos y tienen una
alta proporcin de TR-II / TR-I de unin. La presencia de cidos grasos trans
en los fosfolpidos de ambos balsa / caveolas y no lipdicos micrdomains balsas
de lpidos puede causar inestabilidad de estos dos microdominios (en particular
el microdominios balsa lipdica / caveolas, debido a su alto contenido de cidos
grasos trans), lo que resulta en una rpida rotacin y la degradacin tanto de
los receptores de TGF-beta. Esto es apoyado por la evidencia de que
marcadamente disminucin de los niveles de ambos tipos de TR-I y TR-II se
encuentran en los ratones alimentados con una dieta TF en comparacin con
los ratones alimentados con una dieta control. El TR-I es relativamente
estable en ratones alimentados con una dieta alta en colesterol y sin grasas
trans ( 23 , 24 ), lo que sugiere que los receptores de TGF- localizados en
lpidos balsas / caveolae (que contienen TR-I> TR-II) son ms estables que
los localizados en microdominios balsa no lpidos (que contienen TR-II> TR-I)
en el endotelio artico de estos ratones hipercolesterolmicos ApoE nulo
( 23 , 24).
Nuestra demostracin de que la supresin de la capacidad de respuesta TGF-
(en el endotelio artico y posiblemente en otros tejidos) causada por las grasas
trans en la dieta es probable que tenga implicaciones importantes en otras
enfermedades relacionadas con TF-y trastornos. Por ejemplo, se ha postulado
que las grasas trans son cancergenos y tambin contribuyen a la enfermedad
autoinmune. Estos fenmenos podran ser debido a la supresin de la
respuesta celular de TGF- por las grasas trans en la dieta ya que el TGF- es
un supresor tumoral conocido y inmunosupresor ( 14 ).

Materiales y mtodos
animales

Las condiciones experimentales y (peso corporal, alimentos / consumo de agua

y el peso del hgado), bioqumica (triglicridos en plasma, colesterol, glucosa,
insulina, leptina, resistina, adiponectina y tPA niveles, pruebas de funcin
heptica y pruebas de tolerancia a la glucosa) fsicos y histolgico (hgado )
anlisis de ratones C57BL / 6 alimenta el alto de grasas trans (TF) y una dieta
normal (control) han sido publicados recientemente ( 25 ). En pocas palabras,
de cinco semanas de edad, de sexo masculino C57BL / 6 ratones (Harlan,
Indianapolis, IN) se alimentaron con una dieta TF similar a una dieta de comida
rpida occidental con el 45% de las caloras de la grasa en forma de aceite
vegetal parcialmente hidrogenado (trans- TD06303 grasa dieta personalizada,
Harlan Teklad, Madison, WI). El agua potable se ofrece como gel de agua, 2,8%
de gelatina en los platos en el suelo de la jaula que contiene el jarabe de 42 g /
l maz de alta fructosa (55% de fructosa y 45% de glucosa). Los ratones de

control fueron alimentados con comida para roedores estndar (dieta de

control) que contiene 13,6% de las caloras de la grasa en forma de aceite de
soja (15% saturada, 23% MUFA, AGPI 61%; 2018S, Harlan Teklad). Diez ratones
fueron utilizados en cada grupo experimental. Despus de 16 24 semanas de
alimentacin ad libitum, los ratones en ayunas durante 8 horas se sacrificaron
usando ketamina y xilacina anestesia. Para determinar si las anormalidades
inducidas por esta dieta fueron reversibles, un grupo de ratones (n = 10)
tratados con la dieta TF durante 16 semanas fueron devueltos a la dieta de
control durante otras 8 semanas y se compararon con los grupos de ratones o
bien mantenerse en la dieta TF o mantenimiento en la dieta de control para
todo el perodo de 24 semana.Corazones, aortas, la sangre y los hgados fueron
retirados para histolgico (hematoxilina y eosina), anlisis de transferencia
bioqumica y occidental. Las membranas plasmticas de los corazones y los
hgados se prepararon de acuerdo con procedimientos estndar.
Los anlisis bioqumicos

Los homogeneizados se prepararon por centrifugacin despus de la

homogeneizacin de los hgados y corazones extrados de los ratones
alimentados con dietas de control de TF y (a 1 g de hgado o corazn tejido / ml
de solucin salina tamponada con fosfato). Las membranas plasmticas de los
hgados y los corazones de los ratones alimentados con TF y control dietas
fueron purificados de acuerdo con procedimientos estndar. Contenido de
colesterol en homogeneizados de tejido, membranas de plasma y suero se
analizaron de acuerdo con procedimientos estndar utilizando un analizador
clnico calibrado (Cobas Mira Plus Analizador de la qumica (Roche Diagnostics,
Indianapolis, IN). Se realizaron anlisis histolgico de secciones de corazn y la
aorta como se describe ( 23 , 24 ). Las comparaciones estadsticas entre los
grupos se realizaron mediante ANOVA de una va seguido por procedimientos
mltiples comparaciones por pares post hoc.
Marcaje por afinidad 125I-TGF- y Western Blot anlisis del endotelio artico

El endotelio de las aortas de los ratones alimentados con una dieta TF (24
semanas), una dieta de control (24 semanas), o una dieta TF durante 16
semanas ms una dieta de control durante 8 semanas adicionales (TF dieta
control ) se prepararon (5 ratones por grupo experimental) y se someti
a 125 de marcaje por afinidad I-TGF- y anlisis de Western blot utilizando
anticuerpos a TR-I, TR-II, P-Smad2, Smad2, VCAM-1 y -actina, como se ha
descrito previamente ( 23 , 24 ). Los extractos endotelio artico se
caracterizaron por la presencia de factor VIII y ausencia de actina de msculo
liso -( 23 , 24 ).

Reconocimiento

Agradecemos a Frank E. Johnson, MD para la revisin crtica del manuscrito y

Cheng C. Tsai, MD para los anlisis histolgicos y Chris Mabes para escribir el
manuscrito

Notas al pie

Este trabajo fue apoyado por el NIH subvenciones HL 087463 (JSH) y AR

052578 (SSH), y por la concesin de St. Louis University hgado (BAN-T).
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