UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATAURALES

PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA
BIOQUIMICA VEGETAL

PRACTICA No. 9
METODO COLORIMETRICO PARA DETERMINAR CARBOHIDRATOS
EN MATERIAL VEGETAL

1. OBJETIVOS
1.1.Medir la absorbancia de glucosa por el mtodo de fenol/acido sulfrico
colorimtrico para cuantificar la concentracin de glucosa en muestras
acuosas.
1.2.Reconocer la importancia de la determinacin de carbohidratos en
productos vegetales a nivel de investigacin en poscosecha y
bioqumica vegetal.
2. FUNDAMENTO
El estudio de plantas con capacidad de ajuste osmtico cuando son sujetas
a condiciones de carencia de agua es importante en la agricultura. Para
llevar a cabo este tipo de investigacin se recurre a tcnicas como la
determinacin de potenciales de agua, osmtico, de turgencia y el anlisis
de contenido de molculas como prolina, sorbitol, glicina, betaina y
carbohidratos.
Los carbohidratos asi como las dems molculas citadas, se ha observado
que incrementan su concentracin en algunas especies de plantas que
poseen la habilidad de realizar ajuste osmtico, por lo que han sido
utilizados por varios autores como marcadores o indicadores de resistencia
a sequia.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
3.1.MATERIALES
Espectrofotmetro
Mortero y pistilo
Gradilla
10 tubos de ensayo
Pipetas de 1 mL
Beaker de 50 mL
Pipetas de 5 mL
Gasa
3.2.REACTIVOS
[H2SO4]
Solucin de glucosa 0.06 M
Solucin de Fenol 5% en agua
Muestra liquida problema con azucares (PROPORCIONADA POR LOS
ALUMNOS)
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Determinacin del contenido en carbohidratos.

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BIOQUIMICA VEGETAL

Preparar una solucin stock de glucosa 0.06 M y realizar la extraccin de la

muestra a analizar. Se toma 1 mL. del extracto crudo y se diluyen hasta 30
mL con agua destilada. Esta dilucin ser la muestra de la cual tomaremos
distintos volmenes, tal y como se indica en la siguiente tabla:
PRECAUCION: agitar tras la adicion del reactivo de fenol
Volumen (mL)
M1
M2
M3
Muestra
0.2
0.4
0.6
Agua
0.8
0.6
0.4
Fenol
0.5
0.5
0.5
Agitar
[H2SO4]
2.5
2.5
2.5
CURVA DE CALIBRACION
TUBO
Agua
Azucar
Fenol
Agitar
[H2SO4]
Tubo No.
1.0
0.0
0.5
Agitar
2.5
1
Tubo No.
0.75
0.25
0.5
Agitar
2.5
2
Tubo No.
0.5
0.5
0.5
Agitar
2.5
3
Tubo No.
0.25
0.75
0.5
Agitar
2.5
4
Tubo No.
0.0
1.0
0.5
Agitar
2.5
5
Esperar 30 minutos hasta el desarrollo del color anaranjado
Medir la absorbancia a 485 nm anotando este valor en la hoja de resultados.
Calcular el contenido en carbohidratos usando como coeficiente de
extincin 87.5 mM-1 cm-1 y expresar el contenido (masa) en relacin al
peso hmedo de material vegetal y al volumen de extracto crudo.
Conc. Carb. en el extracto (mg/m)= A485 x V
87.5

total

x10

5. RESUELVA LAS SIGUIENTES PREGUNTAS

5.1.Qu enuncia la Ley de Lambert-Beer?
5.2.Qu es absorbancia y tramitancia, cmo se determinan?
5.3.Cul es el principio de la colorimetra?