Manual de Microbiologia

MANUAL DE
PROCEDIMIENT
OS
MICROBIOLOGI
A
BERMANLAB
CENTRO DE
APOYO AL
DIAGNOSTICO SRL
CONTENIDO
Contenido
Introduccin
Antibiograma
Capacitacin Espermtica
Citoqumico y Cultivo de Lquidos
10
Coprocultivo
13
Coprocultivo funcional
15
Examen Directo y Cultivo de Hongos
17
Cultivo de Lquido Seminal
19
Cultivo de Secrecin
21
Cultivo de Secrecin Farngea
23
Cultivo de Secrecin Uretral
25
Cultivo de Secrecin Vaginal
27
Cultivo de Secrecin Prosttica
29
Test Hamburger
31
Espermatograma
33
Azcares Reductores (Benedict)
40
Examen de Prueba de Parche
42
Examen Directo de caros
43
Examen Directo de Bk
44
Examen Directo de Pneumocystis carinni
46
Examen Parasitolgico en Heces
48
Gota Gruesa (Identificacin de Malaria)
51
Hemocultivo
53
Identificacin de Bartonella
55
Identificacin de Leishmania
57
Investigacin de Cryptococcus
59
Orina Completa
60
Orina Completa +Gram sin Centrifugar
73
Tcnica de Faust: Mtodo de sedimentacin y flotacin por centrifugacin

con sulfato de zinc al 33,3% y densidad 1180
75
Proteinas de Bence Jones
77
Investigacin de Sangre Oculta (Thevenon)
79
Urocultivo
81
Examen directo de Cryptosporidium y otros Coccidios
83
Examen de Moco Fecal
85
Examen de Reaccin Inflamatoria
87
Cultivo de Esputo
89
Cultivo de BK
91
Sudn III
93
Referencias Bibliogrficas
94
INTRODUCCION
El laboratorio clnico de microbiologa moderno, requiere para su correcto funcionamiento de un adecuado

y constante control de calidad sobre todas las etapas en el recibo, manejo y reporte de especimenes
clnicos.
En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar metodologas relativas al cuidado
del paciente. En este contexto el control de calidad en Microbiologa Clnica envuelve el monitoreo de los
medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una adecuada
prctica en el aislamiento, identificacin y caracterizacin de agentes etiolgicos y su correspondiente
prueba de susceptibilidad como una gua de la terapia.
Un programa de control de calidad debe incluir adems un Manual de Procedimientos, validacin de
metodologas y equipos, el desarrollo de ciclos de educacin continuada, elementos de bioseguridad y
una supervisin sobre los reportes generados. En ste sentido se hace nfasis en la correcta valoracin
de las pruebas de laboratorio, los agentes causales de enfermedades, el conocimiento de la flora normal,
la taxonoma bacteriana y la interpretacin correcta de las pruebas de susceptibilidad a los antibiticos.
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo , que el producto final del trabajo tenga un grado
aceptable de seguridad , de conformidad con los limites establecidos. Debido a que la mayora de los
resultados en microbiologa son producto de interpretaciones y evaluacin de reacciones bioqumicas de
seres vivos, donde la capacidad y experiencia del evaluador tienen un gran valor, los clculos de
coeficientes de variacin y desviaciones estndares que son parte de funciones analticas, tienen poca
aplicacin en el laboratorio de microbiologa. Es por ello que algunos expertos consideran que el control
de calidad en microbiologa es mas un arte que una ciencia.
El control de calidad en resumen, es un elemento vital en el laboratorio, ya que ayuda en la confiabilidad
de las pruebas, su reproducibilidad, asegura la calidad de los materiales, reactivos y equipos empleados,
mejora la auto confianza del personal, detecta fallas que pueden reflejarse en el informe de resultados y
en general provee un entorno de excelencia en todos los aspectos del trabajo.
ANTIBIOGRAMA (ME-LB-MC-01 y 51)
1.
2.
METODO:
o
Kirby Bauer
MIC (Mnima Concentracin Inhibitoria) (MICROSCAN)
FUNDAMENTO DE LA PRUEBA:
Determinar los dimetros crticos de los gmenes ante los antibiticos con la finalidad de delimitar la
sensibilidad a estos y poder proporcionar una ayuda en el tratamiento antibitico al mdico y paciente.
3.
MATERIALES, EQUIPOS Y MUESTRAS:

MATERIALES:
o
Placas petri tamao 16 X 100
Paneles Microscan Combo NUC 55
Paneles Microscan Combo NC50
Paneles Microscan Combo PC33
TUBOS DE AGUA CON 3 ML.
TUBOS CON PLURONIC DE 25 ML.
BANDEJAS PARA MICROSCAN
COBERTORES PARA PLACAS DE MICROSCAN
PUNTAS AZULES DE 100 - 1000
Asa bacteriolgica
Lminas portaobjetos
Solucin salina estril
Agua destilada estril
Hisopos de algodn estriles
Pinza punta plana
Gradilla para tubos
Tubos estriles
Mechero bunsen
Medios de cultivo
EQUIPOS:
o
Microscopio
Incubadora
TURBIDIMETRO
LECTOR DE MICROSCAN (WALKAWAY)
MICROPIPETA RENOK
Estufa
Autoclave
MUESTRAS:
Cultivos con grmenes desarrollados a las 24 horas.
o
4.
PROCEDIMIENTO DEL TEST:

METODO KIRBY BAUER
El antibiograma establece la relacin de discos para diferentes bacterias o grupos bacterianos,
teniendo en cuenta criterios tcnicos para su determinacin in Vitro y su eficiencia clnica.

De una placa de cultivo con agar incubado por 18 a 24 horas, seleccionar colonias aisladas y
preparar una suspensin directa en solucin salina, ajustndola a la escala 0.5 Mc. Farland.
Dentro de los 15 minutos siguientes, sumergir u hisopo estril en la suspensin, rotar el hisopo
varias veces presionando firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del
lquido para remover el exceso de inculo.
Inocular la superficie de la placa de Muller Hinton o TSA (Gram +), estriando con el hisopo en
tres direcciones para asegurar una distribucin uniforme del inculo.

Antes de colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5 minutos
para que cualquier exceso de humedad sea absorbido.

Colocar los discos individuales sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza estril,
presionando suavemente sobre cada disco para asegurar el contacto completo con la superficie
del agar.
Distribuir los discos uniformemente, de modo que estn a distancia mnima de 25 mm uno del
otro. No deben de colocarse ms de 12 discos en una placa de 150 mm de dimetro interno,

para evitar la superposicin de las zonas de inhibicin. Un disco no debe ser removido una vez
que tom contacto con la superficie del agar debido a que algunos antibiticos se difunden
rpidamente.
o
Incubar las placas en posicin invertida a 35 C por 24 horas.
Examinar cada placa y medir los dimetros de los halos de inhibicin completa (incluyendo el
dimetro del disco) usando una regla o calibrador. Se debe mantener iluminada la parte posterior
de la placa petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centmetros sobre un fondo
negro.
Los dimetros de inhibicin son interpretados basndose en la tabla de sensibilidad.
La sensibilidad de las cepas sern reportadas como sensible (S), mediano o intermedio (M) o
resistente (R).
METODO POR MIC (Mnima Concentracin Inhibitoria)

El antibiograma establece diferente relacin de discos para grupos bacterianos, teniendo en
cuenta criterios tcnicos para su determinacin in Vitro y su eficiencia clnica, aplicando la

mnima concentracin inhibitoria as como su respectiva identificacin bioqumica.
Los paneles MICROSCAN con los que se cuentan son el Combo NUC55, Combo NC50 y
Combo PC33.
De una placa de cultivo con agar incubado por 18 a 24 horas, seleccionar 4 5 colonias grandes
bien aisladas y morfolgicamente similares, preparar una suspensin directa en un tubo con
inculo de agua de 3 ml., ajustndola a la escala 0.6 0.10 Mc. Farland en caso de
Enterobacterias, 0.10 0.12 en caso de Staphylococcus y Streptococcus y 0.7 -0.9 en caso de
Pseudomonas, as a la vez en una lmina con una gota de solucin salina hacer la identificacin
de la pureza del cultivo.
De la suspensin estndar con una pipeta inocular 100 ul al tubo con 25 ml de agua para
inculo con PLURONIC, tapar bien y homogenizar por inversin de 8 a 10 veces.

Verter el inculo de PLURONIC en las bandejas, para luego con el sistema RENOK rehidratar los
paneles respectivos, donde debe haber una concentracin final en pocillos de 3 7 x 10 5

UFC/ml., luego colocar la tapa protectora.
Introducir los datos de los pacientes en el programa LABPRO, en donde se codificar y por
resultado se obtendr un sticker con su respectivo cdigo de barras, el cual servir al equipo
para su identificacin y lectura del panel.
Colocar los paneles dentro del equipo WALKAWAY para su identificacin, lectura, dispensacin
del aceite mineral y posterior incubacin

Para la identificacin bioqumica del germen el equipo dispensa los reactivos necesarios para
cada panel y pasadas las 24 horas determina la identificacin del germen as como la lectura de
la sensibilidad y resistencia de los antibiticos por MIC expuestos en el panel.
Paralelament
o
5.
CALCULO DE RESULTADOS:
No aplica.
6.
VALORES DE REFERENCIA:
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Instituto Nacional de la Salud. 2002. Manual de Procedimientos para la Prueba de Sensibilidad
Antimicrobiana por el Mtodo de Disco Difusin. Serie de Normas. Tcnicas N 30. Lima Per.
Manual de Procedimiento para grmenes gram positivos y gram negativos. SIEMENS.
MICROSCAN
CAPACITACIN ESPERMATICA (ME-LB-MC-02)
1.
METODO:
"swim-up"
2.
Denominamos capacitacin espermtica al procesamiento de la muestra de semen que se realiza en el

laboratorio. Consiste en separar los espermatozoides del plasma seminal, concentrarlos y seleccionar
aquellos con las mejores caractersticas en cuanto a movilidad y morfologa.
3.
MATERIALES:
o
Cloruro de amonio al 25%.
EDTA al 5%.
Ortotolidina al0.1%.
Perxido de hidrgeno al 30 %.
Suero fisiolgico.
Medio HTF.
Agua destilada.
Micro pipetas automticas ajustables o predeterminadas para medir y distribuir 100 ul, a 1000 ul .
Tubos calibarados de 15 ml.de fondo cnicos estriles.
Tubos de vidrio de 16 x 100 estriles.
Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biolgico.
Puntas estriles.
Lminas y laminillas.
Pipetas Pasteur.
Pipetas plsticas.
Cmara de newbauer.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Cmara de flujo laminar.
Incubador fijado termostaticamente a 37 C+/- 1 C
Microscopio.
MUESTRA:
Liquido seminal.
o
4.

La recoleccin de la muestra se realiza por masturbacin y en forma asptica (previa higiene de
manos y genitales) y en un recipiente estril.

o
Incubar la muestra de semen a 37C por 30 minutos.
Colocar la muestra en tubo calibrado de 15 ml. de fondo cnico.
Evaluar las caractersticas fsicas (Ver espermatograma)
Depositar 0.9 ml. de solucin leucocitospermica en un tubo y agregar 100ul. de muestra de

semen (dilucin 1/10), incubar a 37C por 30 minutos.
Leer el nmero de espermatozoides y de leucocitos en la cmara de newbauer.
Depositar en una lmina una gota de la muestra de semen (sin diluir) para evaluacin pre
capacitacin de la movilidad.
Agregar suero fisiolgico a la muestra para el primer lavado (1/1), homogenizar con pipeta
Pasteur, tapar con papel parafinado y centrifugar a 2,500 rpm por 10 minutos.
Eliminar el sobrenadante y agregar 2 ml. del medio HTF, homogenizar y tapar con papel
parafinado, centrifugar a 2,500 rpm por 7 minutos.

o
Eliminar el sobrenadante. Dejar solo el sedimento que queda adherido al fondo del tubo.
Agregar el medio HTF hasta completar 2 2.5 ml., lentamente, con el tubo inclinado a 45C , a
travs de las paredes, sin mover el sedimento e incubarlo en la estufa, manteniendo la
inclinacin de 45C ,a 37C por una hora.
Transvasar con micropipeta 0.7 ml. de la nube que esta inmediatamente por encima del
precipitado, sin que sta haya llegado a la superficie. Esto representa los espermatozoides
capacitados que estn nadando a la superficie. Incubar hasta entregar al paciente.
Depositar una gota de los 0.7 ml. de la muestra capacitada para evaluar movilidad y nmero post
capacitacin.
5.
No aplica.
6.
Superior a 3 millones de espermatozoides mviles/ ml.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Organizacin Mundial de la Salud, 2001. Manual de laboratorio de la OMS para el Examen del
Semen Humano y de la Interaccin entre el Semen y el Moco Cervical. 4 a Ed. Edit. Mdica
Panamericana. Madrid Espaa.
Vanrell, J.; J. Calaf; J. Balasch; P. Viscasillas. 1999. Fertilidad y Esterilidad Humanas. Tomo I. 2 a
Ed. Edit. Masson. S.A. Barcelona Espaa.
CITOQUIMICO Y CULTIVO DE LIQUIDOS (ME-LB-MC-03, 07,08, 09, 10 y 12)
1.
2.
METODO:
o
Exmen Directo
Siembra directa
Su anlisis est basado para encontrar los diversos procesos patolgicos que originan cambios en los
lquidos, y que sirva de pieza clave en el diagnstico.
3.
MATERIALES:
o
Tubos de 13 x 100
Solucin Turck
Solucin salina
Lminas y laminillas
Gotero
Indicador de ph
Cmara Newbauer
Reactivo de Rivalta
Reactivo Pandy
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
10
Medios de cultivo
EQUIPOS:
o
Analizador hematolgico
Analizador bioqumico
Centrifuga
Microscopio
MUESTRAS:
4.
Lquido Pleural
Lquido Sinovial (Articular)
Lquido Ascitico
Lquido Cefalorraquideo
Lquido Amnitico
CARACTERISTICAS FISICAS:
VOLUMEN: Min. 3.0 ml en frasco estril con anticoagulante.
COLOR:
NORMAL
PATOLOGICO
LIQUIDO
LIQUIDO
LIQUIDO
LCR
LIQUIDO
PLEURAL
Amarillo claro
SINOVIAL
Incoloro o
ASCITICO
Amarillo claro
Cristal de roca
AMNIOTICO
Amarillo claro
ligeramente
a pajizo
amarillo
Hemtico o
Hemtico o
Amarillo o
Hemtico o
hemorrgico
hemorrgico
xantocrmico
Hemtico o
hemorrgico
Amarillo
anaranjado
Amarillo
verdoso
Hemtico o
hemorrgico
hemorrgico
ASPECTO:
NORMAL
PATOLOGICO
11
LIQUIDO
LIQUIDO
LIQUIDO
LCR
LIQUIDO
PLEURAL
Transparente
Lig. Turbio o
SINOVIAL
Transparente
Lig. Turbio o
ASCITICO
Transparente
Turbio o
Transparente
Lig. Turbio
AMNIOTICO
Transparente
Lig. Turbio
Turbio
Purulento
Lechoso
Turbio
purulento
Hemorrgico
Hemorrgico
DENSIDAD:
NORMAL
PATOLOGICO
LIQUIDO
LIQUIDO
LIQUIDO
LCR
LIQUIDO
PLEURAL
< 1.014
> 1.016
SINOVIAL
1.008 1.015
Aumentada
ASCITICO
< 1.016
> 1.016
LIQUIDO
LIQUIDO
LIQUIDO
LCR
LIQUIDO
PLEURAL
Ausente
Presente
SINOVIAL
Ausente
Presente
ASCITICO
Ausente
Presente
Ausente
Presente
AMNIOTICO
Ausente
Presente
AMNIOTICO
COAGULO:
NORMAL
PATOLOGICO
RECUENTO CELULAR:
LIQUIDO
LIQUIDO
LIQUIDO
LCR
PLEURAL
SINOVIAL
ASCITICO
NORMAL
Leucocitos
<1,000/
10 200/
< 300/ mm3
< 5/mm3
PATOLOGICO
Leucocitos
mm3
Aumentada
mm3
Aumentada
Aumentada
Nios: 20 30/mm3
Aumentada
LIQUIDO
AMNIOTICO
CARACTERISTICAS QUIMICAS:
NORMAL
PATOLOGICO
5.
LIQUIDO
LIQUIDO
LIQUIDO
LCR
Glucosa
PLEURAL
Gluc serica
SINOVIAL
Gluc serica
ASCITICO
Gluc. Serica
50 80 mg/dl
Protenas
< 3.0 g/dl
< 2.5 g/dl
1 2 g/dl
15- 40 mg/dl
LDH
Glucosa
< 200 UI/l

< 60 mg/dl
Disminuida
< 200 UI/l

Disminuida
1.5 1.9 mmol/l

<35 mg/dl
Protenas
> 3.0 g/dll
Aumentada
Aumentada
Aumentada
LDH
> 200 UI/l
Aumentada
Aumentada
AMNIOTICO
No aplica.
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
12
LIQUIDO
Govantes, J.; P. Fernndez; C. Esteso. Manual Normon. 7a Ed. Madrid Espaa.
Guerci, A. 1988. Laboratorio. Mtodos de Anlisis Clnicos y su Interpretacin. 4 a Ed. Edit. El

Ateneo. Buenos Aires Argentina.
Krupp, M.; L. Tierney; E. Jawetz; R. Roe; C. Camargo. 1988. Manual de Diagnstico Clnico y de
Laboratorio. Edit. El Manual Moderno, S.A. de C. V. Mxico.
COPROCULTIVO (ME-LB-MC-04, 47 y 48)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de malestares estomacales por

medio de la muestra de heces.
3.
MATERIALES:
o
Guantes de ltex estriles
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
Medios de cultivo
EQUIPOS:
o
Estufa
Equipo automatizado WALKAWAY (Microscan)
MUESTRAS:
4.
Heces
Hisopado rectal

o
Las muestras deben recogerse en recipientes limpios y de boca ancha en caso de las heces.
Para un hisopado rectal se introduce el hisopo sobrepasando el esfnter anal.
13
Las muestras tanto de heces como de hisopado rectal deben ser obtenidas antes de la
administracin de antibiticos o antidiarreicos.
Con el asa bacteriolgica estril colectar una asada de muestra y proceder a sembrar por
estriamiento en los Agares Mac Conkey, XLD, Salmonella-Shiguellay colocar una alicuota de
heces en el Caldo Selenito. Colocar en la incubadora por 24 horas a 37c.
Revisar el cultivo observando el crecimiento tanto en los medios primarios como en los
diferenciales.
Realizar la identificacin bioqumica y el antibiograma respectivo por los mtodos automatizado

usando el lector WALKAWAY (Microscan), el cual usa diferentes paneles desecados
(convencionales), entre ellos el de gram negativos para la identificacin de bacterias aerobias
gram negativas y el mtodo MIC (mnima concentracin inhibitoria) para la lectura automatizada
del antibiograma. Con la cepa identificada y aislada se procede a realizar la confrontacin
serolgica (polivalente y clasica).
5.
No aplica.
6.
No aplica.
8.
14
Mims. Playfair. Roitt. Wakelin. Williams. Mosby. Microbiologa Mdica. Doyma Libros.
COPROCULTIVO FUNCIONAL (ME-LB-MC-05, 23, 30, 39, 47, 48 y 50)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de malestares estomacales por

medio de la muestra de heces (parsitos y levaduras), adems de la observacin microscpica de la
diferenciacin de celular y cualitativa como las sustancias reductoras (Benedit) y en sangre oculta en
heces (Thevenon).
3.
MATERIALES:
o
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
Medios de cultivo
Reactivo de Benedict
Reactivo de Piramidn al 5%
Reactivo de Acido actico al 50%
Reactivo de Perxido de hidrgeno
Reactivo de Sudn III
Solucin fisiolgica estril
Tira indicadora de pH
Lminas portaobjetos
15
Lminas cubreobjetos
Lugol parasitolgico
EQUIPOS:
o
Estufa
MUESTRAS:
o
4.
Heces

o
Las muestras deben recogerse en recipientes limpios y de boca ancha en caso de las heces.
Las muestras de heces deben ser obtenidas antes de la administracin de antibiticos o

antidiarreicos.
Con el asa bacteriolgica estril colectar una asada de muestra y proceder a sembrar por
estriamiento en los Agares Mac Conkey, XLD, Salmonella-Shiguella y colocar una alicuota de
heces en el Caldo Selenito. Colocar en la incubadora por 24 horas a 37c.
En una lmina portaobjetos observar directamente (leucocitos y hemates) la diferenciacin

celular y otras estructuras, as como el examen parasitolgico con lugol.
En un tubo de 16 x 150 mm verter 5 ml de agua destilada y hacer una suspensin de las heces,
para realizar la prueba de Thevenon (sangre oculta en heces): para este examen el paciente
debe estar en dieta ya anteriormente indicada por espacio de 3 dias.
En un tubo de 16 x 150 mm verter 3 ml de Solucin de Benedict y hacer una suspensin de las

heces, estas se lleva a ebullicin y se reporta por cruces de acuerdo al cambio del color inicial.
En una lmina se hace una suspensin de heces con el reactivo de Sudn III, se cubre con una
laminilla y se pone a ebullicin, observar al microscopio las grasas coloreadas de naranja.,
reportar presencia o ausencia.
diferenciales.
5.
Realizar la identificacin bioqumica y a la vez el antibiograma respectivo.
Con la cepa identificada y aislada realizar la confrontacin serolgica.
No aplica.
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

16
EXAMEN DIRECTO Y CULTIVO DE HONGOS (ME-LB-MC-06)
1.
2.
METODO:
o
EXAMEN DIRECTO DE HONGOS
CULTIVO DE HONGOS
o
El examen directo est basada en la visualizacin de esporas, hifas septadas o pseudohifas en

forma directa mediante la incubacin de la muestra en KOH.
El cultivo de hongos consiste en la identificacin de colonias aisladas tanto en su morfologa de

las colonias como la identificacin en forma microscpica.
3.
MATERIALES:
o
Lminas y laminillas
Hoja de bistur N 21
Placa petri
Hidroxido de Potasio (KOH) al 10%
Agar Sabouraud glucosado
Asa tipo punta
EQUIPOS:
o
17
Microscopio
MUESTRAS:
4.
Escamas de piel
Pelos
Fragmentos de uas
Orina
Secreciones
EXAMEN DIRECTO DE HONGOS:

o
Del sitio anatmico afectado, se realiza un raspado con la hoja de bistur N 21, recepcionndolo
en una placa petri.
Una vez obtenida la muestra en cantidad suficiente, se traslado al rea de proceso
de
Microbiologa.
o
Se coloca la muestra en un par de lminas y se incuban con KOH al 10% por espacio de 60
minutos cubrindolos con laminillas.
Pasado el tiempo de incubacin se procede a la visualizacin microscpica buscando estructuras

fngicas.
CULTIVO DE HONGOS:
o
en una placa petri.
Una vez obtenida la muestra en cantidad suficiente, se traslado al rea de proceso
de
Microbiologa.
o
Se realiza el cultivo de la muestra con un asa punta realizando punciones casi superficiales en el
Medio Sabouraud glucosado.
Se coloca la muestra en un par de lminas y se incuban con KOH al 10% por espacio de 60
minutos cubrindolos con laminillas.
Pasado el tiempo de incubacin se procede a la identificacin por el mtodo de la caja petri, que
consiste en colocar en una caja petri estril dos o tres portaobjetos estriles sobre delgadas
varillas de vidrio estriles para aislarlos del fondo, en donde se coloca un papel de filtro
humedecido con solucin de glicerina al 50% a fin de mantener cierto grado de humedad. Se
coloca una gota del medio en cada portaobjetos y se siembra en cada uno; se tapa la caja y a
medida que desarrolla puede observarse al microscopio.
La identificacin se basa en el aspecto microscpico de las colonias en examen directo y por

coloracin, y en el estudio del micelio en sus caracteres fisiolgicos.
5.
No aplica.
6.
Normalmente no se deben encontrar estructuras fngicas en las muestras antes mencionadas. Si se

encontraran, esto pasa a ser una patologa.
18
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

Instituto Nacional de la Salud. 2007. Manual de Procedimientos y Tcnicas de Laboratorio para

la Identificacin de los Principales Hongos Oportunistas causantes de Micosis Humanas. Serie
de Normas. Tcnicas N 44. Lima Per.
CULTIVO DE LQUIDO SEMINAL (ME-LB-MC-11)
1.
METODO:
CULTIVO DE LIQUIDO SEMINAL.

2.
El cultivo de semen consiste en analizar el semen en busca de infecciones causadas por bacterias,
hongos, etc.
En la mayora de los casos, esta prueba se solicita en pacientes con sntomas de prostatitis u orquitis.
3.
MATERIALES:
o
Agar sangre.
Agar Mc conkey.
Tioglicolato.
Set de Gram.
Frasco estril.
Asa bacteriolgica.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
19
MUESTRA:
o
4.
Liquido seminal.

o
Lavarse las manos y brazos con jabn y remojarlas en alcohol.
Lavar los genitales con agua y jabn.
Eliminar la orina antes de la masturbacin y colocar la muestra en un frasco estril.
Con ayuda de una asa bacteriolgica calibrada (0.01 ml.) se siembra en agar sangre y Mac
conkey.
Dejar en incubacin de 37C por 24 horas.
A la vez se realiza una extensin en una lmina portaobjeto para el examen directo donde se
realiza recuento por campo de leucocitos, hemates y presencia de espermatozoides.
Tambin se realiza una coloracin Gram.
Se observa al microscopio con objetivo de inmersin (100X). Se observa polimorfonuclaeares y

mononucleares.
5.
Despus de transcurrida las 24 horas de incubacin.
Se retira las placas de la estufa.
Se precede a analizar, en caso de estar positiva (crecimiento de colonias).
Proceder a la identificacin Bioqumica del microorganismo.
Realizar la prueba de antibiograma por difusin o microscan.
No aplica.
6.
No debe encontrarse bacterias en el Lquido seminal.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
20
CULTIVO DE SECRECION (ME-LB-MC14, 15 y 17)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de infecciones y en este caso

productores de secreciones.
3.
MATERIALES:
o
Guantes de latex estriles
Solucin salina o agua estilada estril
Jabn
Hisopos estriles de algodn
Lminas portaobjetos
Tubo estril (opcional)
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
21
Medios de cultivo
EQUIPOS:
o
Estufa
MUESTRAS:
4.
Secrecin de heridas
Secrecin de absceso
Secreciones de catteres

o
Realizar una buena asepsia de los bordes donde se va a obtener la muestra concntricamente
de adentro hacia fuera.
Para el caso de heridas se debe obtener la muestra separando los bordes cutneos adyacentes
con los dedos pulgar y medio, par introducir la punta del hisopo en la profundidad de la herida.
Obtener la muestra rotando el hisopo y avanzando hacia fuera sin tocar el borde de la herida.
Para el caso de abscesos se introduce la aguja de la jeringa a travs de la piel y aspirar

aproximadamente 1 ml de material purulento.
En el caso de catteres las muestras son remitidas por el mdico en frascos estriles, y con
aproximadamente con 5 cm desde el borde del catter.
Los medios de cultivo por utilizar deben estar a temperatura ambiente.
La inoculacin de la muestra se realiza en un borde del agar sangre, mac conkey, manitol
salado; en ese orden y realizar la siembra por dispersin agotamiento de los cuatro cuadrantes
de la placa, con el propsito de obtener colonias aisladas e incubar los medios por 24 horas.
Inocular una pequea cantidad de muestra en la lmina para la identificacin de

microorganismos y diferenciacin celular microscpicamente para luego colocar el hisopo en
caldo tioglicolato.
diferenciales.
o
5.
Realizar la identificacin bioqumica y microscpica as como a la vez el antibiograma respectivo.
No aplica.
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 2005. Manual de Procedimientos Bacteriolgicos en Infecciones

Intrahospitalarias. Serie de Normas. Tcnicas N 28. Lima Per.
22
Mims. Playfair. Roitt. Wakelin. Williams. Mosby. Microbiologa Mdica. Doyma Libros.
CULTIVO DE SECRECION FARINGEA (ME-LB-MC-16)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de infecciones de vas

respiratorias altas.
3.
MATERIALES:
o
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
Medios de cultivo
Lminas portaobjetos
EQUIPOS:
o
23
Estufa
MUESTRAS:
o
4.
Hisopado faringeo

o
Colocar la cabeza del paciente en hiperextensin y se iluminan las fauces en forma conveniente.
Con el hisopo estril se frotan ambas amgdalas (o ambos papilares en pacientes

amigdalectomizados), si existiera un exudado visible se debera tratar de tocarlo con la punta del
hisopo y en cualquier caso se debe evitar el contacto del hisopo con el paladar o la lengua, es
por ello que resulta imprescindible ayudarse con un bajalenguas.
Una alternativa recomendada ante una emergencia se debe colocar el hisopo en u tubo estril
con unas gotas de solucin fisiolgica estril o el medio de transporte.
La siembra se realiza rotando el hisopo con muestra en una superficie de 3 x 2 cm cerca al borde
de la placa de agar sangre, mac conkey, manitol salado; en ese orden y con el asa se estra por
dispersin agotamiento de los cuatro cuadrantes de la placa, con el propsito de obtener
colonias aisladas e incubar los medios por 24 horas.
Con el hisopo con muestra se rota en la lmina para la identificacin de microorganismos y

diferenciacin celular microscpicamente para luego colocarlo en caldo tioglicolato.
diferenciales, as como el tipo de hemlisis en el agar sangre.
o
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Lopardo, H.; C. Hernndez; R. Soloaga. 1999. Diagnstico Microbiolgico de las Infecciones

Respiratorias Bacterianas. Edit. Britania. Buenos Aires Argentina.

24
CULTIVO DE SECRECION URETRAL (ME-LB-MC-19)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de infecciones del tracto uretral.
3.
MATERIALES:
o
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
Medios de cultivo
Lminas portaobjetos
EQUIPOS:
o
25
Estufa
MUESTRAS:
o
4.
Secrecin de la uretra

o
Informar al paciente sobre el procedimiento que se seguir para la obtencin de la muestra.
Con el hisopo estril o asa bacteriolgica, si existiera un exudado visible se debera tratar de
tocarlo en la punta del hisopo y en cualquier caso se debe evitar el contacto la piel del paciente.
Una alternativa recomendada ante una emergencia se debe colocar el hisopo en u tubo estril
con unas gotas de solucin fisiolgica estril o el medio de transporte.
de la placa de agar sangre, chocolate, mac conkey, manitol salado; en ese orden y con el asa se
estra por dispersin agotamiento de los cuatro cuadrantes de la placa, con el propsito de
obtener colonias aisladas e incubar los medios por 24 horas.

El agar chocolate se coloca dentro de al jarra gas pack.
o
5.
No aplica.
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 2002. Manual de Procedimientos para el Diagnstico

Bacteriolgico de Gonorrea. Serie de Normas. Tcnicas N 33. Lima Per.
26
CULTIVO DE SECRECION VAGINAL ( ME-LB-MC-20)

1.
METODO:
2.
El cultivo de secrecin vaginal sirve para confirmar vaginosis bacteriana, candidiasis vaginal o
Tricomoniasis.
3.
MATERIALES:
o
Cinta de pH.
Mechero.
Solucin salina.
Agar Mc conkey.
Agar Sangre.
Agar Sabouroud.
27
Tioglicolato.
Medios diferenciales: TSI, LIA, Movilidad, Citrato.
Set para coloracin Gram:

Violeta de genciana.
Lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Agua corriente.
Asa bacteriolgica.
Aceite de inmersin.
Fosforos.
Hidrxido de potasio al 10%
Hisopos estriles.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
MUESTRA:
o
4.
Secrecin Vaginal.

o
Obtener una muestra de hisopados con secrecin vaginal del paciente.
Sembrar aspticamente en agar sangre, agar mac conkey, saboroud y caldo tioglicolato.
Incubar a 37 C por 24 horas.
Se realiza una extensin en una lmina portaobjeto para la coloracin Gram.
Dejar secar a temperatura ambiente.
Colorear mediante la tcnica de Gram.
Se observa al microscopio con objetivo de inmersin (100X).
Se coloca un hisopo de secrecin vaginal en solucin salina para el estudio del examen directo
(levaduras, trichomonas).
De los cultivos positivos realizar las pruebas bioqumicas diferenciales para identificar a la
bacteria aislada.
5.
Realizar la prueba de antibiograma por difusin o microscan.
No aplica.
6.
En el fluido de secrecin vaginal se encuentra bacterias propias de la flora normal.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
28
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 2002. Manual de Procedimientos para el Diagnstico

CULTIVO DE SECRECION PROSTATICA (ME-LB-MC-18)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de infecciones de Prstata

3.
MATERIALES:
o
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
29
Medios de cultivo
Lminas portaobjetos
EQUIPOS:
o
Estufa
MUESTRAS:
o
4.
Secrecin Prosttica

o
Informar al paciente sobre el procedimiento que se seguir para la obtencin de la muestra.
El paciente debe hacerse un lavado del glande, previo a la toma de muestra con el masaje
prosttico.
Con el hisopo estril o asa bacteriolgica, si existiera un exudado visible se deber recolectar la
muestra con la punta del hisopo y en cualquier caso se debe evitar el contacto con la piel del
paciente.
Si no se obtuviera muestra despus del masaje prosttico, se tomar la Prueba de tres vasos,
que consiste en la recoleccin de la orina en tres frascos diferentes; el primero ser para el
chorro inicial, el segundo para el chorro medio y el tercero para el chorro final.
de la placa de agar sangre, chocolate, mac conkey, manitol salado; en ese orden y con el asa se
estra por dispersin agotamiento de los cuatro cuadrantes de la placa, con el propsito de
obtener colonias aisladas e incubar los medios por 24 horas.

diferenciacin celular microscpicamente para luego colocarlo en caldo BHI.
o
5.
No aplica.
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Garca R., J. 1998. Microbiologa Mdica (2. Microbiologa Clnica).Harcourt Brace de Espaa.
Madrid - Espaa.
30
TEST HAMBURGER (ME-LB-MC-21)
1.
METODO:
Identificacin microscpica
2.
Se basa en el estudio cuantitativo del sedimento urinario, en el recuento de hemates y leucocitos y, en

forma accesoria de cilindros y clulas epiteliales.
3.
MATERIALES:
o
31
Marcador de vidrio.
Galonera.
Tubos de centrifugas graduados.
Cmara de Newbauer.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Microscopio.
MUESTRAS:
o
4.
Orina de 3 horas.

o
El examen deber practicarse con el paciente en el lecho. Se lo hace levantar y evacuar

totalmente la vejiga; esta orina se desecha. Se vuelve a acostar.
Durante las 3 horas se recoge la orina sin contaminacin.
Luego se debe llevar a cabo la prueba con la mayor rapidez posible.
Se mide el volumen.
Se mide 10 ml. de orina previamente homogenizada en un tubo de centrifuga graduado, se

centrifuga durante 5 minutos a 1,800 rpm.
Se aspira con precaucin el lquido sobrenadante (tratando de no agitar el sedimento) hasta un

volumen inferior a 1 ml., se deja caer la orina adherida a las paredes del tubo.
o
5.
Se homogeniza la suspensin del sedimento y se efecta la lectura en una cmara de newbauer.
NxVx5
T
Donde:
6.
N:
Nmero de elementos contados en 5 cuadrantes.
V:
Volumen de orina en mililitros.
T:
Tiempo en minutos
Leucocitos:
500/min.
Hemates:
100/min.
Clulas epiteliales:
500/min.
Cilindros hialinos:
1 a 2/min.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

32
ESPERMATOGRAMA (ME-LB-MC-22)
1.
METODO:
2.
El Espermatograma es una prueba diagnstica de la calidad del semen. Su finalidad es diagnosticar la

fertilidad del varn y detectar problemas de esterilidad masculina.
Esta basado en realizar correctamente un anlisis de lquido seminal, haciendo sus calificaciones
parciales y totales de la muestra.
33
3.
MATERIALES:
o
Cloruro de amonio al 25%.
EDTA al 5%.
Ortotolidina al0.1%.
Perxido de hidrgeno al 30 %.
Eosina al 0.5%.
Agua destilada.
Micro pipetas automticas ajustables o predeterminadas para medir y distribuir 100 ul a 1000 ul.
Tubos calibrados de 15 ml. de fondo cnicos.
Tubos de vidrio de 16 x 100.
Puntas.
Cmara de newbauer.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
Incubador fijado termostaticamente a 37 C+/- 1 C.
MUESTRA:
o
4.
Liquido seminal.

o
Las muestras deben ser colectadas despus de un perodo de abstinencia de 3 a 5 das.
Para una evaluacin inicial se deben tomar 2 o 3 muestras a intervalo semanal o quincenal.
La muestra debe ser colectada de preferencia en el laboratorio.
Si alguna porcin del eyaculado no llega a ser colectada, se debe descartar la muestra.
La recoleccin de la muestra se realiza por masturbacin y en forma asptica (previa higiene de

manos y genitales) y en un recipiente estril.
El frasco debe estar marcado con el nombre del paciente, nmero de registro, fecha de coleccin
hora de coleccin, y nmero de das de abstinencia.
La muestra de de protegerse de temperaturas extremas (< 20 C o > 40 C)
Colocar la muestra en tubo calibrado de 15 ml. de fondo cnico.
Evaluar las caractersticas fsicas.
CARACTERISTICAS FISICAS
o
Color:
Blanco perla Blanco lechoso Blanco cremoso
Olor:
Sui generis
pH:
VALORES NORMALES: 7.2 - 8.0
34
Licuefaccin:
Volumen:
Viscosidad:
10 30 60
Normospermia:
1.5 6 ml.
Hipospermia:
< 1.5 ml.
Hiperespermia:
> 6 ml.
Normal Aumentada
MOTILIDAD
o
La lectura debe hacerse despus de los 30 minutos y antes de las 2 horas de emitida la muestra.
Se coloca una gota de semen en una lmina y se cubre con una laminilla y se lee 6 campos,
luego se calcula en porcentaje.
Motilidad progresiva rpida (categora a)
Motilidad progresiva lenta
Motilidad no progresiva
Inmviles
(categora b)
(categora c)
(categora d)
VALORES NORMALES: Categora a > 25%

Categora a + b > 50%
Astenozoospermia.
VITALIDAD
o
Se coloca una gota de semen en un lmina con una gota de eosina al 0.5%, se homogeniza y se
lee despus de 2 minutos.
Se leen 6 campos y se diferencian los inmviles vivos no coloreados y los muertos coloreados.
Luego se calcula en porcentaje en base a la categora d.
NUMERO
o
Se prepara la solucin leucocitospermica:

100 ul. = 0.1 ml. de cloruro de amonio al 25%
100 ul. = 0.1 ml. de EDTA al 5%.
900 ul. = 0.9 ml. de ortotolidina al0.1%.
1 gota de perxido de hidrgeno al 30%.
Se agrega 0.9 ml. de solucin leucocitospermica en un tubo.
Luego agregar 100 ul. de semen e incubar por 30 minutos a 37 C.
Se hace el recuento en la cmara de newbauer en los cuadrantes de glbulos rojos.
Se calcula el nmero de espermatozoides por mililitro de acuerdo al nmero de cuadrantes

contados y a la siguiente tabla:
Espermatozoides
Menos de 15
15 40
Ms de 40
Cuadrantes contados
25
10
5
Factor de Conversin
10
4
2
VALORES NORMALES: Espermatozoides/ml: 20-250 mill/ml.
35
Total espermatozoides eyaculados/ml: 30-1,500 mill/ml.

Polizoospermia:
>250 mill/ml.
Normozoospermia:
20-250 mill/ml.
Oligozoospermia:
< 20 mill/ml.
Oligozoospermia ligera:
10 - 20 mill/ml.
Oligozoospermia moderada: 5 - 10 mill/ml.

Oligozoospermia severa: < 5 mill/ml.
Azoospermia: Ausencia de espermatozoides en el eyaculado.
Aspermia: Ausencia de eyaculado externo.
LEUCOCITOS
o
Se utiliza la misma solucin leucocitospermica que para el nmero de espermatozoides
Se hace el recuento en la cmara de newbauer en los cuadrantes de los glbulos blancos.
Se multiplica el nmero de leucocitos contados x 25.

VALORES NORMALES: < 1 mill/ml
MORFOLOGIA
o
Se utiliza la misma solucin leucocitospermica que para el nmero de espermatozoides
Se hace el recuento en la cmara de newbauer en los cuadrantes de los glbulos rojos.
Se cuenta las anormalidades en total y por cabeza, cuello y cola.
Se calcula en porcentaje.
Espermatozoides normales.
Espermatozoides anormales.
VALORES NORMALES: Espermatozoides anormales < 40%.
Teratozoospermia
EXAMEN DIRECTO
5.
Se coloca una gota de semen en una lmina y se cubre con una laminilla.
Se observan e informan las clulas epiteliales y espermticas observadas por campo.
Se observan e informan hemates y espermatozoides aglutinados y otros por campo.
Todos los recuentos obtenidos se convierten a porcentaje.
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
36
BIOQUIMICA SEMINAL
CIDO CITRICO
1.
METODO:
Chambn
2.
Esta basado en que el cido ctrico en presencia de anhdrido actico forma con la piridina un compuesto
de condensacin de color amarillo.
3.
MATERIALES:
o
cido tricloroactico al 10% en agua destilada.
Reactivo piridina-anhidro actico: anhidrido actico 41 ml., piridina 9 ml. Preparar en el momento
de su uso.
Testigo de 500 mg%: cido citrico 500mg H2SO4 1N en 100 ml. Conservado a 4 6C.
Agua destilada.
Puntas.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Bao de hielo.
Bao maria a 37C +/- 1 C.
Espectofotmetro.
MUESTRA:
o
4.
Semen.

o
En un tubo colocar 0.9 ml. de cido tricloroactico al 10%, agregar lentamente 0.1ml. de liquido
seminal, agitar, dejar en reposo 10 minutos luego se centrifuga durante 5 minutos a 2000 r.p.m.
Se prepara el testigo de cido ctrico de igual manera, salvo la centrifugacin.
Reactivo de color
Desproteinizado
Testigo diluido
37
Blanco
-
Desconocido
0.10
-
T1
0.05
T2
0.10
T3
0.15
T4
0.20
T5
0.30
Agua destilada
0.50
0.40
Colocar los tubos en bao de hielo
Reactivo piridina- 3.0
3.0
0.45
0.40
0.35
0.30
0.20
3.0
3.0
3.0
3.0
3.0
anhdro actico
Mantener los tubos en bao de hielo durante 5 minutos
Colocar en bao de agua a 37C durante 30 minutos
Dejar a temperatura ambiente 5 minutos. Leer a 400 nm.
5.
Se calcula el promedio de los testigos y se saca el factor:

Factor:
Concentracin de estndares
D.O estndar
6.
1.5 10.0 mg/ml
7.
CONTROL DE CALIDAD:
FRUCTOSA
1.
METODO:
ROE
2.
Esta basado en la determinacin de la reaccin de Seliwanoff, que consiste en provocar la formacin del
aldehido furfural, el cual origina con la resorcina en medio cido y caliente una coloracin rosada.
3.
MATERIALES:
38
Resorcina al 0.1%: disolver 100 mg. De resorcina en 100 ml.de alcohol etlico de 95 .
cido clorhdrico al 30%.
Solucin testigo de fructosa concentrada al 1%.
Agua destilada.
Puntas.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Espectofotmetro.
MUESTRA:
o
4.
Semen.

o
Se hace una solucin del esperma al 1%, es decir 100ul. de esperma con 9.9 ml. de agua
destilada.
Se centrifuga a 3000 r.p.m por 10 minutos.
Sobrenadante
Testigo diluido
Agua destilada
Resorcina
cido clorhdrico
5.
Blanco
Desconocido
St. 1
St. 2
1.0
0.1
0.2
1.0
0.9
0.8
0.5
0.5
0.5
0.5
1.5
1.5
1.5
1.5
Colocar en bao mara a 80C +/- 1 C por 10 minutos
Enfriar en agua de cao por 15 minutos
Leer a 505 nm.
Se calcula el promedio de los estndares y se saca el factor:

Factor:
Concentracin de estndares
D.O estndar
6.
1.20 5.0 mg/ml.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
39
St. 3
0.4
0.6
0.5
1.5
FRUCTOSA CORREGIDA:
Fructosa corregida: (Log. Esp/ml) (Fructosa)
2.5 - 8.5 mg/ml.
8.
o
Gonzales; G. 1992. Androloga Fertilidad e Infertilidad. Programa de Reproduccin Humana.

Organizacin Mundial de la Salud. Ediciones Instituto de Investigaciones de la Altura. Lima
Per.

AZUCARES REDUCTORES (BENEDICT) (ME-LB-MC-23)
1.
METODO:
Identificacin cualitativa.
2.
La prueba de azucares reductores es til para detectar la deficiencias de enzimas disacaridas del epitelio
intestinal y de las enzimas pancreticas que son las encargadas del metabolismo de dichas sustancias,
as si los carbohidratos no son digeridos quedan en la luz del intestino reteniendo agua e induciendo a la
diarrea.
Tambin se realiza la prueba de azucares reductores en orina ocasional.
40
3.
MATERIALES:
o
Reactivo Benedith.
Aplicador (baja lengua).
Marcador de vidrio.
Frasco con tapa rosca.
Tubos 16 x 100.
Pinza.
Fsforos.
EQUIPOS:
o
Cocina a gas.
MUESTRAS:
4.
Heces frescas.
Orina ocasional.

o
La muestra solicitada son heces, para lo cual el paciente debe recolectar la muestra en un
recipiente limpio con tapa rosca.
La muestra no deben estar mezcladas con orina.
La cantidad debe ser mnima de 2 gr.
En un tubo colocar 5 ml. de solucin Benedit.
Hacer una suspensin con aproximadamente 2 gr. de muestra con la ayuda de un aplicador.
Mezclar y colocar a fuego lento, moviendo el tubo suavemente, por 2 minutos, (cuidado el liquido
puede salpicar con fuerza.)
Enfriar y observar.
Cuando la muestra sea orina se agrega 0.5 ml. de sta y se sigue el mismo procedimiento.
5.
6.
Una reaccin positiva muestra turbidez por precipitados de color:

Verde
Amarillo
++
Rojo ladrillo
+++
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
41
Argeri, N.; H. Lopardo. Anlisis de Orina. Fundamentos y Prcticas. Edit. Mdica Panamericana.
Buenos Aires Argentina.

Organizacin Mundial de la Salud, 1983. Manual de Tcnicas Bsicas para un Laboratorio de

Salud. Publicacin Cientfica N 439.Washington E.U.A.
EXAMEN DE PRUEBA DE PARCHE (ME-LB-MC-24)
1.
METODO:
Identificacin microscpica.
2.
Se basa en el hallazgo de huevos caractersticos de Enterobius vermicularis.

3.
MATERIALES:
o
42
Lminas portaobjetos.
Cinta adhesiva.
Marcador de vidrio.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
MUESTRAS:
o
4.
Lmina con cinta adhesiva colocada en los pliegues anales.

o
La muestra debe ser obtenida a primeras horas de la maana.
Pegar 1cm. Aproximadamente de cinta adhesiva sobre la cara inferior de un extremo de la

lmina, presionando la porcin restante de la cinta sobre los pliegues anales.
o
5.
Observar al microscopio a 10X o 40X.
No aplica.
6.
Normalmente no deben encontrarse huevos de Enterobius vermicularis en los pliegues anales.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 2003. Manual de Procedimientos de Laboratorio para el

Diagnstico de los Parsitos Instestinales del Hombre. Serie de Normas. Tcnicas N 37. Lima
Per.
EXAMEN DIRECTO DE ACAROS (ME-LB-MC-26)
1.
METODO:
2.
El examen directo est basado en la visualizacin del caro en forma directa mediante la incubacin de la
muestra en solucin salina.
3.
43
MATERIALES:
o
Hoja de bistur N 21.
Solucin salina.
EQUIPOS:
o
Microscopio
MUESTRAS:
o
4.
Raspado de piel

o
en una lmina porta objeto.
5.
Se incuban con solucin salina cubrindolos con laminillas.
Pasado el tiempo de incubacin se procede a la visualizacin microscpica buscando los acaros.
No aplica.
6.
Normalmente no deben encontrarse caros en la piel.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Henry, J. El Laboratorio en el Diagnstico Clnico. Edit. Marbn . New York.
EXAMEN DIRECTO DE BK (ME-LB-MC-27)
1.
METODO:
Coloracin Zielh Neelsen

2.
Este examen se basa en la identificacin de los bacilos acido alcohol resistentes causantes de la
tuberculosis en la muestra que el mdico solicite.
44
3.
MATERIALES:
o
Lminas portaobjetos
Baja lenguas
Fenol al 5%
Mechero
Colorante Fucsina fenicada
Alcohol cido
Colorante azul de metileno
Aceite de inmersin
EQUIPOS:
o
Cmara de bioseguridad
Microscopio
MUESTRAS:
4.
Esputo
Aspirado o lavado bronquial
Secreciones de heridas
Orina matutina
Heces
Sangre
Biopsias
Lquidos Cefalorraquideo
Lquido Pleural
Lquido Sinovial
Lquido Asctico
Lquido Peritoneal

o
Realizar la desinfeccin del ambiente a trabajar (cmara de bioseguridad), con fenol al 5%.
Verificar que la muestra y la orden del paciente coincidan para rotular las lminas con su
respectivo cdigo de ingreso.
Encender la Cmara de bioseguridad por lo menos 15 minutos antes de empezar a trabajar.
Extender la muestra en las lminas haciendo uso de baja lenguas, tratando que la muestra sea
homognea en toda la lmina y fijar al calor.
Proceder a colorear la lmina cubrindola en su totalidad con fucsina fenicada por espacio de 3
minutos, luego flamear con el mechero haciendo que desprendan vapor por 3 veces cada 5
minutos.
Lavar la lmina con agua corriente y decolorar con alcohol cido por 10 segundos, lavar
nuevamente y colorear con azul de metileno por espacio de 1 minuto.
Lavar en agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.
Observar 100 campos microscpicos ptimos siguiendo un determinado patrn.
45
Anotar el nmero de bacterias observadas por campo microscpico.
Para una mejor visualizacin de las caractersticas de la bacteria observar el frotis (300) campos
microscpicos para determinar si la muestra es positiva o negativa.
5.
Cuando la lmina es positiva para Baciloscopa se debe informar de la siguiente manera:
Paucibacilar
N de BAAR entre 1 a 9 BAAR en 100 campos microscpicos
(+)
Menos de 1 BAAR por campo en 100 campos microscpicos
(++)
De 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos microscpicos.
(+++)
Ms de 10 BAAR por campo en 25 campos microscpicos.
No aplica.
6.
No se debe encontrar bacterias acido alcohol resistentes en la muestra remitida.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 1995. Manual de Normas y Procedimientos en Bacteriologa de

Tuberculosis. Serie de Normas. Tcnicas N 10. Lima Per.
EXAMEN DIRECTO DE Pneumocystis carinni (ME-LB-MC-29)

1.
METODO:
2.
Examen basado en la identificacin microscpica de Pneumocystis carinii mediante tcnicas de coloracin

adecuadas ya que por cultivo no se han aislado an.
46
Actualmente considerado como un microrganismo importante en la causa de neumonias sobre todo en

paciente con neoplasias hematolgicas.
3.
MATERIALES:
o
Lminas portaobjetos
Paletas baja lenguas
Fenol al 5%
Metanol
Colorante Giemsa filtrado
Agua destilada
Aceite de inmersin
EQUIPOS:
o
Cmara de bioseguridad
Microscopio
MUESTRAS:
4.
Esputo
Lavado broncoalveolar
Biopsias transbronquiales

o
Encender la Cmara de bioseguridad por lo menos 15 minutos antes de iniciar el proceso de la

muestra.
Realizar los extendidos de la muestra en lminas portaobjetos, secarlas al calor y colocar fenol al
5% a la muestra para su descontaminacin igual que a la superficie donde se trabaja.
Fijar las lminas con metanol y una vez secas proceder a la coloracin con giemsa filtrado diluido
en agua destilada en la proporcin (2:1), por espacio de 5 a 10 minutos (dependiendo de la
maduracin del colorante madre).
Lavar la muestra despus de transcurrido el tiempo y dejar secar a medio ambiente.
Observar al microscopio con objetivo de inmersin (100X) buscando por lo general la forma
qustica de este trofozoito.
5.
No aplica.
6.
Normalmente no debe encontrarse este trofozoito en secreciones pulmonares, para no ser considerado
como un caso patolgico.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
47
EXAMEN PARASITOLOGICO DE HECES (ME-LB-MC-30)
1.
METODO:
2.
48
Los parsitos intestinales del hombre son protozoos y/o helmintos, llamados comnmente gusanos
intestinales.
El examen macroscpico permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos
adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las caractersticas organolpticas de las heces
eliminadas, (color, presencia de sangre y/o moco, consistencia, etc.)
Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de
tamao microscpico, as como larvas o huevos de helmintos.
3.
MATERIALES:
o
Laminillas cubreobjetos.
Aplicador (bajalengua).
Solucin salina.
Solucin lugol.
Marcador de vidrio.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
MUESTRAS:
o
4.
Heces frescas.

o
La muestra debe ser obtenida (entre 3 y 6 gramos) lo ms fresca posible, y depositada en un

frasco con tapa rosca y rotulada correctamente con los datos de identificacin.
La muestra debe obtenerse antes del uso de medicamentos antiparasitarios, o hasta 2 o 5 das
despus de su administracin.
Si el paciente no es regular en la evacuacin de sus deposiciones y ha evacuado en la noche

anterior al examen, se recomienda guardar la muestra en una refrigeradora o en un lugar fresco
no expuesto a la luz solar, para que no se alteren las formas parasitarias.
Las heces depositadas en el suelo no son las recomendadas para el diagnstico, debido a que
pueden contaminarse con formas biolgicas, como por ejemplo: larvas similares a los
enteroparsitos del hombre, larvas de nemtodos, huevos de caros o insectos, etc.
La muestra de heces no deben estar mezcladas con orina.
Llevar la muestra al laboratorio en corto tiempo (de 2 - 4 horas de su obtencin), especialmente

si son lquidas o semilquidas ya que las formas trofozoicas de los protozoos pierden movilidad y
mueren poco despus de enfriarse.
Observa las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para la ayuda diagnstica
(consistencia, color, presencia de moco, sangre, alimento sin digerir), as como la presencia de
de gusanos cilndricos, anillados o aplanados (enteros o parte de ellos).
COLOR: El color pardo o castao oscuro de las heces evacuadas normalmente por el adulto
debe su coloracin a dos pigmentos derivados de la bilirrubina: urobilina y estercobilina. Otros
49
colores que presenten las heces se deber a factores como ingestin de alimentos determinados
(frutas, verduras de hojas verdes, cacao, etc.) medicamentos, etc.
o
CONSISTENCIA: Las heces normalmente son blandas y moldeadas. Suele verse heces
excesivamente duras (ascibalos) en casos de estreimiento habitual; heces aplanadas, en forma
de cinta, cuando el sujeto ingiere aceite mineral, pero en otros casos indican obstruccin del
recto. Los purgantes producen heces blandas, pastosas o lquidas y abundantes, lo mismo que
las diversas causas que pueden producir diarreas. Esta consistencia puede ser: Lquida, blanda,
pastosa o dura.
MOCO: Las heces normalmente contienen muy poca cantidad de moco ntimamente mezclado.
Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero fisiolgico y, con ayuda de un
aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, emulsionada y cubrirla con una laminilla
cubreobjeto.
Colocar en el otro extremo de la lmina portaobjeto, una gota de lugol y proceder a la aplicacin
de la muestra fecal como el prrafo anterior.
Con el suero fisiolgico, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma
natural, y con lugol, las estructuras internas, ncleos y vacuolas.
Observar al microscopio a 10X o 40X, recorrer la lmina siguiendo un sentido direccional,

ejemplo: de derecha a izquierda, o de arriba abajo.
NEMATODOS: Gusanos redondos

Ascaris lumbricoides: Se observan huevos miden aprox. 45-75 x 30-50 mm, presenta una clula
rodeada por tres capas, producen una patologa de dolor de estomago y desnutricin.
Tricocfalo: El huevo mide de 50-55 x 22-25 mm Tiene la forma de baln de ftbol americano,
produce anemia intensa, dolores abdominales, prolapso rectal ocasional.
Uncinarias: Tienen una forma elptica, estn cubiertas de una membrana lisa, transparente y fina,
mide de 60 - 40 x mm producen anemia.
Strongyloides stercolaris: Se observan larvas. Produce diarrea, vomito, desnutricin.
Enterobius vermicularis (Oxiuros): Los huevos son ovoides con una cara convexa y una plana,
presenta una membrana interna y delicada y otra gruesa hialina y mamelonada, mide de 50-60 x
20-30 mm. Produce prurito en la regin perianal, insomnio, cambios de conducta.
CESTODOS: Gusanos planos

Taenia: Los huevos miden 20-30 x 30-40 mm, son ovoides con membrana gruesa, amarillenta
que se encuentra estriada en forma de empalizada y encierra un embrin de seis ganchos poco
visibles. Produce trastornos nerviosos.
Hymenolepis nana: Huevos ovoides, mide aprox. 50 mm tiene una membrana interna y una
externa, tambin puede causar trastornos nerviosos.
PROTOZOARIOS:
Amebas
Entamoeba histoltica: Se observan quistes miden aprox. 20 mm se observa con cuatro ncleos.
Pueden causar lesin de la mucosa intestinal.
Entamoeba coli: Son quistes ms grandes que los de histoltica, tiene ms de cuatro ncleos. Es
considerada cono NO patgena.
50
Endolimax nana: Los quistes son ovalados miden de 6 - 10 mm presentan de uno a cuatro
ncleos.
Iodamoeba btschlii: Su quiste se caracteriza por la presencia de una vacuola de yodo, no es
una ameba patgena.
Giardia lamblia: Es una ameba en forma de pera simtricamente lateral, con un extremo ancho y
redondeado, el quiste presenta cuatro ncleos y dos cuerpos parabasales, produce una diarrea
amarillenta y vomito.
o
TREMATODOS: Forma de hoja plana

Fasciola heptica: Dao en hgado. De gran tamao.
Cabe sealar que el resultado negativo de una sola muestra de heces no autoriza a descartar la
presencia de parsitos intestinales, debiendo, pues, examinar tres distintas muestras sucesivas
de heces, para tener la certeza de si hay o no parsitos.
5.
No aplica.
6.
Normalmente no deben encontrarse parsitos intestinales en las heces.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o


Per.
GOTA GRUESA (IDENTIFICACION DE MALARIA) (ME-LB-MC-31)
1.
METODO:
51
2.
Este examen se basa en la identificacin del parsito Plasmodium causante de la malaria en una muestra
de gota gruesa y extendido sanguneo.
3.
MATERIALES:
o
Algodn o Gasa
Alcohol
Lanceta estril
Metanol
Aceite de inmersin
EQUIPOS:
o
Microscopio
MUESTRAS:
4.
Gota gruesa sangunea.
Frotis sanguneo.

o
Realizar la desinfeccin del dedo anular con alcohol, haciendo unos leves masajes.
Punzar el dedo con la lanceta estril.
Presionar el dedo levemente para que fluya la sangre
Descartar la primera gota de sangre con una torunda de algodn seco y tomar la muestra de la
yema de los dedos colocando una gota en el primer tercio superior externo de la superficie de la
lmina. El tamao e esta gota se aproxima al tamao de una cabeza de fsforo.
Presionar nuevamente el dedo y colectar una segunda gota de sangre ms pequea que la
primera, en el centro de la lmina para realizar el frotis.
Limpiar la sangre restante del dedo con una torunda de algodn humedecida en alcohol e indicar
al paciente que presione esta torunda contra el lugar de la puncin por 5 minutos.
Obtener informacin del paciente sobre su sintomatologa y posible estada en zonas de riesgo.
La gota gruesa se realiza utilizando uno de los ngulos de una segunda lmina (lmina auxiliar),
esparcir rpidamente la gota de sangre y extenderla uniformemente en forma concntrica en una
sola direccin de adentro hacia fuera o viceversa hasta formar una gota gruesa de 1 centmetro
de dimetro; teniendo en cuneta que la sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente
con 3 a 6 movimientos.
El frotis sanguneo se realiza utilizando la misma lmina auxiliar, ponindola en contacto con la
superficie de la lmina que contiene la gota central y hacerla correr firmemente a lo largo de su
borde en un ngulo de 45 grados.
Dejar que sequen las lminas en forma horizontal y fijar el frotis con metanol.
Colorear la gota gruesa con Giemsa filtrado diluido en agua destilada en proporcin (2:1) y el
frotis con Giemsa filtrado diluido en agua destilada en proporcin (1:1).
52
Lavar el exceso de colorante con agua corriente y esperar que sequen a medio ambiente y
observar al microscopio con objetivo de inmersin (100X) la gota gruesa buscando los diferentes
estadios del parsito Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum o Plasmodium malariae.
Observar 100 campos microscpicos ptimos siguiendo un determinado patrn y moviendo el

micromtrico con la finalidad de observar el mayor nmero de capas sanguneas.
Anotar el nmero de parsitos observados y la especie a la que pertenecen (si fuera posible)
Para una mejor visualizacin de las caractersticas del parsito observar el frotis (300) campos
microscpicos para determinar si la muestra de sangre es positiva o negativa para malaria, pero
si el diagnstico es dudoso examinar 400 a 500 campos microscpicos.
5.
Cuando la lmina es positiva a malaria se debe informar de la siguiente manera:
+/2
De 40 a 60 parsitos en 100 campos
Un parsito por campo en 100 campos
++
De 2 a 20 parsitos por camp en 100 campos
+++
De 21 a 200 parsitos por campo en 100 campos
++++
ms de 200 parsitos por campo en 100 campos
No aplica.
6.
No se debe encontrar ningn estadio de Plasmodium en la muestra sangunea.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

Diagnstico de Malaria. Serie de Normas. Tcnicas N 39. Lima Per.
HEMOCULTIVO (ME-LB-MC-32)
1.
METODO:
2.
53
El momento ptimo de obtencin de la muestra para hemocultivo es justo antes del pico ms alto
de fiebre, sin embargo esta situacin ideal no es frecuente. Alternativamente, las muestras
pueden obtenerse de acuerdo con el caso.
En adultos la cronologa y el nmero de cultivos se gua por lo siguiente:

En sepsis: se debe tomar dos o tres muestras de lugares diferentes en un lapso de diez minutos.
En endocarditis aguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes en un lapso de 1 a 2
horas.
En endocarditis subaguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes a intervalos de al
menos quince minutos. Si el cultivo es negativo a las 24 horas obtener tres muestras ms.
En fiebre de origen desconocido: Obtener dos o tres muestras de lugares diferentes con
diferencia de una hora o ms entre una y otra muestra. Si el cultivo es negativo a las 24 horas,
obtener dos o tres muestras ms.
3.
MATERIALES:
o
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero Bunsen
Caldo Infusin Cerebro Corazn (BHI)
Medios de cultivo
Lminas portaobjetos
Jeringa estril
Guantes de ltex
Alcohol al 70%
EQUIPOS:
o
Estufa
MUESTRAS:
o
4.
Sangre

o
La proporcin entre el volumen de sangre obtenida y el volumen de caldo de cultivo debe estar
en una relacin de 1:5 1:10.
El volumen de sangre depender de la edad del paciente; por cada venopuncin se recomienda:
Adultos:
10 30 ml.
Nios:
1 5 ml.
Lactantes:
1 2 ml.
Neonatos:
0.5 1.0 ml.
Utilizar el medio BHI . Desinfectar el diafragma del frasco de hemocultivo con alcohol al 70%
alcohol yodado.
Inocular la muestra de sangre al frasco con medio de cultivo a travs del diafragma. Debe
realizarse inmediatamente de obtenida la muestra para evitar que se coagule.
54
Mezclar el contenido del frasco inclinndolo suavemente dos o tres veces.
Descartar la aguja y la jeringa en un contenedor resistente a las punturas.
Limpiar la tapa del frasco. Etiquetar el frasco apropiadamente.
Incubar el frasco a 37 C. hasta por 7 das.
Examinar visualmente y con luz transmitida los frascos de hemocultivo despus de 12 y 24 horas
de incubacin.
La observacin de turbidez o lisis de los glbulos rojos es indicativa de crecimiento bacteriano;

entonces se realiza una coloracin Gram y un subcultivo.
Si no se observa lisis de los glbulos rojos o turbidez en el caldo, continuar observando todos los
das par ver si aparecen signos de crecimiento, hasta siete das despus de haber iniciado el
procedimiento.
Para realizar los subcultivos desinfectar la superficie de la tapa del frasco con alcohol de 70%.
Con una jeringa estril, extraer a travs del tapn de jebe la muestra de sangre.
Inocular una gota de muestra del hemocultivo en un extremo de la superficie de las placas de
agar sangre, chocolate, mac conkey, manitol salado; en ese orden y con el asa se estra por
Colocar una gota de muestra de hemocultivo en una lmina portaobjetos para hacer un frotis y
coloracin Gram.
Incubar las placas a 37C por 24 horas.
5.
Si no hay crecimiento a las 24 horas seguir incubando hasta por 48 horas.
Si no hubiese desarrollo bacteriano, repetir el procedimiento al 5 y 7 da.
No aplica.
6.
No se debe encontrar bacterias en la muestra de sangre.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

IDENTIFICACION DE BARTONELLA (ME-LB-MC-33)
1.
METODO:
55
2.
Este examen se basa en la identificacin de la bacteria Bartonella causante de la bartonelosis en una

muestra frotis sanguneo.
3.
MATERIAL:
o
Algodn o Gasa
Alcohol
Lanceta estril
Metanol
Aceite de inmersin
EQUIPOS:
o
Microscopio
MUESTRA:
o
4.
Frotis sanguneo.

o
Realizar la desinfeccin del dedo anular con alcohol, haciendo unos leves masajes.
Punzar el dedo con la lanceta estril.
Presionar el dedo levemente para que fluya la sangre
Descartar la primera gota de sangre con una torunda de algodn seco y tomar la muestra de la
yema de los dedos colocando una gota en el primer tercio superior externo de la superficie de la
lmina. El tamao e esta gota se aproxima al tamao de una cabeza de fsforo.
Limpiar la sangre restante del dedo con una torunda de algodn humedecida en alcohol e indicar
al paciente que presione esta torunda contra el lugar de la puncin por 5 minutos.
Obtener informacin del paciente sobre su sintomatologa y posible estada en zonas de riesgo.
El frotis sanguneo se realiza utilizando una lmina auxiliar, ponindola en contacto con la
superficie de la lmina que contiene la gota, hacerla correr firmemente a lo largo de su borde en
un ngulo de 45 grados.
Dejar que sequen las lminas en forma horizontal y fijar el frotis con metanol.
Colorear el frotis con Giemsa filtrado diluido en agua destilada en proporcin (1:1).
Lavar el exceso de colorante con agua corriente y esperar que sequen a medio ambiente y
observar al microscopio con objetivo de inmersin (100X) el frotis buscando las diferentes formas
de la bacteria Bartonella (cocos, cocobacilos o bacilos).
Observar 100 campos microscpicos ptimos siguiendo un determinado patrn.
Anotar el nmero de bacterias observadas y la forma encontrada.
56
Para una mejor visualizacin de las caractersticas de la bacteria observar el frotis (300) campos
microscpicos para determinar si la muestra de sangre es positiva o negativa para Bartonella.
Cuando la lmina es positiva a Bartonella se debe informar de la siguiente manera:
< del 1%
Menos de 1 bacteria por campo en 100 campos
1%
1 bacteria por campo en 100 campos microscpicos
2 o 3%
Cuando se observa ms de 1 bacteria por campo en 100

campos microscpicos
5.
No aplica.
6.
No se debe encontrar bacterias cocoides, cocobacilares o bacilares sugerentes a Bartonella en la muestra

sangunea.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 2006. Diagnstico Bacteriolgico de la Bartonelosis Humana o

Enfermedad de Carrin. Lima Per.
IDENTIFICACION DE LEISHMANIA (ME-LB-MC-34)
57
1.
METODO:
2.
Este examen se basa en la identificacin del parsito causante de la leishmaniasis en una muestra de
extendido de lesin.
3.
MATERIAL:
o
Lminas portaobjetos
Capilares sanguneos
Mechero
Algodn o Gasa
Agua destilada esteril
Fsforos
Metanol
Aceite de inmersin
EQUIPOS:
o
Microscopio
MUESTRAS:
o
4.
Extendido linftico drmico obtenido del borde de la lesin sospechosa de leshmaniasis.

o
Desinfectar la lesin ulcerosa tipo crter, realizando una compresin de la lesin
Fabricacin de las micropipetas estriles (capilares sanguneos aguzados en uno de los

extremos)
Realizar una puncin en el borde en crecimiento de la lesin ulcerosa tipo crter, presionando, y
esperar que termine de salir la sangre para posteriormente obtener la linfa drmica y realizar el
extendido en las lminas.
Una vez obtenida una buena muestra, fijarla con metanol.
Colorear con Giemsa filtrado diluido en agua destilada en proporcin (2:1).
Dejar colorar por espacio de 5 a 10 minutos, dependiendo de la maduracin del colorante y luego
lavar con agua de cao.
Esperar que seque a medio ambiente y observar al microscopio con objetivo de inmersin
(100X), buscando formas amastigotas del parsito.
5.
No aplica.
58
6.
Normalmente no debe encontrarse formas amastigotas del parsito, para no ser considerado como un
caso patolgico.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Instituto Nacional de la Salud. 2000. Leishmaniasis. Mdulos Tcnicos- Serie Documentos

Monogrficos N 8. Lima Per.
59
INVESTIGACION DE CRYPTOCOCCUS (ME-LB-MC-35)
1.
METODO:
Tinta china
2.
Este examen est basado en la identificacin de Cryptococcus usando la tinta china como tincin
negativa, con la finalidad de darle contraste al fondo sin colorear la clula que es lo que se desea
observar.
3.
MATERIAL:
o
Asa bacteriolgica
Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Tinta china
EQUIPOS:
o
Microscopio
MUESTRAS:
o
4.
Lquido Cefalorraquideo.

o
Haciendo uso de un asa bacteriolgica, colocar la muestra de lquido cefalorraquideo en la

lmina portaobjetos y a un costado una gota de tinta china.
Usando la lminilla mezclar la tinta china con la muestra hasta homogeneizarla.
Observar al microscopio con objetivo de 40X el contraste de fondo y la clula levaduriforme de

Cryptococcus transparente.
5.
No aplica.
6.
No se debe encontrar formas levaduriformes en la muestra de esputo.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

60
ORINA COMPLETA (ME-LB-MC-36)
1.
METODO:
2.
Es una de las pruebas mas frecuentemente solicitadas por su utilidad en el diagnstico clnico. Se emplea
para obtener informacin, de manera indirecta, de la presencia de alteraciones renales, metablicas o
sistmicas.
3.
MATERIALES:
o
Tiras reactivas.
Frascos estriles.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Microscopio.
MUESTRA:
o
4.
Orina.

o
Se recomienda recoger la primera orina de la maana al despertar.
El examen de Orina Completa se divide en 3 fases:

La primera fase (Macroscpica) consiste en reportar las caractersticas fsicas de la muestra.
CARACTERISTICAS FISICAS:
VOLUMEN
Se anota el volumen.
COLOR
La orina normal presenta una amplia gama de colores, por lo cual est determinado por su concentracin.
El color puede variar de un amarillo plido a un mbar oscuro, segn la concentracin de los pigmentos
urocrmicos y, en menor medida, la urobilina y de la uroeritrina. Cuanto ms pigmento tenga, mayor ser
la intensidad del color.
61
Color
Causas patolgicas
Causas medicamentosas y
alimentarias
Aspecto turbio
cido rico, bacterias, clculos
Dieta alta en alimentos ricos en
(arenilla), carbonatos,
purinas (hiperuricosuria)
contaminacin con matria fecal,

eritrocitos, espermatozoides,
fosfaturia, grumus, hperoxaluria,
leucocitos, levaduras, lquido
prosttico, medio de contraste
radiopaco, mucina (moco), pus,
tejidos, urato
Aspecto lechoso
Caf
Cremas vaginales, grasas lipuria,

piuria
Pigmentos biliares, mioglobina
Leguminosas, levodopa,
metronidazol, nitrofurantoina,
algunos agentes antimalricos
Pardusco (castao) a negro
cido homogentsico, cido

parahidroxifenilpirvico,
fenol, melanina,
metahemoglobina,
mioglobina, pigmentos
Alfa-metildopa, compuestos de
hierro (especialmente
intravenosos), levodopa,
metronidazol, nitrofurantona,
quinina, resorcinol
biliares (bilirrubina),
porfirinas
Verde o azul
Biliverdina, infeccin del tracto
Acriflavina, amitriptilina, azul de
urinario por Pseudomona
Evans, azul de metileno,

cimetidina intravenosa, complejo
de vitamina B, fenilsalicilato,
ndigo
carmn, prometazina
intravenosa, timol, triamtereno

Amarillo fuerte a naranja
Pigmentos biliares (bilirrubina),
Acriflavina,
azogastrina,
urobilina
colorantes de alimentos,
fenazopiridina, fenotiazinas,
nitrofurantona,
orina
concentrada, Pyridium,
quinacrina, riboflavina, ruibarbo,
62
serotonina, sulfasalazina,
zanahoria
Rojo o castao a prpura
Rosado o rojo
Porfirinas, porfobilingeno,
Fenoltaleina, remolacha,
uroporfirinas
rifampicina, ruibarbo, zarzamora
Hematuria, hemoglobinuria,
Amiodarona, antipiramina,
mioglobinuria, porfirinas,
bromosulftalena, colorantes de
profobilina
alimentos, difenilhidantona,
fenacetina, fenotiazina,
metildopa, Pyridum, remolacha
Pus, quilo
Blanco
Fosfatos
La segunda fase (Qumica) consiste en analizar varios parmetros a travs de tiras reactivas.
El procedimiento para usar las tiras reactivas es el siguiente:
o
Sumergir completamente las reas de prueba de la tira en orina fresca, bien mezclada y sin
centrifugar y retirar la tira en forma inmediata. Debe tenerse cuidado de no tocar las reas
reactivas.
Eliminar el exceso de orina de la tira tocando con el borde de ste el frasco que contiene la
muestra. Las tiras deben sostenerse en posicin horizontal.
En el tiempo determinado comparar las reas reactivas con la correspondiente carta de colores
del envase, la lectura deben hacerse con buena iluminacin para lograr una comparacin exacta
del color.
pH
Principio de la prueba
La prueba se basa en la combinacin de tres indicadores: el rojo de metilo, el azul de bromotimol y la
fenolftalena, que reaccionan con los iones de hidrgeno, presentes en la muestra de orina. Las
reacciones producen cambios cromticos, que van del naranja al verde amarillo y al azul, que el
bacterilogo mediante una tabla de comparacin puede leer o el lector de tirillas detectar para determinar
el pH de la orina. Antes de interpretar el pH de la orina vale la pena recordar que los riones normales
producen orina con pH de 4,6 a 8,0, usualmente ste se encuentra alrededor de 5,5 a 6,5. La orina se
torna ms alcalina despus de las comidas; debido a la secrecin de cido por la mucosa gstrica su pH
es mas bajo en estados de ayuno. Las protenas causan disminucin del pH y los ctricos lo aumentan.
Adems, en los nios usualmente es alcalina, relacionado con el consumo de leche.
Interpretacin de la prueba
63
Valores de referencia: 4,8 a 7,4 a lo largo del da y 5,5 a 6,5 en la orina de la primera muestra de la
maana. Una de las principales funciones del rin es mantener el equilibrio cido-base del organismo,
de tal manera que el pH sanguneo se mantenga estable. En trminos generales, a excepcin de los
pacientes con acidosis tubular renal, el pH de la orina refleja el pH srico. La incapacidad para acidificar la
orina a un pH menor de 5.5, a pesar de un ayuno prolongado y de la administracin de una carga de
cido, es considerado como el sello caracterstico de la acidosis tubular renal. En la acidosis tubular renal
tipo I (distal), el pH srico es cido pero la orina es alcalina, esto es secundario a la incapacidad de
secretar los protones en la orina. La acidosis tubular renal tipo II (proximal) se caracteriza por una
inhabilidad en la absorcin del bicarbonato. Esta situacin produce la orina alcalina inicialmente, pero
como la carga de filtracin de bicarbonato disminuye, la orina se torna ms cida.
Utilidad clnica
El pH de la orina es til en la evaluacin del estado cido-bsico de un determinado paciente, por
ejemplo: Pacientes pH < 7 debido a una acidosis metablica por ayuno prolongado, acidosis diabtica,
insuficiencia renal, acidosis tubular renal, algunas sustancias qumicas y medicamentos (salicilatos, etilenglicol, alcohol, biguanidas, anfotericina, espironolactona) o una acidosis respiratoria por retencin de CO2,
como puede ocurrir en pacientes con enfisema. Pacientes con pH > 7 debido a alcalosis metablica por
deficiencia grave de potasio, ingestin excesiva de lcalis, diurticos y vmito a alcalosis respiratoria por
hiperventilacin. El pH de la orina tambin es de utilidad en el diagnstico y manejo de las infecciones y
clculos del tracto urinario. La orina alcalina en un paciente con infeccin del tractourinario sugiere la
presencia de un organismo que degrada la urea, la cual puede estar asociada con cristales de fosfato de
amonio y magnesio que pueden formar clculos coraliformes. Los valores de pH reiteradamente alcalinos
evidencian una infeccin del tracto urogenital, a pesar de la disminucin de la sobrevida de los leucocitos.
Los clculos de cido rico estn asociados con la acidificacin de la orina.
Resultados falsos positivos o negativos
Si la muestra no se procesa en el tiempo adecuado, la orina puede tornarse alcalina como consecuencia
de la descomposicin bacteriana de la urea y en este caso la determinacin del pH carecera de valor
diagnstico.
Limitaciones de la prueba
El pH urinario puede modificarse segn los hbitos nutricionales del individuo: las protenas animales y las
frutas cidas acidifican la orina y las dietas vegetarianas y ricas en citrato la alcalizan. Cuando el pH
urinario se encuentra en extremos, alto o bajo, puede haber destruccin prematura de leucocitos y
eritrocitos, lo que explica la combinacin de resultados negativos en el sedimento con una reaccin
positiva para alguna de estas clulas en la tira.
GRAVEDAD ESPECFICA (PESO ESPECFICO O DENSIDAD)
La prueba, mediante reaccin con un formador de complejos y deteccin de los protones liberados, mide
las concentraciones inicas en orina. Como resultado de las reacciones se producen cambios cromticos,
que el bacterilogo mediante una tabla de comparacin puede leer o el lector de tirillas detectar.
64
Valores de referencia: 1.016 a 1.022. A diferencia de la osmolaridad, que depende slo del nmero de
partculas en la orina, la gravedad especfica depende tanto del peso como del nmero de ellas. Es as
como sustancias de alto peso molecular pueden aumentar significativamente la gravedad especfica sin
mayor modificacin de la osmolaridad. Desde el punto de vista de los valores de la gravedad especfica
de la orina, hay trminos que se definen con ella: isostenuria cuando constantemente est en 1.010 e
hipostenuria cuando est por debajo de este valor; en tanto que el trmino de hiperstenuria no se utiliza.
En estado normal, la gravedad especfica de la orina puede oscilar entre 1.003 y 1.030, pero en la
prctica, un valor menor de 1.010 indica una relativa hidratacin y un valor mayor de 1.020 sugiere una
relativa deshidratacin.
Utilidad clnica de la prueba
Como parmetro de laboratorio, la gravedad especfica ofrece al mdico informacin importante sobre el
estado de hidratacin y de la capacidad de concentracin de los riones de un paciente. La gravedad
especfica de la orina se aumenta en presencia de glucosuria, en el sndrome de secrecin inapropiada de
la hormona antidiurtica y puede estar disminuida por el uso de diurticos, en la diabetes inspida, en el
hiperaldosteronismo, en la insuficiencia suprarrenal y cuando hay dao de la funcin renal. En la mayora
de los pacientes con enfermedad renal parenquimatosa, el margen de variacin de la gravedad especfica
se estrecha con el tiempo, hasta que finalmente el filtrado glomerular no se altera en su paso por el nefrn
en donde se fija en 1.010 o menos. En el paciente con oliguria, la densidad especfica puede ayudar a
distinguir entre insuficiencia renal aguda, en la que hay isostenuria y la oliguria por deshidratacin, en la
cual se encuentra elevada. Ejemplos de hipostenuria persistente son la diabetes inspida, la ingestin
compulsiva de agua, la hipopotasemia grave, la hipercalcemia, enfermedades renales parenquimatosas
fundamentalmente del tipo de tbulo intersticial, la insuficiencia renal aguda y los defectos tubulares
renales.
Resultados falsos positivos o negativos
La gravedad especfica tiende a estar falsamente elevada en orinas con pH por debajo de 6 y falsamente
disminuida en orinas con pH por encima 717,18. Cuando en la orina hay pequeas cantidades de
protenas (100 a 500 mg/da) o cetonuria, la gravedad especfica usualmente arroja valores un poco ms
altos que los reales.
La gravedad especfica de la orina depende del estado de hidratacin, la cual puede estar modificada,
intencional o accidentalmente, debido a la ingesta de stos, la transpiracin, la temperatura
medioambiental y el uso de diurticos, incluido el caf. Cuando la densidad especifica est por debajo de
1.010 tiene significacin analtica por cuanto en dicha orina, cuando hay eritrocitos y/o leucocitos, stos se
destruyen rpidamente dando como resultado un sedimento urinario negativo (falso negativo) mientras
que la reaccin para eritrocitos y leucocitos es positiva en la tirilla (verdadero positivo).
Interferencia con medicamentos
Los medicamentos, y cualquier otro tipo de sustancias, que modifican la diuresis pueden dar resultados
falsamente bajos o altos, con valores que pueden oscilar entre 1.000 y 1.040, incluso en personas sanas.
PROTENAS
65
La prueba se basa en el denominado error de protena de los indicadores de pH. En la zona de reaccin
de la tirilla hay una mezcla tampn y un indicador que cambia de color amarillo a verde en presencia de
protenas en la orina, aunque el pH se mantenga constante. Estos cambios cromticos pueden ser
detectados por el lector de tirillas o ledos por el bacterilogo mediante una tabla de comparacin para
determinar la presencia de protenas en la orina. La reaccin es particularmente sensible a la albmina,
siendo positiva a partir de concentraciones de albmina mayores de 6 mg/dL.
Valores de referencia:
Negativo (< 10 mg/dL). En personas sanas, la pared capilar glomerular es permeable slo a sustancias
con un peso molecular menor de 20.000 daltons. Una vez filtradas, las protenas de bajo peso molecular
son hidrolizadas, reabsorbidas y metabolizadas por las clulas tubulares proximales. Entre las protenas
urinarias normales se incluyen la albmina, las globulinas sricas y las protenas secretadas por los
tbulos renales. El uroanlisis por tirilla presenta una sensibilidad y especificidad mayor del 99% para
detectar la albuminuria25. La proteinuria, uno de los aspectos ms caractersticos de la enfermedad renal,
es definida como la excrecin urinaria de protenas mayor de 150 mg por da.
Desde el punto de vista prctico, la proteinuria detectada por la tira reactiva cualitativamente, en cruces,
se correlaciona cuantitativamente en la siguiente escala: 1+ (una cruz) corresponde aproximadamente a
30 mg/dL de protena, ++ corresponden a 100 mg/dL, +++ a 300 mg/dL y ++++ a 1.000 mg/dL.
Utilidad clnica
Es importante aclarar que la presencia de protenas en orina no constituye una prueba de nefropata, ni su
ausencia la excluye. En todos los casos en que se encuentre en la orina, o se sospeche clnicamente, se
debern realizar los estudios complementarios y establecer un diagnstico diferencial adecuado.
GLUCOSA
Con tiras reactivas impregnadas con la enzima glucosa oxidasa puede detectarse slo glucosa. Estas
tiras utilizan las dos reacciones enzimticas secuenciales siguientes:
Glucosa + O2 GLUCOSA OXIDASA cido glucnico
H2O2 + cromgeno PEROXODASA cromgeno oxidado + H2O
El cromgeno que se utiliza vara con las diferentes tiras reactivas.
Negativa (< 30 mg/dL). Normalmente la glucosa es filtrada por el glomrulo, pero sta es reabsorbida casi
completamente en el tbulo proximal. La glucosuria ocurre cuando la carga de glucosa filtrada excede la
capacidad de reabsorcin del tbulo, es decir 180 mg/d.
Utilidad clnica
Entre las diferentes causas de glucosuria estn la diabetes mellitus, el sndrome de Cushing, la
enfermedad pancretica, las enfermedades hepticas y el sndrome de Fanconi. La ausencia de
glucosuria no excluye un trastorno del metabolismo de la glucosa y sobretodo, no excluye el diagnstico
de diabetes mellitus.
66
Resultados falsos positivos

La presencia de restos de detergentes que contengan perxido de hidrgeno u otros oxidantes fuertes en
los recipientes utilizados para tomar o manejar la muestra, puede inducir resultados falsos positivos.
Resultados falsos negativos
Las primeras tirillas daban resultados falsos negativos por interferencia con vitamina C (cido ascrbico)
en la orina, situacin que en las tiras reactivas disponibles en la actualidad est completamente
controlada.
CETONAS
La prueba se basa en el principio de la prueba de Legal. El cido acetoactico y la acetona reaccionan
con nitroprusiato sdico y glicina en un medio alcalino para formar un complejo color violeta, que el
bacterilogo mediante una tabla de comparacin puede leer o el lector de tirillas detectar para determinar
la presencia de cetonas en la orina. La reaccin es especfica para el cido acetoactico y la acetona. No
es interferida por el cido beta-hidroxibutrico ni por la presencia de glucosa, protenas y cido ascrbico
en la muestra.
Negativo (< 5 mg/dL). Las cetonas (cido acetoactico, beta hidroxibutrico y acetona) aparecen en la
orina cuando en el organismo se produce un aumento de la degradacin de las grasas por un aporte
energtico insuficiente de hidratos de carbono.
Utilidad clnica:
Desde el punto de vista clnico, la deteccin de cetonuria, sin ser exclusiva, es particularmente til en los
pacientes con diabetes mellitus. La cetonuria se encuentra muy asociada a la diabetes descompensada,
pero tambin puede ocurrir durante el embarazo, debido a dietas libres de carbohidratos, a
deshidratacin, ayuno, inflamacin intestinal e hiperemesis.
UROBILINOGENO
Principio de la prueba:
Una sal de diazonio estable, p-metoxibenceno diazoniofluoborato presente en la tira reactiva, reacciona
casi inmediatamente con el urobilingeno, dando lugar a la formacin de un colorante azoico rojo, que el
bacterilogo mediante una tabla de comparacin puede leer o el lector detirillas detectar. urobilingeno
tiene variacin diurna, una razn ms para estandarizar la muestra a la primera de la maana.
67
Se pueden presentar resultados falsos negativos cuando el paciente recibe antibiticos por va oral,
debido a que stos disminuyen significativamente el nmero de bacterias que degradaran la bilirrubina en
la luz intestinal, cuando hay suspensin de la colepoyesis (estimulacin de la produccin de bilis) en el
hgado por ejemplo en hepatitis viral severa y lesiones hepatotxicas graves o cuando hay una
obstruccin de los conductos biliares, debido a que en este caso la bilirrubina no pasara al tracto
digestivo. Tambin se presentan resultados falsos negativos cuando la muestra se procesa ms all del
tiempo ptimo, debido a la oxidacin del urobilingeno expuesto a la luz y cuando la orina es conservada
con formaldehdo a una concentracin mayor de 200 mg/dL.
El pH alcalino de la orina aumenta la depuracin del urobilingeno y aumenta la cantidad del urocromo en
la orina18.
Interferencia con medicamentos:
Se presenta interferencia con las sulfonamidas, el PABA (cido para-amino benzoco) y el cido paraaminosaliclico ya que pueden ocurrir resultados falsos positivos para urobilingeno. Otros frmacos que
tien la orina de rojo o son de color rojo en un medio cido, como la fenazopiridina, tambin pueden dar
resultados falsos positivos.
BILIRRUBINA
La prueba se basa en la unin de la bilirrubina con una sal de diazonio estable (2,6- diclorobencenodiazoniofluoborato) en un medio cido del papel reactivo. La ms leve coloracin rosada indica un
resultado positivo, que el bacterilogo mediante una tabla
Interpretacin de la prueba y utilidad clnica
Negativo (< 0,2 mg/dL). Las reacciones que se presentan en la tirilla son muy sensibles y pueden detectar
cantidades tan pequeas como 0,05 mg/dL de bilirrubina en la orina. La bilirrubina conjugada es soluble
en agua y en consecuencia puede encontrarse en la orina de pacientescon ictericia obstructiva, dao
heptico y cncer de pncreas o de conductos biliares, en tanto que la bilirrubina no conjugada, la que
resulta de procesos hemolticos, es insoluble en agua y no pasa a travs del glomrulo y por lo tanto no
aparece en la orina. Por consiguiente, en ictericias hereditarias, como en la enfermedad de DubinJohnson y en el sndrome de Rotor es positiva y es negativa en el sndrome de Gilbert y en la enfermedad
de Crigler-Najjar.
Se pueden presentar frente a grandes cantidades de cido ascrbico y nitritos en la orina. Tambin por la
inestabilidad del analito, cuando la orina se procesa despus de varias horas de exposicin a la luz en las
mesas del laboratorio18.
68
En caso de que la orina se contamine con materia fecal puede obtenerse un resultado falso positivo.
Adems, por medicamentos que tien la orina o que se tornan rojos en contacto con un medio cido,
como la fenazopiridina18.
NITRITO
La prueba se basa en el principio del ensayo de Griess y es especfica para el nitrito. La reaccin revela la
presencia de nitrito y por lo tanto, indirectamente, la existencia de bacterias formadoras del mismo en la
orina, coloreando el tampn de la prueba de color rosa rojizo.
Negativo. Los nitritos normalmente no se encuentran en la orina, se producen cuando las bacterias
reducen los nitratos urinarios a nitritos. La mayora de los organismos Gram negativos y algunos Gram
positivos son capaces de realizar esta conversin, por lo que un resultado positivo indica que estos
microorganismos estn presentes en una cantidad considerable (ms de 10.000 por mL).
Utilidad clnica de la prueba:
La prueba es muy especfica pero poco sensible, por lo que un resultado positivo es til, pero un resultado
negativo no descarta una infeccin del tracto urinario. La deteccin de nitrito es especfica de la presencia
de bacteriuria y en todos los casos debe ser confirmada por un cultivo. Un resultado de nitrito negativo no
excluye una infeccin del tracto urinario porque el recuento bacteriano y el contenido de nitratos pueden
variar ampliamente, o la bacteria presente en la orina puede no contener la enzima reductasa, que
convierte el nitrato a nitrito.
Limitaciones de la prueba:
El reactivo para nitritos es sensible al contacto con el aire, por lo que los recipientes se deben cerrar
inmediatamente se retire una tira de uroanlisis. Despus de una semana de exposicin, una tercera
parte de las tiras pueden dar resultados falsos positivos y despus de dos semanas, las tres cuartas
partes, circunstancia que frecuentemente pasa inadvertida en laboratorios clnicos con baja carga de
trabajo.
LEUCOCITOS
La tirilla tiene una zona que contiene un ster de indoxilo que es disociado por la esterasa leucocitaria. El
indoxilo libre reacciona con una sal de diazonio para formar una tincin violeta.
Negativo (menos de 10 leucocitos por mL). Los leucocitos excretados en la orina son casi exclusivamente
granulocitos (polimorfonucleares neutrfilos y eosinfilos) y la tirilla reactiva detecta su presencia
mediante la actividad de la estearasa que poseen. La prueba de estearasa detecta la presencia de
leucocitos a niveles tan bajos como 5 clulas por campo de alto poder, tanto ntegras como lisadas,
69
situacin que explica porqu un resultado positivo en la tirilla puede ser negativo para leucocitos en el
sedimento.
Utilidad clnica:
La prueba es muy buena cuando hay infecciones urinarias con recuentos mayores de 105 UFC/mL y
cuando se combina con la prueba de nitrito, con una sensibilidad del 84%, especificidad del 98,3%, valor
predictivo positivo del 84% y negativo del 98,3%.La prueba de estearasa leucocitaria cuando se compara
con el microscopio tiene una sensibilidad y especificidad de 80% y 70% respectivamente18.
Los microorganismos como
Se pueden presentar por contaminacin de la muestra con secreciones vaginales o uretrales.
Cuando en la muestra de orina hay grandes cantidades de albmina, cido ascrbico y glucosa, as como
cuando la gravedad especfica est muy elevada. Tambin puede presentarse en pacientes con
neutropenia18.
An con piuria al microscopio, la estearasa leucocitaria es un mal predictor de urocultivo positivo.
SANGRE
La prueba detecta sangre completa (eritrocitos), sangre lisada (hemoglobina) y mioglobina. Para lograr el
objetivo, la prueba se basa en la accin peroxidativa de la hemoglobina o la mioglobina que cataliza la
oxidacin del indicador cromtico (TMB: tetrametil-bencidina) mediante un hidroperxido orgnico, el 2,5dimetilhexano-2,5-dihidroperxido, para producir un color azul verdoso.
Utilidad clnica
De acuerdo con la Asociacin Americana de Urologa, se acepta como definicin de hematuria la
presencia de tres o ms eritrocitos por campo de alto poder en dos o tres muestras de orina. La
visualizacin de eritrocitos intactos en el examen microscpico del sedimento urinario puede diferenciar la
hematuria de otras condiciones.
Valores de referencia: negativo (0 a 2 eritrocitos por mL). la actividad peroxidasa de los eritrocitos. Sin
embargo, la mioglobina y la hemoglobina tambin pueden catalizar esta reaccin, por lo que un resultado
positivo de la prueba puede indicar hematuria, hemoglobinuria o mioglobinuria.
En la tercera fase, el examen microscpico es una parte indispensable del uroanlisis, la identificacin de
cilindros, de clulas, de cristales y de microorganismos ayuda a dirigir el diagnstico en una variedad de
condiciones.
o
Se toman de 10 a 15 mL de orina fresca que debe ser centrifugada a 1,500 3,000 rpm (400 g)
por 5 minutos.
70
El sobrenadante es decantado y el sedimento es resuspendido en el lquido remanente, de este

se transfiere una gota a una lmina porta objeto limpia y se aplica un cubre objetos.
Se hace la observacin microscpica a 10 X en un panorama general y 40 X para contar por

campo.
CONSTITUYENTES DEL SEDIMENTO URINARIO

En individuos sanos se excretan algunos eritrocitos, leucocitos, clulas y cilindros en la orina. Su nmero
puede aumentar en individuos normales despus de ejercicios fuertes o de exposicin al fro intenso.
Muchas sustancias exgenas pueden contaminar el sedimento urinario, como fragmentos de algodn,
bacterias o levaduras procedentes de recipientes sucios y grnulos de almidn. Tambin pueden aparecer
en la orina secreciones vaginales, incluyendo bacilos y tricomonas.
CLULAS
Es posible identificar dos tipos de clulas en el sedimento urinario de acuerdo con su origen: las que
proceden (de la descamacin) del tracto urinario y las que proceden de la sangre.
Clulas procedentes del tracto urinario
En la orina de individuos normales es habitual encontrar algunas clulas derivadas de la descamacin del
tracto urinario, con morfologa caracterstica de acuerdo con el epitelio de donde se originan: las tubulares
o renales, las de transicin y las pavimentosas o escamosas.
Las clulas tubulares o renales se derivan de epitelio que recubre los tbulos proximal, distal y colector
(valor de referencia: 0 a 2 clulas por campo de alto poder) y su aumento se asocia con un dao tubular
desencadenado por diferentes situaciones como la necrosis tubular aguda y la pielonefritis.
Las clulas de transicin se derivan de los epitelios que recubren el tracto urinario desde la pelvis renal
hasta la porcin superior de la uretra y su presencia aumentada, usualmente con leucocitosis, sugiere
inflamacin del tracto urinario que recubren. Si se presentan en acmulos son sospechosas de un
proceso maligno localizado entre la pelvis renal y la vejiga urinaria.
Las clulas pavimentosas o escamosas, son grandes y de bordes irregulares, con un ncleo pequeo y
un citoplasma granular fino, se derivan de los epitelios que recubren la porcin inferior de la uretra y la
vagina. El aumento de estas clulas en la orina de la mujer es altamente sospechosa de contaminacin
de la muestra, por lo que debe repetirse antes de darles una interpretacin clnica.
Clulas procedentes de la sangre
Los eritrocitos y leucocitos que se observan en el sedimento urinario pueden proceder de cualquier sitio
del tracto urinario, desde el glomrulo hasta la uretra.
ERITROCITOS
Normalmente se encuentran en muy poca cantidad (valores de referencia: 0 a 3 por campo de alto poder).
GLBULOS ROJOS Y CILINDROS DE GLBULOS ROJOS
Los glbulos rojos pueden confundirse con gotas de grasa, levaduras o clulas epiteliales degeneradas.
Cuando hay presencia de cogulos en la orina debe sospecharse que el origen de la hematuria est en
las vas excretoras.
71
La presencia de cilindros de glbulos rojos, hemticos o eritrocitarios, cuyo significado es el mismo,

siempre indican enfermedad y deben ser buscados diligentemente. Estos cilindros hemticos se forman a
travs del paso de los eritrocitos por los tbulos renales quedando atrapados en los cilindros formados por
la mucoprotena de Tamm-Horsfall, por lo tanto son siempre indicativos de enfermedad renal
parenquimatosa.
LEUCOCITOS
La orina normalmente tiene algunos leucocitos (valores de referencia: 0 a 4 por campo de alto poder). La
mayora de los leucocitos observados en la orina son polimorfonucleares neutrfilos que en la prctica no
se diferencian.
La presencia anormal de leucocitos en orina (leucocituria) debe hacer pensar al mdico en la posibilidad
de una infeccin urinaria pero no debe olvidarse que en el caso de las mujeres pude haber contaminacin
con flujo vaginal, en cuyo caso tambin se observan clulas epiteliales. Las leucociturias son importantes
en enfermedades inflamatorias de las vas urinarias, como en la uretritis, la cistitis y la pielonefritis,
particularmente en las formas aguda. Tambin pueden verse en pacientes con procesos febriles, tumores
de las vas urinarias y trastornos inflamatorios crnicos o agudos.
CILINDROS
Los cilindros son estructuras longitudinales formadas en los tbulos renales debido a la precipitacin o
gelificacin de la mucoprotena de Tamm-Horsfall o a la inclusin de diferentes elementos a una matriz
proteica, dicha mucoprotena no se encuentra en el plasma y es secretada por las clulas epiteliales del
tbulo renal. Los cilindros estn constituidos por caras paralelas y extremos redondeados o romos, su
forma y tamao depende de las caractersticas del tbulo donde se forme. Los cilindros pueden ser
utilizados para localizar el sitio especfico del tracto urinario donde ocurre la enfermedad.
El tipo de cilindro est determinado por los elementos celulares predominantes, por lo tanto pueden
formarse diferentes tipos de cilindros: hialinos, eritrocitarios, leucocitarios, bacterianos, epiteliales,
granulares (finos, burdos y pardos), anchos, grasos, creos y mixtos por combinacin de los anteriores.
En estado normal, usualmente no se observan cilindros, a pesar de que despus de ejercicio intenso
pueden aparecer ocasionalmente algunos hialinos o granulosos, los otros tipos de cilindros, por lo general
acompaados de proteinuria, indican enfermedad renal.
CRISTALES
Son elementos que se forman debido a la precipitacin de diferentes componentes urinarios como
consecuencia de su aumento en la orina, o por la alteracin en la solubilidad de esta ltima4. Los cristales
ms frecuentes son los uratos y los fosfatos amorfos, los oxalatos de calcio, los de cido rico y los de
trifosfato de amonio y magnesio. Normalmente, en la orina recin emitida no se encuentran cristales:
estos pueden aparecer despus de un reposo prolongado de la muestra o luego de haber sido sometida a
cambios en la temperatura, por lo tanto, la bsqueda de stos debe hacerse en una orina fresca. Para la
diferenciacin interpretacin de los cristales es necesario conocer el pH de la muestra
y las caractersticas de solubilidad de los componentes ya que en las orinas alcalinas aparecern cristales
de carbonato de calcio, fosfato de calcio, uratos de amonio, fosfato triple, y en las orinas cidas
aparecern cristales de cido rico, uratos de sodio y oxalato de calcio. La mayora de los cristales
aparecen nicamente despus de que la orina ha alcanzado la temperatura ambiente. La presencia de
cristales en la orina puede tener un valor diagnstico importante, sin embargo en raras ocasiones ofrecen
informacin clnica fundamental. La presencia de cristales en la orina tiene significado patolgico en caso
72
de trastornos metablicos, en la formacin de clculos y en la regulacin de medicamentos4. Los cristales

de mayor importancia clnica son:
o Los cristales de cistina, presentes enalteraciones del metabolismo de la cistina.
o Los cristales de leucina, en la leucinosiso enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce y en
las hepatopatas graves.
o Los cristales de tiroxina en la tirosinosisy en las hepatopatas graves.
o Los cristales de colesterol en casos de quiluria, embolismo por colesterol y procesos nefrticos y
nefrticos.
o Los cristales de bilirrubina, en casos de hiperbilirrubinemia severa.
o Los cristales de sulfonamidas, relacionados con las sulfas que pueden llevar a dao renal por su
precipitacin a nivel de los tbulos renales.
OTROS ELEMENTOS
Aparte de los hasta aqu enunciados, en el sedimento urinario pueden encontrarse, en mnimas
cantidades y sin significado clnico, bacterias, blastoconidias, moco, gotas de grasa y espermatozoides.
5.
No aplica.
6.
No debe encontrarse los elementos mencionados anteriormente en la muestra de orina.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
Campuzano, G.; M. Arbelez. El Uroanalisis: Un gran aliado del Mdico. Urologa Colombiana.
Medelln Colombia.

Salud. Publicacin Cientfica N 439. Washington E.U.A.
73
ORINA COMPLETA +GRAM SIN CENTRIFUGAR (ME-LB-MC-36 y 25)
1.
METODO:
2.
El examen de gram de orina sin centrifugar es muy importante y relevante ya que le permite
identificar rpidamente la presencia o no de bacterias.
3.

MATERIALES:
o
Tiras reactivas.
Frascos estriles.
Mechero.

Lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Agua corriente.
Asa bacteriolgica.
Aceite de inmersin.
Fsforos.
Frascos estriles.
Agua y jabn.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Microscopio.
MUESTRA:
o
4.
Orina asptica obtenida del chorro medio.

o
Para la recoleccin de muestras de orina en nios, puede utilizarse una bolsa de plstico estril
colectora de orina. La bolsa se colocar despus de haber lavado los genitales adhirindola a la
piel por medio de un anillo adhesivo. Si no es posible recolectar orina en los siguientes 45
minutos, deber cambiarse la bolsa por una nueva.
74
En mujeres se debe higienizar la zona genital con agua y jabn, de adelante hacia atrs, secar
con toalla limpia, y se debe colocar un tapn vaginal (torunda de gasa o algodn). Se elimina el
primer chorro (10 ml.) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (10 20 ml.) Se
recomienda orinar separando los labios mayores.
En hombres se debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balano prepucial con agua
y jabn, y secar con toalla limpia. Se elimina el primer chorro (10 ml.) y se recolecta en frasco
estril la fraccin siguiente (10 20 ml.)
5.
Se homogeniza la orina agitndose suavemente.
Con ayuda de una asa bacteriolgica estril se realiza una extensin en una lmina portaobjeto.
Para el estudio fsico, qumico y sedimento se sigue el procedimiento de la orina completa.
No aplica
6.
No debe encontrarse formas bacilares ni cocos en la coloracin Gram.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Argeri, N.; H. Lopardo. Anlisis de Orina. Fundamentos y Prcticas. Edit. Mdica

Panamericana. Buenos Aires Argentina.
Medelln Colombia.

Krupp, M.; L. Tierney; E. Jawetz; R. Roe; C. Camargo. 1988. Manual de Diagnstico Clnico y
de Laboratorio. Edit. El Manual Moderno, S.A. de C. V. Mxico.

75
TCNICA DE FAUST: MTODO DE SEDIMENTACIN Y FLOTACIN POR CENTRIFUGACIN CON

SULFATO DE ZINC AL 33,3% Y DENSIDAD 1180 (ME-LB-MC-37)
1.
METODO:
2.
PRINCIPO DEL TEST:

Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en la superficie por ser de menor
densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1180. Es til para la bsqueda de quistes
y/o huevos de parsitos y excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad
del sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
3.
MATERIALES, EQUIPOS Y MUESTRA:

MATERIALES:
o
Solucin salina.
Solucin lugol.
Marcador de vidrio.
Gradilla para tubos de ensayo.
Tubos de prueba 15 x 150
Tubos de prueba 13 x 100.
Embudo pequeo.
Gasa.
Sulfato de zinc 33,3%, densidad 1,180.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
Centrifuga.
MUESTRAS:
o
4.
Heces frescas.

o
Colocar 1 a 2 g de la muestra de heces en el tubo de prueba 13 x 100 o 15 x 150 y agregar de 7

a 10 mL de agua filtrada o destilada. Realizar una buena homogeneizacin con ayuda del
bajalengua o bagueta.
Colocar en el tubo, un embudo con dos capas de gasa y filtrar la muestra homogeneizada hasta
alcanzar 1 cm por debajo del borde del tubo (opcional).
76
Retirar el embudo y centrifugar de 2 000 a 2 500 r.p.m. de 2 a 3 minutos (opcional).
Decantar el sobrenadante, adicionar agua al sedimento, homogeneizar y repetir la centrifugacin

1 2 veces, hasta que el sobrenadante se observe limpio.
Eliminar el sobrenadante y agregar la solucin de sulfato de zinc (3-4 mL), homogeneizar y

completar con la misma solucin hasta 1 cm del borde del tubo.
Centrifugar de 1 a 2 minutos de 2 000 a 2 500 r.p.m.
Colocar el tubo en la gradilla y agregar, con ayuda de un gotero, la solucin de sulfato de zinc
hasta formar un menisco en la boca del tubo.
Colocar una laminilla cubreobjeto sobre el menisco y dejar en reposo de 5 a 6 minutos.
Depositar una gota de solucin lugol en la lmina portaobjeto.
Retirar la laminilla cubreobjeto, colocarla sobre la gota de lugol o con asa de colocar 3 4
asadas en la lmina y cubrir con una laminilla cubreobjeto y observar al microscopio.
5.
No aplica
6.
Normalmente no deben encontrarse parsitos intestinales en las heces.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o


Per.
77
PROTEINAS DE BENCE JONES (ME-LB-MC-38)
1.
METODO:
Prueba del calor por Harrison
2.
PRINCIPO DEL TEST:

Es una proteina especial de bajo peso molecular y de sensibilidad trmica, es una paraproteina, que
est presente en el 50 a 60% de los casos de mieloma multiple (casi siempre en su fase terminal), en
distintas neoplasias seas, osteomalacia y leucemias mieloides o linfoides crnicas.
3.

MATERIALES:
o
Tubos de vidrio 13 x 100.
cido actico 33%.
Papel filtro.
Galonera de plstico.
Goteros de plstico
EQUIPOS:
o
Bao mara.
Centrifuga.
MUESTRAS:
o
4.
Orina de 24 horas.

o
Se filtra la orina.
Colocar en 3 tubos de ensayo 5 ml. de orina filtrada.
En el primer tubo se coloca una gota de cido actico al 33% y en el segundo tubo dos gotas, el
tercer tubo no recibe cido actico.
Se calienta gradualmente en un bao mara, se agita los tubos cuidadosamente y se observa la

aparicin de turbidez.
o
5.
La protena de Bence Jones aparece entre 40 y 60C, y desaparece a mayor temperatura.
No aplica
6.
No aplica
78
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.

79
INVESTIGACIN DE SANGRE OCULTA (THEVENON) (ME-LB-MC-39)
1.
METODO:
Identificacin cualitativa.
2.
PRINCIPO DEL TEST:

El thevenon sirve para la bsqueda de sangre oculta en heces, lo cual es sumamente importante
para casos de un cncer oculto de tubo digestivo (colon), enfermedades parasitarias y otras
anormalidades.
El thevenon sirve tambin para la bsqueda de sangre oculta en orina, liquido seminal, etc.
3.

MATERIALES:
o
Aplicador (baja lengua).
Solucin salina.
Marcador de vidrio.
Perxido de hidrgeno.
Piramidn 1%.
cido actico 50%.
Tubos 16 x 100.
MUESTRAS:
4.
Heces frescas.
Orina ocasional.
Lquido seminal.

o
El paciente debe seguir una dieta de 3 das sin haber ingerido carnes rojas, alimentos con
colorantes ni verduras de coloracin naranja o rojo.
La cantidad debe ser mnima de 2 gr.
Las muestras seriadas durante algunos das, aumentan la exactitud del examen.
Generalmente se obtienen resultados falsos positivos en pacientes con hemorroides.
En un tubo colocar 8 ml. de solucin salina.
Hacer una suspensin con aproximadamente 2 gr. de muestra con la ayuda de un aplicador.
Agregar 7 gotas de cido actico al 50% y mezclar bien.
Aadir 1ml. de perxido de hidrgeno en zona (inclinar el tubo en ngulo de 45, permitiendo que
el reactivo aadido se deslice suavemente por la pared del tubo).
80
5.
Aadir en zona 1 ml. del reactivo piramidn al 1% y esperar 1 minuto.
Cuando la muestra sea orina se agrega 5 ml. de sta y se sigue el mismo procedimiento.
No aplica
6.
Si la prueba es positiva se formara un anillo color violeta en la zona de contacto entre la suspensin y el
piramidn. Se puede informar en cruces de acuerdo a la intensidad del color.
Normalmente no debe encontrarse sangre oculta en las heces.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
81
Ramirez, R. 1987. Mtodos Prcticos de Laboratorio Clnico Bsico. Lima Per.
UROCULTIVO (ME-LB-MC-40, 25 y 36)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
El urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un mtodo excelente para
cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario.
3.
MATERIALES , EQUIPOS Y MUESTRAS:

MATERIALES:
o
Tiras reactivas.
Frascos estriles.
Agar Mc conkey.
Agar Sangre.
Medios diferenciales: TSI, LIA, SIM, Citrato y Urea.

Lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Agua corriente.
Asa bacteriolgica.
Aceite de inmersin.
Fsforos.
Frascos estriles.
Agua y jabn.
EQUIPOS:
o
Centrifuga.
Microscopio.
Equipo automatizado WALKAWAY (Microscan)
Cabina de Bioseguridad BIO II ADVANCE (TELSTAR)
Lector automatizado de tiras reactivas de orina URO DIPCHECK 400 e (ERBA MANNHEIM)
82
MUESTRA:
o
4.
Orina asptica obtenida a mitad de chorro.

o
Para la recoleccin de muestras de orina en nios, puede utilizarse una bolsa de plstico estril
colectora de orina. La bolsa se colocar despus de haber lavado los genitales adhirindola a la
piel por medio de un anillo adhesivo. Si no es posible recolectar orina en los siguientes 45
minutos, deber cambiarse la bolsa por una nueva.
En mujeres se debe higienizar la zona genital con agua y jabn, de adelante hacia atrs, secar
con toalla limpia, y se debe colocar un tapn vaginal (torunda de gasa o algodn). Se elimina el
primer chorro (10 ml.) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (10 20 ml.) Se
recomienda orinar separando los labios mayores.
En hombres se debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balano prepucial con agua
y jabn, y secar con toalla limpia. Se elimina el primer chorro (10 ml.) y se recolecta en frasco
estril la fraccin siguiente (10 20 ml.)
Se homogeniza la orina agitndose suavemente.
Con ayuda de una asa bacteriolgica calibrada (0.01 ml.) se siembra en agar sangre y Mac
conkey.
Dejar en incubacin de 37C por 24 horas.
A la vez se realiza una extensin en una lmina portaobjeto para la coloracin Gram.
Para el estudio fsico, qumico y sedimento se sigue el procedimiento de la orina completa.
Se precede a analizar, en caso de estar positiva (crecimiento de colonias).
Realizar el recuento de colonias en UFC/ml.
Proceder a la identificacin Bioqumica del microorganismo.
Realizar la identificacin bioquimica y el antibiograma respectivo por los mtodos de discos de

difusin o automatizado usando el lector Microscan, el cual usa diferentes paneles desecados
(convencionales), entre ellos tenemos paneles para grmenes gram negativos y gram positivos ,
cada uno con su respectiva identificacin y resultado de antibiograma por el mtodo MIC
(mnima concentracin inhibitoria)
N de Colonias / ml : N colonias en 1 cm2 x 6400
5.
No debe encontrarse bacterias en la muestra de orina.

6.
CONTROL DE CALIDAD:
7.
83
Bantar, C.; H. Lopardo.1997. Urocultivo. Procesamientos, Criterios de Interpretacin
e Informe. Edit. Britania. Buenos Aires Argentina.

o

EXAMEN DIRECTO DE CRYPTOSPORIDIUM Y OTROS COCCIDIOS (ME-LB-MC-41)
1.
METODO:
Identificacin microscpica por Coloracin Ziehl- Neelsen modificado.
2.
Se basa en el comportamiento cido-resistente de la cubierta de estos parsitos, los cuales se tien
de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo del colorante de contraste usado.
3.

MATERIALES:
o
Marcador de vidrio.
Soporte de varillas de vidrio para coloracin de lminas portaobjeto.
Estiletes o pinzas punta curva.
Fuscina fenicada.
Verde de malaquita o azul de metileno acuoso.
Metanol.
Hidrxido de sodio al 4%.
Alcohol cido.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
MUESTRAS:
o
4.
Heces frescas.

o
Colocar las lminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de vidrio.
Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lmina portaobjeto y dejar secar.
Fijar la lmina con alcohol metlico de 2 a 5 minutos y dejar secar.
84
Agregar hidrxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y lavar con
agua.
Cubrir la lmina con la fucsina fenicada (previa agitacin del frasco) por 5 minutos, diluida
previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua).
Lavar suavemente la lmina portaobjeto con agua corriente.
Decolorar con alcohol-cido, cubriendo el portaobjeto por unos segundos hasta quitar el
colorante.
Lavar suavemente el portaobjeto con agua.
Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5
minutos, diluidas previamente al tercio.
5.
Lavar la lmina suavemente con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.
Observar el microscopio.
No aplica
6.
Normalmente no deben encontrarse protozoarios (criptosporidium) en las heces.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

Per.
85
EXAMEN DE MOCO FECAL (ME-LB-MC-42)
1.
METODO:
2.
Cuando el moco es abundante, por lo general indica irradiacin o inflamacin del intestino y en el
especial del colon.
3.

MATERIALES:
o
Solucin salina.
Marcador de vidrio.
EQUIPOS:
Microscopio.
MUESTRAS:
4.
Moco fecal.
Heces.
PROCEDIEMIENTO DEL TEST:

o
La muestra recolectada debe ser moco fecal, y depositada en un frasco con tapa rosca y
rotulada correctamente con los datos de identificacin.
Llevar la muestra al laboratorio en corto tiempo (de 15 - 30 minutos de su obtencin).
Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero fisiolgico y, con ayuda de
un aplicador, colocar la muestra y cubrirla con una laminilla cubreobjeto.
86
Se debe informar en que cantidad se encuentran los leucocitos y hemates por campo, indican
principalmente infeccin bacteriana.
5.
No aplica
6.
Normalmente no deben encontrarse leucocitos en el moco fecal.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.

87
EXAMEN DE REACCIN INFLAMATORIA (ME-LB-MC-42)
1.
METODO:
2.
Cuando el moco es abundante, por lo general indica irradiacin o inflamacin del intestino y en el
especial del colon.
3.

MATERIALES:
o
Solucin salina.
Marcador de vidrio.
Colorante wright o azul de metileno.
Aceite de inmersin.
EQUIPOS:
o
Microscopio.
MUESTRAS:
o
4.
Moco fecal.

o
La muestra recolectada debe ser moco fecal, y depositada en un frasco con tapa rosca y
rotulada correctamente con los datos de identificacin.
88
Llevar la muestra al laboratorio en corto tiempo (de 15 - 30 minutos de su obtencin).
Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero fisiolgico y, con ayuda de un
aplicador, colocar la muestra y cubrirla con una laminilla cubreobjeto.
Se debe informar en que cantidad se encuentran los leucocitos y hematies por campo, indican
principalmente infeccin bacteriana.
se hace una lmina y se colorea con Wright o azul de metileno, se hace el recuento diferencial
siempre y cuando haya mas de 10 leucocitos se cuenta 100 clulas y se diferencia entre
polimorfo nucleares(neutrfilos) y mononucleares y si hay mayor cantidad de neutrfilos la
infeccin es causada por bacterias, si hay mayor cantidad de no segmentados la infeccin es de
tipo viral.
5.
No aplica
6.
Normalmente no deben encontrarse leucocitos en el moco fecal.

7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.

89
CULTIVO DE ESPUTO (ME-LB-MC-45 y 13)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de infecciones de vas

respiratorias bajas.
3.
MATERIALES:
o
Placas petri
Asa bacteriolgica
Mechero
Medios de cultivo
Lminas portaobjetos
EQUIPOS:
o
Estufa
MUESTRAS:
4.
Esputo
Secrecin Bronquial
90
Se debe instruir al paciente para recoger nicamente los materiales expulsados por la tos, sin
mezcla de saliva ni de secreciones nasales o nasofaringea. Tambin es conveniente que
enjuague la boca con agua antes de recoger el esputo.
Cuando la muestra es secrecin bronquial se obtiene mediante aspiracin.
Se debe recolectar la muestra en un frasco estril.
de la placa de agar sangre, mac conkey, manitol salado; en ese orden y con el asa se estra por

o
6.
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o

91
CULTIVO DE BK (ME-LB-MC-49)
1.
METODO:
Siembra directa
2.
Este examen se basa en el aislamiento de Mycobacterium tuberculosis causante de la tuberculosis.
3.

REACTIVOS:
o
Hidrxido de Sodio al 4%
Glutamato Monosdico
Fosfato Monopotsico
Glicerina
Verde de Malaquita
Agua Destilada
Huevos de gallina
Fenol al 5%
INSTRUMENTAL:
o
Tubo de vidrio con tapa rosca (25 x 150 mm)
Tubo de vidrio con tapa rosca (20 x 125 mm)
Pipeta Pasteur x 6 mm de dimetro por 20 cm de largo
Bandeja de aluminio 40 x 30 cm
92
Bombilla de jebe para pipetas
EQUIPO:
o
Bao mara
MUESTRAS:
4.
Esputo
Orina Ocasional
Lquidos corporales
Biopsias
Tejidos

o
El primer paso es la descontaminacin de la muestra, la cual se realiza con Hidrxido de Sodio al

4%, con la finalidad de eliminar la flora asociada a Mycobacterium tuberculosis, cuyos grmenes
se multiplican ms rpido que el bacilo y a s mismo sirve para homogenizar la muestra
especialmente el esputo con el fin de liberar al bacilo del mucus, material celular y tejido.
En el caso de muestras de orina y contenido gstrico se debern centrifugar a una revolucin de

3,000 3,500 rpm durante 20 a 30 minutos. Eliminar el sobrenadante, descontaminar y sembrar
el sedimento.
Para cada cultivo se utiliza 1 frasco estril con solucin de Hidrxido de Sodio al 4%, 2 tubos con
medio de cultivo (OGAWA), 1 jeringa de tuberculina.
Se transvasa 1 ml de la muestra a la solucin de 4 ml de Hidrxido de sodio al 4%, se

homogeniza y se coloca en la estufa a 37c por 20 minutos.
Retirar los tubos de la estufa, volverlos a homogenizar e inocular 0.1 ml. Por tubo de medio de
Ogawa baando toda la superficie del medio.
Colocar los tubos inclinados en la estufa a 37 c para incubar.
Despus de 48 horas revisar los tubos y ajustar las tapas, adems de verificar si algn tubo est
contaminado. El desarrollo de colonias antes de las 48 horas es indicativo de contaminacin y
algunas veces el medio se licua por accin de grmenes proteolticos.
Revisar posteriormente durante la incubacin a los 7, 30 y 60 dias.
El desarrollo de M. tuberculosis generalmente aparece luego de 2
a 3 semanas, las
caractersticas de la colonia son de color crema, secas, rugosas de aspecto de coliflor y borde
irregular.
o
6.
El reporte se hace por cruces, contando el nmero de colonias.
De 20 a 100 colonias
++
ms de 100 colonias
+++
Colonias confluentes (se observa desarrollo en toda la superficie)
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
93
8.
o
Suarez
P. G, .Manual de Normas y Procedimientos en Bacteriologa de Tuberculosis.
Normas Tcnicas .N 10.Lima. 1995.
GRASAS EN HECES (SUDAN III) (ME-LB-MC-50)

1.
METODO:
Prueba cualitativa
2.
Este examen se basa en la tincin de las grasas en heces para detectar cualitativamente las
esteatorreas.
3.

REACTIVOS:
o
Colorante Sudan III
MATERIALES:
o
Lmina portaobjetos
Laminillas
Mechero
MUESTRAS:
o
4.
Heces

o
Realizar una suspensin de la muestra de heces en un portaobjeto, tapar con la laminilla y llevar
a ebullicin.
94
Observar al microscopio con objetivo de 40X la presencia de grasas coloreadas de naranja, lo

que indica cualitativamente su presencia.
o
6.
Informar como: presentes o ausentes
No aplica.
7.
CONTROL DE CALIDAD:
8.
o
Diaz P y col.1997. Aspectos Bsicos de Bioqumica Clnica. Madrid Espaa.
1.
2.
Bantar, C.; H. Lopardo.1997. Urocultivo. Procesamientos, Criterios de Interpretacin e Informe.

Edit. Britania. Buenos Aires Argentina.
3.
Medelln Colombia.
4.
Gonzales; G. 1992. Androloga Fertilidad e Infertilidad. Programa de Reproduccin Humana.

Organizacin Mundial de la Salud. Ediciones Instituto de Investigaciones de la Altura. Lima
Per.
5.
Govantes, J.; P. Fernndez; C. Esteso. Manual Normon. 7a Ed. Madrid Espaa.
6.

7.
95
8.

Per.
9.

10. Instituto Nacional de la Salud. 2002. Manual de Procedimientos para la Prueba de Sensibilidad
Antimicrobiana por el Mtodo de Disco Difusin. Serie de Normas. Tcnicas N 30. Lima Per.
11. Instituto Nacional de la Salud. 2005. Manual de Procedimientos Bacteriolgicos en Infecciones
12. Instituto Nacional de la Salud. 2002. Manual de Procedimientos para el Diagnstico
13. Instituto Nacional de la Salud. 1995. Manual de Normas y Procedimientos en Bacteriologa de
Tuberculosis. Serie de Normas. Tcnicas N 10. Lima Per.
14. Instituto Nacional de la Salud. 2003. Manual de Procedimientos de Laboratorio para el
Diagnstico de Malaria. Serie de Normas. Tcnicas N 39. Lima Per.
15. Instituto Nacional de la Salud. 2006. Diagnstico Bacteriolgico de la Bartonelosis Humana o
Enfermedad de Carrin. Lima Per.
16. Instituto Nacional de la Salud. 2000. Leishmaniasis. Mdulos Tcnicos- Serie Documentos
Monogrficos N 8. Lima Per.
17. Krupp, M.; L. Tierney; E. Jawetz; R. Roe; C. Camargo. 1988. Manual de Diagnstico Clnico y de
18. Lopardo, H.; C. Hernndez; R. Soloaga. 1999. Diagnstico Microbiolgico de las Infecciones
Respiratorias Bacterianas. Edit. Britania. Buenos Aires Argentina.
19. Mims. Playfair. Roitt. Wakelin. Williams. Mosby. Microbiologa Mdica. Doyma Libros.
20. Organizacin Mundial de la Salud, 1983. Manual de Tcnicas Bsicas para un Laboratorio de
21. Organizacin Mundial de la Salud, 2001. Manual de laboratorio de la OMS para el Examen del
22. Ramirez, R. 1987. Mtodos Prcticos de Laboratorio Clnico Bsico. Lima Per.
96
23. Vanrell, J.; J. Calaf; J. Balasch; P. Viscasillas. 1999. Fertilidad y Esterilidad Humanas. Tomo I. 2 a
Ed. Edit. Masson. S.A. Barcelona Espaa.
97

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Cultivo de Lquido Seminal

Cultivo de Secrecin Farngea

Cultivo de Secrecin Uretral

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Cultivo de Secrecin Prosttica

Azcares Reductores (Benedict)

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Proteinas de Bence Jones

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Examen directo de Cryptosporidium y otros Coccidios

Examen de Moco Fecal

Examen de Reaccin Inflamatoria

El laboratorio clnico de microbiologa moderno, requiere para su correcto funcionamiento de un adecuado

ANTIBIOGRAMA (ME-LB-MC-01 y 51)

MIC (Mnima Concentracin Inhibitoria) (MICROSCAN)

MATERIALES, EQUIPOS Y MUESTRAS:

Placas petri tamao 16 X 100

Paneles Microscan Combo NUC 55

Paneles Microscan Combo NC50

Paneles Microscan Combo PC33

TUBOS DE AGUA CON 3 ML.

TUBOS CON PLURONIC DE 25 ML.

BANDEJAS PARA MICROSCAN

COBERTORES PARA PLACAS DE MICROSCAN

PUNTAS AZULES DE 100 - 1000

Solucin salina estril

Agua destilada estril

Hisopos de algodn estriles

Pinza punta plana

Gradilla para tubos

LECTOR DE MICROSCAN (WALKAWAY)

PROCEDIMIENTO DEL TEST:

teniendo en cuenta criterios tcnicos para su determinacin in Vitro y su eficiencia clnica.

tres direcciones para asegurar una distribucin uniforme del inculo.

para que cualquier exceso de humedad sea absorbido.

otro. No deben de colocarse ms de 12 discos en una placa de 150 mm de dimetro interno,

Incubar las placas en posicin invertida a 35 C por 24 horas.

Los dimetros de inhibicin son interpretados basndose en la tabla de sensibilidad.

METODO POR MIC (Mnima Concentracin Inhibitoria)

cuenta criterios tcnicos para su determinacin in Vitro y su eficiencia clnica, aplicando la

inculo con PLURONIC, tapar bien y homogenizar por inversin de 8 a 10 veces.

paneles respectivos, donde debe haber una concentracin final en pocillos de 3 7 x 10 5

del aceite mineral y posterior incubacin

CAPACITACIN ESPERMATICA (ME-LB-MC-02)

Denominamos capacitacin espermtica al procesamiento de la muestra de semen que se realiza en el

MATERIALES, EQUIPOS Y MUESTRAS:

Cloruro de amonio al 25%.

Tubos calibarados de 15 ml.de fondo cnicos estriles.

Tubos de vidrio de 16 x 100 estriles.

Tubos de vidrio de 13 x 100 estriles.

Contenedor para desechos peligrosos desde el punto de vista biolgico.

Cmara de flujo laminar.

Incubador fijado termostaticamente a 37 C+/- 1 C

PROCEDIMIENTO DEL TEST: