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Introduccin.
La espectrometra de fluorescencia es una tcnica de espectroscopia atmica.
Esta se basa en las transiciones de electrones de los tomos que se producen
cuando una radiacin electromagntica de cierta energa incide con el material
en estudio, produciendo una excitacin del tomo, el cual pasa de un estado
basal (estable) a otro de mayor energa (inestable) de lo que resultan
transiciones en diferentes estados energticos en el tomo, los cuales son
nicos para cada tomo en particular. Esta caracterstica se utiliza para la
identificacin de los analitos o compuestos que queremos analizar, por lo que
es de gran utilidad en el anlisis cualitativo. La cuantificacin o anlisis
cuantitativo de diferentes elementos o compuestos se puede llevar acabo
utilizando mtodos espectroscpicos de absorcin y emisin. 1
Objetivo
Conocer por que surge cambio de la fluorescencia de la riboflavina a diferentes
valores de pH de acuerdo a distintos disolventes.
Resultados
Tabla 1. Resultados de la curva de calibracin de riboflavina en diferentes
medios.
Riboflavina
(ppm)
Intensidad de
fluorescencia
en H2O
Intensidad de
fluorescencia
en HCl 0.1M
Intensidad de
fluorescencia
en
CH3COOH
0.9 M
Intensidad de
fluorescencia
en NaOH 0.1 M
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
10.0
50.0
4,92
5,81
6,67
7,48
7,90
8,87
11,82
17,85
4,91
5,09
5,17
5,28
5,38
5,47
5,87
6,69
4,92
5,62
6,30
6,89
7,48
8,03
10,23
14,62
4,93
4,93
4,94
4,95
4,96
4,97
4,99
5,03
pH
13
20
15
RFU
10
Intensidad de fluorescencia en CH3COOH 0.9 M
5
0
0
10
30en NaOH 0.1
40 M
Intensidad
de20
fluorescencia
50
60
Concentracion(PPM)
de fluores cencia
fig.Intens
2 idad
Curvas
deen H2O
calibracion
10
9
f(x) = 0.77x + 4.26
R
f(x)==0.99
0.62x + 4.37
R = 1
6
RFU
f(x)(Intens
= 0.11x
Linear
idad+de4.84
fluores cencia en HCl 0.1M)
f(x)==0.99
0.01x + 4.92
R
R = 0.96
3
2
1
Intens idad de fluores cencia en NaOH 0.1 M
0
0
Concentracion
Agua
0.76
4.2587
0.995
cido actico
0.6206
4.368
0.998
HCl
0.108
4.8387
0.992
NaOH
0.0086
4.9167
0.981
Discusin.
Como se observa en la figura 1 las pendientes de las
rectas a bajas concentraciones tienden a ser ms altas
que en concentraciones mayores con lo cual podemos
afirmar que existe
una mayor sensibilidad a
concentraciones bajas. Esto se debe gracias al
autoapagamiento de las molculas en el cual hay ms
choques entre ellas y con ello una mayor transferencia
de la energa de radiacin y de acuerdo a lo reportado en la el
autoapagamiento aumenta con la concentracin.2
Una vez mencionado lo anterior se tiene que en la misma figura tenemos un
comportamiento de H2O, CH3COOH, HCl, NaOH l cual fue el esperado
La mayora de los compuestos que contienen anillos aromticos proporcionan
emisin fluorescente. Ciertos compuestos carbonlicos alifticos y alicclicos y
estructuras de dobles enlaces tambin lo hacen. Sin embargo, su nmero es
pequeo en comparacin con el nmero de compuestos fluorescentes que
contienen anillos aromticos. La mayora de los hidrocarburos aromticos no
sustituidos fluorescen con una emisin fluorescente creciente con el nmero de
anillos y con su grado de condensacin. Los anillos heterocclicos ms
sencillos (piridina, furano, pirrol,...) no fluorescen pero las estructuras de anillos
fusionados con ms de dos anillos (quinolina, isoquinolina, indol) lo hacen con
frecuencia.3
De acuerdo a lo anterior a un pH acido la riboflavina se encontrar en su forma
aninica, y con ello se tiene un cambio en el nmero de estructuras resonantes
lo que disminuye la estabilidad de su estado exitado. 4
En el caso contrario a pH alcalino un factor que ocasiona que la fluorescencia
se apague, es que ah la riboflavina hidroliza al compuesto lo que hace que se
pierda la estructura de su grupo funcional y con ello no tenga fluorescencia.
Por supuesto, la relacin de mrito entre el mtodo de fluorescencia y el de
absorcin depender de varios factores, entre ellos: la eficiencia cuntica de
fluorescencia del analito en cuestin, su absortividad molar, la precisin (en
miliabsorbancias) del espectrofotmetro disponible, la sensibilidad del
fluormetro.5
Cuestionario.
1 Por qu se deben conocer las longitudes de onda de mxima
excitacin y de mxima emisin?
Conclusiones
De acuerdo al pH del medio se tendrn distintas intensidades de fluorescencia.
A bajas concentraciones se tiene una mayor sensibilidad del mtodo.
La fluorescencia est en funcin de las estructuras de anillos fusionados de las
molculas.
Bibliografa:
1) http://www.uach.mx/extension_y_difusion/synthesis/2009/08/20/espectro
metria_de_flourescencia_de_rayos_X.pdf
2, 5) http://www.qi.fcen.uba.ar/materias/ai/laboratorio/Fluorometria_2011.pdf
3,4)http://repositorio.innovacionumh.es/Proyectos/P_22CursoMateriales/Mig
uel_Angel_Sogorb/Wimba/Espectroscopia_06.htm
6) http://www.lincargentina.org/tratamiento-coenzim%C3%A1tico/
7) http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/fosforescencia