UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC

Centro de Engenharia, Modelagem e Cincias Sociais Aplicadas

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL (EN 2105)

MICROBIOTA DE ESGOTO SANITRIO

Aristides Cardozo da Fonseca

Ivaldo Pessoa de Arajo
Jucilaine dos Santos Pereira
Letcia Sales Carvalheira Machado
Mrcia Gonalves Dias
Nathalia Taniguti
Rafael Martins

Orientadores:
Prof. Dr. Dcio Roberto Matheus
Prof. Dra. Lusa Helena dos S. Oliveira

Santo Andr, SP
2014

11079308
11086408
11145408
11126210
11080207
11072910
11081510

MICROBIOTA DE ESGOTO SANITRIO

RESUMO
O exame da gua destinada ao consumo humano de fundamental importncia visto que, para
ser considerada potvel, a gua deve ser livre de microrganismos patognicos e de
substncias qumicas nocivas. A maioria das doenas veiculadas pela gua tem origem na
contaminao fecal e um importante indicador dessa contaminao a existncia de um grupo
de bactrias que contem microrganismos patognicos e chamado de coliformes. O principal
representante desse grupo de bactrias chamado Escherichia coli. A Portaria n 518/2004 do
Ministrio da Sade estabelece que aes como a determinao da presena de coliformes
totais e termotolerantes e a contagem de bactrias heterotrficas sejam realizadas com o
intuito de aferir sua potabilidade. A recomendao da portaria que a contagem padro de
bactrias no exceda a 500 Unidades Formadoras de Colnias por 1ml de amostra (500
UFC/ml). A pesquisa de coliformes baseia-se nas caractersticas do grupo: bacilos gramnegativos, em forma de bastonetes, aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de
esporos, capazes de crescer na presena de de concentraes relativamente elevadas de sais
biliares e fermentarem a lactose a 35-37 C e, consequentemente, produzindo cido, gs e
aldedo em um prazo de 24 a 48 horas. A escolha de bactrias do grupo coliformes bacilos
gram-negativos como indicadores de contaminao da gua se baseia na sua presena em
fezes de animais de sangue quente - inclusive nas dos seres humanos - alm de estar presente
na gua, que possui uma relao direta com o grau de contaminao fecal. O presente exame
de deteco de coliformes partiu da hiptese em que os microrganismos que cresceram e
produziram gs a partir de lactose degradada so coliformes, o que verificado num teste
presuntivo. Como no h informaes sobre as demais caractersticas desses microrganismos,
outros testes so necessrios para confirmao: o teste confirmativo, que tem como objetivo
confirmar a presena de coliformes na gua em estudo, e o teste completo, que tem como
finalidade reafirmar o resultado do teste anterior, proporcionando um controle de qualidade dos
dados. Tambm pode ser realizado um teste de coliformes fecais que distingue os coliformes
fecais dos demais coliformes em que se utiliza o meio EC (Escherichia coli) inoculado a partir
do teste presuntivo. Neste trabalho foi realizado somente a primeira etapa dos testes, ou seja, o
teste presuntivo, que tem como principal objetivo a anlise de potabilidade de amostras
recolhidas na Universidade Federal do ABC (UFABC) da gua da torneira, do bebedouro e do
esgoto, visando a determinao da presena de coliformes fecais, e a anlise do grau de
contaminao da amostra.

SUMRIO
1.

INTRODUO..................................................................................4

2.

OBJETIVOS....................................................................................11

3.

MATERIAIS E MTODOS..............................................................12

3.1

Materiais.........................................................................................12

3.2

Procedimentos................................................................................12

3.3

Anlise da Potabilidade..................................................................12

3.4

Anlises diversas............................................................................13

4.

RESULTADOS................................................................................14

4.1

Anlise de Potabilidade..................................................................14

4.1.1

Anlise da potabilidade da gua do esgoto................................14

4.1.2

Anlise da potabilidade da gua da torneira...............................15

4.1.3

Anlise da potabilidade da gua do bebedouro..........................15

4.2

Anlises diversas............................................................................15

4.2.1

Mtodo NMP da gua da torneira...............................................17

4.2.2

Mtodo NMP da gua do bebedouro..........................................17

4.2.3

Mtodo NMP da gua do esgoto.................................................18

5.

DISCUSSES................................................................................20

6.

CONCLUSES...............................................................................22

7.

REFERNCIAS..............................................................................23

1 INTRODUO
A Poltica Nacional de Recursos Hdricos (PNRH) define que a gua
um bem de domnio pblico, um recurso natural limitado e dotado de valor
econmico. A gesto de recursos hdricos, segundo a PNRH, deve
proporcionar o uso mltiplo das guas, utilizar a bacia hidrogrfica como
unidade territorial de gesto e ainda ser descentralizada e participativa,
envolvendo os setores pblicos, os setores usurios e as comunidades.
4

Os setores usurios de gua (abastecimento humano, consumo

industrial, irrigao, recreao e turismo, dessedentao de animais, gerao
de energia eltrica, transporte, diluio de despejos, minerao e preservao
de flora e fauna) tm igualdade de acesso aos recursos hdricos, com exceo
para situaes de escassez, em que os usos prioritrios so o abastecimento
humano e a dessedentao de animais.
O uso de recursos hdricos de cada setor podem ser classificados como:
consuntivo - quando uma quantidade de gua retirada de sua fonte natural e
no h retorno total, ou seja, h um desequilbrio - ou no-consuntivo, no qual
retirada uma determinada quantidade de gua dos mananciais e depois de
utilizada, devolvida na mesma quantidade e com a mesma qualidade, ou
ainda nos usos em que a gua seja apenas um veculo.
O aumento da variedade dos usos mltiplos da gua tem resultado em
uma diversidade de impactos de diferentes magnitudes, que exigem distintas
avaliaes qualitativa e quantitativa e monitoramento adequado a longo prazo.
Cada uso implica tambm em diferentes requisitos de qualidade, requerendo
um conjunto diferentes de variveis indicadoras de qualidade de gua.
A Resoluo CONAMA n 357 de 17 de maro de 2005, dispe sobre a
classificao dos corpos da gua e diretrizes ambientais para o seu
enquadramento, bem como estabelece as condies e padres de lanamento
de efluentes, e d outras providncias.
O enquadramento dos corpos dgua em classes est previsto como um
dos instrumentos de planejamento da PNRH. O enquadramento determina o
grau de qualidade (classe) a ser atingido ou mantido em um segmento de
corpo dgua ao longo do tempo de acordo com os usos pretendidos.
As guas doces, salobras e salinas so classificadas, segundo a
qualidade requerida para os seus usos preponderantes atuais e futuros, em
treze classes de qualidade.
As guas doces so classificadas em:
I.

Classe especial guas destinadas:

a. ao abastecimento humano, com desinfeco;
5

b. preservao do equilbrio natural das comunidades

aquticas; e
c. preservao dos ambientes aquticos em unidades de
conservao de proteo integral.
II.

Classe 1 guas que podem ser destinadas:

a. ao abastecimento humano, aps tratamento simplicado;
b. proteo das comunidades aquticas;
c. recreao de contato primrio, tais como natao, esqui
aqutico e mergulho;
d. irrigao de hortalias que so consumidas cruas e de
frutas que se desenvolvam rentes ao solo e que sejam
ingeridas cruas sem remoo de pelcula; e
e. proteo das comunidades aquticas em Terras
Indgenas.
III.
Classe 2 guas que podem ser destinadas:
a. ao abastecimento para consumo humano, aps tratamento
convencional;
b. proteo das comunidades aquticas;
c. recreao de contato primrio, tais como natao, esqui
aqutico e mergulho;
d. recreao de hortalias, plantas frutferas e de parques,
jardins, campos de esporte e lazer, com os quais o pblico
possa vir a ter contato direto; e
e. aqicultura e atividade de pesca.
IV. Classe 3: guas que podem ser destinadas:
a. ao abastecimento para consumo humano, aps tratamento
b.
c.
d.
e.

convencional ou avanado;
irrigao de culturas arbreas, cerealferas e forrageiras;
pesca amadora;
recreao de contato secundrio: e
dessedentao de animais.

V. Classe 4 guas que podem ser destinadas:

a. navegao; e
b. harmonia paisagstica.
As gua salinas so assim classificadas:
I. Classe especial guas destinadas:
a. preservao dos ambientes aquticos em unidades de
conservao de proteo integral; e
6

b. preservao do equilbrio natural das comunidades

aquticas.
II. Classe 1 guas que podem ser destinadas:
a. recreao de contato primrio, tais como natao, esqui
aqutico e mergulho;
b. proteo das comunidades aquticas; e
c. aqicultura e atividade de pesca.
III. Classe 2 guas que podem ser destinadas:
a. pesca amadora; e
b. recreao de contato secundrio.
IV. Classe 3 guas que podem ser destinadas:
a. navegao; e
b. harmonia paisagstica.
As guas salobras so assim classificadas:
I. Classe especial: guas destinadas:
a. preservao dos ambientes aquticos em unidades de
conservao de proteo integral; e
b. preservao do equilbrio natural das comunidades
aquticas.
II. Classe 1 guas que podem ser destinadas:
a. recreao de contato primrio, tais como natao, esqui
aqutico e mergulho;
b. proteo das comunidades aquticas;
c. aqicultura e atividade de pesca;
d. ao abastecimento para consumo humano aps tratamento
convencional ou avanado; e
e. irrigao de hortalias que so consumidas cruas e de
frutas que se desenvolvam rentes ao solo e que sejam
ingeridas cruas sem remoo de pelcula, e irrigao de
parques. Jardins, campos de esporte e lazer. Com os quais
o pblico possa vir a ter contato direto.
III. Classe 2 guas que podem ser destinadas:
a. pesca amadora; e
b. recreao de contato secundrio.
IV. Classe 3 guas que podem ser destinadas:
a. navegao; e
b. harmonia paisagstica.
7

A Portaria do Ministrio da Sade n 518 de 25 de maro de 2004

estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e
vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de
potabilidade. As tcnicas adotadas pela portaria tm o propsito de atender s
especificaes do Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater, publicao da American Public Health Association (APHA),
American Water Works Association (AWWA) e Water Environment Federation
(DOMINGUES, 2007).
O padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano
est exposto na Tabela 1:
VMP(1)

PARMETRO

gua para consumo humano(2)

Escherichia coli ou coliformes
termotolerantes(3)

Ausncia em 100ml

gua na sada do tratamento

Coliformes totais

Ausncia em 100ml

gua tratada no sistema de distribuio (reservatrios e rede)

Escherichia coli ou coliformes
termotolerantes(3)

Coliformes totais

Ausncia em 100ml
Sistemas que analisam 40 ou
mais amostras por ms:
Ausncia em 100ml em 95%
das amostras examinadas no
ms;

Sistemas que analisam menos de

40 amostras por ms: Apenas
uma amostra poder
apresentar mensalmente
resultado positivo em 100ml.
Tabela 1: Padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano.
Fonte: Ministrio da Sade

NOTAS:
(1) Valor Mximo Permitido.
(2) gua para consumo humano em toda e qualquer situao, incluindo
fontes individuais como poos, minas, nascentes, dentre outras.
(3) A deteco de Escherichia coli deve ser preferencialmente adotada.

A contaminao da gua pela grande maioria dos microrganismos

patognicos se d atravs das excretas humana e animal e, por isso, a
pesquisa destes na gua requer procedimentos temporalmente extensos e
complexos, fazendo-se necessrio a utilizao de organismos que sejam,
seguramente, indicadores de contaminao fecal para avaliar a qualidade
bacteriolgica da gua. Dentre os principais esto os coliformes totais,
coliformes fecais, Escherichia coli e o Streptococcus fecais (AMORIM, 2001).
A Portaria MS 518/2004 estabelece, ainda , que alm da determinao
da presena de coliformes totais e termotolerantes (E.coli), para determinar o
padro de potabilidade da gua, em 20% das amostras mensais para anlise
de coliformes totais nos sistemas de distribuio, dever ser efetuada a
contagem de bactrias heterotrficas, no limite de 500 unidades formadoras de
colnia (UFC) por ml e que, vez excedida, devem ser providenciadas a
imediata recoleta, inspeo local e, se ainda assim for constatada
irregularidade, outras providncias cabveis devem ser tomadas. No estado de
So Paulo, a norma tcnica L 5.201, da CETESB (Companhia Ambiental do
Estado de So Paulo), descreve toda a metodologia a ser utilizada, baseada
diretamente na Portaria 518/2004 do Ministrio da Sade.
Esse teste fornece informaes sobre a qualidade bacteriolgica da
gua de maneira geral, posto que o teste detecta inespecificamente bactrias
ou esporos de bactrias, sejam de origem fecal, componentes da flora natural
da gua ou resultantes da formao de biofilmes no sistema de distribuio.
Por isso, utilizado apenas como indicador auxiliar da qualidade da gua, j
que capaz de fornecer informaes adicionais sobre eventuais falhas na
desinfeco, colonizao e formao de biofilmes no sistema de distribuio
(DOMINGUES, 2007).
Segundo a Portaria n 2.914, de 12 de dezembro de 2011, que revoga a
Portaria n 518/GM/MS, de 25 de maro de 2004, o grupo de bactrias
coliformes totais est constitudo por vrios gneros da famlia
Enterobacteriaceae (Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter e Escherichia) e
definido como bacilos gram-negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, no
formadores de esporos, oxidase-negativos, capazes de desenvolver na
presena de sais biliares ou agentes tensoativos que fermentam a lactose com
9

produo de cido, gs e aldedo a 35,0 0,5C em 24-48 horas, e que podem

apresentar atividade da enzima -galactosidase. Os coliformes fecais ou
termotolerantes so um subgrupo do grupo coliforme que fermentam a lactose
a 44,5 0,2C em 24 horas, sendo a E. coli seu principal representante, de
origem exclusivamente fecal, que alm da lactose tambm fermenta manitol,
produz indol a partir do triptofano, oxidase negativa, no hidroliza a uria e
apresenta atividade das enzimas -galactosidase e -glucoronidase, sendo
considerado o mais especfico indicador de contaminao fecal recente e de
eventual presena de organismos patognicos. Ainda h a necessidade de
acompanhamento da presena de cianobactrias, microrganismos
procariticos autotrficos, capazes de ocorrer em qualquer manancial
superficial especialmente naqueles com elevados nveis de nutrientes
(nitrognio e fsforo), podendo produzir toxinas com efeitos adversos sade,
tais como cianotoxinas, microcistinas, cilindrospermopsina e saxitoninas. O
anexo XI da portaria em vigor afirma que a frequncia de monitoramento das
cianobactrias em mananciais de abastecimento de gua deve ser mensal,
caso o nmero de clulas por mL seja menor ou igual a 10.000, e semanal,
caso ultrapasse este limite.
De acordo com Carvalho (2013), as estratgias de contagem de
cianobactrias so descritas por Chorus e Bartram, no livro Toxic
cyanobacteria in water: A guide to their public health consequences, monitoring
and management, publicado pela Organizao Mundial da Sade (OMS), e
pela Norma Tcnica CETESB L5.303. As amostras podem ser preparadas por
centrifugao ou sedimentao e analisadas com microscpio normal ou
invertido, utilizando cmaras de contagem (Sedgwick-Rafter e Utermhl) ou o
retculo de Whipple.
Para deteco de coliformes totais feito o teste presuntivo, que utiliza
meio de cultura, como por exemplo, o Caldo Lactosado ou Caldo Lauril Sulfato,
facilitador de crescimento rpido de bactrias fermentadoras de lactose,
presumindo sua presena no ambiente em questo. Testes confirmativos
trabalham acerca da presena real de coliformes totais, utiliza meios de cultura
com inibidores de outra microbiota que no a de interesse, principalmente os
gram-positivos. Com a inoculao da amostra em Caldo Lactosado com bile ou
Verde brilhante, estes que so os inibidores das bactrias no entricas e
10

gram-positivas, h a confirmao de coliformes totais devido formao de gs

pela fermentao da lactose, caracterstica deste grupo. O teste para
coliformes fecais utiliza um meio seletivo, o caldo EC, inoculado a partir do
teste presuntivo e incubado em temperatura elevada inibindo a maior parte
dos microrganismos, permitido apenas o crescimento de Echerichia coli e
algumas espcies relacionadas (AMARAL, 2007).
Segundo Hirai (2013), outras espcies como Clostridium perfringens,
Enterococcus Enterobacter spp. e Klebsiella spp. tambm podem ser utilizadas
como indicadores de contaminao fecal, mas estes dois ltimos no so
exclusivamente fecais como a E. coli.
Podem, ainda, ser realizados testes para patgenos especficos, como
Salmonella spp. e Legionella spp., esta que encontrada em fontes naturais de
solo e gua, mas que se tornam um risco sade quando as condies
permitem sua rpida multiplicao. Outro teste qualitativo, j citado, usado para
verificar a qualidade da gua o de determinao de bactrias heterotrficas e
consiste basicamente em efetuar a contagem da populao microbiana em
temperaturas diferentes, analisando mudanas repentinas no tamanho da
populao, lembrando que pode-se utilizar diferentes metodologias para sua
realizao (DOMINGUES, 2007).
Dentre outros microrganismos indicador de potabilidade da gua, Amaral
(2007) relata que no Brasil, Pseudomonas aeruginosa usada como padro de
potabilidade em guas minerais. Isso devido a sua grande versatilidade
metablica que possibilita sua persistncia na gua por mais tempo do que os
coliformes. No entanto, alvo de estudo o fato de haver antagonismo entre a
presena de Pseudomonas aeruginosa e coliformes, posto que a presena
daquela pode inibir a identificao destes.
2 OBJETIVOS
Fazer a avaliao da potabilidade de amostras coletadas na
Universidade Federal do ABC (UFABC), localizada no municpio de Santo
Andr, da gua do bebedouro, da gua da torneira e da gua do esgoto,
atravs da deteco e anlise de coliformes fecais utilizando o teste presuntivo.

11

Avaliar o grau de contaminao das amostras usando uma srie de tubos

mltiplos inoculados com diluies decimais da amostra (10ml, 1ml e 0,1ml).

12

3 MATERIAIS E MTODOS
1.1 Materiais
Para o experimento de estudo da microbiota do esgoto sanitrio, foram
necessrios os seguintes materiais:

Estufa bacteriolgica;
Bico de Bunsen;
Tubos de ensaio;
Tubo de Durhan;
Caldo Lauril Triptose;
Amostras de gua da torneira, gua do bebedouro e gua de esgoto todos da

Universidade Federal do ABC;

Papel alumnio;
Placas de Petri; e
Pipetas graduadas.
Composio do caldo lauril triptose:
Triptose
20,0 g
Lactose
5,0 g
K2HPO4
2,7 g
Cloreto de Sdio
5,0 g
Sulfato de Sdio Lauril
0,1 g
gua destilada
1.000 ml
O pH foi corrigido para 7.0.
1.2 Procedimentos
1.3 Anlise da Potabilidade
Para cada amostra em estudo (tanto para gua do bebedouro, da gua
de torneira e da gua de esgoto da Universidade Federal do ABC), foi realizada
uma srie de procedimentos descritos a seguir.
Primeiramente inverteu-se os tubinhos de Durhan em 5 (cinco) tubos de
ensaio contendo 10 ml de caldo de Lauril Triptose. Em seguida, esses tubos de
ensaio foram inoculados com 20 ml da amostra em estudo e incubados a 35 C
por 24 horas.

13

Aps esse perodo, foram realizadas leituras considerando positivos os

tubos com presena de bolhas. As amostras foram novamente incubadas,
desta vez por mais 72 horas, quando foi realizada uma nova leitura.
1.4 Anlises diversas
Para essas anlises, foram realizados os seguintes procedimentos,
descritos a seguir, para cada amostra em estudo (gua do bebedouro, gua de
torneira e gua de esgoto da Universidade Federal do ABC UFABC).
Os tubos de Durhan foram invertidos em 15 (quinze) tubos de ensaio
contendo 10 ml de caldo Lauril Triptose. Foi realizada a inoculao da amostra
da seguinte forma:
10 ml da amostra em 5 tubos de ensaio;
1 ml da amostra em outros 5 tubos de ensaio; e
0,1 ml da amostra nos outros 5 tubos de ensaio restantes.
Aps a inoculao, as amostras foram incubadas a 35 C por 24 horas,
quando foi realizada a primeira leitura. Os tubos com presena de gs foram
considerados tubos positivos.
Em seguida, os tubos foram novamente incubadas por mais 72 horas.
Ao final deste perodo, realizou-se uma segunda anlise.
Usou-se a tabela para verificar o nmero mais provvel (NMP) de
coliformes por 100 ml ou estimou-se atravs da frmula de Thomas:
NMP/ 100mL =

Nmero de tubos positivos x 100______

mL de tubos negativos x mL de todos os tubos

14

4 RESULTADOS
1.5 Anlise de Potabilidade
GUA DE
TORNEIRA
(20mL)

GUA DE
BEBEDOURO
(20 mL)

ESGOTO
(20mL)

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tabela 2: Resultados da anlise de potabilidade: Resultado negativo(-) para a no presena de

gs no interior do tubo Durham, ou positivo(+) no caso de presena de gs no tubo Durhan.

a)

b)

c)

d)
Figura 1: Tubos de ensaio da anlise de potabilidade aps as 72 horas a) gua de torneira; b)
gua de bebedouro; c) gua de bebedouro do tubo 4 com resultado positivo; d) gua de esgoto

Anlise da potabilidade da gua do esgoto

No teste da potabilidade do esgoto, os cinco tubos que continham 10 mL

do caldo Lauril Triptose inoculados com 20 mL de amostra do esgoto

15

apresentaram formao de gs nos tubos de Durham invertidos, mostrando

que estavam contaminado por coliformes. A pesquisa de coliformes teve
resultado positivo logo aps as primeiras 24 horas, na primeira leitura
(realizada na sexta-feira, dia 25/04/2014), e tendo a formao de gases
aumentado aps a reincubao das amostras por mais 72 horas. A segunda
leitura foi realizada na segunda-feira, dia 28/04/2014. Os dados so
apresentados na tabela 2 e representados na figura 1-d.
2

Anlise da potabilidade da gua da torneira

No teste da potabilidade da gua da torneira, a pesquisa de coliformes

teve resultado negativo. Os cinco tubos que continham 10 mL do caldo Lauril

Triptose inoculados com 20 mL da amostra da gua da torneira no
apresentaram formao de gases nos tubos de Durham invertidos em
nenhuma das leituras realizadas, mostrando que no estavam contaminados
por coliformes. Os dados so apresentados na tabela 2 e esto representados
na figura 1-a.
3

Anlise da potabilidade da gua do bebedouro

No teste da potabilidade da gua do bebedouro, dos cinco tubos que

continham 10 mL do caldo Lauril Triptose inoculados com 20 mL da amostra da

gua do bebedouro, quatro deles no apresentaram formao de gases nos
tubos de Durham invertidos nos dias analisados, mostrando que no estavam
contaminados por coliformes fecais, dando resultados negativos. Porm, em
um dos tubos (tubo 4), a pesquisa de coliformes obteve resultado positivo na
segunda observao, realizada na segunda-feira, dia 28/04/2014, ou seja, aps
as 72 horas de reincubao das amostras obteve a indicao de contaminao
de coliformes. Os dados esto apresentados na tabela 2 e os resultados dos
tubos representados na figura 1-b. O tubo 4, cujo resultado foi positivo, est
representado na figura 1-c.
2

Anlises diversas
Conforme indicado na metodologia, para a anlise dos resultados do

mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP), ser utilizada a tabela 3, de acordo

16

com as reaes ocorridas no laboratrio para cada um dos fludos testados

quando inoculadas pores de 10 mL, 1 mL e 0,1 mL de amostra.

Tabela 3 - ndice de NMP e limites de confiana de 95%, quando inoculadas pores de 10 mL,
1 mL e 0,1 mL de amostra. (Fonte: CETESB. Norma tcnica L5.406 Coliformes
termotolerantes: Determinao em amostras ambientais pela tcnica de tubos mltiplos com
meio A1 mtodo de ensaio. Junho, 2007.)

0,1ml
1,0ml
10ml

GUA DE
GUA DE
TORNEIRA BEBEDOURO
(20mL)
(20 mL)
5(-)
5(-)
5(-)
5(-)
5(-)
5(-)

ESGOTO
(20mL)
5(+)
5(+)
5(+)
17

Tabela 4: Resultados das anlises diversas: Resultado negativo (-) para a no presena de
gs no interior do tubo Durham, ou positivo (+) no caso de presena de gs no tubo Durhan.

Mtodo NMP da gua da torneira

O teste NMP da gua da torneira em nenhum dos dois dias de

observao apresentou contaminao, ou seja, no ocorreu formao de gases

em nenhum dos 15 tubos (sendo cinco tubos com 10 mL de caudo Lauril
Triptose com 0,1 mL da amostra, cinco tubos com 10 mL de caudo Lauril
Triptose com 1 mL da amostra e cinco tubos com 10 mL de caudo Lauril
Triptose com 10 mL da amostra). Dessa forma, a combinao de tubos 0-0-0
e, de acordo com a tabela 3, o nmero mais provvel de coliformes na amostra
menor que 1,8; sendo o limite de confiana superior de 6,8.

a)

b)

c)

Figura 2 - Tubos de ensaio de Anlises Diversas da gua de torneira: a) 0,1ml de amostra, b)

1ml de amostra, c) 10ml de amostra

Mtodo NMP da gua do bebedouro

O teste NMP da gua do bebedouro em nenhum dos dois dias

apresentou contaminao, ou seja, no ocorreu formao de gs em todos os

15 tubos (cinco tubos com 10 mL de caudo lauril triptose e 0,1 mL da amostra,
18

cinco tubos com 10 mL de caudo lauril triptose e 1 mL da amostra e cinco tubos

com 10 mL de caudo lauril triptose e 10 mL da amostra). Dessa forma, a
combinao de tubos positivos 0-0-0 e, de acordo com a tabela 3, o nmero
mais provvel de coliformes na amostra menor que 1,8; sendo o limite de
confiana superior de 6,8.

a)

b)

c)

Figura 3 Tubos de ensaio de Anlises Diversas da gua do bebedouro: a) 0,1ml de amostra,

b) 1ml de amostra, c) 10ml de amostra

Mtodo NMP da gua do esgoto

O teste NMP do esgoto, logo aps as primeiras 24 horas, apresentou

contaminao, ou seja, ocorreu formao de gs em todos os 15 tubos (cinco

tubos com 10 mL de caudo Lauril Triptose e 0,1 mL da amostra, cinco tubos
com 10 mL de caudo Lauril Triptose e 1 mL da amostra e cinco tubos com 10
mL de caudo Lauril Triptose e 10 mL da amostra). Dessa forma, a combinao
de tubos positivos 5-5-5 e, de acordo com a tabela 3, o nmero mais provvel
de coliformes na amostra maior que 1600, sendo o limite de confiana
mnimo (inferior) de 700.
19

a)

b)

c)

Figura 4 Tubos de ensaio de Anlises Diversas da gua do esgoto: a) 0,1ml de amostra, b)

1ml de amostra, c) 10ml de amostra

NMP/ 100mL =
Nmero de tubos positivos x 100
.
mL de tubos negativos x mL de todos os tubos

Resultados para o NMP - via Tabela

GUA DE
TORNEIRA

GUA DE
BEBEDOURO

ESGOTO

NMP/100ml

< 1,8

<1,8

>1600

Lim.Conf. (inf. ; sup.)

( - ; 6,8)

( - ; 6,8)

(700 ; - )

Resultados para o NMP - via Frmula

GUA DE
TORNEIRA

GUA DE
BEBEDOURO

ESGOTO

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NMP

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5 DISCUSSES
Com relao a gua de esgoto, pde-se concluir pela sua no
potabilidade, uma vez que tanto no teste presuntivo da anlise de Potabilidade,
que detecta a presena de coliformes fecais, como no teste presuntivo da
anlise de diversos, que estima a quantidade presente por 100ml (NMP),
obteve-se resultado positivo para todos os tubos.
J os resultados obtidos para a amostra de gua de torneira, segundo as
normas estabelecidas pela Portaria do Ministrio da Sade n 2914 de 12 de
dezembro de 2011, que estabelece os procedimentos e responsabilidades
relativos ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e
seu padro de potabilidade, apontam para a sua potabilidade, uma vez que no
foi detectada a presena de coliformes fecais em nenhum dos tubos de
amostra da anlise de Potabilidade e assim como uma presena de menos de
1,8 (NMP/100ml) Escherichia coli ou coliformes termotolerantes, segundo os
dados apontados pela tabela 3, diante dos resultados negativos para todos os
tubos de teste da anlise de diversos.
Quanto aos resultados obtidos para a amostra de gua de bebedouro,
primeiro devemos considerar que o resultado positivo para um dos tubos de
amostra, pode ter sido decorrente de contaminao durante os procedimentos
de preparo do teste, e tambm o fato de que as normas estabelecidas pela
Portaria do Ministrio da Sade n 2.914/2011 preveem a anlise para gua
saindo do sistema de tratamento e para a gua tratada no sistema de
distribuio (rede e reservatrios), o que no o nosso caso, uma vez que a
gua foi coletada de um bebedouro. Para os casos de deteco de uma
amostra positiva para a anlise de potabilidade, a portaria determina a
realizao de coleta de novas amostras em dias imediatamente sucessivos at
que as novas amostras revelem resultado satisfatrio, o que no nos permite
classificar a gua de bebedouro como no potvel, acrescido do fato de que
sendo estes testes presuntivos, a constatao de casos positivos enseja a
realizao de testes confirmativos e testes completos, para confirmao de sua
contaminao.

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Gerou-nos uma certa dvida o fato que para o teste de anlise diversas
os resultados foram todos negativos, resultando portanto em um NMP/100ml
de menos de 1,8 Escherichia coli ou coliformes termotolerantes, segundo os
dados apontados pela tabela 3, sendo esta a melhor situao possvel. Porm,
a portaria 2.914/2011 prev potabilidade apenas para gua, quando da
ausncia de coliformes totais e Escherichia coli ou coliformes termotolerantes
por 100ml. Ficou faltando tambm conseguir compatibilizar os valores
encontrados para NMP/100ml, via tabela 3 e os valores resultantes da
aplicao da frmula de Thomas, como, por exemplo, no caso da gua de
esgoto, em que sendo todos os tubos positivos, o resultado do denominador
passa a ser zero. Atravs dos dados obtidos possvel observar a influncia da
glicose como principal fonte de energia ao organismo e tambm de substncias
txicas, como o tolueno que, quando est em contato com microrganismos
vivos, capaz de interferir no processo digestivo do mesmo, levando-o a
morte.

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6 CONCLUSES
Pode-se concluir atravs deste experimento, que a pesquisa de
coliformes pode ser feita atravs de tcnicas simples: Atravs do mtodo
presuntivo, presumiram-se que os microrganismos que crescem e produzem
gs a partir de lactose sejam coliformes. Porm s com tcnicas mais
complexas poderamos determinar com mais preciso outras caractersticas
desses microrganismos. Atravs da potabilidade detectamos a presena de
coliformes nas amostras de gua de esgoto e tambm obtivemos a mesma
confirmao atravs do teste de Nmero Mais Provvel (NMP). J era
esperado que a amostra de gua de esgoto apresentasse altas concentraes
de coliformes e que fosse observada contaminao em todos os tubos, j que
sua gua proveniente de sistema sanitrio.
Para as anlises de gua de torneira e bebedouro, esperava-se uma
melhor qualidade de potabilidade da gua do bebedouro do que a de torneira,
j que as ingerimos. Porm, um tubo de amostra de gua do bebedouro (tubo
4) apresentou gs no interior de seu tubo de Durhan, indicando presena de
coliformes nesta concentrao, fato este provavelmente causado por
contaminao durante o preparo dos testes, o que refora ainda mais a
necessidade no s de melhor assepsia, como tambm da realizao de coleta
de novas amostras em dias imediatamente sucessivos at que as novas
amostras revelem resultado satisfatrio, como determina a portaria n
2.914/2011, para os casos de deteco de uma amostra positiva para a anlise
de potabilidade, e da prpria realizao do teste de anlises diversas.
Esta mais uma das utilidades que o estudo e pesquisa sobre
microrganismos nos possibilita, pois atravs do estudo de suas caractersticas
especficas, seus meios de sobrevivncia e adaptao s diversidades,
possvel, por exemplo, a realizao de testes relativamente baratos, rpidos e
eficazes, a exemplo da utilizao da Escherichia coli, um dos representantes
do grupo de bactrias, cuja existncia no meio aqutico, indica a contaminao
da mesma por coliformes fecais, que por sua vez so os maiores veculos de
transmisso de doenas veiculadas pela gua.

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