PRUEBA DE EFICIENCIA INSECTICIDA DE EXTRACTOS X

Responsables: Ing. Aneida Maldonado Argandoa

Laboratorio de Entomologa
1. OBJETIVO:

Evaluar la eficiencia de diferentes extractos para el control de la polilla de la quinua

Erysacca quinoae.

2. MATERIALES Y METODOLOGA
Laboratorio
Insectos:
Spodoptera frugiperda . Criado con dieta artificial en condiciones controladas de temperatura y
humedad. Este organismo es utilizado como modelo biolgico de mariposas nocturnas plagas de
quinua.
Para los bioensayos se utilizaron larvas de 3er. Esta dio (aprox. 2 cm.)
Preparacin de las soluciones:
Se preparo 6 diluciones de cada una de las seis muestras al 0.1%, 0.25%, 0.5%, 0.75%, 1% y 2% y
solamente agua como testigo control.
Tratamientos: En los tratamientos se manej seis dosis y un testigo para cada una de las muestras.
Tratamientos:
T1: dosis 20 ml. /20 litros de agua (0.1%)
T2: dosis 50 ml. /20 litros de agua (0.25%)
T3: dosis 100 ml. /20 litros de agua (0.5%)
T4: dosis 150 ml. /20 litros de agua (0.75%)
T5: dosis 200 ml. /20 litros de agua (1%)
T6: dosis 400 ml. /20 litros de agua (2%)
T7: Testigo control (agua)

Mtodo de contacto forzoso en placas petri: A un principio se procedi a preparar las 6 diferentes
concentraciones de las muestras y 1 testigo, se preparo un total de 4 placas por tratamiento para el
bioensayo de cada concentracin se aadi 500 l a las placas petri.
Bioensayo: Se introdujeron 10 larvas de 3er estado de Spodoptera f. a cada placa, una vez
introducidos se impregnaron totalmente con la ayuda de un pincel. Se evalu la mortalidad a 1

hora, 2 hrs, 3 hrs, 4 hrs y 5hrs. El criterio de mortalidad fue la falta de coordinacin en
movimientos: Cuando se rotaba a la larva con esta queda boca arriba, si no retornaba a su posicin
normal (boca abajo) inmediatamente, ya se consider como muerto.
Anlisis de datos: La determinacin de la Concentracin Letal Media (CL 50) para las 6 muestras se
hizo a travs de anlisis de regresin PROBIT (log 10) donde se obtuvieron las probabilidades de
concentracin para una mortalidad del 50% de la poblacin (DL 50) y 90% (DL90). La comparacin
entre DL50 de las muestras evaluadas se realiz mediante verificacin de solapamiento de sus
respectivos intervalos de confianza.
Para todas las pruebas se utiliz =0.05. Todo el anlisis se realiz en el paquete estadstico SPSS
ver. 17.0.
Campo
1Los materiales utilizados en los ensayos de campo fueron: una mochila aspersora, flexo o
huincha, cordel blanco para delimitacin, estacas y planillas de evaluacin, balde, probeta.
2La implementacin del ensayo de campo se inicio con la identificacin de parcelas de quinua
de agricultor en las comunidades de Tiraque (Cochabamba), en la parcela se verifico la
presencia de larvas de polilla de la quinua antes de la aplicacin de los tratamientos.
3El producto evaluado fue el extracto concentrado X (muestra 4) en una dosis de 200 ml. / 20
litros de agua (resultado del ensayo de laboratorio), como control positivo se utiliz el
producto Entrust (Spinosad 80%) producido por Dow Agroscience, producto que est
aceptado en la produccin orgnica.
4A todos los tratamientos se aadi aceite vegetal (Natural Oil) en la dosis recomendada.
Diseo del ensayo:
Cada unidad experimental cinco surcos por 7 metros de largo, los tratamientos fueron distribuidos
en bloques al azar con 3 tratamientos y 3 repeticiones, los tratamientos fueron los siguientes:
T1: Extracto seleccionado (dosis 200 ml. /20 litros de agua)
T2: Entrust (control, positivo, dosis 3 g. / 20 litros de agua)
T3: Testigo absoluto (sin tratamiento)
Evaluaciones:
Los datos evaluados en el presente ensayo fueron:

Poblacin inicial de la plaga, para lo que se conto nmero de larvas de polillas por planta
(antes de la aplicacin)

Poblacin despus de la aplicacin 24h despus del tratamiento Para lo que tambin se
contaron larvas de polillas por planta, contando solo las larvas vivas.

En ambos casos el conteo de larvas de polillas se realiz en 10 plantas seleccionadas al azar dentro
de cada unidad experimental, tratando de no evaluar las mismas plantas, para esta evaluacin se
tomo en cuenta solo los 3 surcos centrales.
3. RESULTADOS
Laboratorio
Cuadro 1: Concentracin letal media CL50 y Concentracin letal al 90% (Anlisis de Regresin PROBIT);
Intervalo de confianza de cada una de las muestras.

Intervalo de confianza
Concentracin Menor

Mayor

CL50
1,228
1,056
1,494
CL90
2,950
2,227
4,728
CL50
2,916
2,03
6,62
Muestra 2
CL90
10,01
4,96
57,24
CL50
8,21
3,24
62153303
Muestra 3
CL90
31,32
6,84
2,77
Muestra 4
CL50
0,5131
0,377
0,638
CL90
0,894
0,708
1,552
Muestra 5
CL50
1,51
1,41
1,89
CL90
2,89
2,33
4,16
Muestra 6
CL50
No se registro
Muertos
CL
No
se
registro
Muertos
En
el
90
cuadro 1:
El anlisis de Regresin Probit arrojo los resultados de concentracin letal media (CL50) probable
para eliminar al 50% de la poblacin de plaga y para causar la muerte del 90% de la poblacin
(CL90). Adicionalmente el anlisis tambin revela los intervalos de confianza que se deben tomar
en cuenta para un experimento. Los intervalos de confianza nos indican cuanto de extracto como
mnimo y mximo puedes utilizar para matar al 50% y 90% de la poblacin plaga.
Muestra 1

La muestra 4 y muestra 1 mostraron ser ms eficientes segn Regresin Probit. Para eliminar al
50% de la poblacin se necesita 200 ml de extracto de la muestra 4 y de la muestra 1 se necesita
250 ml. este clculo est recomendado para 20 litros de agua.

Fig. 1: Mortalidad de S.frugiperda con seis diferentes concentraciones de extractos vegetales.

120

100

100
80

55

60
40
% de Mortalidad

20
0

5
00000

00000

000 0

15
2.5

67.5
25
5

00

00

100
80

65

30
27.5
22.525
7.5
5

Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Testigo

Concentracion ml/L

El tratamiento testigo/control no present ningn espcimen muerto despus de las evaluaciones,

lo que nos da certeza de la buena conduccin del experimento (fig. 1).
La evaluacin de los tratamientos se realizo cada hora por un tiempo de 5 horas. La muestra 4
anoto la mortalidad desde la concentracin (0,25 - 2), a medida que la concentracin va
aumentando tambin aumenta la mortalidad. Siendo que para las concentraciones ms altas al 1%
y 2% la mortalidad llega al 100%.
La muestra 1 le sigue con menor eficiencia, la mortalidad se anota desde la concentracin (0,5 - 2)
de la misma manera a concentraciones altas la mortalidad tambin es alta la concentracin 1%
llega a 28% de mortalidad y el 2% al 80% de mortalidad.
Las muestras 2, 3, 5 son las menos eficientes ya que estos anotaron una mortalidad de menos de
50% a excepcin de la muestra 5 en la concentracin al 2% llego al 65% de mortalidad, la muestra
6 no entro en el anlisis debido a que no anot ninguna mortalidad.
Campo
Realizando el anlisis estadsticos de X2 (chi cuadrado) de los datos obtenidos en las evaluaciones
despus del tratamiento, se observa diferencias significativas entre tratamientos, donde no hay
diferencias estadsticas entre los tratamientos con el extracto y el Entrust, pero si hay diferencia
significativa de ambos tratamientos respecto al testigo, como se observa en la figura 2.

60
50.83

50
40
% de larvas despues del control 30

31.21
18.79

20
10
0

Extracto

Entrust

Testigo

Tratamientos

Fig. 2: Porcentaje de larvas de polilla de la quinua muertas despus del tratamiento.

4. CONCLUSIONES.
En el ensayo de laboratorio, la muestra 4. Es el ms eficiente comparada con las dems muestras,
por lo tanto se recomienda usar esta muestra con fines de formulacin de un bioinsecticida.
En el ensayo de campo la muestra 4 probada no muestra diferencias significativas respecto al
control positivo (Entrust 80%).
5. OBSERVACIONES.
En los ensayos realizados tanto en laboratorio como en campo se observa que el extracto (muestra
4) es un aceite que al combinar con agua para las diluciones no se mezcla fcilmente, por lo que es
necesario el uso de un dispersante que facilite su mezcla.

FASE 2: Pruebas con muestra 4, muestra 7, muestra 8 en

laboratorio
Las tres muestras han sido destinadas para los bioensayos solo en laboratorio y en las dos
especies de noctuidos (S.frugiperda, C. incommoda) y la polilla de la papa P. opercullla.

Cuadro 1. Concentracin letal media (CL50) y Concentracin letal al 90% (Anlisis de Regresin PROBIT)
muestra 4 con sus respectivos intervalos de confianza.

Intervalo de confianza
Concentracin Menor
Muestra 4
S.frugiperda
P. opercullla
C. incommoda

CL50
CL90
CL50
CL90
CL50
CL90

7,249
46.378
2,562
9,634
6,963
28,675

1,832
4,906
3,153
7,279

Mayor
5,109
44,734
1118,196
277582,6

En el cuadro 1: El anlisis de Regresin Probit arrojo los resultados de concentracin letal media
(CL50) probable para eliminar al 50% de la poblacin de plaga y para causar la muerte del 90% de la
poblacin (CL90). Adicionalmente el anlisis tambin revela los intervalos de confianza que se
deben tomar en cuenta para un experimento. Los intervalos de confianza nos indican cuanto de
extracto como mnimo y mximo puedes utilizar para matar al 50% y 90% de la poblacin plaga.
Segn Regresin Probit para eliminar al 50% de la poblacin de noctuidos (S. frugiperda y C.
incommoda) se necesita 1392 ml (1 litro y 392 ml) de extracto (muestra 4) / 20 l de agua y para
eliminar al 50% de la poblacin polilla P. operculella se necesita 512 ml para 20 litros de agua.

Fig. 1: Mortalidad de las tres especies plaga con la Muestra 4.

En la figura 1. se observa que la muestra 4 tuvo mejor efecto de control sobre la especie S.
frugiperda con un porcentaje de 37.5% seguido por la especie P.operculella con un porcentaje de
22,5%, en la figura presente se observa que a medida que aumenta la concentracion tambien
aumenta la mortalidad.

Cuadro 2. Concentracin letal media (CL50) y Concentracin letal al 90% (Anlisis de Regresin PROBIT); con
sus respectivos Intervalo de confianza de la muestra 8.

Intervalo de confianza
Concentracin Menor
Muestra 8
S.frugiperda
P operculella.
C. incommoda

CL50
CL90
CL50
CL90
CL50
CL90

1,927
3,790
3,618
9,817
3,044
7,364

1,638
2,832
2,416
4,725
2,219
4,123

Mayor
2,487
6,606
12,744
116,170
6,962
39,269

Para el caso de la muestra 8 como se observa en el cuadro 2: Segn Regresin Probit para eliminar
al 50% de la poblacin de noctuidos (S. frugiperda Y C. incommoda) se necesita 500 ml de
extracto, para eliminar al 50% de la poblacin polilla P. operculella se necesita 724 ml para 20
litros de agua.

Fig. 2: Mortalidad de las tres especies plaga con la muestra 8.

En la figura 2: La muestra 8 nos muestra que tuvo mejor efecto de control sobre la especie S.
frugiperda con un porcentaje de 52,5% seguido por la especie C. incommmoda con 25%, como en
los anteriores casos la mortalidad es proporcional a las concentraciones.

Cuadro 3. Concentracin letal media (CL50) y Concentracin letal al 90% (Anlisis de Regresin PROBIT); con
sus respectivos intervalos de confianza.

Intervalo de confianza
Concentracin Menor
Muestra 7
S.frugiperda
P operculella.
C. incommoda

CL50
CL90
CL50
CL90
CL50
CL90

0,741
1,425
0,915
2,049
1,203
2,180

Mayor

0,580
1,090
0,642
1,355
0,852
1,426

0,934
2,600
1,401
7,804
2,664
20,088

Para
el
producto
7, segn Regresin Probit para eliminar al 50% de la poblacin de noctuidos S. frugiperda se
necesita 150 ml de extracto/ 20 l de agua, para C. incommoda se necesita 250 ml. / 20 l de agua
Para eliminar al 50% de la poblacin polilla P. operculella se necesita 200ml/ 20 l de agua.

Fig. 3: Mortalidad de las tres especies plaga con la muestra 7

% de Mortalidad

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0

92.595

80
57.5
17.5
10
0 0

0 0

0 0

15

15
S.frugiperda
C.incommoda
P.operculella

Concentracion ml/L

La muestra 7 resulto ser la ms eficiente sobre las especies C. incommoda y P. operculella con un
porcentaje de 95% seguido por S. frugiperda con 92,5%, en la figura se observa a medida que va
aumentando la concentracin tambin aumenta la mortalidad como en todos los experimentos.
CONCLUSIONES.

Los ensayos de laboratorio nos indica que la muestra 7 es el ms eficiente comparada con las
dems muestras a nivel de laboratorio, por lo tanto se recomienda hacer pruebas a nivel de campo
para finalmente llegar a la formulacin de un bioinsecticida.