Introduccin

La inmunodifusin radial es una tcnica cuantitativa, basada en la

precipitacin en gel de un sistema antgeno-anticuerpo mono especfico. Para
cuantificar un antgeno dado, se incorpora en el gel una cierta cantidad de los
anticuerpos correspondientes, con lo que al aplicar una muestra en un hoyo y
dejarla difundir libremente, se forma un precipitado circular.
De aqu se deriva el nombre de esta tcnica, ya que la difusin de la
muestra y su precipitacin ocurren en forma radial. El dimetro del crculo o
anillo de precipitado guarda una proporcin con la cantidad de antgeno en la
muestra. De esta forma, se puede establecer una curva de referencia con
cantidades conocidas del antgeno (estndares o patrones de referencia) y as
interpolar los valores de muestras desconocidas.
Es un examen de sangre que mide la actividad de una cierta protena
que es parte del sistema de complementos. Dicho sistema es un grupo de
protenas que se mueven libremente a travs del torrente sanguneo. Las
protenas trabajan con el sistema inmunitario y juegan un papel en el
desarrollo de la inflamacin.
Existen nueve protenas mayores del complemento. Se clasifican de C1
a C9. Este examen mide la C4.

Mtodo para inmunodifusin radial

Para desarrollar una tcnica de inmunodifusin radial propia (no comercial) se
requiere: agarosa; un antisuero monoespecfico contra el antgeno de inters; y una solucin
patrn de concentracin conocida del antgeno (para preparar la curva de referencia). Los
principales parmetros que deben estandarizarse y optimizarse son:
(1) La concentracin de antisuero en el gel, la cual depender del ttulo y avidez de
los anticuerpos; en general, el antisuero se utiliza a una concentracin del 2-10% (v/v).
(2) la cantidad de muestra (usualmente 5-10 l).
Es fundamental mantener constante el grosor del gel, as como los dos parmetros
mencionados, para obtener resultados cuantitativos que sean confiables y reproducibles.
Estas condiciones se deben ajustar con el fin de lograr anillos de precipitado con bordes
ntidos, fcilmente visibles, cuyos dimetros varen entre los 5-15 mm. La aparicide ms
de un anillo de precipitacin indica que el antisuero utilizado reconoce ms de un antgeno
(no es monoespecfico), y por lo tanto, no sera apropiado para esta tcnica.
Principio de la tcnica:
Consiste en una inmunoprecipitacin en agarosa entre un antgeno a cuantificar y su
anticuerpo especfico. Se realiza incorporando uno de los dos reactivos inmunes
(generalmente el anticuerpo) uniformemente en una capa de agarosa y luego introduciendo
el otro reactivo en los pocillos cavados en el gel. El antgeno difunde radialmente en la
mezcla gel-anticuerpo y se forma un disco o anillo de precipitado visible en un punto que
depende de la relacin estequeromtrica antgeno-anticuerpo. Al completarse la reaccin a
las 24-48 Horas, se realiza la medida del dimetro del anillo de precipitacin en mm2 y se
compara con una curva de calibracin que se construye con los dimetros al cuadrado de
una serie de patrones vs. La concentracin de los mismos, siendo esta relacin lineal.
Definicin
El estudio de los factores del Complemento es la determinacin de los componentes
de uno de los factores que influyen directamente en la inflamacin llamada cascada del

Complemento, entre estos factores se suelen determinar principalmente los factores C3, C4,
y la actividad del complemento total o CH50.Los factores del complemento son nueve
protenas, del C1 al C9.La cascada puede ser iniciada por diversos factores, principalmente
la unin de complejos antgeno-anticuerpo.
El producto final de la cascada es la unidad de ataque de la membrana celular, que
genera agujeros en las bacterias pero tambin en ocasiones en clulas del propio cuerpo
(enfermedades auto-inmunes).
Cuando la misma bacteria vuelve a infectar a un individuo se produce la activacin
del complemento por la llamada va alterna, desde el componente C3 , y desde esta
activacin se produce la unidad de ataque celular.
La actividad del complemento CH 50 mide la actividad que le queda a la cascada
por activarse, si esta actividad es baja es que el complemento ya est siendo activado por
otros factores y se encuentra agotada su capacidad.

Para qu se realiza este estudio.

La actividad de complemento (CH50 o las protenas individuales de complemento)
se miden para determinar si el complemento est involucrado en el origen o en el proceso
de diferentes enfermedades. La actividad de complemento se mide tambin para controlar
la gravedad o evolucin de unaenfermedad, tanto como diagnstico como para comprobar
la eficacia del tratamiento.
Por ejemplo, los pacientes con Lupus Eritematoso Sistmico activos pueden tener
niveles bajos de C3 y C4, y estos niveles del Complemento pueden seguirse como un ndice
de la actividad de la enfermedad.
La actividad de complemento puede variar en partes diferentes de cuerpo. Por
ejemplo, actividad de complemento en la sangre de pacientes con Artritis Reumatoide
puede ser normal o aumentada, pero en el lquido articular se encuentra muy baja.Los
niveles del complemento se encuentran muy disminuidos en graves infecciones bacterianas,

por

hongos

por

parsitos.

Tcnica de realizacin del estudio.

Para realizar este anlisis NO se precisa estar en ayunas.
El componente C3 del complemento es inestable a altas temperaturas.
Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clnica, hospital) pero en
ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente.
Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se
utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la
muestra utilizar guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de
extraccin).
Le pondr un tortor (cinta de goma-ltex) en el brazo para que las venas retengan
ms

sangre

aparezcan

ms

visibles

accesibles.

Limpiar la zona del pinchazo con un antisptico y mediante una palpacin

localizar la vena apropiada y acceder a ella con la aguja. Le soltarn el tortor.
Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una aspiracin (mediante
la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo con vaco).
Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de
algodn o similar para favorecer la coagulacin y se le indicar que flexione el
brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas.
La sangre extrada se traslada al laboratorio de anlisis en un tubo especial para
bioqumica, que contiene un producto anticoagulante. En general no suelen ser
necesarios ms de 10 mililitros de sangre para una batera estndar de parmetros
bioqumicos.
Problemas y posibles riesgos.

La obtencin mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor.

La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios

pinchazos.

Aparicin de un hematoma (moratn o cardenal) en la zona de extraccin, suele

deberse a que la vena no se ha cerrado bien tras la presin posterior y ha seguido
saliendo sangre produciendo este problema. Puede aplicarse una pomada tipo
Hirudoid o Trombocid en la zona.

Inflamacin de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una
causa meramente fsica o por que se ha infectado. Se deber mantener la zona
relajada unos das y se puede aplicar una pomada tipo Hirudoid o Trombo cid en la
zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deber consultarlo con su mdico.

Valores normales del complemento

CH 50

75 a 160 U/ml

C1 Inhibidor

16 a 33 mg/ dl

C3 Hombres

88 a 252 mg/ dl

C3 Mujeres

88 a 206 mg/ dl

C4 Hombres

12 a 72 mg/ dl

C4 Mujeres

13 a 75 mg/ dl

En estos valores puede haber muy pequeas diferencias por la tcnica o por criterios
de normalidad propios de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras
veces por las unidades a las que se hace referencia.
Valoracin de resultados anormales
La actividad aumentada de complemento puede verse en:

Cncer

Colitis ulcerosa

Infarto agudo de miocardio

La actividad disminuida de complemento puede verse en:

Angioedema hereditario

Cirrosis heptica

Glomerulonefritis

Hepatitis infecciosa

Lupus Eritematoso Sistmico con afectacin renal

Malnutricin

Rechazo de trasplante de rganos.

UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NUCLEO BOLIVAR
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD

INMUNODIFUCION RADIAL Y
DETERMINACION DEL C4

PROFEOSRA

BACHILLER:

MaraMalav

Castro Gnesis

CI: 23732809

Ciudad Bolvar, febrero del 2016.

Conclusin

El estudio de los factores del Complemento es la determinacin de los componentes

de uno de los factores que influyen directamente en la inflamacin llamada cascada del
Complemento, entre estos factores se suelen determinar principalmente los factores C3,
C4,y la actividad del complemento total o CH50.Los factores del complemento son nueve
protenas, del C1 al C9.La cascada puede ser iniciada por diversos factores, principalmente
la unin de complejos antgeno-anticuerpo.
La actividad de complemento se mide tambin para controlar la gravedad o
evolucin de una enfermedad, tanto como diagnstico como para comprobar la eficacia del
tratamiento.La inmunodifusin radial es una tcnica de anlisis inmunolgico de tipo
cuantitativo. Se utiliza para detectar la cantidad de anticuerpos IgG, IgM e IgA que hay en
el suero de un individuo.

Bibliografa

https://es.wikipedia.org/wiki/Inmunodifusin_radial

https://microinmuno.files.wordpress.com/.../inmunodifusic3b3n-radial.
exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/.../LaboratorioN5.pdf.
www.tuotromedico.com/temas/estudio_complemento.htm
www.nlm.nih.gov Pgina Principal Enciclopedia mdica.
www.lablasamericas.com.co/.../complemento_serico__c4__por_nefelom