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1
MANEJO, CUIDADO Y USO DEL MICROSCOPIO
Objetivo: Aplicar los principios tericos y lograr utilizar correctamente el
microscopio para el anlisis de las estructuras celulares que participan en los
procesos biolgicos.
Fundamento
El desarrollo del microscopio, hace ms de 300 aos, mostr que la vida no est
limitada a lo que se ve por observacin directa. Aquel invento permiti descubrir
niveles de complejidad insospechados en los organismos vivos. Mediante el
microscopio apareca un mundo nuevo que los cientficos de la poca no saban
cmo interpretar. Los primeros, construidos en el siglo XVII, tenan una sola
lente.
Antoni van Leeuwenhoek, un vendedor de telas holands, fue uno de los
primeros fabricantes de microscopios. Su instrumento era bien simple: una sola
lente montada en una placa de metal con tornillos para mover lo que se quisiera
ver y enfocar la imagen. Bajo su lente, Van Leeuwenhoek observ todo lo que
pasaba por sus manos: polvo de diamante, lana de cordero, pelo humano, pepita
de naranja, excremento de rana, vino, restos de piel, restos de hueso, etctera.
Cientos de pequeos seres vivos totalmente desconocidos por los cientficos de la
poca aparecan con su microscopio.
Durante 50 aos, Leeuwenhoek public regularmente el resultado de sus
minuciosas observaciones en la Royal Society britnica. Al mismo tiempo, en
Inglaterra, Robert Hooke, tambin describa las maravillas que aparecan a travs
de la luz del microscopio. En su libro Micrographia, que constituy una de las
primeras publicaciones sobre el tema, Hooke incluy descripciones y dibujos
detallados de diversas observaciones microscpicas y telescpicas. Si bien Hooke
describi cmo el corcho y otros tejidos vegetales estaban formados por
pequeas cavidades separadas por paredes, a las que llam clulas, su trabajo fue
slo descriptivo ya que no esboz teora alguna.
Las primeras lentes podan producir un aumento de hasta 200 veces, pero tenan
varias limitaciones. Los microscopios distorsionaban la forma y el color de los
Procedimiento
1. Coloque la preparacin teida en el Microscopio enfoque la imagen sin ajustar
la iluminacin. Note la apariencia del espcimen. Despus ajuste el Microscopio
para la iluminacin Khler y examine el espcimen nuevamente. Compare las
dos imgenes.
Ajuste el microscopio para la iluminacin de Khler mediante los siguientes
pasos:
- Encienda el microscopio (luz amarilla de bajo voltaje).
- Abra los diafragmas (de campo y de iris).
- Suba el condensador a su tope.
- Seleccione el objetivo 10X.
- Enfoque con el mando macromtrico y micromtrico usando nicamente el ojo
derecho. Para enfocar con el ojo izquierdo, proceda a girar el porta-ocular o el
ocular enfocable hasta lograr ver ntida la imagen, no utilice el mando micromacro para esta funcin. Ajuste despus la distancia interpupilar.
-Cierre el diafragma de campo.
-Haga descender ligeramente el condensador hasta ver ntido el borde del
diafragma de campo.
- De ser necesario, centrar el condensador con la ayuda de sus dos tornillos
laterales, una vez centrado el condensador abrir el diafragma de campo hasta que
el borde apenas desaparezca del campo visual, agregar el filtro azul y de ser
necesario intensificar un poco ms la luz.
- Contrastar la imagen con el diafragma de iris del condensador. Un buen ajuste
normalmente se logra teniendo entre un 66 y un 80% de la apertura de diafragma
de campo visible.
2. Limpie y marque 3 portaobjetos o coloque unas pocas esferas de vidrio en
cada portaobjetos sobre de esto, ponga el cubreobjeto y adicione agua (n=1.3330)
Conclusin:
En el 40 x podemos percibir mejor como estn compuestas las clulas en su
estructura externa, con el de 100x la imagen se ve muy de cerca
Cuestionario
1. Cules son los sistemas que componen el microscopio de luz? Indica sus
partes de cada sistema.
El microscopio est formado por tres sistemas:
* El sistema ptico, formado a su vez por lentes objetivos y oculares.
* El sistema de iluminacin, formado por lmpara, lente colectora, condensador y
diafragma iris.
* El sistema mecnico que est formado por la base, el brazo, el tornillo macro y
micromtrico, revolver, la platina, pinzas sujetadoras y el tubo del microscopio.
2. A qu se le llama poder de resolucin?
Es la distancia ms pequea entre dos puntos los cuales pueden ser vistos como
separados. Tiene que ver con la calidad ptica con la cual una lente permite
discriminar los detalles finos de un espcimen.
3. Cul es el lmite de resolucin del ojo humano, del microscopio de luz y el
microscopio electrnico?
Los lmites de resolucin son:
Del ojo humano es de 100 m
Del microscopio de luz 100 nm
Del microscopio electrnico es de 0.4 nm.
4. Indique dos tipos de microscopia de luz y electrnica y sus ventajas.
Microscopia de luz:
* Contraste de fase es ideal observar clulas vivas.
* Confocal se pueden mandar la imagen a un monitor y reconstruir de forma
tridimensional sin hacer cortes.
Microscopia electrnica:
* Transmisin: se puede observar la estructura interna de las clulas.
* Barrido: se puede observar la estructura externa de la clula sin hacer cortes.
PRACTICA No. 2
OBSERVACIN DE CLULAS EUCARITICAS
Objetivo: Realizar observaciones para identificar las caractersticas de las clulas
eucariticas.
Fundamento
Se denomina eucariotas a todas las clulas que tienen su material hereditario
fundamental (su informacin gentica) encerrado dentro de una doble membrana,
la envoltura nuclear, que delimita un ncleo celular. Igualmente estas clulas
vienen a ser microscpicas pero de tamao grande y variado comparado con las
otras clulas.
La alternativa a la organizacin eucaritica de la clula la ofrece la llamada
clula procariota. En estas clulas el material hereditario se encuentra dentro de
diferentes compartimientos llamados organelos, en el seno del citoplasma. Las
clulas eucariotas no cuentan con un compartimiento alrededor de la membrana
plasmtica (periplasma), como el que tienen las clulas procariotas. A los
organismos formados por clulas eucariotas se les denomina eucariontes.
Clulas animales
Estructura de una clula animal tpica: 1. Nuclolo, 2. Ncleo, 3. Ribosoma, 4.
Vescula, 5. Retculo endoplasmtico rugoso, 6. Aparato de Golgi, 7.
Citoesqueleto (microtbulos), 8. Retculo endoplasmtico liso, 9. Mitocondria,
10. Peroxisoma, 11. Citoplasma, 12. Lisosoma. 13. Centriolo.
Las clulas animales componen los tejidos de los animales y se distinguen de las
clulas vegetales en que carecen de paredes celulares y de cloroplastos y poseen
centriolos y vacuolas ms pequeas y, generalmente, ms abundantes. Debido a
la carencia de pared celular rgida, las clulas animales pueden adoptar una
variedad de formas e incluso pueden fagocitar otras estructuras.
Clulas vegetales
Estructura de una clula vegetal tpica: 1. Ncleo, 2. Nuclolo, 3. Membrana
nuclear, 4. Retculo endoplasmtico rugoso, 5. Leucoplasto, 6. Citoplasma, 7.
Aparato de Golgi, 8. Pared celular, 9. Peroxisoma, 10. Membrana plasmtica, 11.
Mitocondria, 12. Vacuola central, 13. Cloroplasto, 14. Plasmodesmos, 15.
Retculo endoplasmtico liso, 16. Citoesqueleto, 17. Vescula, 18. Ribosomas.
Las caractersticas distintivas de las clulas de las plantas son: * Una vacuola
central grande (delimitada por una membrana, el tonoplasto), que mantiene la
forma de la clula y controla el movimiento de molculas entre citosol y savia. *
Una pared celular compuesta de celulosa y protenas, y en muchos casos, lignina,
que es depositada por el protoplasto en el exterior de la membrana celular. Esto
contrasta con las paredes celulares de los hongos, que estn hechas de quitina, y
la de los procariontes, que estn hechas de peptidoglicano. * Los plasmodesmos,
poros de enlace en la pared celular que permiten que las clulas de la plantas se
comuniquen con las clulas adyacentes. Esto es diferente a la red de hifas usada
por los hongos. * Los plastos, especialmente cloroplastos que contienen clorofila,
el pigmento que da a la plantas su color verde y que permite que realicen la
fotosntesis. * Los grupos de plantas sin flagelos (incluidas conferas y plantas
con flor) tambin carecen de los centriolos que estn presentes en las clulas
animales.
Material
Microscopio
Mechero
Bistur o tijeras de punta fina
Pinzas y/o palillos estriles
Cebolla
Papel de filtro
Placa de Petri
Piseta
Colorante (verde de metilo o azul de metileno)
Portaobjetos y cubreobjetos
Procedimiento
Clulas vegetales (Epidermis de cebolla)
1. Se corta la cebolla por la mitad y se separa una de las capas de la misma.
2. Marca con el bistur o con las tijeras una cuadrcula de pequeo tamao (1 cm
de lado) en la parte interna o cncava de la capa.
3. Separa el fragmento de epidermis con las pinzas y colcalo en el centro del
portaobjetos.
4. Coloca el portaobjetos en la placa de Petri, aade unas gotas de colorante sobre
la muestra y djalo actuar durante cinco minutos.
5. Lava con cuidado el exceso de colorante y scalo con un poco de papel de
filtro.
6. Aade una gota de agua a la muestra.
7. Coloca el cubre apoyndolo por un lado y dejndolo caer para que no queden
burbujas.
Observa la preparacin al microscopio, utilizando varios objetivos, realiza un
dibujo detallado de las clulas e indica el aumento del mismo.
Clulas animales (Epitelio de la mucosa bucal)
8. Raspa suavemente el interior del carrillo con las pinzas o con un palillo
(siempre por la parte roma, procurando no cortarse). Coloca la mucosa blanca
que se obtiene en el portaobjetos.
9. Realiza una extensin (frotis) deslizando el borde de una porta sobre el que
tiene la muestra.
10. Calienta suavemente con el mechero (que no llegue a quemar!) la parte
inferior del porta que contiene la mucosa.
11. El resto del procedimiento es idntico al de la epidermis de cebolla.
Resultados
Haz esquemas de las clulas que observaste, indicando el aumento usado. Seala
las partes en cada tipo de clula y marca las diferencias entre ellas.
Conclusin:
PRACTICA No. 3
DESNATURALIZACIN DE PROTENAS
Objetivo: Determinar el comportamiento de una protena globular hidrosoluble
bajo condiciones de desnaturalizacin.
Fundamento
Las protenas son los materiales que desempean un mayor nmero de funciones
en las clulas de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura
bsica de los tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.) Y, por otro,
desempean funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de nutrientes,
transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de materiales txicos
o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada
ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los
sistemas de reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario.
Son macromolculas orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C),
hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin
azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu),
magnesio (Mg), yodo (I), etc...
Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales
llamados aminocidos. Se sabe que de los 20 aminocidos proteicos conocidos, 8
resultan indispensables (o esenciales) para la vida humana y 2 resultan
"semiindispensables".
Los pptidos y el enlace peptdico.
Los pptidos estn formados por la unin de aminocidos mediante un enlace
peptdico. Es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un
aminocido y el grupo amino del siguiente, dando lugar al desprendimiento de
una molcula de agua. As pues, para formar pptidos los aminocidos se van
enlazando entre s formando cadenas de longitud y secuencia variable. Para
denominar a estas cadenas se utilizan prefijos convencionales como:
* Oligopptidos.- si el n de aminocidos es menor de 10.
* Dipptidos.- si el n de aminocidos es 2.
* Tripptidos.- si el n de aminocidos es 3.
* Tetrapptidos.- si el n de aminocidos es 4.
* Polipptidos o cadenas polipeptdicas.- si el n de aminocidos es mayor de 10.
Estructura de las protenas
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales
denominados:
* Estructura primaria
contacto con el agua. De esta forma la membrana est estructurada por una
bicapa de fosfolpidos con protenas asociadas.
FUNCIONES DE LA MEMBRANA PLASMTICA:
1. Comparta mentalizacin
2. Constituyen una barrera selectivamente permeable.
3. Transporte de solutos
4. Respuestas a seales externas
5. Interaccin celular
6. Sitio de actividades bioqumicas
7. Transduccin de energa
Material
Vaso de precipitado
Solucin de yodo
Solucin de almidn al 1%
Bolsa de plstico
Condn
Celofn dulce
Hilo de algodn
Procedimiento
Llene el vaso de precipitados con agua hasta el 80% de su volumen, adale 10
gotas de solucin de yodo y agtelo.
Cuestionario
1. De acuerdo al modelo del mosaico fluido, de qu estn constituidas las
membranas celulares?