INSTITUTO POLITECNICO

NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLOGICAS
LABORATORIO DE MTODOS DE ANLISIS
SEPARACIN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y
FLUORESCENA USANDO CROMATOGRAFA POR ADSORCIN.
ALUMNA: HERNNDEZ ESCAMILLA ROSALINDA
GRUPO: 4IV1

SECCIN 3

PROFESOR: VICTOR MANUEL L. MACAS MARTNEZ

INTRODUCCIN
La cromatografa comprende un grupo de mtodos para separar mezclas
moleculares que dependen de las afinidades diferenciales de los solutos
entre dos fases no miscibles. Una de las fases es un lecho fijo de gran
rea superficial, mientras que la otra es un lquido el cual se mueve a
travs de la superficie fija o sobre ella. Los componentes de la mezcla
deben tener dimensiones moleculares, lo que requiere que estn en
solucin.
La fase fija se denomina fase estacionaria y la otra, fase mvil. La fase
estacionaria puede ser un slido poroso o finamente dividido, o un
lquido que ha sido colocado en una capa delgada sobre un material de
soporte inerte. Es necesario que las partculas de la fase estacionaria
sean lo ms pequeas y homogneas posible para proveer una gran
superficie de modo que la adsorcin y desorcin de los solutos ocurran
con frecuencia. Segn el tipo de cromatografa empleada la fase mvil
puede ser un lquido puro o una mezcla se soluciones o tambin puede
ser un gas.
*Bibliografa 1
La cromatografa de adsorcin es una de las tcnicas ms empleadas
para la separacin de mezclas en sus componentes puros, purificacin
de un compuesto y comparacin de compuestos que se creen idnticos,
entre otras aplicaciones. Se puede llevar a cabo a travs de diferentes
modalidades: cromatografa en columna, en capa fina, en papel, etc. Se
basa en el diferente grado de adsorcin de cada compuesto orgnico
sobre la superficie del adsorbente por fuerzas electrostticas, quedando
reversiblemente ligado a la misma. Para que el proceso ocurra es
necesaria la presencia de un disolvente, o mezcla de disolventes, que
interaccionan con el adsorbente y los compuestos de la mezcla; esta
interaccin triple entre soluto, disolvente y adsorbente, establece las
proporciones relativas en que se fijan y migran, a travs del adsorbente,
los diferentes solutos y, por tanto, determina la separacin entre los
mismos.
*Bibliografa 2
OBJETIVOS.

Llevar a cabo la separacin de dos colorantes mediante sus

propiedades fsicas y qumicas por cromatografa por adsorcin.

DATOS EXPERIMENTALES
Tabla 1.- Valores de absorbancia obtenidos para la separacin de
fluorescena y azul de metileno.
Volumen de
elucin. (ml)

A493

A668

3
6
9
12
15
18
21
24
27
30
33
36
39
42
45
48
51
54
57
60
63
66
69
72
75
78
81
84

0
0.023
0.139
0.102
0.038
0.035
0.005
0
0
0.004
0.001
0.003
0
0.001
0.001
0
0.069
0.137
1.254
2.073
1.086
0.263
0.111
0.083
0.066
0.053
0.039
0.027

0
0
2.069
1.866
0.584
0.2
0.078
0.043
0.023
0.023
0.009
0.004
0
0
0
0
0
0
0
0.009
0.004
0.004
0
0
0
0.004
0.003
0

Grfico 1.- Perfil de elucin a diferentes longitudes de onda.

Perfil de elucin.
2.5
2
1.5
Absorbancia

1
0.5
0

Volumen de elucin
A493

A668

Estructuras de los colorantes

Azul de metileno (cloruro

de metiltionina)

Na O

O Na

O
Fluorescena

DISCUSIN
El azul de metileno eluy primero, esto se debe gracias a que la fase
mvil que se adicion fue agua, sta misma tiene una gran afinidad por
el azul de metileno, lo cual no se puede decir lo mismo con la
fluorescena. Se puede observar en la estructura del azul de metileno
que ste contiene varios elementos con pares de electrones de no
enlace, lo que provoca que forme uniones electrostticas con el agua,
as aumentando su solubilidad con el agua. La fluorescena a diferencia
del azul de metileno tambin tiene varios grupos con pares de
electrones de no enlace, pero son en su totalidad aniones, los cuales
interaccionan con la almina, porque sta goza de un pH cido, lo que le
permite interactuar en este momento preferencialmente con la
fluorescena.
Despus se adicion regulador de fosfatos de pH 12 el cual es una
solucin ms bsica que la misma fluorescena, provocando as que el
regulador y la fluorescena compitan por las interacciones con la
almina. De esta forma se le permite a la fluorescena eluir, al tener ms
afinidad por la fase mvil que por la fase estacionaria.
Con las alcuotas recolectadas desde el inicio, las cuales fueron
analizadas en el espectrofotmetro, a diferentes longitudes de onda
(493,668), pretendiendo as obtener un perfil de eluciones, para conocer
si la separacin fue exitosa; cada colorante tiene su mximo de
absorbancia a diferente longitud de onda, en el caso del azul de
metileno es a 493 y la fluorescena a 668, se puede observar en el
grfico perfil de eluciones que cada uno obtuvo su mximo en la
longitud de onda esperada.
El perfil de elucin fue el esperado, es decir se obtuvo una buena
separacin de los colorantes previamente mencionados, esto se puede
observar en el grfico 1 ya que se obtuvieron en cada longitud de onda
una absorbancia mxima que de ninguna manera se intersectan.

PREGUNTAS EXTRA
1. Especifique y defina los elementos del sistema cromatogrfico
para esta separacin.
FASE MVIL: es la fase que se
mueve en una direccin definida.
Puede ser un lquido, un gas o un
fluido supercrtico.
FASE ESTACIONARIA: es la sustancia
que est fija en una posicin
durante la cromatografa.
SOPORTE: Medio en el
realizar la separacin.

cual

se

ANALITO O MUESTRA PROBLEMA: es

la substancia que se va a separar
durante la cromatografa.

2. Defina el trmino de adsorcin y, empleando frmulas,

esquematice que fuerzas intermoleculares participan en el proceso
de separacin de los solutos.
La adsorcin es la retencin, adhesin o concentracin en la
superficie de un slido de sustancias disueltas o dispersas en un
fluido mediante interacciones electrostticas o enlaces covalentes.
Interaccin electrosttica entre el azul de metileno y el agua.

Enlaces inicos entre la almina y la fluorescena

+

Na O
ALMIN
A CIDA

O Na

3. Considerando las propiedades de la solubilidad de los colorantes,

indique que modificaciones hara para invertir el orden de la
elucin.
Cambiando el pH a bsico de la almina para que de esa forma el
azul de metileno interaccione con la almina e invirtiendo el orden al
adicionar las fases mviles.
4. Completa la frase
El que porfa... mata caza.
A explicacin no pedida culpabilidad manifiesta.
5. Menciona tres compuestos que sean buenos adsorbentes.
Carbn activado, Gel Slice y Carbonato de Calcio
CONCLUSIONES
1. Para llevar a cabo una cromatografa se debe tener en cuenta
cules son sus componentes y cul es la funcin de cada uno de
estos.
2. La cromatografa fue utilizada como una tcnica de separacin.
3. Para emplear sta tcnica como separacin deben conocerse las
propiedades fsicas y qumicas de los analitos a separar.
4. Es necesario tener en cuenta que se quera obtener ambos
colorantes y no solo uno, por lo cual fue necesario agregar una
segunda fase mvil.

BIBLIOGRAFA

1. Remington, Genaro Alfonso. Farmacia 20 Ed. Editorial Mdica

Panamericana. Ao 2000. Pgina 686.
2. Molina Buenda, P. Prcticas de qumica orgnica. Editorial
Universidad de Murcia. Ao 1991. Pgina 22