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INTRODUCCIN
El ADN (cido Desoxirribonucleico) Es
una cadena de mltiples unidades
repetitivas compuesta por nucletidos
unidos entre s por enlaces fosfodiester
[1].Esta molcula es la que se encarga
de guardar y transmitir de generacin en
generacin toda la informacin necesaria
para el desarrollo de todas las funciones
biolgicas de un organismo. El ADN es
nuestra huella gentica y tiene un gran
uso en la sociedad actual, en especial en
las ciencias biomdicas; es por eso que
la extraccin del ADN es de suma
importancia para la realizacin de
diferentes procesos como lo es el estudio
y as mismo la deteccin de bacterias y
virus en el medio ambiente, as como el
diagnstico de enfermedades y sus
trastornos. [2]
El objetivo de este laboratorio fue
determinar la presencia de material
gentico (ADN) en la muestra utilizada, la
cual fue una fraccin de hgado de pollo.
Y as mismo desarrollar habilidades para
la manipulacin de los implementos
utilizados en la extraccin de ADN, por
otro lado se estudi tambin la funcin
que cumplan cada uno de los diferentes
METODOLOGIA
Para llevar a cabo esta prctica de
laboratorio primeramente se tomaron
10gr de tejido animal (hgado de pollo)
que luego se cort en varias unidades
pequeas con ayuda del bistur, seguido
de esto se depositaron estos cortes del
tejido en un mortero donde se le adiciono
20 ml de agua destilada para
ser
macerados
hasta
disolverse,
seguidamente se coloc una gasa sobre
un beacker limpio para filtrar el macerado
anteriormente hecho, luego de esto se le
adicion un volumen igual de NaCl 2M al
volumen de sobrenadante despus se
agreg 1ml de shampoo y
se
homogenizo la solucin dejndolo
reposar por 10 min, terminado el tiempo
de espera se separ la solucin en
cuatro tubos eppendorf y se centrifug a
12.000 rpm por un lazo de tiempo de
5min seguido de estos 5 min se tom el
sobrenadante de cada tubo con la ayuda
de una pipeta micromtrica y se transfiri
a un tubo de ensayo donde se le aadi
lentamente etanol absoluto frio por las
paredes del tubo inclinado, despus de
esto se recuper el ADN para transferirlo
a un nuevo tuvo
eppendorf y
nuevamente se llev al centrifugado a
12.000 rpm durante 5 min descartndose
la capa sobrenadante, posterior a esto se
sec la muestra a temperatura ambiente
suspendi con 1ml de agua destilada.
Finalmente se sembr la muestra en un
pozo en gel de agarosa y adicionalmente
un marcador de peso molecular.
RESULTADOS
De
las
prcticas
anteriormente
se
siguientes resultados:
de
laboratorio
obtuvieron
los
Electroforesis
4
f(x) = - 0.27x +
4.03(Electroforesis)
Electroforesis
Linear
2
0
2
DISCUSIN
En los experimentos realizados para este
laboratorio, no se lograron los resultados
deseados, ya que el fin de dicha prctica
era la determinacin cualitativa de ADN
genmico total, y para esto era necesaria
la extraccin de ADN, seguido de una
electroforesis, al realizar este ltimo
procedimiento para la observacin del
ADN, no se obtuvo la imagen esperada,
esto pudo haber ocurrido por diferentes
causas como lo es, la falta del hgado de
pollo en la realizacin de la prctica ,otra
causa pudo ser que el Shampoo utilizado
no era el ms adecuado, puesto que el
ms indicado para esta extraccin de
ADN es el Shampoo marca H&S, ya
que este posee el componente necesario
para el rompimiento de la membrana
celular y seguidamente la membrana
nuclear, para as poder liberar el material
CONCLUSIN
Despus de haber realizado cada uno de
los procedimientos planteados para este
laboratorio, se obtuvo un conocimiento
amplio acerca de la extraccin de ADN,
aunque los resultados obtenidos no
hayan sido los esperados para esta
prctica, a su vez
se desarrollaron
ciertas destrezas en la manipulacin de
los instrumentos utilizados para este
proceso, se conoci tambin el uso que
tienen cada uno de los reactivos que
fueron necesarios para la realizacin de
este laboratorio.
ANEXOS
1.
Las
aplicaciones
del
ADN
recombinante en la medicina son muchas
como: la produccin de protenas como
la somatostatina, la insulina, la hormona
del
crecimiento
humana
y
los
interferones, es de gran importancia
prctica. Por ejemplo, en el pasado, la
hormona del crecimiento humana para el
aislar
en
genes
regiones
Cromatografa de adsorcin. Se
basa en la adsorcin y desorcin de
los cidos nucleicos en presencia de
sales caotrpicas. Bajo condiciones
nativas, los cidos nucleicos estn
recubiertos de una capa hidratante
de molculas de agua que mantienen
la solubilidad del DNA en soluciones
acuosas. Con la adicin de iones
caotrpicos a los cidos nucleicos, se
destruye esta ordenada estructura de
molculas de agua de la capa
hidratante, por lo que las sales
caotrpicas
crean
un
entorno
hidrofbico alrededor del DNA.
Cromatografa de penetrabilidad.
El componente bsico es una
columna empaquetada con una
matriz en
gel especial, que son
partculas de un polmero orgnico de
estructura
tridimensional,
que
originan una red de poros hidroflicos
equilibrados con un tampn acu oso.
La tcnica consiste en que las
molculas de gran tamao no
penetran por los poros del polmero,
por lo que migran mucha ms rpida
mente que las de menor tamao que
s es capaces de penetrar por los
poros de la matriz.
Cromatografa de intercambio
inico. Es el mtodo ms utilizado
para la separacin de cidos
nucleicos. El mecanismo bsico es el
intercambio reversible de los iones en
solucin con los grupos funcionales
unidos covalentemente a una fase
estacionaria insoluble llamada resina.
Por ejemplo, un cido nucleico con
carga negativa a pH 7, 0 se unir a
un intercambiador inico con grupos
cargados positivamente, pero eludir
de la columna al cambiar al pH del
tampn (tampn de elucin) ya que
los iones del tampn de elucin
interaccionan
con
los
grupos
cargados del cido nucleico o del
intercambiador
inico,
respectivamente; primero eludirn de
la columna las molculas cargadas
positivamente que no se unen a la
fase estacionaria y posteriormente, al
aadir el tampn de elucin, eludirn
las molculas con poca carga
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. cidos nucleicos. Gerald Karp.
Biologa celular y molecular. 5ta
edicin.McGrawHill
2. Propsitos de la extraccin de
ADN.Rod
Howell.
EHow.
Disponibleen:http://www.ehowene
spanol.com/propositosextraccion-del-adnsobre_144163/