Problemas e Incidencias HPLC 1260

Por este medio le informo que el dia 12/01/16, se procedi a iniciar con el desarrollo del
mtodo de amiono acidos en el producto Jarabe Heptico:
L-arginina
L-Citruline
El principio del mtodo es el siguiente:
El mtodo de ensayo propuesto es tomado con algunas modificaciones en el
procedimiento del tratamiento de las muestras y el estndar. Los Amino cidos muestra
unin a diferentes grupos de derivatizantes, tales como el FMOC-Cl debido a la
interaccin inica del grupo amino primario. Las aminas carece de grupos cromforos
tiles y no puede ser analizada directamente por tcnica HPLC-UV (DAD).
Consecuentemente los aminos acidos debe de derivatizarse. El Cloruro de 9Fluoroenilmetil cloroformato (FMOC-Cl) es el reactivo derivatizante debido a que
reacciona fcilmente con las aminas primarias y secundarias.
El derivado es separado isocrticamente en una columna de fase reversa C18 250 x 4.6,
5m, y ledo en la regin ultravioleta del espectro electromagntico. La derivitacion fue
optimizada 0.4M buffer de Borato ph 9.20 y Cloruro de Metileno para separar las fases.
Procedimiento Sistema Cromatogrfico
Columna
Temperatura de la columna
Longitud de onda analtica
Flujo
Volumen de inyeccin

C18 250 x 4.6, 5m.Knauer

35 1 C.
338 nm
1,0 mL/min.
20 L.

Solucin A: Pesar con exactitud aproximadamente 20,0 g de Fosfato

Monobsico de Sodio ajustar con Hidroxido de Sodio. Transferir a un matraz
volumtrico de 1000 mL y disolver con agua desionizada Filtrar y desgasificar
con filtros de membrana de Nylon de tamao de poro de 0,45 m y 47 mm de
dimetro.
Solucin B: Acetonitrilo:Metanol:Agua (45:45:10)
Fase mvil. Use la mezcla de la solucin A y B que se indica en la siguiente tabla.
Hacer ajustes si es necesario.
Tiempo (minutos)

Solucin A (%)

Solucin B (%)

30

80

20

Despues de los 30 min se observ la elevada la presin a 300 Bar se procedio a lavar el
equipo con agua destilada a70C la columna estaba saturada y desaplazo el relleno a la
celda obstruyndolo, debido a la cantidad de solventes y sustancias.

Problemas e Incidencias HPLC 1260

Segn el manual del uso de la celda con respecto alos solventes las soluciones de
haluros alcalinos y sus respectivos cidos (por ejemplo,yoduro de litio, cloruro de
potasio, y as sucesivamente).
Las altas concentraciones de cidos inorgnicos como cido sulfrico y cido ntrico,
especialmente a temperaturas ms altas .
Disolventes halogenados o mezclas que formen radicales y / o cidos, para
ejemplo:
2CHCl3 + O2 2Cl2
+ 2HCl
Esta reaccin, en la que el acero inoxidable probablemente acta como catalizador, se
produce.
Las partes metlicas en la va de flujo interactuaron con las biomolculas
obstaculizando la celda debido ala degradacin ..