Alumno: Alejandro Santos Martnez 2BAT B

EXTRACCIN DE ADN
La extraccin de los cidos nucleicos (ADN y ARN) es el primer paso para poder
utilizar un marcador molecular
Un marcador gentico o marcador molecular es un segmento de ADN con una ubicacin
fsica identificable en un cromosoma y cuya herencia gentica se puede rastrear. Un
marcador puede ser un gen, o puede ser alguna seccin del ADN sin funcin conocida.
Cogeremos una hojita pequea de tomate y la meteremos en un tubo, haremos 2
extracciones por persona. Introduciremos 250 l de tampn de extraccin de varios
compuestos que ayudaran a proteger el ADN. Trituramos con un palito hasta ver que no
queda hoja.
Despus, volveremos a introducir 250 l de tampn de extraccin y lo mezclaremos. A
continuacin, aadiremos 35l de SDS y agitamos. Una vez hecho esto, incubaremos
los tubos a 65 durante 5 minutos. Ponemos 130 l de CH3CO2K e incubar en
condiciones normales durante 5 minutos.
Una vez pasado ese tiempo, centrifugamos a 13000 rpm durante 10 minutos. Y la parte
superior clara de la mezcla del tubo, despus de ser centrifugada, la pasamos a otro
tubo. Aadimos 500 l de C3H8O y 60 l de C2H3NaO2 y volvemos a dejarlo incubar
en condiciones normales durante, esta vez ser el doble de tiempo, 10 minutos.
Repetimos el centrifugado a 13000 rpm durante 10 minutos y quitamos el sobrenadante
(la parte superior de la mezcla).
Introducimos 300 l de C2H6O y golpeamos el tubo para que el precipitado se
desprenda del fondo. Repetimos el centrifugado a 13000 rpm pero, esta vez, durante 5
minutos. Y quitamos el alcohol de los tubos. Obtenemos el pellet, se deja secar y se
resuspende, es decir se le agrega agua estril, se agita y el pellet queda disuelto otra vez.
Finalmente, se conserva en un frigorfico a 4C.
Si queremos comprobar la calidad de la extraccin hacemos una electroforesis, claro
est, con extracciones que estn ya comprobadas.
La electroforesis en geles de agarosa, es un polisacrido, que estn teidos con
C21H20BrN3, es un agente intercalante que emite fluorescencia cuando est en
contacto con la luz ultravioleta, y, as, podemos ver las molculas de ADN. Tambin, es
un poderoso mutgeno por eso ya estarn preparados los geles cuando empecemos la
prctica.
De la siguiente manera se prepara un gel de agarosa:
Cogemos el volumen de tampn de electroforesis y lo introducimos en un matraz,
despus pesamos la cantidad de agarosa y la introducimos en el matraz. Se disolver
calentndolo en el microondas hasta que llegue a la ebullicin, y dejamos enfriar.

Alumno: Alejandro Santos Martnez 2BAT B

Mientras se enfra, sellaremos el portageles con cinta y colocaremos el peine sobre el

portageles. Y aadiremos el C21H20BrN3 y se agita. La aadiremos al portageles y se
polimerizar.
Cuando la agarosa se haya solidificado quitaremos el peine y la cinta. Y, finalmente, se
podr hacer el Electroforesis.