Introduo:

Citogentica uma cincia hibrida que combina citologia e gentica. Esta

cincia inclui manuseio dos cromossomos atravs da aplicao de tcnicas de colorao,
para a determinao do nmero e morfologia dos cromossomos (anlise cariotpica) e
para um melhor entendimento do processo de diviso celular (mitose, meiose) e das
modificaes ocorridas na estrutura e nmero dos cromossomos.
Para estudos de comportamento e morfologia de cromossomos mitticos e
meiticos de plantas, no existe uma tcnica geral que possa ser usada para todos os
grupos de plantas. Por esta razo deve se experimentar diferentes pr-tratamentos,
fixadores, corante e mesmo mtodo de obteno das preparaes, adaptados para o
estudo dos cromossomos de um grupo particular de plantas. O estudo da anlise
cromossmica extremamente importante, pois permite a caracterizao de um
caritipo que em alguns grupos de plantas, pode ser usado na identificao de espcies.
Os agentes ANTIMITTICOS mais utilizados so a colchicina 0,01 a 0,5 % ou 8hidroxiquinolena (8HQ) 0,002M.

O objetivo desta prtica ensinar ao aluno a realizao de coletas e tratamento

de razes de cebola e usa-las para a obteno de metfases que podero ser
posteriormente utilizadas para a anlise cariotpica.

Materiais:
Razes vegetais (cebola);

Orceina actica 2%;

Gilete;

Soluo de 8-hidroxiquinolena.

Lmina e lamnula;
Papel filtro;
Seringas com agulha;
Tubos de ensaio;
Lamparina;
Procedimento:
a) Coleta de razes: As sementes devem ser colocadas para germinar e coletadas
quando estiverem com dois a trs centmetros de comprimento;
b) Pr-tratamento: A finalidade do pr-tratamento interromper a diviso celular da
metfase. Para a obteno dos cromossomos de cebola as razes so tratadas com
8-hidroxiquinolena durante 24 horas. Aps o pr-tratamento as razes fixadas
em etanol: cido actico na proporo 3:1 durante o perodo de 12 a 24 horas.

Em seguida a soluo ser substituda por um novo carnoy e o material mantido

em geladeira;
c) Fixao Mergulhou-se as razes em carnoy 3:1 por 2 a 20 horas a temperatura
ambiente.
d) Estocagem-Caso no queira trabalhar com o material imediatamente, estoque as
razes no prprio fixador no freezer ou etanol na geladeira.
e) Colorao- Retirou-se as razes previamente fixadas (j preparadas com
bloqueadores de mitose), enxugou-se as ligeiramente em papel filtro e colocouse em um tubo de ensaio com orcena actica a 2%. Aqueceu-se o tubo aberto na
chama da lamparina a lcool at que o corante comece a borbulhar. Retirou-se
rapidamente da chama e deixou-se o material esfriar no corante (20 minutos).
Mantendo-o fechado.
Observao:
1- Use apenas uma quantidade de orcena suficiente para cobrir todas as razes.
2- Quando aquecido na chama, o corante pode ferver bruscamente e expulsar
violentamente todo o contedo do tubo. Por essa razo, durante o
aquecimento, deve-se manter a boco do tubo voltado para a parede.
f) Preparao da lmina colocou-se uma raiz numa lmina limpa, seccione a
poro apical da raiz. Tente deixar apenas o meristema da raiz, eliminando as
capas do tecido mais externo. Com ajuda das agulhas fragmente o meristema em
pedaos menores, tendo cuidado para o tecido no ressecar na lmina enquanto
manuseia. Acrescente uma gota de corante no aquecido e cubra com a lamnula
limpa. Bata levemente com uma agulha de ponta rombuda por cima da lamnula
contra lmina, diretamente sobre o material, at espalhar bem as clulas de cada
fragmento. Pressione a lamnula contra a lmina, dentro de uma folha dobrada
de papel filtro. Observe ao microscpio e cole com esmalte. Percorra a lmina e
veja o que pode observar. Fotografe.
Resultados:
Metfase

Metfase

a) O mtodo de colorao utilizado foi suficiente?

Sim o mtodo de colorao foi suficiente.

b) Foram obtidas metfases com cromossomos sem sobreposio e com boa

morfologia?
Sim, puderam ser observadas metfases com cromossomos.
c) Caso contrrio, seria possvel melhorar o espalhamento e a nitidez das
figuras metafsicas?
Sim, seria possvel.

Discusso:
1) Qual importncia do fixador?
Para eliminar restos celulares e citoplasmticos e para a obteno de um
nmero suficiente de clulas.
2) Como agem os bloqueadores de diviso celular? Qual foi o utilizado nesse
procedimento?
Bloqueiam o ciclo mittico em metfase, acarretando um acmulo de
clulas nesse estgio, provocam maior contrao cromossmica, permitindo
visualizar melhor as constries primrias e secundrias, definindo melhor a
morfologia cromossmica. Produzem um maior espalhamento cromossmico,
devido destruio ou inibio das fibras do fuso acromtico. O bloqueador
utilizado neste procedimento foi 8-hidroxiquinolena.
3) Como se d a colorao dos cromossomos pelo reativo de Schiff?
A hidrlise acida libera grupos aldedos do DNA para que se liguem ao
reagente de Schiff e ocorra a colorao.
4) Como voc usaria o conhecimento obtido nesta aula?
As tcnicas de anlise citogentica permitem observar o complemento
cromossmico de um organismo, ou segmentos especficos de cromossomas,
sendo um dos seus principais objetivos, a identificao de alteraes
cromossmicas associadas a evoluo e especiao.
Concluso:
Ao se estudar os cromossomos, inmeras pesquisas cientficas so
desenvolvidas, tanto bsicas como aplicadas, servindo para a seleo antecipada
do material gentico de uma determinada espcie. Nesta aula prtica foi
observado a metfase cromossmica com a colorao pelo reativo de Schiff.

Referncias:
Cincia
Tecnologia
<.
Disponvel
em
<http://www.fciencias.com/2014/07/13/tecnicas-de-analise-cromossomica/
acesso em 31. Janeiro. 2016.
Guerra, Marcelo Como observar cromossomos : um guia de tcnicas em
citogentica vegetal, animal, e humana / Marcelo Guerra, Maria Jos de Souzas.
-- Ribeiro Preto, SP : Fundao de Pesquisas Cientficas de Ribeiro Preto,
2002.