INGENIERA AMBIENTAL

BIOQUMICA

TRABAJO INTEGRADOR
(LABORATORIO)
EXTRACCIN DEL ADN
INTEGRANTES:
Mara Elisa Muoz Tello
Daniel Alejando Montalvn Orellana
Jorge Alberto Pelez Zambrano
Diego Jos Angamarca Angamarca
Christian Oswaldo Loja Farez
PROFESORA:
Ing. Anglica Geovanna Zea Cobos

INTRODUCCION
Para la extraccin del ADN se requiere unas series de etapas bsicas:
o En primer lugar tiene que romperse la membrana plasmtica de la clula
eucariota para poder acceder al ncleo de la clula; en este caso de nuestra clula
vegetal y tambin tiene que romperse la pared celular.
o A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre al
ADN.
o Por ultimo hay que proteger al ADN de enzimas que pueden disminuirlo y para
aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol al 96% bien fro.
Como el ADN se encuentra en todas las clulas vegetales; extrajimos el ADN de la
cebolla.
El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en el alcohol se desenrolla y
precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Adems de permitirnos ver el ADN,
el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la
solucin acuosa.
Utilizamos la sal de mesa ya que evita la unin de las protenas del ADN.
OBJETIVOS
Realizar la extraccin de ADN del tejido vegetal (cebolla).
Observar la estructura y el proceso de extraccin del ADN.
MATERIALES
-

Muestra vegetal (cebolla)

Agua destilada
Sal de mesa
Bicarbonato sdico
Detergente liquido
Alcohol al 96% muy fro
Batidora
Nevera
Centrfuga
Vaso
Tubo de ensayo
Varilla fina
Pipeta

REACTIVOS
-

Bicarbonato sdico
Cloruro de sodio
Alcohol al 96%
Etanol
Agua destilada
Detergente

PROCEDIMIENTO

 Preparar el tampn con los siguientes materiales y mantener en la nevera en un

bao de hielo triturado.
o 120ml de agua, si es posible destilada y sino mineral; no usar agua de grifo.
o 1,5gr de sal de mesa, preferiblemente pura.
o 5gr de bicarbonato sdico.
o 5ml de detergente lquido o champ.

Utilizamos la cebolla vegetal la cual nos va a proporcionar el ADN y cortarla en

cuadritos.

Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a

impulsos de 10 segundos. Y as se rompern muchas clulas y otras quedaran
expuestas a la accin del detergente.

 Mezclar en un recipiente limpio 2,5ml del triturado celular con 5ml del tampn
frio y agitar vigorosamente al menos 2 minutos. Separar despus los restos
vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador o
papel filtro lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5
minutos y despus pipetear el sobrante.

Retirar 2,5ml del caldo molecular en un tubo de ensayo y aadir con pipeta 5ml
de alcohol al 96% bien fro. Se tiene que dejar escurrir lentamente el alcohol por
la cara interna del recipiente, teniendo este inclinado, El alcohol va a quedar
flotando sobre el tampn.

 Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin

entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia adelante y hacia atrs y
poco a poco se ira enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado
un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN
quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.

CONCLUSIONES
Al realizar los procedimientos antes indicamos se pudo llegar a un resultado
favorable; se pudo observar la formacin de un hilo que rode la varilla fina la
cual era la cadena de protenas que contiene el material gentico ADN.
Al trmino de la prctica se devolvi todos los materiales y reactivos sobrantes
junto con todos los materiales solicitados para la prctica realizada.
ANEXOS