Laboratorio 4

RESUMEN

En esta prctica analizaremos el punto isoelctrico de la casena y gelatina en la

cual lo observaremos mediante un pequeo precipitado; esto nos indicara a que
pH la gelatina y la casena son neutros. El pH que encontramos para la casena
fue de 4,7 la cual en la tabla es el tubo nmero 5 y para la gelatina el pH fue de
5,16 la cual en la tabla esta entre en el tubo 2 y 3. El pI es el pH en el que la
molcula se disocia por igual en ambos sentidos, y como equidista de los dos
valores de pK, puede obtenerse por su semisuma:

Las molculas complejas, tales como las protenas, se combinan con los iones
hidrgeno y con otros iones presentes en la disolucin, dando lugar a la carga
neta de la molcula. A la concentracin de iones hidrgeno, o al pH, para el cual la
concentracin del ion hbrido de una protena es mxima y el movimiento neto de
las molculas de soluto en un campo elctrico es prcticamente nulo, se le
denomina punto isoelctrico.
Los aminocidos pueden existir como sal interna, llamada zwitterin. Esto ocurre
porque un electrn del oxgeno del grupo carboxilo es atrado por el
grupo amino NH2 (ya que al nitrgeno le sobraban dos electrones de valencia) que
est en posicin alfa y quedando este como grupo amonaco NH3+.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Determinacin del punto isoelctrico de la casena
A diferencias de otras protenas, la casena se precipita en el punto
isoelctrico sin medios deshidratantes. El pI de la casena es un pH 4,7.
Tomamos 8 tubos de ensayo a cada uno le agregamos agua , soluciones de
cido actico y casena en las proporciones indicadas en la tabla .

NTubo

Agua

1
2
3
4
5
6
7
8

8,4
7,8
8,8
8,5
8,0
7,0
5,0
1,0

CH3COOH
(0,01mol/L)
0,6
1,3
-

CH3COOH
(0,1mol/L)
0,3
0,5
1,0
2,0
4,0
8,0

Solucin pH de la mezcla
de casena
1,0
5,9
1,0
5,6
1,0
5,3
1,0
5,0
1,0
4,7
1,0
4,4
1,0
4,1
1,0
3,8

El tubo numero 5 nos muestra un pequeo precipitado de la casena.

Determinacin del punto isoelctrico de la gelatina

Tomamos 6 tubos de ensayo en la cual en cada una aadimos segn la
tabla soluciones de cido actico,acetato de sodio ,agua de destilada y

gelatina .Seguidamente el contenido de cada tubo lo mezclamos y por el

borde de las paredes agregamos una pequea cantidad de alcohol.
Despues de 30 minutos determinamos el punto isoelctrico el cual lo
pudimos observar con un pequeo grado de turbidez
NTubo

Agua

CH3COOH
(0,1mol/L)

CH3COOH
(1mol/L)

CH3COONa
(0,1mol/L)

Solucin de
gelatina

pH

1
2
3
4
5
6

3,8
3,5
3,0
2,0
3,2

0,8
0,5
1,0
2,0
4,0
-

0,8

2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0

2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0

5,6
5,3
5,0
4,7
4,4
4,1

La turbidez de la gelatina se da a un pH=5,16

CONCLUSIONES

 Al determinar el punto isoelctrico(pI) de la caseina el tubo que mostro una

pequea turbidez fue el numero 5, la cual tiene un pH =4,7. A este pH,la
ovoalbmina se encuentra en su punto de menor solubilidad ,debido a la
reduccin de repulsiones intermoleculares ,por lo que precipita.

Al determinar el punto isoelctrico de la gelatina esta nos result un

pH=5,16,se pudo observar un pequeo precipitado entre los tubos 2 y 3 .La
gelatina y otras protenas se disuelven por completo en el agua aun en su
punto isoelctrico ,por lo tanto se le aadi el agente precipitante como el
alcohol etlico para hacer manifiesto el precipitado.

Laboratorio 6

RESUMEN

En esta prctica se tiene como objetivo la comparacin de la actividad enzimtica

con un catalizador no biolgico, usando como enzima a la amilasa salival y como
catalizador no biolgico al HCl, en la hidrlisis del almidn, la misma que se
comprob con el reactivo de Fehling por medio de la reduccin del Cu 2+ a
Cu2O(s) (rojo) por accin de la maltosa (disacrido reductor) formado en la
hidrlisis del almidn. Adems se pudo observar la velocidad de la hidrolisis
mediante la reaccin del almidn con el lugol la cual dio una coloracin azul que
luego va decolorndose por la formacin de la maltosa, lo que manifest que se
produjo la hidrolisis.
La amilasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la
reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -Amilasa al digerir
el glucgeno y
el almidn para
formar azcares simples.
Se
produce
principalmente en las glndulas salivales (sobre todo en las glndulas partidas) y
en el pncreas. Tiene actividad enzimtica a un pH de 7. Cuando una de estas
glndulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la produccin de amilasa y
aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia).

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Reactivos:

Amilasa (Saliva).

cido Clorhdrico 10%.

Almidn.
Azul de Metileno 0.01%.
Formaldehdo 0.4%.
Jugo de papa.
Leche de vaca.
Extracto de rbano.
Materiales:

Tubos de ensayo.
Gradillas.
Pipetas.
Baguetas.
Termmetro

En tres tubos de ensayo colocamos:

Tubo N 1 : 1 ML de Agua.
Tubo N 2 : 1 mL de cido Clorhdrico.
Tubo N 3 : 1 mL de Saliva Diluda.

A todos los tubos le aadimos 3mL de solucin de almidn (la cual se prepar con
anterioridad diluyendo el almidn starch en agua destilada y calentando para
ayudar a la disolucin), seguidamente agitaremos con una bagueta cada tubo,
posteriormente a cada tubo se los llevara a un bao de agua durante 15 minutos
de la siguiente manera:

Tubo N 1 : Bao de agua a 38 C.

Tubo N 2 : Bao de agua hirviendo.
Tubo N 3 : Bao de agua a 38 C.

Una vez pasado este tiempo , dejamos enfriar los tubos, y les aadimos 2 gotas
de solucin de yodo, observndose un cambio de coloracin en la muestra. Tal
como sigue:

MUESTRA

COLORACION

Tubo N 1

Azul

Tubo N 2

Amarilla

Tubo N 3

Amarilla

Luego para la determinacin de maltosa se tom 1mL de casa solucin, y le

aadimos 1mL del reactivo de Fehling, el cual nos determinar la presencia de
maltosa al formase un precipitado rojo de xido cuproso.

MUESTRA

FORMACION DE PRECIPITADO

Tubo N 1

Negativo

Tubo N 2

Positivo

Tubo N 3

Positivo

CONCLUSIONES

 La alfa-amilasa acta rompiendo el glucgeno inicialmente en dextrinas

ramificadas de peso molecular mediano, formando solamente pequeas
cantidades de maltosa; posteriormente disminuye el peso molecular de las
dextrinas, a travs de rompimientos relativamente lentos dando glucosa y
un oligosacrido con un residuo de glucosa menos.

La hidrlisis del glucgeno ( almidn) puede ser catalizada por cidos

por enzimas. Las reacciones catalizadas por enzimas son muchos mas
rpidas y mas completas que las correspondientes reacciones no
catalizadas.

El incremento de la velocidad en las reacciones catalizadas depende de la

colocacin exacta del sustrato en la proximidad y con la orientacin
adecuada respecto al grupo cataltico.
La -amilasa cataliza la hidrlisis rpida y ordenada de enlaces internos
(1-4) y no hidroliza los enlaces (1-6).

Los productos finales de la degradacin por hidrlisis del almidn son:

glucosa, maltosa e isomaltosa.

Laboratorio 7

RESUMEN

Las enzimas pertenecen a seis grupos que aparecen a continuacin:

Oxidoreductasas, actan en reacciones de oxidoreduccin y se las llama tambin

deshidrogenasas. Transferasas, transfieren grupos funcionales de un compuesto a

otro. Las quinasas representan un grupo especializado que transfiere grupos
fosfato. Hidrolasas, rompen un enlace adicionando una molcula de agua. Liasas,
rompen enlaces por mecanismos distintos a la hidrlisis o la oxidacin. Las
decarboxilasas y aldolasas son ejemplos de liasas.Isomerasas, catalizan
reacciones de interconversin de ismeros.Ligasas, unen molculas utilizando
energa proveniente del ATP. Tambin se llaman sintetasas.
Esta prctica se tiene como objetivo la revelacin de las oxido reductasas en
material biolgico. Usamos la papa, rbano y la leche, a las dos primeras se le
agrego bencidina y perxido ya que estos tubrculos presentan la enzima
peroxidasa la cual va a catalizar la reaccin de oxidacin de la bencidina a
difenoquinoidiimina, esta reaccin se manifest por la formacin de un complejo
verde azulado. Debido a que la leche presenta la enzima aldehidoxidasa se le
agrego formaldehido, esta enzima cataliza la reaccin de deshidrogenacin de
diferentes aldehdos lo cual se puede observar por la decoloracin del azul de
metileno.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Revelacin de Aldehidoxidasa en la Leche

En esta primera experiencia se utiliz dos tubos de ensayo en la cual se agreg 5

mL de leche a cada una. Al tubo N1 se le agrego 1mL de agua y al segundo tubo
formaldehido, seguidamente a ambos tubos se le aadi 1mL de azul de metileno.
Se pudo observar un problema al comenzar, al no contar con el aceite de vaselina
no se puede proteger la solucin del oxigeno del aire y por tanto la superficie del
lquido reaccionar tomando la coloracin del azul de metileno como se observa
en la primera figura:

Tubo N 1

Tubo N 2

Despus del bao en agua (37c) los tubos contenidos de leche toman esta
coloracin
Luego al cabo de 5-10 min con agitacin vigorosa comparamos el cambio de color
y observamos lo siguiente:

Revelacin de la Peroxidasa en la Papa y el Rbano

En dos tubos de ensayo agregamos,en el primero 1m L de jugo de papa y en el

segundo extracto de rbano .A ambos tubos aadimos 5 gotas de la solucin
alcohlica de bencidina y una gota de perxido de hidrogeno.
Figura N1

Se puede observar el cambio de coloracin.Para el tubo contenido del extracto

de rabano la coloracin fue inmediata y luego fue el jugo de papa.

Pepas de sandia

Agregamos en un tubo de ensayo unas cuantas pepitas de sanda, un poco de

agua destilada y urea, se agit bien con la bagueta y seguido se agreg un par de
gotitas de fenoltalena en la cual se pudo observar el cambio de coloracin a
rosado,y esto nos indica que la enzima presente es la ureasa.

Pimentn
En tres tubos de ensayo colocamos trocitos pequeos de pimentn

Tubo N 2

Tubo N 1

CONCLUSIONES

Se observ que en la leche, la solucin ha adquirido la coloracin del azul

de metileno, esto se debe a la presencia del oxgeno en el agua.
La enzima aldehidoxidasa reacciona con la lactosa de la leche, la cual
presenta un grupo aldehdo dando las coloraciones especficas al tratarlo
con azul de metileno.
En el extracto de rbano hay presencia de Peroxidasa que catalizan la
oxidacin de la benzidina a difenoquinoidiimina. En este caso el cambio de
coloracin es rpido debido a tener mayor presencia de peroxidasa.
En el jugo o extracto de papa hay poca cantidad de Peroxidasa que
cataliza esta reaccin por eso se pudo observar que en el cambio de
coloracin demor para este tubo.
Al trabajar con las pepas de sanda,se pudo observar el cambio de
coloracin a rosado (por la presencia de la fenoltalena) y esto se debe por
que se encuentra presente la enzima ureasa .Si se hubiera trabajado con el
tiourea ,no se hubiera notado ninguna coloracin y esto se debe por la
presencia del azufre en la cual no se dio ninguna reaccin.

BIBLIOGRAFA
Bioqumica Mdica, John W. Baynes y Marek H. Dominiczak, Editorial
Elservier, 2da Edicin, pg. 54-56.