PRCTICAS DE HISTOLOGA

TOUR HISTOLGICO: INCLUSIN EN PARAFINA PARA MICROSCOPA PTICA

Objetivo: Realizar un diagnostico de la biopsia.
1 fijacin: sumergir la muestra (biopsia) en un liquido fijador (formol al 10%). El
fijador es el encargado de detener los procesos degradativos del tejido, para ello,
tiene que entrar dentro de cada una de las clulas y desplazar el agua y as poder
observar la muestra tal y como est.
2 Deshidratacin: se elimina el agua de la biopsia mediante la utilizacin de
diferentes alcoholes.
1.
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7.
8.

Sumergir en agua destilada durante 5 min. Para eliminar el fijador (2 veces).

Et-OH 70% (5min x 2)
Et-OH 96% (5min x 3)
Et-OH 100% (7min x 3)
Acetato alcohol (5min x 2)
Acetato n-butilo (7min x 3) (disolvente orgnico)
Acetato n-butilo/parafina (15min)
Parafina (20min) (La parafina es una mezcla de hidrocarburos no miscible en
agua y por eso hay que utilizar un disolvente. A temperatura ambiente la
parafina est en estado slido, pero al calentarse se vuelve liquida. Al
introducir la muestra, recupera su temperatura ambiente y queda atrapada
la biopsia en ella. Tras esto se realiza el corte.)
3 Realizar el proceso de infiltracin en estufa de inclusin a 68C. Introducir la
biopsia con partes iguales de lquido intermedio y parafina hasta conseguir que
ocupe todos los espacios intra e inter celulares.
4 Realizar el montaje: placas Leuckart +platina muestra con parafina orientar
la muestra en funcin de cmo se realice el corte posterior.
Fijar el bloque sobre una superficie slida (madera) para ello echamos parafina
lquida sobre la base de madera y colocamos a continuacin la muestra.
5 Corte micrtomo: fijar la muestra de la tablilla sobre el portamuestras y gracias
al portacuchilla realizamos cortes en cada vuelta de la manivela.
6 Eliminamos la parafina (desparafinacin) ya que los colorantes suelen ser
soluciones acuosas y la parafina no se mezcla con agua. Por ello se usan
disolventes orgnicos de tipo xileno.
7 Hidratar el corte en soluciones decrecientes de etanol y como paso final, agua
destilada.
8 Lavamos en agua destilada los cortes cubiertos con un cubreobjetos depositado
con gotas de medio montaje.
9 Adhesin de los cortes en portaobjetos, extendiendo una gota de medio montaje
(albumina- glicerina 1:1) formando una fina pelcula. Eliminar los restos de lquido
de montaje por agua.
10 Desparafinamos con xilol (30 min)
Comenzamos la tincin:
1) HIDRATACIN
1 OH-100 (5min)

2 OH-96 (5min)
3 OH-70 (5min)
4 H2Od (5min)
2) TINCIN HEMATOXILINA-EOSINA
5 Hx (20min)
6 H2O corriente (H2O bajo grifo)
7 Eosina (5min)
3) DESHIDRATACIN
8 H2O (2 fases)
9 OH-70 (pase rpido, arriba y abajo)
10 OH-96 (5min)
11 OH-100 (5min)
12 Xilol

TIPOS DE TINCIN
HEMATOXILINA-EOSINA:
-morado: ncleo y nuclelo, sustancia fundamental.
-rosa: citoplasma, colgeno, reticulina, elastina
La hematoxilina tie de morado estructuras cidas ya que es un colorante
bsico. La eosina tie de rosa estructuras bsicas por ser un colorante cido.
TRICRMICO DE MAISSON:
-pardo-negro: ncleo y estructuras basfilas
-rojo-rosa: citoplasma y queratina
-azul- verde: tejido conjuntivo
-rojo: eritrocitos, fibras musculares
MTODOS DE PLATA:
Estructuras con neuronas y sus prolongaciones o las fibras de reticulina de color
pardo-negro.
GIEMSA:

Empleado para el frotis sanguneo y mdula sea. Compuesto por eosinato de

azul metileno en alcohol metlico (fija el extendido y tie los citoplasmas) y el
colorante GIEMSA (tie ncleos y granulos). La eosina (acida) tie los
componentes acidfilos y el azul de metileno se une a compuestos basfilos.
VIOLETA DE CRESILO:
El violeta de cresilo es un colorante acidfilo, que tie el ncleo y el RER
(grnulos de Nissl). Se emplea en el sistema nervioso.

NDICE
Vejiga de rata (HE)
Esfago (HE)
Intestino delgado humano (HE)
Glndula submaxilar rata (HE)
Conducto umbilical humano (TM)
Tendn rata (HE)
Aorta humana (TM)
Hueso humano (HE)
Lengua rata (TM)
Corazn humano (HE)
Tibia rata (TM)
Hueso conejo (Ag-E)
Corteza cerebral rata (VC)
Corteza cerebelosa pollo (VC)
Nervio citico (TM)
Globo ocular conejo (TM): crnea, retina e iris.
Oreja conejo (TM)