PRCTICA DE LABORATORIO 4 ESO

Biologa y Geologa

NOMBRE __________________________________ FECHA ________________

Extraccin de ADN de tejidos animales

Objetivo
En esta prctica realizaremos la extraccin del ADN de clulas animales poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el grado de arrollamiento que permite el empaquetamiento en el ncleo celular. Tras la extraccin se realizar una tincin especfica del ADN obtenido.
Material necesario:
- Tejido animal (hgado)
- Trozo de tela para filtrar
- Pipeta
- Alcohol 96

- Mortero o batidora
- Arena (si se usa mortero)
- Varilla de vidrio
- Solucin de NaCl 2M

- Embudo
- Probeta
- Vaso de precipitados
- Detergente tipo lavavajillas

Fundamento
El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para
formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogeneizar el tejido y romper las clulas para separar el
ncleo, romper ste para liberar el ADN, separarlo de las protenas y precipitarlo para extraerlo de la solucin.
Aparecer como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio. Por ltimo, se puede
situar sobre un porta, teirlo con un colorante bsico y observarlo al microscopio.
Procedimiento

! Tras cada paso relacionado a continuacin escribe su finalidad en el espacio al efecto

1. Triturar en fro la muestra de hgado en el mortero junto con arena o mediante la batidora.
2. Aadir 50 ml de agua y remover suavemente pero mezclando a fondo.

3. Filtrar varias veces el resultado a travs de un pedazo de tela.

4. Aadir al filtrado resultante un volumen igual de solucin de NaCl 2M.

Qu es una solucin de NaCl 2M? Qu accin realiza en este procedimiento?

IES El Carrascal

5. Aadir ahora 1 ml de detergente (tipo Mistol o Woolite) y remover suavemente, mezclando bien
pero evitando que se forme espuma. Repetir la mezcla varias veces dejando reposar un minuto cada
vez. Si se forma espuma se puede retirar con un esquina de papel de filtro o con un cuentagotas.

6. Ahora se aaden unos 50 ml de alcohol muy fro ladeando el tubo o vaso de precipitados y dejando
resbalar muy lentamente el alcohol por la pared de aquel para formar una capa sobre la solucin
anterior. Es muy importante evitar que se mezclen ambas soluciones, pues en la interfase precipitar el ADN.

7. El ADN ir apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se

favorece la precipitacin y recoleccin si se va recogiendo mediante la varilla de vidrio, u otro
instrumento similar, introducindola ligeramente bajo la interfase y hacindola girar suavemente
mientras se extrae. As se irn pegando en la varilla unas hebras blancas que corresponden a miles
de fibras de ADN.

8. Se puede ahora tomar una muestra del ADN recogido, depositarla sobre un porta y teir con azul
de metileno durante 1 a 3 minutos. Tras limpiar bien el porta, se observa al microscopio.
Describe lo que observes al microscopio y haz un esquema.

9. Otra posibilidad es conservar el ADN obtenido por uno de los siguientes mtodos:
- en un frasco bien cerrado con alcohol etlico al 50% o 70%.
- dejndolo secar al aire extendido sobre papel de filtro.