Roteiro de Aulas Práticas de Bioquímica

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU
DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E FARMACOLOGIA

ROTEIRO DAS AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA
ROTEIRO DAS AULAS PRTICAS
Profa.Dra. Regina Clia de Assis
Prticas de Bioqumica 1

DETERMINAO QUALITATIVA DOS AMINOCIDOS

As protenas so substncias orgnicas de alto peso molecular formadas por um grande nmero de
aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas. As clulas de todos os organismos vivos contm uma
variedade de protenas com funes diferentes. As membranas que circundam as clulas contm protenas, as
reaes metablicas que se do no interior das clulas so catalisadas por enzimas que so protenas. A
reproduo das clulas e a transmisso das caractersticas hereditrias dependem das protenas. Certos
hormnios so protenas, e os anticorpos que defendem o corpo so protenas. Quando as protenas so
hidrolisadas, elas so convertidas numa mistura de aminocidos. So conhecidos cerca de 20 aminocidos
obtidos a partir de protenas. O propsito das experincias descritas a determinao qualitativa de aminocidos
bem como a pesquisa da ligao peptdica. A molcula protica to complexa que s vezes difcil interpretar
o seu comportamento qumico. As protenas de um modo geral refletiro as propriedades qumicas de seus
aminocidos. Muitas reaes coloridas das protenas dependem da presena de um determinado aminocido.
1 - REAO DO BIURETO
As protenas e seus produtos de hidrlise que contenham mais de duas ligaes peptdicas so reagentes
positivos para a Reao do Biureto.
O Biureto formado da decomposio da uria a uma temperatura de 180C.
As solues alcalinas com biureto apresentam uma colorao violeta na presena de sulfato de cobre
(CuSO4). Isso ocorre pela formao de um complexo entre o on Cu +2 e os tomos de nitrognio da molcula do
biureto.
R
R
H
Cu
O
H
N
2+
O
H
O
N
As ligaes presentes na molcula do biureto so semelhantes s ligaes peptdicas que unem os

aminocidos na formao dos peptdeos e protenas.
REAGENTE DE BIURETO
Dissolva 1,5g de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) e 6,0g de tartarato de sdio e potssio
(KNaC4H4O6.4H2O) em 500 mL de gua destilada. Adicione, sob agitao constante, 300 mL de soluo de
hidrxido de sdio (NaOH) 10%. Complete o volume para 1L com gua destilada e guarde o reagente em frasco
mbar. Conserve por tempo indefinido.

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
iii.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Reagente de biureto;
Soluo de ovoalbumina 2%;
Soluo de gelatina 1%;
gua destilada.
Vidraria:
3 tubos de ensaio;
4 pipetas de 5 mL.
Procedimento:
Numere os tubos de ensaio;
Prepare os tubos com as seguintes solues:
Tubo 1 com 2 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
Tubo 2 com 2 mL de gua destilada;
Tubo 3 com 2 mL de soluo de gelatina 1%;
Adicione 1 mL de reagente de biureto em cada tubo;
Agite os tubos;
Observe e anote os resultados.
2 - REAO DE NINHIDRINA
Aminocidos que possuem um grupo amino livre aquecidos em soluo com excesso de ninhidrina
formam um composto chamado Prpura de Rhemann. Essa reao pode ser utilizada para a deteco de
peptdeos e protenas que apresentam essas caractersticas, aminas primrias e amnia. Nas condies
apropriadas, a intensidade da cor violeta produzida relacionada concentrao das espcies presentes. A
prolina, que um iminocido, forma um composto amarelo.
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
b.
i.
ii.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo aquosa de ninhidrina [C6H4COCO.C(OH)2] 0,1%;
Soluo de ovoalbumina 2%.
Vidraria:
1 tubo de ensaio;
2 pipetas de 5 mL.

2)
a.
i.
b.
c.
d.
e.
Procedimento:
Preparar o tubo com as seguintes solues:
1 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
Adicione 10 gotas da soluo de ninhidrina 1 %;
Agite o tubo;
Aquea em banho maria durante 2 minutos;
3 - PRECIPITAO COM SAIS DE METAIS

Os ctions de metais como Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam precipitados insolveis de
protenas pela formao de sais insolveis de metal com as protenas negativamente carregadas, forma em que se
encontram em meio alcalino. Essa precipitao mais intensa quando o pH est acima do ponto isoeltrico (pI)
porque nessa circunstncia, a carga total sobre a protena negativa, o que favorece a interao com os ctions
metlicos. Pode ocorrer a ressolubilizao se o pH for corrigido.
O
R
O
2
O
+
NH3
O
+
+ HgCl2
NH3
Hg
2NaOH
+ 2NaCl + 2H2O
O
+
NH3
Protena
Sal Insolvel do metal
Cloreto de Mercrio
Cloreto de sdio
O
O
O
2 R
NH3
(II)
Pb
O
H3C
O
Protena
O
+
NH3
H3C
Acetato de Chumbo
(II)
Pb
2NaOH
+ 2CH3COONa + 2H2O
O
+
NH3
Sal Insolvel do metal
Acetato de sdio
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
c.
d.
e.
f.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cloreto de mercrio (HgCl2) 5%;
Soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb.3H2O] 10%;
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
3 pipetas de 5 mL.
Procedimento:
Adicione ao primeiro tubo 7 gotas de HgCl2 5%;
Adicione ao segundo tubo 5 gotas de (CH3COO)2Pb.3H2O 10%;
Agite levemente;

4 - PRECIPITAO PELOS CIDOS FORTES
Estes cidos desnaturam as protenas transformando-as em metaprotenas insolveis. Essa precipitao
mais intensa quando o pH est abaixo do ponto isoeltrico (pI). Isso porque, abaixo do pI, a carga lquida sobre
a protena positiva, favorecendo a interao com os nions provenientes dos cidos fortes. Pode ocorrer a
ressolubilizao se o pH for corrigido.
PROTENA + HNO3 METAPROTENA

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
i.
b.
c.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cido ntrico concentrado (HNO3);
Soluo de ovoalbumina 2%;
gua destilada.
Vidraria:
1 tubo de ensaio;
3 pipetas de 5 mL.
Procedimento:
Prepare o tubo com a seguinte soluo:
Adicione 3 mL de gua destilada;
Incline o tubo e acrescente lentamente pelas paredes 0,5 mL de cido ntrico concentrado (HNO3), sem agitar;
d. Observe e anote os resultados.
5 - REAO XANTOPROTEICA
O benzeno reage lentamente com o cido ntrico (HNO3) concentrado formando o nitrobenzeno. Essa
reao pode ser acelerada por aquecimento tornando a colorao da reao amarela. Essa reao tambm ocorre
com aminocidos que possuam em suas cadeias laterais anis benznicos, que ocorre com a tirosina e o
triptofano, e em condies de nitrao mais fortes, ocorre tambm para a fenilalanina. Se a reao for mantida
em meio bsico, a colorao ser vermelho alaranjada.
-H2O
+ HNO3
NH3
HO
O
+
NH3
HO
Nitroderivado
vermelho
NaOH
alaranjado
Tirosina (Tyr)
Nitroderivado
amarelo
O
-
O
+
NH
NH3
Triptofano (Trp)
-H2O
+ HNO3
NH
NH3
NaOH
Nitroderivado
vermelho
alaranjado intenso
O
Nitroderivado
amarelo intenso

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
i.
b.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cido ntrico concentrado (HNO3);
Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 2N;
Vidraria:
1 tubo de ensaio;
3 pipetas de 5 mL.
Procedimento:
Prepare o tubo com a seguinte soluo:
Acrescente 10 gotas de cido ntrico concentrado (HNO 3);
Aquea o tubo em banho maria;
Adicione 4 mL de soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 2N;
6 - REAO DE MILLON
O grupamento hidroxifenil da tirosina sofre uma nitrao pelo cido ntrico presente na soluo. Aps a
nitrao, esse produto reage com os ons mercrio na soluo, formando o fenolato de mercrio que forma uma
soluo ou precipitado vermelho, resultados positivos. Como a tirosina o nico aminocido a apresentar um
grupo fenlico, esse teste se torna especfico para verificao da presena ou ausncia desse aminocido. A
reao no deve ser feita em meio alcalino forte devido precipitao do mercrio sob a forma de xido.
O
O
2
+
HO
O
-
NH3
Tirosina (Tyr)
+Hg
++
HNO3
Hg
H3C
O
+
NH3
Fenolato de mercrio
Alanina (Ala)
REATIVO DE MILLON
Adicione 40 mL de cido ntrico (HNO3) concentrado frio em 20 g de mercrio (Hg0), dissolvendo por
aquecimento. Dilua com gua destilada 2 vezes em volume. Deixe decantar por 24 horas e use o sobrenadante. O
reativo de Millon pode ser armazenado por longos perodos em geladeira.
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
c.
d.
e.
f.
g.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo do reagente de Millon;
Soluo de gelatina 1%;
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
3 pipetas de 5 mL.
Procedimento:
1 mL de soluo de gelatina 1%;
Adicione aos dois tubos 5 gotas do reativo de Millon;
Agite levemente;
Observe e anote os resultados;
Aquea em banho maria o tubo com a soluo de ovoalbumina com reativo de Millon;

7 REAO DO GRUPO SULFIDRILA
Dos aminocidos que apresentam enxofre em sua constituio apenas a cistena e a cistina so capazes
de liber-lo quente e no meio alcalino. O enxofre liberado forma sulfeto de sdio que reage com o acetato de
chumbo, formando o sulfeto de chumbo precipita na cor preta ou castanha. O enxofre da metionina no
liberado em meio bsico.
O
HS
O
O
2NaOH
Na2S + H2O + HO
NH3
NH3
Sulfeto de sdio
Cistena (Cys)
Serina (Ser)
O
H3C
O
O
(II)
Pb
Na2S +
O
PbS
+ 2
H3C
O Na
H3C
O
Sulfeto de sdio
Acetato de Chumbo
Sulfeto de chumbo
Acetato de sdio
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Chumao de cabelo;
Soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb] 5%;
Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 50%.
Vidraria:
1 tubo de ensaio;
2 pipetas de 5 mL.
Procedimento:
Coloque o chumao de cabelo no tubo de ensaio;
Adicione 5 gotas da soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb] 5%;
Acrescente 2 mL da soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 50%;
Ferva durante 5 minutos;
REAES DE CARACTERIZAO DOS CARBOIDRATOS

Os carboidratos podem ser definidos como: poli-hidroxialdedos ou poli-hidroxicetonas
(monossacardeos), seus polmeros (oligossacardeos polissacardeos), seus produtos de reduo, oxidao e seus
produtos de substituio. A funo mais importante dos carboidratos no organismo servir como combustvel,
fornecendo a fonte principal de energia, graas a sua oxidao a CO 2 e H2O, atravs de uma via complexa, de
importncia fundamental no metabolismo de todos os componentes da clula animal. So as biomolculas mais
abundantes da natureza.
Para um completo entendimento de muitas reaes que se processam com os carboidratos nos seres
vivos, indispensvel o conhecimento de suas estruturas, suas reaes e de que maneira eles so identificados no
laboratrio. As reaes a seguir so clssicas, geralmente reaes coloridas que apesar do advento da tcnica de
cromatografia ainda so muito utilizadas para identificao dos diversos tipos de carboidratos.

I IDENTIFICAO DE CARBOIDRATOS
1 TESTE DE MOLISCH
Os cidos concentrados como o cido sulfrico (H 2SO4) causam a desidratao de um monossacardeo.
Se um oligossacardeo ou polissacardeo estiver presente, eles so primeiro hidrolisados aos seus
monossacardeos constituintes os quais ento so desidratados. Pela desidratao originam-se o furfural ou seus
derivados. As pentoses formam o furfural e as hexoses o hidroximetilfurfural. Vrios compostos fenlicos como
o timol ou o -naftol condensam com o furfural ou seus derivados e formam compostos coloridos de estruturas
complexas.
O teste de Molisch considerado uma reao geral para carboidratos livres ou combinados, mas no
especfica, porque pode ocorrer com outras substncias. Por isso, quando positiva no indica necessariamente
presena de um carboidrato, mas sendo no reagente, indica seguramente sua ausncia.
OH
OH
OH
2
O
O
HO
OH
HO
OH
H2SO4
Naftol
+ 3 H2O
O
HO
OH
OH
D-Glucose
4,4'-{[5-(hidroximetil)furano-2-il]
metanedil}dinaftaleno-1-ol
5 hidroximetilfurfural
(Composto de cor violeta)

OH
OH
HO
O
HO
OH
O + 3 H2O
H2SO4
Naftol
OH
OH
D-Arabinose
4,4'-(furano-2-ilmetanedil)
dinaftaleno-1-ol
(Composto de cor violeta)
Furfural
REAGENTE DE MOLISCH
Dissolva 20g de -naftol em 100 mL de etanol 94GL.
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
vi.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
Material:
Solues e reagentes:
Reagente de Molisch;
Soluo de cido Sulfrico (H2SO4) concentrado;
Soluo de glicose 1%;
Soluo de sacarose 1%;
Soluo de amido 1%
gua destilada.
Vidraria:
4 tubos de ensaio;
5 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Tubo 1 com 1 mL de soluo de glicose 1%;
Tubo 2 com 1 mL de soluo de sacarose 1%;

iii.
iv.
c.
d.
e.
f.
g.
Tubo 3 com 1 mL de soluo de amido 1%;

Tubo 4 com 1 mL de gua destilada.
Adicione duas gotas do reagente de Molisch em cada tubo;
Agite os tubos;
Adicione cuidadosamente e sem agitao 1 mL de cido sulfrico (H 2SO4) concentrado, inclinando o tubo e
deixando escorrer lentamente pelas paredes;
Deixe o tubo em repouso na estante por 5 minutos;
2 TESTE DO LUGOL
O amido, polissacardeo importante, constitudo por dois outros polissacardeos estruturalmente
diferentes que so a amilose e a amilopectina. A ligao glicosdica da amilose Gli (1:4)Gli, no apresentando
portanto, ramificaes e, no espao, assume a conformao helicoidal. J a amilopectina, alm das ligaes Gli
(1:4)Gli, a cada 20 a 25 molculas de glicose apresenta uma ligao Gli (1:6)Gli, formando ento
ramificaes, no formando uma estrutura helicoidal.
OH
H
OH
OH
H
OH
H
OH
OH
H
O
O
H
OH
OH
R
n
Amilose
O iodo presente no lugol reage com a amilose formando um complexo de cor azul escuro ou intenso
pela ocluso ou aprisionamento do iodo nas cadeias lineares da amilose. A reao com o glicognio ou com as
dextrinas formam um complexo de cor marrom avermelhado porque a interao com o iodo menor e a
colorao ento, menos intensa. Outros carboidratos polimricos como a celulose ou mono e dissacardeos no
formam esse complexo com o iodo por no apresentarem uma conformao que interaja com o iodo.
OH
H
H
OH
OH
OH
OH
H
OH
OH
O
H
OH
O
OH
H
H
OH
OH
OH
H
OH
OH
H
OH
OH
H
OH
OH
O
H
OH
Amilopectina

SOLUO DE LUGOL
Dissolva 100 g de KI e 50 g de I2 em 100 mL de gua destilada e complete o volume para 1 L.
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
iii.
iv.
c.
d.
e.
f.
g.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de Lugol;
Soluo de amido 1%
gua destilada.
Vidraria:
4 tubos de ensaio;
5 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Adicione duas gotas do reagente de Lugol em cada tubo;
Agite os tubos;
Aquea um pouco no banho maria o tubo 3 at a mudana de colorao;
Resfrie em gua corrente e observe;
Observe e anote os resultados de todos os tubos.
II IDENTIFICAO DE CARBOIDRATOS REDUTORES

1 REAO DE BENEDICT
Os monossacardeos possuem na sua estrutura um grupamento aldedo livre ou em potencial o qual
poder reduzir certos ons metlicos. Reagentes alcalinos de sais de cobre so muito usados para pesquisas de
aucares redutores. Sob a ao de um agente redutor, o hidrxido cprico reduzido a hidrxido cuproso que por
aquecimento forma xido cuproso.
OH
OH
+ 2Cu(OH)2
OH
HO
OH
OH
-D-Glicose
- H2O
OH
OH
HO
+ 2CuOH
- H2O
Cu2O
OH
cido -D-Glicnico
Precipitado
vermelho-tijolo
REAGENTE DE BENEDICT
Dissolva 173 g de citrato de sdio (C6H5O7Na3.5H2O) e 100 g de carbonato de sdio anidro (Na 2CO3)
em 800 mL de gua a quente. Filtre se necessrio e complete o volume para 850 mL. Dissolva 17,3 g de sulfato
de cobre (CuSO4) em 100 mL de gua e adicione na primeira soluo aos poucos, agitando continuamente.
Complete ento o volume para 1 L. A soluo final pode ser conservada por muito tempo.

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
vi.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Reagente de Benedict;
Soluo de frutose 1%;
Soluo de amido 1%
gua destilada.
Vidraria:
5 tubos de ensaio;
6 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Tubo 3 com 1 mL de soluo de frutose 1%;
Adicione 1 mL do reagente de Benedict em cada tubo;
Aquea em banho maria por 3 minutos;
III DIFERENCIAO ENTRE ALDOSES E CETOSES

1 REAO DE SELIWANOFF
O mecanismo da reao de Seliwanoff semelhante reao de Molisch. As cetohexoses formam mais
derivados do 5-hidroximetilfurfural de que as aldohexoses pela ao de cidos concentrados. O resorcinol se
condensa com as altas concentraes formadas de 5 hidroximetilfurfural originados das cetohexoses, formando
produtos de colorao vermelha, mas no reage com a quantidade baixa formada a partir das aldohexoses.
HO
OH
HO
2
HO
OH
O
HO
OH
HCl
HO
+ 3 H2 O
Resorcinol
O
OH
OH
6-hidroxi-9-[5-(hidroximetil)furano-2-il]
-3H-xanten-3-ona
-D-Frutose
5 hidroximetilfurfural
Composto de cor avermelhado
REAGENTE DE SELIWANOFF
Dissolva 0,05 g de resorcina (resorcinol) [C6H4(OH)2] em 100 mL de HCL.
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
Material:
Solues e reagentes:
Reagente de Seliwanoff;
Soluo de frutose 1%;
gua destilada.

b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
iii.
iv.
c.
d.
e.
Vidraria:
4 tubos de ensaio;
5 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Tubo 3 com 1 mL de soluo de frutose 1%;
Adicione 2 mL do reagente de Seliwanoff em cada tubo;
Aquea em banho maria por 12 minutos, observando de 3 em 3 minutos a reao;
IV HIDRLISE DE DI
E POLISSACARDEOS
A sacarose um dissacardeo encontrado nas plantas (acar comum) e formada por uma unidade de
D-glicose e uma de D-frutose com uma ligao do tipo Gli (1:2) Fru. Como a ligao glicosdica da
sacarose ocorre entre os carbonos anomricos, ento a sacarose no um acar redutor.
O amido o material de reserva celular dos vegetais. Contm dois tipos de polmeros da
glicose, a amilose e a amilopectina. A amilose formada por cadeias longas, no ramificadas, de
unidades de D- glicose com ligaes do tipo Gli (1:4) Gli. A amilopectina muito ramificada e
formada por ligaes glicosdicas tanto do tipo Gli (1:4) Gli quanto Gli (1:6) Gli.
1 HIDRLISE DA SACAROSE
OH
OH
H
H
OH
OH
H
OH
O + H2O
OH
OH
OH
D Glicopiranose
H2SO4
HO
O
H
HO
H
HO
HO
HO
OH
H
OH
H
OH
OH
O
HO
H
OH
Sacarose: Gli (1:4) Fru
OH
D Frutofuranose
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
i.
ii.
c.
d.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cido sulfrico (H2SO4) concentrado;
gua destilada.
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
4 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Tubo 2 com 2 mL de soluo de sacarose 1%.
Adicione 3 gotas da soluo de cido sulfrico (H2SO4) concentrado no tubo 1;
Adicione 3 gotas de gua destilada no tubo 2;

e.
f.
g.
h.
i.
j.
Aquea em banho maria por 3minutos;

Acrescente 2 mL do reagente de Benedict em cada tubo;
Agite os tubos;
Aquea em banho por mais 3 minutos;
2 HIDRLISE DO AMIDO
Quando o amido tratado por um cido a quente sofre uma sucesso de hidrlises formando dextrinas
(amilo, eritro e acrodextrinas), maltose e glicose como produto final. As dextrinas so classificadas pela
colorao que fornecem quando reagem com a soluo de Lugol. A maltose e a glicose possuem propriedades
redutores que podem ser reconhecidas pela reao de Benedict.
Carboidrato
Lugol
Benedict
Cor
Amido
Azul
Amilodextrina
Roxa
Eritrodextrina
Vermelha
Acrodextrina
Incolor
Maltose
Vermelha
Glicose
Vermelha
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
b.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.
k.
l.
m.
n.
o.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cido clordrico (HCl) 2N;
Soluo de Lugol;
Soluo de amido 1%.
Vidraria:
7 tubos de ensaio;
2 pipetas de 10 mL;
1 pipeta de 5 mL;
1 pipeta de 2 mL;
1 erlenmeyer de 100 mL.
Procedimento:
Coloque 30 mL da soluo de amido 1 % no erlenmeyer;
Acrescente 6 mL da soluo de cido clordrico (HCl) 2N;
Coloque 3 mL da mistura do erlenmeyer em cada tubo;
No tubo 1 acrescente uma gota da soluo de Lugol;
Coloque os tubos de 2 a 7 no banho maria;
A cada 5 minutos, retire um tubo do aquecimento e resfrie em gua corrente;
Acrescente uma gota da soluo de Lugol;
Ao retirar o ltimo tubo (Tubo 7), resfrie em gua corrente;
Adicione 2 mL do Reagente de Benedict;
Retorne ao banho maria por mais 3 minutos;
Preencha a tabela.

Tubo
Tempo de reao (min)
10
15
20
25
Cor (Soluo de Lugol)
Produto
Cor (Reagente de Benedict)

7
30
REAES DE CARACTERIZAO DOS LIPDEOS

Os lipdeos constituem uma classe de compostos de grande interesse bioqumico que se caracterizam
fisicamente porque so pouco solveis na gua e solveis nos chamados solventes orgnicos (ter, benzeno,
clorofrmio, acetona, etc.), e quimicamente porque na maioria so steres de cidos graxos. A funo principal
dos lipdeos no organismo a de reserva energtica atuando tambm como isolante trmico, mecnico e como
veculo de vitaminas.
Como lipdeos, h os leos e gorduras (triglicerdeos, ceras, fosfolipdeos e cerebrosdeos) e as
substncias derivadas dos lipdeos (esterides e compostos isoprenides). Quase todos estes compostos tem
cidos graxos nas suas estruturas como o cido butrico, cido caprico e todos os outros cidos graxos
saturados. Entre os insaturados h os cidos palmitolico, olico, linolico, linolnico. As reaes a seguir
analisam algumas propriedades fsicas e qumicas dos cidos graxos e triacilgliceris.
PROPRIEDADES GERAIS DOS LEOS E GORDURAS

1 - HIDRLISE ALCALINA DE TRIGLICERDIOS (Saponificao)
O
O
OH
CH3
n
O
CH3 + 3 KOH
OH
CH3
n
OH
CH3
+ 3 K+
Triacilglicerol
Glicerol
Sais de cidos graxos (sabes)
TCNICA
3)
a.
i.
ii.
b.
i.
ii.
Material:
Solues e reagentes:
Margarina;
Soluo alcolica de hidrxido de potssio (KOH) 5%.
Vidraria:
1 tubo de ensaio grande (Grosso calibre);
Pipeta de 10 mL.

4)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
Procedimento:
Adicione 10 g de margarina no tubo de ensaio;
Acrescente 10 mL de soluo alcolica de hidrxido de potssio (KOH) 5%;
Aquea em banho maria fervente por 30 minutos.
Verifique se a hidrlise foi completa observando a solubilidade de uma amostra do produto em gua;
Conserve o tubo em banho maria;
2 - SEPARAO DOS CIDOS GRAXOS

O
HO
CH3
O
+ HCl
Sais de cidos graxos
1)
a.
i.
ii.
b.
i.
ii.
iii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
CH3
+ KCl
cidos graxos livres
TCNICA
Material:
Solues e reagentes:
Tubo da experincia anterior;
Soluo de cido clordrico (HCl) concentrado.
Vidraria:
Pipeta de 2 mL:
Bquer.
Procedimento:
Retire o tubo do banho maria;
Adicione 1 mL da soluo de cido clordrico (HCl) concentrado gota a gota, agitando o tubo;
Recoloque no banho maria at a separao de uma camada oleosa na superfcie;
Resfrie o tubo em gua corrente e a seguir em gelo em um bquer;
Descarte o lquido do tubo cuidadosamente;
Reserve os produtos para as experincias seguintes;
3 - SOLUBILIDADE NOS SOLVENTES

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
b.
i.
ii.
iii.
iv.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
Material:
Solues e reagentes:
Tubo da experincia 2;
ter;
Soluo de lcool etlico;
gua destilada.
Vidraria:
3 tubos de ensaio;
3 pipetas de 2 mL;
Basto de vidro.
Procedimento:
Numere os 3 tubos de ensaio;
Retire com o basto de vidro uma pequena quantidade dos cidos graxos obtidos na experincia 2 e distribua nos
3 tubos de ensaio;
Acrescente 1 mL de ter no tubo 1 e agite;
Acrescente 1 mL de gua destilada no tubo 2 e agite;
Acrescente 1 mL da soluo de lcool etlico no tubo 3 e agite;

4 - FORMAO DE SABES POR REDISSOLUO DOS CIDOS GRAXOS
HO
O
CH3
+ KOH
CH3
n
cidos graxos
+ H2O
Sais de cidos graxos (sabes)

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
iii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo alcolica de hidrxido de potssio (KOH) 5%;
gua destilada.
Vidraria:
2 pipetas de 10 mL;
Basto de vidro.
Procedimento:
Adicione 10 mL de gua destilada ao tubo da experincia 2;
Acrescente 6 mL da soluo alcolica de hidrxido de potssio (KOH) 5%
Aquea em banho maria por 5 minutos e agite;
Guarde o tubo para a prxima experincia;
5 - SEPARAO DOS SABES POR SALIFICAO

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
iii.
2)
a.
b.
c.
d.
Material:
Solues e reagentes:
Cloreto de sdio (NaCl);
gua destilada.
Vidraria:
Proveta de 50 mL;
Basto de vidro.
Procedimento:
Coloque em uma proveta 3 mL da experincia 4;
Acrescente gua destilada at 20 mL;
Adicione cloreto de sdio (NaCl) misturando at saturar, ou seja, quando o sal no mais se dissolver;
6 - FORMAO DE SABES INSOLVEIS

O
2 K+
CH3
O
+ CaCl2
Sabes de potssio solveis
O
Ca
H3C
n
CH3
O
+ 2KCl
Sabes de clcio insolveis

2K
H3C
O
(II)
Pb
CH3
O
(II)
Pb
H3C
n
H3C
CH3
O
+ 2 H3C
K
O
Sabes de potssio solveis
Acetato de chumbo
Sabes de chumbo insolveis
Acetato de potssio
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cloreto de clcio (CaCl2) 5%;
Soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb] 5%
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
3 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Numere os 2 tubos de ensaio;
Pipete 2 mL da soluo do tubo da experincia 4 em cada tubo de ensaio;
Adicione 3 gotas da soluo de cloreto de clcio (CaCl2) 5% no tubo 1;
Adicione 3 gotas da soluo de acetato de chumbo [(CH 3COO)2Pb] 5% no tubo 2;
REAES DE CARACTERIZAO QUALITATIVA DOS COMPONENTES QUMICOS DO LEITE

O leite utilizado como alimento humano desde o nascimento at a morte. Por isso, o estudo da
qumica do leite importante para a garantia de qualidade desse produto e contribui decisivamente no
desenvolvimento de novos produtos em laticnios.
O leite bovino um fluido complexo que contm gua, lipdeos, protenas, carboidratos e sais minerais.
O conhecimento dessa composio qumica determinante na definio da qualidade nutricional e adequao
para processamento e consumo humano.
Obs: essa composio pode variar em funo da raa, alimentao e outros fatores.
GUA
o constituinte quantitativamente mais importante. Isso faz com que o leite apresente propriedades
fsicas semelhantes s da gua, sendo que essas so modificadas pela concentrao de solutos e pelo estado de

disperso dos outros componentes. A gua pode ser encontrada livre ou ligada quimicamente a outros
componentes como protenas, lactose e substncias minerais.
LIPDEOS
O leite um disperso natural de gordura em uma fase aquosa. A gordura est presente no leite na forma
de gotculas ou glbulos contendo, principalmente, triglicerdeos. Esses glbulos encontram-se revestidos por
uma pelcula que contm fosfolipdeos (principalmente lecitina e cefalina), protenas e vitamina A.
PROTENAS
O leite bovino contm vrios compostos que possuem nitrognio em sua composio, dos quais 95%
ocorrem como protenas. As protenas quantitativamente principais esto agrupadas em duas grandes classes:
casenas (80%) e protenas do soro como albuminas (16%) e globulinas (4%). Enquanto as albuminas e
globulinas so solveis em gua (denominadas protenas do soro), as casenas so insolveis e apresentam-se em
suspenso, formando uma fase coloidal. As enzimas tambm so importantes constituintes do leite. Fazem parte
as lipases, proteinases, xido-redutases, fosfatase, catalase e peroxidase.
CARBOIDRATOS
O principal carboidrato presente no leite a lactose. Alm dela, existem alguns oligossacardeos, mas
que no so quantitativamente representativos.
SAIS MINERAIS
O leite contm quantidades significativas de cloro, fsforo, potssio, sdio, clcio e magnsio. Alm
disso, possui pequenas quantidades de ferro, alumnio, bromo, zinco e mangans. Esses elementos encontram-se
na forma de sais orgnicos e inorgnicos, podendo estar totalmente solveis ou formando uma suspenso
coloidal. Os minerais tambm podem ser encontrados em associao com protenas, fator que contribui para a
manuteno da estabilidade de algumas protenas, como a casena.
VITAMINAS
O leite bovino contm praticamente todas as vitaminas conhecidas, mas em quantidades extremamente
reduzidas. Por isso o leite no considerado fonte de vitaminas. Essa situao agravada pelo tratamento
trmico ao qual o leite submetido, que interfere, principalmente, nas quantidades de vitamina B 1, B12 e C.
PIGMENTOS
O principal pigmento presente no leite o caroteno, que pode chegar a conferir colorao amarelada ao
leite.
TCNICA
5)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
vi.
vii.
viii.
ix.
x.
b.
i.
ii.
iii.
iv.
Material:
Solues e reagentes:
Leite;
gua destilada;
cido actico (C2H4O2) 10%;
lcool (C2H5OH);
ter (C4H10O);
Reagente de Sulkowitch;
Soluo de cido ntrico (HNO3) concentrado;
Soluo de nitrato de prata (AgNO3) 5%;
Vidraria:
4 tubos de ensaio;
8 pipetas de 5 mL.
Basto de vidro;
Bquer de 100 mL;

v.
vi.
vii.
viii.
ix.
Bquer de 250 mL
Erlenmeyer de 125 mL
Funil;
Papel de filtro;
Placa de Petri;
I EXTRAES
1)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.
Procedimento:
Adicione 50 mL de gua destilada morna a 50 mL de leite em um bquer de 250 mL;
Acrescente soluo de cido actico (C2H4O2) 10% gota a gota, agitando at que o leite se coagule;
Deixe em repouso durante 5 minutos;
Prepare o aparato de filtrar com o papel de filtro encaixado sobre o filtro e sobre o erlenmeyer de 125 mL;
Decante o lquido sobrenadante sobre o papel de filtro, recolhendo o filtrado no erlenmeyer de 125 mL;
Guarde o precipitado para uso posterior;
Transfira o filtrado para o bquer de 250 mL;
Aquea o bquer de 250 mL diretamente na chama at a ebulio, diminua a chama e mantenha em ebulio
para reduzir o volume at aproximadamente 40 mL;
Se houver a formao de espuma, sopre na superfcie;
Filtre e deixe esfriar;
k. Guarde a soluo para uso posterior;

II RECONHECIMENTO DA PORO LIPDICA DO LEITE
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
Procedimento:
Coloque o precipitado do item f em um bquer de 100 mL;
Adicione 10 mL de lcool (C2H5OH) e amasse com o basto de vidro;
Decante e despreze o sobrenadante;
Adicione novamente 10 mL de lcool (C2H5OH) e repita a operao anterior;
Adicione 5 mL de ter (C4H10O) e faa a extrao com ouso do basto de vidro;
Passe o lquido sobrenadante para uma placa de Petri;
Deixe evaporar o ter temperatura ambiente;
Recolha o precipitado lavado pelo ter em papel de filtro e deixe evaporar o ter restante temperatura
ambiente;
III RECONHECIMENTO DA PORO PROTICA DO LEITE TESTE DO BIURETO

3)
a.
b.
c.
d.
Procedimento:
Coloque uma pequena poro do precipitado reservado no procedimento 2-f em um tubo de ensaio;
Adicione 3 mL do reagente de biureto;
Agite;
IV PESQUISA DE ACARES REDUTORES TESTE DE BENEDICT

Procedimento:
a.
b.
c.
d.
Coloque 1 mL da soluo reservada no procedimento 2-k em um tubo de ensaio;

Adicione 2 mL do reagente de Benedict;
Aquea em banho maria por 3 minutos;
V PESQUISA DE CLCIO TESTE DE SULKOWITCH

(NH4)2C2O4
oxalato de amnio
CaCl2
cloreto de clcio
2NH4Cl
cloreto de amnio
CaC2O4
oxalato de clcio
REATIVO DE SULKOWITCH

Dissolva 2,5 g de cido oxlico em 100 mL de gua destilada. Acrescente 2,5 g de oxalato de amnio, 5
mL de cido actico glacial e complete o volume com gua destilada para 150 mL.
TCNICA
4) Procedimento:
a. Coloque 2 mL da soluo reservada no procedimento 2-k em um tubo de ensaio;
b. Adicione o reativo de Sulkowitch gota a gota at o aparecimento de uma turvao ou formao de um
precipitado branco;
c. Observe e anote os resultados.
VI PESQUISA DE CLORETOS
2AgNO3
CaCl2
nitrato de prata
5)
a.
b.
c.
d.
2AgCl
cloreto de clcio
cloreto de prata
Ca(NO3)2
nitrato de clcio
Procedimento:
Coloque 2 mL da soluo reservada no procedimento 2-k em um tubo de ensaio;
Adicione 2 a 3 gotas de cido ntrico (HNO3) concentrado;
Acrescente gotas de nitrato de prata (AgNO3) 5% at o aparecimento de turvao ou formao de precipitado.
PROPRIEDADES DA UREASE
A urase uma enzima que degrada a uria em duas molculas de amnia e uma de anidrido carbnico.
O
H2N
+ 2H2O + H+
NH2
Urease
2NH4+ + HCO3-
Foi a primeira enzima cristalizada (1926). encontrada principalmente em sementes de plantas,

microorganismos e invertebrados. Em plantas, um hexmero de cadeias idnticas e em bactrias, ocorre com
duas ou trs unidades. uma enzima com alta especificidade para a uria.
I REAO DA UREASE COM O BIURETO

TCNICA
1)
c.
i.
ii.
iii.
d.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de urease;
gua destilada.
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
3 pipetas de 2 mL:
Procedimento:
Coloque nos tubos 1 mL do reagente de biureto;
Acrescente ao primeiro tubo 3 gotas da soluo de urease;
Acrescente ao segundo tubo 3 gotas de gua destilada;
II TESTE DE ATIVIDADE ENZIMTICA

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de uria [(NH2)2CO] 0,4M, pH 7,0 com o indicador vermelho de fenol;
Soluo de urease;

iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
gua destilada.
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
3 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Coloque nos tubos 1 mL da soluo de uria 0,4M;
Acrescente ao primeiro tubo 3 gotas da soluo de urease;
Acrescente ao segundo tubo 3 gotas de gua destilada;
Agite levemente;
Aguarde 2 minutos;
Guarde o tubo 1 para comparao com outro experimento.
III TESTE DA ESPECIFICIDADE

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de tiouria [(NH2)2CS] 0,4M, pH 7,0 com o indicador vermelho de fenol;
Soluo de urease.
Vidraria:
1 tubo de ensaio;
2 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Coloque no tubo 1 mL da soluo de tiouria, 0,4M;
Acrescente 3 gotas da soluo de urease;
Agite levemente;
Aguarde 2 minutos;
Compare com o tubo 1 da experincia II;
IV TESTE DA DESNATURAO PELO CALOR

TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de urease;
gua destilada.
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
3 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Coloque no primeiro tubo 1 mL de gua destilada;
Acrescente 3 gotas da soluo de urease;
Coloque em banho maria por 5 minutos;
Coloque no segundo tubo 1 mL da soluo de uria 0,4M;
Acrescente 0,5 mL da soluo de urease fervida;
Agite levemente;
Aguarde 2 minutos;
Compare com o tubo 1 da experincia II;

V INIBIO POR SAIS DE MERCRIO
TCNICA
1)
a.
i.
ii.
iii.
iv.
b.
i.
ii.
2)
a.
b.
c.
d.
e.
k.
f.
Material:
Solues e reagentes:
Soluo de cloreto de mercrio (HgCl2) 5%;
Soluo de urease;
gua destilada.
Vidraria:
2 tubos de ensaio;
4 pipetas de 2 mL.
Procedimento:
Coloque nos dois tubos 1 mL de gua destilada;
Acrescente 3 gotas da soluo de urease nos dois tubos;
Adicione 5 gotas da soluo de cloreto de mercrio (HgCl 2) 5% no segundo tubo;
Agite levemente;
Adicione 1 mL de soluo de uria [(NH2)2CO] 0,4M nos 2 tubos;

Roteiro de Aulas Práticas de Bioquímica

Caricato da

Informazioni sul documento

Descrizione originale:

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Roteiro de Aulas Práticas de Bioquímica

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E FARMACOLOGIA

ROTEIRO DAS AULAS PRTICAS

Profa.Dra. Regina Clia de Assis

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

DETERMINAO QUALITATIVA DOS AMINOCIDOS

As ligaes presentes na molcula do biureto so semelhantes s ligaes peptdicas que unem os

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

3 - PRECIPITAO COM SAIS DE METAIS

Sal Insolvel do metal

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

PROTENA + HNO3 METAPROTENA

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

REAES DE CARACTERIZAO DOS CARBOIDRATOS

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

(Composto de cor violeta)

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Tubo 3 com 1 mL de soluo de amido 1%;

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

II IDENTIFICAO DE CARBOIDRATOS REDUTORES

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

III DIFERENCIAO ENTRE ALDOSES E CETOSES

Composto de cor avermelhado

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Sacarose: Gli (1:4) Fru

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Aquea em banho maria por 3minutos;

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Tempo de reao (min)

Cor (Soluo de Lugol)

Cor (Reagente de Benedict)

REAES DE CARACTERIZAO DOS LIPDEOS

PROPRIEDADES GERAIS DOS LEOS E GORDURAS

Sais de cidos graxos (sabes)

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

2 - SEPARAO DOS CIDOS GRAXOS

Sais de cidos graxos

cidos graxos livres

3 - SOLUBILIDADE NOS SOLVENTES

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Sais de cidos graxos (sabes)

5 - SEPARAO DOS SABES POR SALIFICAO

6 - FORMAO DE SABES INSOLVEIS

Sabes de potssio solveis

Sabes de clcio insolveis

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Sabes de potssio solveis

Sabes de chumbo insolveis

REAES DE CARACTERIZAO QUALITATIVA DOS COMPONENTES QUMICOS DO LEITE

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

k. Guarde a soluo para uso posterior;

III RECONHECIMENTO DA PORO PROTICA DO LEITE TESTE DO BIURETO

IV PESQUISA DE ACARES REDUTORES TESTE DE BENEDICT

Coloque 1 mL da soluo reservada no procedimento 2-k em um tubo de ensaio;

V PESQUISA DE CLCIO TESTE DE SULKOWITCH

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

Foi a primeira enzima cristalizada (1926). encontrada principalmente em sementes de plantas,

I REAO DA UREASE COM O BIURETO

II TESTE DE ATIVIDADE ENZIMTICA

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU