I.

INTRODUCCION:

Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias,
pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes: (Baynes & Dominiczak, 2011.)
BACTERIOSTTICOS: agentes que impiden el crecimiento microbiano.
BACTERICIDAS: agentes que destruyen (matan) las bacterias.
En general, sino slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de
microorganismos, hablamos respectivamente de agentes microbiostticos y microbicidas.
Ahora bien, para una misma sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto
microbiosttico y otro microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha
sustancia y del tiempo durante el que acta.
Cmo podemos saber que un microorganismo est muerto? El nico criterio
vlido es la prdida irreversible de la capacidad de divisin celular, es decir, de la prdida
de viabilidad, y se suele comprobar empleando tcnicas con placas de Petri (es decir,
confirmando que no crecen en medios slidos adecuados).
Veamos unas cuantas definiciones bsicas.
Agentes esterilizantes: son aquellos que producen la inactivacin total de todas las
formas de vida microbiana (o sea, su muerte o prdida irreversible de su viabilidad).
(Tambin existen agentes fsicos esterilizantes, como ya vimos en los dos captulos
anteriores).
Agentes desinfectantes (o germicidas): son agentes (sobre todo qumicos)
antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos) de un
material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar efectos txicos sobre tejidos
vivos, por lo que se suelen emplear slo sobre materiales inertes.
Agentes antispticos: son sustancias qumicas antimicrobianas que se oponen a la
sepsis o putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad
txica hacia los tejidos vivos donde se aplican.
Quimioterpicos: son compuestos qumicos con actividad microbicida o microbiosttica,
con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un
organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto
tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del
organismo.
Todos los das usamos agentes qumicos para controlar el crecimiento microbiano:
detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables,
antispticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies
en la industria y en los laboratorios, quimioterpicos y antibiticos para tratar
enfermedades bacterianas, etc.

II.

OBJETIVO:

Determinar el efecto bactericida o bacteriosttico de algunos agentes qumicos

como colorantes bsicos, desinfectantes y metales pesados.
III.

MARCO TERICO:

Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir la transmisin
de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y evitar la contaminacin tanto en
procesos industriales que requieran cultivos puros, como en laboratorios de diagnstico o
investigacin. (Baynes & Dominiczak, 2011.)
Trminos importantes a tratar sobre el control de microorganismos:
Esterilizacin es el efecto de destruir toda forma de vida (un objeto esterilizado es aquel
que no posee ninguna forma de vida, ni siquiera esporas)
Agente antimicrobial es un compuesto por lo general qumico que mata o interfiere con
el crecimiento y actividad de los microoganismos. Se clasifica de acuerdo a su aplicacin
y a cmo acta.
1. El germicida es un agente qumico que mata los microorganismos pero no
necesariamente las esporas (ejemplo el bactericida, mata bacterias, el fungicida, mata
hongos y el viricida mata los virus).
2. El agente microbiosttico es uno que inhibe el crecimiento de los microoganismos,
pero no los mata (ejemplo los agentes bacteriostticos, inhiben crecimiento bacterial).
3. El desinfectante es un compuesto que mata microorganismos, pero no
necesariamente las esporas. Se aplica sobre objetos inanimados.
4. El antisptico es parecido al desinfectante, pero ste se puede aplicar sobre tejido
biolgico (cuerpo).
Condiciones que influyen en la accin microbiana
Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar agentes
qumicos o fsicos para el control de microorganismos.
Concentracin del agente qumico: Mientras ms concentrado est el agente
qumico, ms rpido se destruirn los organismos.
Intensidad del agente fsico: Cuanto ms intenso es el agente fsico (calor o
radiacin) ms rpidamente mata a los micoorganismos.
Tiempo de exposicin: A mayor tiempo de exposicin, mayor es el nmero de
organismos destruidos.
Temperatura: A mayor temperatura se acelera la destruccin de los organismos.
Nmero de organismos: Mientras mayor sea el nmero de microorganismos,
ms tiempo se requiere para destruirlos.
Clase de organismo: Las clulas vegetativas (las que estn metablicamente
activas) son ms susceptibles que las esporas bacteriales.
Estado fisiolgico de las clulas: Mientras ms viejas sean las clulas, ms
rpido se destruyen.
Naturaleza del medio ambiente: Algunos ambientes desfavorecen la
destruccin rpida de los microorganismos, como por ejemplo los medios
viscosos.

FACTORES QUMICOS PARA EL CONTROL DE MICROORGANISMOS:

El fenol y sus derivados:
El fenol se adhiere a superficies inertes y proporciona lo que se llama una
desinfeccin residual. Su accin se prolonga por varias horas. Los compuestos de
fenol pueden actuar como microbicidas o microbiostticos dependiendo de la
concentracin que se utilice. Los fenoles poseen efecto germicida pues daan la
membrana y desnaturalizan las protenas bacteriales. Uno de los derivados del
fenol se llama cresol; stos tienen un efecto germicida superior al fenol. Los
cresoles se usan en jabones lquidos (ej. lysol es un jabn ms un cresol). Otro
derivado del fenol es el hexaclorofeno, el cual se usa en jabones para las manos
(en ciruga y hospitales). Un ejemplo de este ltimo es el Phisohex. El fenol y sus
derivados por lo general no matan esporas.
Los alcoholes:
Los alcoholes daan la membrana, desnaturalizan las protenas, disuelven lpidos
y deshidratan la clula. La concentracin ms efectiva de alcohol es el 70% y los
ms utilizados son el alcohol etlico e isoproplico.
Halgenos:
Los halgenos actan sobre los microorganismos oxidando las protenass y
enzimas esenciales. No matan las esporas. Los halgenos ms comunmente
usados son el cloro y el iodo.
El cloro Es uno de los desinfectantes ms usados y es microbicida contra la
mayora de los microorganismos. Se usa para limpiar las aguas contaminadas y se
aplica en agua potable.
El iodo Se utiliza comnmente como un antisptico y es uno de los mejores que
hay para la piel. Se aplica principalmente como tintura de iodo. Es microbicida
para la mayora de los organismos. El iodo tambin se emplea como iodforo
(compuesto de iodo con otros agentes). Los iodforos no manchan ni irritan, un
ejemplo es el betadine.
Metales pesados y sus compuestos:
La accin antimicrobial de los metales pesados y sus compuestos se debe a la
combinacin del in metlico con protenas y las enzimas del microorganismo,
daando as el sistema.
Compuestos de mercurio Los ms importantes de este grupo son los orgnicos
como: mercurocromo, metiolato y metafen. Todos estos se usan como antispticos
y son principalmente microbiostticos.
Compuestos de plata El ms que se usa es el nitrato de plata en solucin al 1%
y se usa en los ojos de los recin nacidos.
Compuestos de cobre El sulfato de cobre se usa para controlar el crecimiento de
algas en las piscinas.
Tintes:
Algunos tintes se usan como agentes selectivos en medios de cultivos por su
efecto bacteriosttico. Ejemplos de estos tintes son el cristal violeta (violeta
genciana), azul de metileno, eosina, carbol fucsina, verde brillante. Estos tintes
inhiben las bacterias Gram+. El modo de accin no est claro, pero se cree que
intervienen en los procesos de oxidacin celular.
Jabones y detergentes:
Un jabn es una sal de sodio o de potasio de un cido graso. Los agentes que
reducen la tensin superficial del agua (surfactantes) y que se emplean

principalmente para la limpieza de superficies se llaman detergentes (el jabn es

un ejemplo de un detergente). Los detergentes se clasifican en catinicos,
aninicos y no-inicos. Los detergentes catinicos son mejores desinfectantes que
los dems. Otro nombre con que se conocen a los detergentes catinicos son
cuaternarios de amonio. Estos son bacteriostticos a bajas concentraciones y
bactericidas a concentraciones mayores. Ejemplos de estos compuestos son el
Zephiran y el Roccal, que se usan como antispticos para la piel, adems de
usarse para el saneamiento de lecheras y plantas elaboradoras de alimentos.
Estos compuestos no matan esporas.
cidos:
Hay una serie de cidos orgnicos que se usan como conservantes en muchos
alimentos como el cido actico, cido benzoico, cido lctico, cido propinico y
cido srbico. El cido baja el pH y esto desnaturaliza las protenas. No matan las
esporas.
IV.

MATERIALES Y MTODOS:

MATERIALES:
Agar nutritivo en tubos,
Cultivos en caldo nutritivo: Bacillus sp, E. coli, Salmonella sp, Staphylococcus sp.
Discos de papel filtro.
Placas Petri estriles.
Pinzas.
Asa de Kolle.
REACTIVOS:
Soluciones colorantes:
Cristal violeta: 1/1000, 1/5000, 1/10000.
Verde malaquita: 1/1000, 1/5000, 1/10000.
Azul de metileno: 1/1000, 1/5000, 1/10000.
Soluciones desinfectantes:
Fenol: 0.5%, 1% y 3%.

Soluciones de materiales pesados:

Sulfato de cobre: 0.5%, 1% y 3%.
Cloruro de mercurio: 0.5%, 1% y 3%.

PROCEDIMIENTO:

Colocar dos asadas de uno de los cultivos bacterianos a los tubos con los medios
licuados, mezclar bien y verter el contenido de los tubos en las placas Petri. Dejar
enfriar.
Despus de la solidificacin del medio dividir la superficie de la placa en seis
partes iguales con un plumn marcador.
En condiciones aspticas, coger un disco de papel de filtro con las pinzas y
sumerja ligeramente uno de sus bordes en una de las soluciones antimicrobianas.
Una vez que el colorante a impregnado el disco colquelo sobre el agar en uno de
los sectores marcados.
Repetir el procedimiento con cada uno de los agentes antimicrobianos y los
cultivos.
Incubar las placas a 37C por 24 horas. Observar los resultados.

HOJA DE REPORTE

MESA 1
Shigella
sp.
Pinesol
Phyton 27
H202
Leja
Ajo
Ampicilina 500mg.
Ac. Lctico
Cristal violeta
Hg2Cl2
Purexol 2
CuSO4
Superoxido 15
Desinfectante de
manos
Verde malaquita

no
cambio
s

mayor
intensida
d
moderad
o
levement
e

FACTORES QUMICOS QUE AFECTAN EL

MESA 3
CRECIMIENTO
Staphylococcus sp.
Pinesol
Phyton 27
H202
Leja
Cristal violeta
Hg2Cl2
Purexol 2
CuSO4
Superoxido 15
Verde
MESA 5
malaquita
Salmonella
Colgate
sp.
Oral
B
Lactato
concentrado
Cristal violeta
Verde malaquita
Ajo
CuSO4
Oral B
Ampicilina 500mg.
Pinesol

V.

Resultados y Discusiones

Staphylococcus sp

Shigella sp.

Segn

Tortora, et al (2007), Los halgenos se utilizan solo o como componentes de soluciones

inorgnicas u orgnicas. Actuando como germicidas, en el caso el cloro su accin se basa
en la formacin de cido hipocloroso, y como desinfectante comercial en forma de
hipoclorito de sodio o calcio (leja), comparando con nuestros resultados, el ensayo de la
leja tuvo un efecto positivo confirmando la teora.

Segn Tortora, et al (2007), los metales pesados como el mercurio, el cobre y el cinc se
utilizan como germicidas debido a travs de accin oligodinmica, cuando los iones de los
metales pesados se combinan con grupos sulfidrilos(-SH) se desnaturalizan las protenas,
debido a esa accin el ensayo con el cloruro mercrico y sulfato cprico resulto positivo.
Segn Negroni (2009), los colorantes se utilizan ampliamente en bacteriologa para la
tincin y como indicadores. La accin bacteriosttica de los colorantes se debe a la
modificacin del potencial de xido-reduccin del medio, lo que inhibe el desarrollo de los
microorganismos, como los derivados del trifenilmetano (verde malaquita y cristal violeta),
lo cual se vio en los resultados encontrados ya que dio positivo.
El pinesol es un limpiador desinfectante, la razn del resultado negativo puedo deberse al
mal manejo de las operaciones en el laboratorio, tambin puedo ser la escasa
concentracin de desinfectante.
Segn Tortora, et al (2007), los peroxgenos (agentes oxidantes) como el ozono el
perxido de hidrogeno y otros ejercen su efecto mediante molculas oxidantes en el
interior de las clulas. Lo cual confirma los resultados obtenidos.
Segn shoemaker(2002), la ampicilina es un derivado semisinttico de la penicilina es
activada contra la mayora de las cepas de bacterias sensibles a la penicilina G y centra
algunos bacilos Gram negativos, enterobacterias. Lo cual comparado con los resultados
es confirmado, ya que nos mostr una respuesta positiva.
Sefun Vanaclocha (2003), el consumo de ajo fresco constituye uno de los remedios ms
empleados popularmente para combatir las enfermedades inflamatorias y degenerativas
osteoarticulares, lo cual confirma el resultado positivo de la prueba de laboratorio.

Salmonella sp.

Allaert C. y Escol M. (2002) presentan un procedimiento para la preparacin de caldo

con verde de malaquita (0.036g/l) y cloruro de magnesio (13.58g/l) que es un medio de
cultivo selectivo utilizado para el enriquecimiento de Salmonella en agua y alimentos, en
la cual sealan utilizando un control macroscpico un caldo translucido de color azulverdoso un crecimiento bueno para Salmonella Typhimurium y Escherichia coli.

Lo sealo en el prrafo anterior concuerda con el resultado observado en la placa Petri en

la cual se puede apreciar que el efecto del verde malaquita fue moderado, es decir, el
colorante mencionado no afecto el crecimiento de Salmonella en todo caso lo benefici.

Tabla 1 Dosificaciones de agentes antimicrobianos en salmonelosis.

Fuente: Romero y Herrera (2002)

Segn Romero y Herrera (2002) los pacientes que presentan gastroenteritis por
Salmonella; deben ser tratados con ampicilina o amoxicilina inicialmente, a menos que se
sospeche de organismos resistentes.
Como se aprecia en la tabla la dosis de ampicilina es 8g por da. En nuestro caso
utilizamos 500mg lo cual resulto efectivo en la desinfeccin adems se aprecia el halo de
transparencia caracterstico, con los dicho se comprueba y se coincide en decir que la
ampicilina es un buen agente antimicrobiano para la Salmonella.
Chauca L. (1997) seala que los compuestos antibacterianos utilizados son el
cloranfenicol, clorotetraciclina, estreptomicina y nitrofurazona. Su comportamiento ha sido
demostrado in vitro, utilizando cepas de Salmonella typhymurium que originaron la
Salmonelosis

VI.

CONCLUSIONES:

El verde de malaquita promueve el crecimiento de Salmonella

La ampicilina inhibe el crecimiento de Salmonella

BIBLIOGRAFA:

ALLAERT C. y Escol M. 2002. Mtodos de Anlisis Microbiolgicos de Alimentos.

Ediciones Daz De Santos. Madrid. Espaa. Paginas
Baynes, J., & Dominiczak, M. 2011. Bioqumica Mdica. 3a. Edicin. Elsevier Mosby
Espaa, S.L.
CHAUCA L. 1997 Produccion de Cuyes (Cavia Porcellus) Editorial Fao. Instituto Nacional
de Investigacin Agraria. La Molina. Per.
NEGRONI MARTA. 2009. Microbiologa Estomatolgica. Segunda edicin. Editorial
Mdica Panamericana. Argentina.
ROMERO y HERRERA, 2002. Sindrome Diarreico Infeccioso. Segunda edicin. Editorial
Mdica Panamericana. Calzada de Tlalplan. Mexico.
TORTORA GERAD J., FUNKE BERDELL R., CASE CHRISTINE L. 2007. Introduccion a la
Microbiologia. Novena edicion. Editorial Mdica Panamericana. Argentina.
VANACLOCHA VANACLOCHA BERNAT, CAIGUERAL FOLCARA SALVADOR.2003.
Fitoterapia. Cuarta edicin. Editorial M Masson. Espaa.