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SOBRE
CROMATOGRAFA
LIQUIDA DE ALTA PERFORMANCE
INTEGRANTES:
Beck, Cristina Soledad
Ibarra, Ariana
CROMATOGRAFA
ndice
1. Introduccin. Mtodos de separacin
2. Tipos de Cromatografa
3. Cromatografa liquida clsica y cromatografa liquida de
alta performance
4. Los mtodos cromatogrficos
5. Ventajas y desventajas de la cromatografa lquida de alta
presin
6. Instrumental
7. Aplicaciones
8. bibliografa
datos obtenidos.
Las tcnicas analticas ms empleadas en la actualidad pueden
englobarse en dos grandes grupos: tcnicas de separacin y tcnicas
espectroscpicas. Las tcnicas espectroscpicas proporcionan, para
cada compuesto analizado, una informacin compleja, relacionada
con sus caractersticas estructurales especficas, por otro lado las
tcnicas de separacin se utilizan para resolver los componentes de
una mezcla y la seal obtenida puede utilizarse con fines analticos
cuantitativos o cualitativos.
Actualmente las separaciones analticas se realizan
fundamentalmente por cromatografa y electroforesis.
La cromatografa no solo permite la separacin de los
componentes de una mezcla, sino tambin su identificacin y
cuantificacin. Se pueden separar molculas en funcin de sus
cargas, tamaos y masas moleculares. Tambin a travs de la
polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, etc. El anlisis
cualitativo est basado en la medida de parmetros cromatogrficos
(tiempos y volmenes de retencin) mientras que el anlisis
cuantitativo est basado en la medida de alturas o reas de picos
cromatogrficos que se relacionan con la concentracin.
Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar segn la forma
en que la fase mvil y la fase estacionaria se pongan en contacto. As
en la cromatografa de columna, un tubo estrecho contiene la fase
estacionaria a travs de la cual se hace pasar la fase mvil por
presin. En la cromatografa en plano, la fase estacionaria se fija
sobre una placa plana o a los intersticios de un papel; en este caso la
fase mvil se desplaza a travs de la fase estacionaria por capilaridad
o por gravedad.
Las tres clases de cromatografa desde un ngulo ms general son
cromatografa de lquidos, cromatografa de gases y cromatografa de
fluidos supercrticos. Como su nombre lo indica, la fase mvil en las
tres tcnicas son lquido, gas y fluido supercrtico respectivamente.
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a
travs de una columna que contiene a la fase fija. Solo la
cromatografa de lquidos es la que puede llevarse acabo en columna
o sobre superficies planas, por otra parte tanto la de gas como la de
fluidos supercrticos estn restringidas a los procedimientos en
columna de tal manera que las paredes de la columna contienen la
fase mvil.
La tcnica ms usada es la cromatografa lquida de alta
resolucin(HPLC), por su sensibilidad, fcil adaptacin a las
determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la
separacin de especies no voltiles y su aplicacin a sustancias de
HPLC.
Las nicas fases que se utilizan en este tipo de cromatografa son la
slice y la almina, siendo la primera la preferida.
Es adecuada para compuestos no polares probablemente con masas
moleculares inferiores a 5000. Los mtodos de la cromatografa de
adsorcin y reparto tienden a ser complementarios, aunque en algunos
casos se superponen.
En general la CLS es ms adecuada para muestras que son solubles
en disolventes no polares y por ello tienen solubilidad limitada en
disoluciones acuosas que son las que se utilizan en cromatografa de
reparto en fase inversa. En ste tipo de cromatografa tambin se
pueden separar compuestos con diferentes grupos funcionales. Una
caracterstica particular de este mtodo es su capacidad para diferenciar
compuestos ismeros en mezclas.
El mecanismo de separacin de sta, se basa en la competencia que
existe entre las molculas de la muestra y de la fase mvil o disolvente
por ocupar los sitios activos en la superficie de un slido (almina y gel
de slice).
Este tipo de cromatografa es muy til y se aplica a molculas de baja
o media polaridad.
4) Cromatografa lquida por exclusin o CE: separa solutos segn el
peso molecular
La cromatografa de exclusin, tambin llamada de filtracin en gel
o cromatografa de permeacin en gel, se basa en la diferencia de
penetracin de las molculas en los poros de la fase estacionaria
debido a que la separacin obtenida depende del tamao de la
molcula. El tiempo de retencin es proporcional al peso molecular
de los mismos, por lo que no es muy usada con los compuestos de
alto peso molecular. Este tipo de separacin por tamao difiere de las
dems tcnicas de cromatografa en que no existen interacciones
fsicas o qumicas entre el analito y la fase estacionaria. Es una
tcnica reproducible, escalable y rpida.
La fase fija est formada por partculas de slice que contienen una
red uniforme de poros por los que pueden penetrar las molculas de
pequeo tamao. Las molculas de tamao grande se excluyen
totalmente y son eluidas en primer lugar, mientras que las de
pequeo tamao tienen acceso a todo el volumen poroso y son las
ltimas que se eluyen; de esto se deduce que el volmen disponible
para las molculas pequeas es mayor que para las grandes. Por lo
tanto las molculas se eluyen por su tamao decreciente.
Los diferentes tipos de partculas usadas deben ser estables:
mecnica y qumicamente; tener bajo contenido en grupos inicos,
tipo
lquido-slido
fase
estacionaria
intercambio
inico
resina cambiadora
lquidolquido
gas-lquido
fase
mvil
soluciones
acuosas
lquido adsorbido
en un soporte slido
lquido
pelcula de lquido
adsorbida sobre un
soporte slido
gas
Desventajas
-Instrumentacin costosa
-Difcil anlisis cualitativo
-No existe detector universal
y sensible
-Elevado costo de operacin
-Experiencia indispensable
6. Aplicaciones