COMPONENTE DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

El cultivo celular se realiza en medios artificiales preparados mediante la

mezcla de componentes purificados o de soluciones orgnicas complejas, en el
interior de instrumentos que mantienen las condiciones fsico-qumicas
adecuadas y sobre soportes o recipientes que los contienen y aslan del medio
exterior. Por ello consideraremos que el medio de cultivo estar formado por
cuatro elementos: la naturaleza del sustrato o fase en que crecen las clulas,
las condiciones fsico-qumicas y fisiolgicas del medio, la naturaleza y
composicin de la fase gaseosa y las condiciones de incubacin, especialmente
la humedad y la temperatura.
1. El sustrato de cultivo. La mayor parte de las lneas celulares crecen en
forma de monocapa unidas a un soporte ms o menos slido. El crecimiento
en suspensin est usualmente restringido a algunas lneas celulares
especialmente de clulas hematopoyticas y tumores ascticos. Segn si la
lnea celular precise o no unirse al sustrato para proliferar se dice que es
dependiente (adhesin) o independiente (suspensin) de anclaje:
La mayor parte de las clulas que se mantienen en cultivo proceden de
disgregacin tisular o de tumores formados por clulas adheridas y
mantienen esa caracterstica: necesitan adherirse al sustrato para
mantenerse.
Los cultivos en suspensin suelen coincidir con los de aquellas clulas
que in vivo son circulantes, en general clulas sanguneas. El gran
inters que tiene el cultivo de clulas sanguneas (linfocitos) ha
extendido notablemente la caracterizacin de los cultivos en
suspensin. El cultivo de clulas en suspensin tiene algunas ventajas:
mayor facilidad de manipulacin y pase de un cultivo al siguiente
(replaqueo) pues no requieren separacin del sustrato mediante por ej.
Tripsinizacin, posibilidad de cultivo en mayor escala pues slo
dependen de la accesibilidad del medio y de los gases pero no de la
superficie del recipiente, etc. Y algunas desventajas: son cultivos
homogneos en los que se pierden las interacciones (espaciales, de
adhesin, etc).
Los tipos de sustrato ms empleados en la actualidad son los siguientes:

Vidrio. Empleado usualmente como sustrato de cultivo tiene como

ventajas su escaso coste y su facilidad de limpieza y esterilizacin.
Asimismo es especialmente til para su posterior observacin al
microscopio por su calidad ptica.
Plstico desechable. Muy empleado en la actualidad como material
desechable estril por irradiacin. El plstico ms empleado es el
poliestireno, de buena calidad ptica. Debido a que este plstico es
hidrofbico requiere un tratamiento mediante irradiacin-gamma,

qumico, o mediante descargas elctricas que produzca una superficie

hidroflica. El tratamiento es caracterstico de los diferentes
suministradores, y por ello los productos varan en calidad de uno a otro.
Aunque para la mayor parte de los usos rutinarios no es necesario, es
recomendable probar muestras de distintos orgenes y medir la eficacia
de plaqueo y las tasas de crecimiento para maximizarlas especialmente
en aquellas lneas celulares de crecimiento difcil. Otros plsticos que se
emplean son polivinil-cloruro, policarbonato (PVC), politetrafluoretileno
(tefln, PTFE), thermanox (TPX).
Actualmente es de gran inters, especialmente para el cultivo de clulas
epiteliales polarizadas, el uso de membranas plsticas porosas. Un
ejemplo de este tipo de cmara se representa en la figura.

Microsoportes ("microcarriers"). Se trata de soportes plsticos

(poliestireno), de sephadex o poliacrilamida en forma de pequeas bolas
("beads") a las que se unen las clulas dependientes de anclaje. Estas
bolas con las clulas adheridas se mantienen en suspensin.
Otros sustratos artificiales. Se han desarrollado tcnicas para crecer
clulas de gla en sustratos metlicos de paladio o en discos de acero.
Superficies tratadas. La adherencia y crecimiento de las clulas en un
frasco mejora en muchos casos si la superficie ha sido tratada con el

medio de crecimiento de otro cultivo, debido a la presencia de colgeno

o fibronectina liberada por las clulas, o bien sobre superficies
recubiertas de protenas de matriz extracelular (fibronectina, colgeno,
vitronectina, Matrigel, etc). As, se pueden tratar los recipientes de
cultivo con fibronectina (1 ng/mL) aadido al medio, o con colgeno. El
tratamiento con colgeno desnaturalizado aumenta la adhesin de
muchos tipos celulares, y especialmente de las clulas epiteliales.
Muchos resultados parecen indicar que el tratamiento de las superficies con
compuestos biolgicamente activos pueden inducir alteraciones especficas de
la adhesin o el comportamiento celular. Se han descrito mtodos para la
reconstitucin de membranas basales con la finalidad de optimizar las
condiciones de diferenciacin celular. Estos resultados refuerzan la nocin cada
vez ms extendida de que las interacciones clula-matriz extracelular son
determinantes en la regulacin de la proliferacin y la diferenciacin.
Otros tratamientos que se han usado han sido: gelatina (msculo), poli-D-lisina
(algunos teratomas de ratn).

"Feeder layers". Se ha descrito previamente que algunos tipos celulares

para crecer en cultivo y expresar sus caractersticas diferenciadas
precisan de suplementos especficos. Una manera de obtener estos
suplementos es la de hacerlos crecer sobre los restos de monocapas de
otros tipos celulares. Estas monocapas previas se esterilizan o se inhibe
su crecimiento (normalmente por irradiacin X o gamma). Este efecto
podra ser debido a dos posibilidades: suplementacin del medio, o
modificacin del sustrato. Una de las monocapas ms empleadas son los
fibroblastos de ratn 3T3 irradiados.
Matrices tridimensionales. Son sustratos en los que las clulas penetran,
estableciendo una distribucin tridimensional: geles de colgeno,
esponja de celulosa sola, o recubierta de colgeno, o "gelfoam". En
estas matrices muchos tipos celulares crecen y se establecen de una
manera anloga a como lo hacen en el tejido de origen: clulas
epiteliales de mama se organizan en disposicin tubular, mientras que
las clulas del carcinoma de mama lo hacen de una forma mucho ms
desordenada.
Sustratos no adherentes. Son sustratos que no permiten la adhesin
celular, por ejemplo agar, agarosa, o methocel (metilcelulosa de alta
viscosidad). Son de utilidad en situaciones en las que no conviene que
exista dispersin de las clulas derivadas de una originaria, por ejemplo
en los procesos de aislamiento de colonias infectadas por virus.
Interfases lquido-gel o lquido-lquido. Se han observado en algunas
situaciones proliferacin celular y adhesin a las interfases lquidolquido o lquido-gel, a pesar de que se desconocen exactamente los
mecanismos.

Haces microcapilares permeables (hollow fiber). Son cmaras de

crecimiento de clulas formadas por un recipiente cilndrico en el que se
siembra, y en el interior del cual hay un haz de capilares plsticos
permeables adecuados para que las clulas se adhieran. Los capilares
se encuentran conectados a un circuito de recambio del medio. Este
dispositivo ofrece una gran superficie de crecimiento apta para el
crecimiento celular, y un eficaz sistema de recambio del medio.

Tal

como se ha descrito previamente, el material ms utilizado como sustrato es el

plstico desechable, en forma de diferentes tipos de recipientes. Los ms
comunes son:

placas de Petri (ventiladas). Disponibles en 3 tamaos: 3,5, 6,0 y 10 cm

de dimetro son las ms empleadas cuando se trata de crecer las clulas
para usar directamente en experimentos. No es recomendable, por su
escasa estanqueidad, emplearlas para el mantenimiento de lneas.

multiplacas. Es una variante

de Petri. Placas de varios
a 96 pocillos.

Frascos de Roux
(botellas
ventiladas o no).
Disponibles en
diferentes tamaos, son recomendables para el mantenimiento de las

de las placas
pocillos, desde 6

lneas y la produccin de clulas, o bien para el crecimiento de clulas

en suspensin.
"Roller bottles". Se trata de tubos, con una cara plana sobre la que se fija
el cultivo, y que se incuban en los incubadores dotados de "roller".
Existen variantes con una gran superficie de adhesin (espirales de
plstico...) y que se destinan a la produccin de gran nmero de clulas.

2.

La

fase gaseosa. Los componentes ms significativos de la fase gaseosa son

el oxgeno y el dixido de carbono:
Oxgeno. Las necesidades de oxgeno para la mayor parte de los cultivos
celulares es cubierta con la tensin atmosfrica, aunque existen cultivos,
especialmente los cultivos de rganos que requieren una tensin de
oxgeno superior (del 95%) posiblemente debido a la geometra del
rgano y a las dificultades de difusin del gas en su interior. Se ha
propuesto que los requerimientos de selenio en el medio podran ser
debidos a su papel en la detoxificacin de radicales de oxgeno,
especialmente en los medios sin protenas sricas.
Dixido de carbono. El dixido de carbono juega un complejo papel en el
medio debido a que influye la cantidad de CO2 disuelto, el pH y la
cantidad de iones HCO3. Las reacciones que tienen lugar en el medio
son:

El incremento de la concentracin de in bicarbonato desplaza la ecuacin [1]

hacia la izquierda, de modo que el pH se establezca en 7,4. Se puede emplear
asimismo otra base, por ejemplo NaOH, siendo la ecuacin:

De
modo que para establecer un pH determinado se debe tener en cuenta

especialmente los niveles de bicarbonato sdico y la tensin de CO2. Cada

medio tiene una concentracin recomendada de bicarbonato y tensin de CO2
para alcanzar el pH correcto. Sin embargo, se emplean otras sustancias
tamponadoras en la formulacin de muchos medios en la actualidad, lo que
permite una estabilidad superior del pH en el medio, as como una mayor
capacidad tamponadora (los denominados Good's buffers: HEPES, Tricina, etc).
Aunque aparentemente podra ser posible prescindir del bicarbonato en la
formulacin del medio, esto se ha revelado falso, debido probablemente a que
la ausencia de bicarbonato sdico desplazara la ecuacin [1] hacia la derecha,
de modo que tendera a desaparecer el CO2 disuelto y eventualmente el in
bicarbonato, ambos aparentemente necesarios para el crecimiento celular.
Una alternativa es la suplementacin del medio con piruvato. Esto permite a
muchos tipos celulares incrementar su produccin de CO2 endgeno,
hacindolas independientes de la aportacin de CO2 exgeno.
En resumen, los cultivos crecidos a baja densidad en un recipiente abierto
precisan una atmsfera de CO2, cuya concentracin est en equilibrio con el
bicarbonato sdico en el medio. A concentraciones celulares muy reducidas
(por ej. durante el clonaje) es necesario aadir CO2 en la fase gaseosa de los
frascos cerrados. Cuando la concentracin celular es ms elevada puede no ser
necesario aadir CO2 a frascos cerrados, pero si en frascos abiertos. En los
casos en los que la densidad celular sea elevada, con mucha produccin de
cido es recomendable, por la elevada produccin de CO2endgeno, mantener
abierto el recipiente de modo que se pueda eliminar el exceso. En estos casos
es especialmente recomendable suplementar el medio con HEPES para
asegurar un correcto control del pH del medio.
3. Propiedades fsicas. Las caractersticas del medio son: pH, osmolaridad,
temperatura, viscosidad y tensin superficial.
pH y capacidad tamponadora. El pH ptimo de crecimiento para la
mayora de tipos celulares es de 7,4 aunque existen pequeas
variaciones: algunas lneas normales de fibroblasto crecen mejor entre
pH 7,4 y 7,7 y clulas transformadas lo hacen en el margen de pH de 7,0
a 7,4. Las clulas epidrmicas pueden ser mantenidas a pH 5,5.
El indicador de pH que se suele emplear es rojo fenol, que presenta color rojo a
pH 7,4, naranja a pH 7,0, amarillo a pH 6,5, azul-rojo a pH 7,6 y prpura a pH
7,8. El medio de cultivo debe estar tamponado, a fin de evitar los cambios
bruscos de pH. La solucin tamponadora ms empleada sigue siendo el
tampn bicarbonato, que equilibra el CO2 atmosfrico, a pesar de su escasa
capacidad tamponadora, debido a: su bajo coste, baja toxicidad, y beneficios
nutricionales para el cultivo. HEPES es la solucin tamponadora de eleccin por
su elevada capacidad tamponadora en el rango 7,2 a 7,6, y se emplea en
concentraciones de 10 a 20 mM. Cuando se usa conjuntamente con CO2

externo, debe estar a concentracin doble del bicarbonato para un

tamponamiento adecuado.

Osmolaridad. Muchas clulas en cultivo tienen una amplia tolerancia

frente a la osmolaridad del medio, creciendo bien en el rango de 260 a
320 mOsm/kg, con pequeas variaciones dependiendo de la especie
considerada. Es recomendable emplear medios ligeramente hipotnicos
para compensar la evaporacin durante el periodo de incubacin,
especialmente en incubadores sin control de la humedad ambiente.

La osmolaridad se controla mediante la determinacin del punto de

congelacin o la elevacin de la presin de vapor. Hay que tener en cuenta que
la adicin de HEPES, de drogas disueltas en cidos fuertes y la neutralizacin
posterior pueden afectar fuertemente a la osmolaridad del medio.

Temperatura. La temperatura tiene gran influencia en la tasa de

crecimiento de las clulas, de ah la importancia de un buen control de
sta en la incubacin. Influye asimismo en el pH del medio, por lo que se
recomienda o bien ajustar el pH del medio 0,2 unidades por debajo del
ptimo, a temperatura ambiente, o bien preparar el medio completo,
incluso suero, dejar equilibrar en la estufa y despus ajustar el pH, antes
de aadirlo al cultivo.
Viscosidad. La viscosidad del medio viene determinada
fundamentalmente por el contenido en suero y tiene poca influencia
sobre el crecimiento. S es importante para evitar el dao celular en la
agitacin del cultivo (menor dao a ms viscosidad) y en la
tripsinizacin. Se puede incrementar la viscosidad, especialmente en
medios libres de suero, aadiendo al medio carboximetil-celulosa o
polivinilpirrolidona.
Tensin superficial. La tensin superficial se ha de mantener baja, y en
general slo se ve alterada por la aparicin de espumas en los cultivos
en suspensin donde se burbujea CO2. En estos casos es recomendable
emplear un agente antiespumante de silicona pues en stos casos se
produce un aumento de la desnaturalizacin de protenas y se
incrementa el riesgo de contaminacin si la espuma alcanza el cuello del
recipiente de cultivo.
4. Condiciones fisiolgicas. Hacen referencia a la composicin del medio. Ya
se indic que la principal dificultad para el establecimiento de las lneas
celulares es el de obtener medios nutritivos adecuados que sean capaces de
reemplazar al medio "natural" como extractos embrionarios, hidrolizados de
protena o sueros. Un primer grupo de medios tales como el medio basal de
Eagle (MEM) y el ms complejo 199 de Morgan y col o CMRL 1066 de Parker
y col. (1950) eran medios definidos pero que precisaban de un suplemento
de suero entre el 5 y el 20%.

A fin de eliminar el aporte de medios complejos no definidos se han ido

formulando medios ms complejos como NCTC 109 (Evans y col, 1956), 135
(Evans y Bryant, 1965), MB572/1 (Waymouth, 1959), Ham F10 y F12 (Ham,
1963, 1965), serie de los MCDB (Ham y McKeehan, 1978) y los medios de Sato
suplementados con hormonas (Barnes y Sato, 1980).
La aproximacin recomendada para establecer un medio definido es empezar
con un medio rico, por ejemplo Ham F12, suplementado con elevada
concentracin de suero (20%) y probar suplementos que permitan reducir la
cantidad de suero hasta poderla reducir o suprimir. Despus de aos de
investigacin en la composicin de los medios la eleccin de stos sigue siendo
emprica.
Los principales medios empleados y sus aplicaciones son:

Medio Basal de Eagle (BME). Medio elemental con slo los aminocidos
esenciales. Se necesita siempre la suplementacin con suero bovino
fetal al 10 %. Crecimiento de fibroblastos de ratn y clulas HeLa.
Medio Mnimo Esencial de Eagle (MEM). Es el medio de uso ms
corriente, contiene ms aminocidos y en mayor concentracin que el
BME. Se usa para cada casi todo tipo de cultivos y requiere la adicin de
suero (10%).
RPMI 1640. Medio diseado para el crecimiento de linfoblastos y lneas
celulares leucmicas en suspensin. Tiene un amplio rango de
aplicaciones con suplementos adecuados.
Medio MEM modificado por Dulbeco (DMEM). Contiene cuatro veces la
concentracin de aminocidos y vitaminas que el BME. Se usa para la
seleccin de hibridomas suplementado con HAT o HT.
Modificacin de Iscove del medio DMEM (IMDM). Es un medio muy
completo que incluye en su formulacin albmina bovina, transferrina,
selenito, et... Es muy til para el cultivo de linfocitos en medio libre de
suero. Tambin sirve para otros tipos celulares, pero en ese caso
requiere suero a bajas concentraciones.
McCoy 5A. Medio diseado para el crecimiento para el crecimiento de
lneas celulares diploides tanto de rata como humanas.
Medio L-15 de Leibovitz. Utilizado para el cultivo de virus.
Medio F-10 de Ham. Para el crecimiento de lneas celulares humanas,
debe ser suplementado con protenas y hormonas. Contiene metales
como Fe, Cu, Zn. Es til para el cultivo de clulas amniticas.
Medio F-12 de Ham. til para el crecimiento de lneas celulares son
suplementos protenicos. Combinado con IMDM es un medio que se usa
como libre de suero.
Medio 199. Muy usado para el cultivo de clulas no diferenciadas y
estudio de cromosomopatas.

Todo medio de cultivo est formado por los siguientes elementos:

Soluciones salinas equilibradas (BSS). Una solucin salina equilibrada es

una mezcla de sales inorgnicas, incluyendo usualmente bicarbonato
sdico, y suplementada con glucosa. Se usan para diluir medios ms
completos, como medio de diseccin o lavado, o para incubaciones
cortas que requieren un medio isotnico no completo nutricionalmente.
Su eleccin depender de:
la tensin de CO2. La concentracin de bicarbonato deber permitir el
equilibrio a pH 7,54 a 36,5C. As BSS-Eagle es ms usada para 5% CO2
y BSS-Hank (HBSS) es usado a la tensin atmosfrica normal.
su uso en la disgregacin de tejidos o monocapas. En ese caso debern
carecer de Ca2+ y Mg2+. Son recomendables los medios de Moscona,
CMF, o PBS de Dulbeco o Vogt (PBSA).
su uso para el cultivo en suspensin o de clulas en monocapa. Es
recomendable el uso de MEM(S), variante de MEM sin Ca2+que reduce la
agregacin celular y la adherencia.
Debido a su escasa capacidad tamponadora se recomienda suplementarlo con
HEPES para pH en el rango 7,2 a 7,8 y Tricina en el rango 7,4 a 8,0.

Aminocidos. Es necesario suplementar el medio basal con los

aminocidos esenciales. Asimismo se suplementa con otros
aminocidos, pues los requerimientos pueden variar de una clula a
otra. Un suplemento comn es el de glutamina, a 2 mM final, aunque
hay algunas lneas celulares pueden usar el glutamato. La glutamina es
inestable en el medio, y se recomienda aadirla a partir de un stock
concentrado (100) que se mantiene congelado, no ms de 1 semana
antes de aadir el medio al cultivo (conservando a 4C).
Vitaminas. El medio MEM slo suplementa con vitaminas del grupo B,
siendo los dems grupos aportado por el suplemento de suero. En
medios ms definidos se suplementan todas las vitaminas. La limitacin
de vitaminas se manifiesta en la supervivencia de las clulas y en la
reduccin de la tasa de crecimiento ms que en la densidad celular.
Glucosa. Es la fuente de energa en muchos medios. Metabolizada
preferentemente va gluclisis hacia piruvato que puede ser convertido
en lactato o acetoacetato que entra el ciclo de Krebs, y genera CO2. La
acumulacin de cido lctico en el medio propio de clulas embrionarias
y transformadas parece indicar un funcionamiento diferente del ciclo de
Krebs en estas clulas respecto al modelo in vivo. En estos casos la
mayor parte del CO2 parece proceder de un uso de la
glutamina/glutamato.
Otros suplementos orgnicos de bajo peso molecular. Dependiendo del
medio, ste incluye en su formulacin nuclesidos, intermediarios del
ciclo de Krebs, piruvato, lpidos,... La adicin de piruvato en el medio

permite al cultivo incrementar su produccin endgena de CO2

hacindole independiente de la aportacin exgena de ste. El medio de
Leibovitz L15 contiene una concentracin superior de piruvato y no
contiene bicarbonato sdico, y no requiere aporte de CO2 en la fase gas.
Hormonas y factores de crecimiento (suero). En los medios no definidos
suele aportarlos el suero. Los tipos de suero empleados son suero de
ternera ("calf serum", CF), suero bovino fetal ("fetal calf serum", FCS),
suero de caballo ("horse serum", HS) y suero humano ("human serum",
HuS). El ms usado es el suero de ternera, mientras que el suero bovino
fetal es usado en lneas ms exigentes, y el suero humano en lneas
humanas. La utilizacin de suero es problemtica pues:
a pesar de que la composicin del suero es conocida, existen gran
cantidad de componentes presentes en cantidades variables en ste que
pueden influir notablemente en el cultivo (hormonas, factores de
crecimiento...)
el suero vara de lote a lote, y cada uno se puede emplear como mximo
1 ao, probablemente deteriorndose a lo largo de ese tiempo, a pesar
del almacenamiento a baja temperatura.
cada cambio de lote de suero requiere realizar una serie de controles
tediosos y costosos.
si se cultivan varios tipos celulares cada uno puede requerir un lote
diferente, lo que complica el almacenamiento e incrementa los costes.
crea una dependencia importante de un suministro que no siempre
puede mantenerse con la periodicidad y calidad requerida.
si se han de purificar productos del medio de cultivo la presencia de los
componentes del suero dificulta notablemente estos procesos.
el suero est contaminado con desgraciadamente demasiada frecuencia
por virus y micoplasmas, lo que representa un grave peligro para el
cultivo.
algunos factores sricos como el factor de crecimiento plaquetario
(PDGF) estimula la proliferacin de fibroblastos, lo que puede ser un
problema en el establecimiento de cultivos primarios especializados.

En conjunto supone un gran inconveniente para la estandarizacin de

protocolos experimentales y de produccin. Por ello se realizan importantes
esfuerzos para la definicin de medios definidos para el crecimiento celular.
Esto, adems de la reproducibilidad buscada, permite establecer medios
selectivos en los que crezca el tipo celular deseado. Tienen como desventaja la
gran cantidad de esfuerzo necesario para su definicin, as como que en
muchos casos el crecimiento de las clulas en estos medios es menor, las
lneas finitas permanecen viables menos generaciones, as como el hecho
probable de que la adaptacin del cultivo al medio libre de suero supone un
tipo de seleccin per se.

Para conseguir reemplazar el suero completamente de un medio ser necesario

reemplazar:
los factores de adhesin como la fibronectina. Clulas crecidas en
medios libres de suero requieren el suplemento de fibronectina (25-50
g/mL) o laminina (1-5 g/mL) en el medio, o bien el tratamiento de las
placas con poli-lisina (1 mg/mL) antes de la siembra.
inhibidores de proteasas. Despus de la tripsinizacin de un cultivo el
exceso de actividad trptica se inhibe por la adicin de suero al medio.
En ausencia de ste deben usarse inhibidores de proteasas como el
inhibidor de tripsina de soja.
Hormonas. El complemento hormonal depender especialmente del tipo
celular, tales como hormona de crecimiento, T3, hidrocortisona,
dexametasona, FSH.
Factores de crecimiento peptdico. En la actualidad se han identificado
algunos polipptidos de actividad mitognica: FGF ("Fibroblast Growth
Factor"), EGF ("Epidermal Growth Factor"), PDGF ("Platelet Derived
Growth Factor") y MSA, y con un rango amplio de actividad. Asimismo se
han aislado otros factores con mayor especificidad de accin.
Nutrientes: Fe, Cu, Se, y otros minerales, a pesar de que los
fundamentos de su funcin son desconocidos en muchos casos.
Protenas y poliaminas. La inclusin de albmina bovina aade
indefinicin al medio, por ello se recomienda el uso de BSA libre de
cidos grasos (usualmente a 1-10 mg/mL). Transferrina (10 ng/mL) se
requiere como portador de Fe, y se cree que puede tener actividad
mitognica. Putrescina se usa a alrededor de 100 nM.
A fin de reemplazar el suero se han desarrollado una serie de sustitutos
comerciales como son SerXtend (NEN), Ventrex (Ventrex Lab Ltd.), Nu-serum
(Collaborative Res.).

Inhibidores del crecimiento de los contaminantes (antibiticos y

antifngicos). A fin de evitar el crecimiento de contaminantes en el
cultivo se suele suplementar ste con sustancias antibiticas de
diferente espectro de accin. La adicin de antibiticos ha de ser
estrictamente controlada para evitar efectos nocivos sobre el cultivo.

Es importante tener especial cuidado cuando se combinan dos o ms

antibiticos. Las mezclas de uso ms comn son:
Penicilina (100 U/mL) / Estreptomicina (100 g/mL). Combinacin antimicrobiana.
Penicilina (100 U/mL) / Estreptomicina (100 g/mL) / Fungizona.
Combinacin anti-microbiana y anti-fngica.
Gentamicina (50 g/mL). Anti-microbiana, conviene ir alternndola con
la penicilina-estreptomicina.

 Anfotericina-B (2,5 g/mL). Antifngico y antilevaduras. Se han

observado algunos efectos secundarios sobre el crecimiento de clulas
de mdula sea humana en cultivo.