Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Medicina
Licenciatura Ciencia Forense

QUMICA FORENSE
PRCTICA 7.

ANLISIS DE METOMILO EN PLANTAS DE JITOMATE.

06 DE NOVIEMBRE DE 2015

EQUIPO 5:
De la Cruz Corts Alondra
Flores Fernndez Jani Ytz
Fossati Del ngel Vanessa
Hernndez Navarro Luis Alberto
Salazar Padilla Maribell

PROFESORES:
Sheila Snchez Lazo Prez
Luz Alejandra Castillo Alans
Isidro Hinojosa Lpez

PRCTICA 7. ANLISIS DE METOMILO EN PLANTAS DE JITOMATE.

OBJETIVOS
Determinar la presencia de pesticidas en matrices biolgicas
Realizar la cuantificacin de los analitos de inters
Comprender la importancia de la tcnica de cromatografa de lquidos en la
qumica forense
Aprender el funcionamiento de un equipo cromatogrfico de lquidos
Interpretar los resultados obtenidos en el cromatograma
INTRODUCCIN
La cromatografa de lquidos es una tcnica analtica de separacin ampliamente
utilizada. Las razones de su popularidad son su sensibilidad, su fcil adaptacin a las
determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para automatizarla, su
capacidad para separar especies no voltiles o termolbiles, pero sobre todo, su
amplia aplicabilidad a sustancias que son importantes en la industria, muchos campos
de la ciencia y para la sociedad en general. Algunos ejemplos de estos materiales son
aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, frmacos,
terpenoides, plaguicidas, antibiticos, esteroides, especies organometlicas y una
variedad de sustancias inorgnicas.
La cromatografa lquida de alta eficiencia se encuadra dentro de la cromatografa
de elucin. En esta, un lquido (fase mvil) circula en ntimo contacto con un slido u
otro lquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de substancias
(analitos) en la corriente de fase mvil, cada analito avanzar a lo largo del sistema
con una velocidad diferente que depender de su afinidad por cada una de las fases.
Esto supone que despus de terminado el recorrido de la muestra por columna, cada
una de las substancias introducidas en el sistema eluir con un tiempo diferente, es
decir, estarn separadas.
Componentes de un equipo de cromatografa de lquidos.
Sistema de almacenamiento y dispensadores de la fase mvil (disolventes): su
funcin es garantizar la disponibilidad de fase mvil al sistema en condiciones
apropiadas de modo que se evite la contaminacin o degradacin de los
disolventes empleados con estos fines.
Sistemas de impulsin de la fase mvil: bombas capaces de proporcionar
presiones hasta de 400 atm. Se encargan de mantener un flujo constante del
disolvente.
2

 Sistemas de inyeccin de la muestra: permiten la insercin de un volumen fijo o

variable de muestra en el sistema sin romper o perturbar significativamente las
condiciones de presin del mismo. La mayor parte de los cromatgrafos actuales
se venden con autoinyectores. Dichas unidades tienen la capacidad de inyectar
muestras en el cromatgrafo de lquidos a partir de frascos que estn en un
carrusel o desde placas microtituladoras. Por lo regular, contienen rizos de
muestreo y una bomba de jeringa para inyectar volmenes desde menos de 1 L
hasta ms de 1 mL.
Dispositivo de pre-tratamiento de las muestras: Su objetivo es efectuar
tratamientos u operaciones en la muestra, previas a la propia separacin.
Columna: es el elemento fundamental de un cromatgrafo de lquidos, puesto
que en ella es donde tiene lugar la separacin. Normalmente son de acero,
aunque existen de vidrio, material polimrico y en caso de microcolumnas, slice
fundida.
Detectores: Proporciona informacin sobre la presencia de las especies separadas
en la columna cromatogrfica. Debe elegirse de acuerdo a las caractersticas del
analito. El detector ms usual es el de absorcin UV-Vis.

Imagen 1. Esquema de los componentes de un equipo de cromatografa de lquidos

(HPLC).

Importancia del sistema de inyeccin.

El mtodo de introduccin de la muestra en HPLC, es de suma importancia pues un
mal sistema de inyeccin puede dar lugar a ensanchamientos de la banda
cromatogrfica que disminuyan la eficacia del sistema cromatogrfico.

Un inyector ideal debe tener las siguientes caractersticas:

Introducir la muestra en la columna como una banda lo ms estrecha posible.
Ser de fcil manejo.
Dar lugar a resultados reproducibles, tanto en la cantidad de muestra inyectada
como en el ensanchamiento que origina en la banda cromatogrfica.
Ser capaz de trabajar a presiones elevadas.
Fundamentalmente existen dos tipos de inyectores manuales: los de jeringa y los de
vlvula:
Inyectores de jeringa: En este tipo de inyectores, la introduccin de la muestra en
la columna se realiza por medio de una jeringa cuya aguja entra en el sistema
cromatogrfico a travs de una membrana ("septum"), lo que permite depositar
la muestra en la cabeza de la columna (imagen 2).

Imagen 2. Inyectores de jeringa.

Inyectores de vlvula: Este sistema de inyeccin consiste en una vlvula de seis

vas, dos de las cuales estn conectadas entre s por medio de una espira o
carrusel ("loop"). Esta espira es un tubo de volumen conocido, cuya misin es la de
contener la muestra antes de efectuarse la inyeccin.
La introduccin de la muestra en la columna se lleva a cabo en dos etapas; la
primera se realiza a presin atmosfrica, y consiste en cargar la muestra en la
espira con ayuda de una jeringa; en la segunda, mediante un giro de la vlvula,
se hace pasar el eluyente a travs de la espira hacia la columna (imagen 3). La
inyeccin mediante vlvulas es con mucho la ms utilizada, ya que rene
prcticamente todas las caractersticas exigibles a un inyector.

Imagen 3. Inyeccin mediante vlvulas de 6 vas.

El cromatograma
Un cromatograma nos dice la complejidad de la muestra en base al nmero de picos
observados. Identifica los componentes de la muestra en base a la precisa posicin
de los picos (tiempo de retencin) y determina cuantitativamente la concentracin
de las sustancias en base al rea de cada pico. Para obtener este cromatograma a
la salida de la columna se coloca un sistema de deteccin y registro, que permite
responder a una propiedad de la solucin que contiene al analito o del propio analito
en funcin del tiempo.
Tiempo de retencin (tR): Es el tiempo que transcurre despus de la inyeccin de
la muestra para que el pico del analito alcance el detector se denomina tiempo
de retencin.
Tiempo muerto (tM): Es el tiempo para que la especie no retenida alcance el
detector.

Imagen 4. Ejemplo de un cromatograma de

dos componentes.

El factor de respuesta
En la cromatografa, el factor de respuesta (f) es la inversa del coeficiente a y
corresponde a la cantidad de sustancia por unidad de rea; en el caso ms general,
cada componente tendr un factor de respuesta caracterstico. Estos factores de
5

respuesta se determinan experimentalmente midiendo el rea de la seal producida

por una cantidad conocida (Mi) de cada componente.
Metomilo.
El metomilo es un insecticida carbamato con accin de contacto, estomacal y
translaminar. Controla insectos chupadores y masticadores en hortalizas, cereales,
maz, forrajeras, frutales y vides.
Cuando se utiliza no se debe reingresar al rea tratada sino hasta pasadas 48 horas
de la aplicacin. Los animales deben permanecer afuera hasta por 8 das. Este
insecticida es altamente txico por lo que si en algn momento se llega a encontrar
en plantas de consumo humano puede provocar diversos sntomas por intoxicacin.
Propiedades fisicoqumicas:
Slido cristalino de color blanco, con olor ligeramente sulfuroso.
Su punto de fusin se encuentra entre los 78 y 79 C.
Su densidad relativa es de 1.2946 kg/m3 a 24 C.
Su solubilidad en agua es de 58,000 mg/L (5.8 % peso/peso) a 25 C.
Es soluble en algunos disolventes orgnicos. Su solubilidad (expresada en %
peso/peso) en diferentes compuestos a 25C es la siguiente: en etanol de 42, en
metanol de 100, en isopropanol de 22 y en acetona de 73.
Se descompone al calentarse o al arder, produciendo gases txicos e irritantes
que incluyen a los xidos de nitrgeno, xidos de azufre, cianuro de hidrgeno y
metilisocianato.

Imagen 5. Molcula de metomilo.

Normas Oficiales Mexicanas que regulan el uso de plaguicidas.

En la NOM-232-SSA1-2009 sobre plaguicidas, se establecen los requisitos del envase,
embalaje y etiquetado de productos grado tcnico y para uso agrcola, forestal,
pecuario, jardinera, urbano, industrial y domstico.
Los plaguicidas son sustancias o mezclas de stas que se usan con la intencin de
mitigar, reducir o eliminar el impacto de las plagas en la produccin agropecuaria, en
6

la salud de los seres humanos, entre otros. Dada su naturaleza txica, estos productos
tienen el potencial de ejercer efectos adversos a la salud humana y al medio
ambiente. Lo anterior hace de los plaguicidas un grupo de sustancias en cuyo manejo
se debe enfatizar la proteccin del usuario y personal ocupacionalmente expuesto.
El mal uso de los plaguicidas puede ocasionar la intoxicacin de los trabajadores, la
contaminacin de los alimentos y el medio ambiente, todos stos con efectos dainos
para la salud humana. Esta norma se genera con el propsito de fomentar el manejo
seguro y comunicar los principales riesgos al momento de su uso.
HIPTESIS
Despus del anlisis de la muestra, se cuantificar una concentracin elevada de
metomilo.
La cantidad del carbamato (metomilo) utilizado para el cultivo de hortalizas, ser
superior a las cantidades permitidas en la norma.
La cantidad del carbamato (metomilo) utilizado para el cultivo de hortalizas se
encontrar dentro del parmetro permitido en la norma.
MATERIALES
2 matraces aforados de 10 mL
1 matraz aforados de 25 mL
1 matraz aforados de 50 mL
1 matraz aforado de 100 mL
Pipetas volumtricas de 1, 2 y 5 mL
3 pipetas beral
2 vasos de precipitados de 50 mL
2 vasos de precipitados de 100 mL
Propipeta/jeringa
Mortero con pistilo
1 nave para pesar
Esptula
REACTIVOS
Planta de jitomate, recolectada de los valles altos del Estado de Mxico.
Alcohol metlico (metanol grado HPLC)
Acetonitrilo grado HPLC
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 Estndar de metomilo
Cartucho de SPE
Sonicador
DESARROLLO
1. Cules son los pasos crticos en la cuantificacin de metomilo por cromatografa
de lquidos? Expliquen.
Elegir el disolvente adecuado como fase mvil y la columna apropiada como fase
estacionaria. Adems la preparacin de la muestra tambin tiene importancia ya
que debe utilizarse un disolvente capaz de solubilizar al metomilo, en este caso se
utiliz metanol.
2. Qu tipo de tcnica de cuantificacin realizarn? Expliquen.
Se utilizar el mtodo de estndar externo, para lo cual primero se inyecta una
masa conocida del componente a cuantificar, se mide el rea de la seal y se
calcula el factor de respuesta. Posteriormente, se inyecta la muestra problema y
se mide la seal del componente que se quiere cuantificar. Finalmente, utilizando
el factor de respuesta se calcula la concentracin del metomilo.
3. Realicen los clculos necesarios para preparar 100Ml de una solucin estndar de
metomilo de 10 ppm.
10 ppm

10 mg
0.1L 1mg de metomilo
1L

4. Cmo debern realizar la extraccin del o los pesticidas que estaran presentes
en una muestra?
En primer lugar se debe identificar y elegir la parte comestible de la muestra la cual
tiene mayor importancia ya que se trata de la principal fuente de intoxicacin con
plaguicidas para las personas. De acuerdo con las caractersticas de la parte
comestible pueden llevarse ciertos procedimientos, los ms comunes son triturarla
y con algn solvente extraer el analito (maceracin) en algunas ocasiones es
necesario filtrar para evitar la presencia de residuos slidos en la solucin a analizar
por cromatografa, en esta prctica se determin triturar el jitomate cherry con
todo y cascara y se aadieron 5 mL de metanol, posteriormente se hizo una
filtracin. Y para evitar todo tipo de impurezas en la muestra, se pas el filtrado por
un cartucho para SPE, el cual contena gel de slice, obteniendo asi, una fase
lquida totalmente libre de slidos que puedan contaminar la muestra y afectar la
lectura del cromatgrafo de lquidos.

Con lo anterior, se realiz el siguiente diagrama de trabajo para la elaboracin de

la muestra y la lectura en el HPLC, previo a la inyeccin de la muestra, se debe
agregar el estndar de metomilo antes preparado.

RESULTADOS
Debido a la imposibilidad de pesar 1mg de metomilo en la balanza, se tomaron 0.013g
de esta sustancia y se llevaron a 100mL, obteniendo una disolucin de 130 ppm. Se
tom 1mL de dicha disolucin y se afor a 10mL con agua calidad HPLC, obteniendo
como concentracin del estndar final, 13 ppm.
En cuanto al peso de la matriz biolgica jitomate, se trabaj con 11.99 g.
Una vez seguido el procedimiento indicado, se llevaron la muestra y el estndar al
cromatgrafo de lquidos. Se introdujeron, por separado, 250L de cada preparacin
en el sistema de inyeccin y se obtuvieron los siguientes cromatogramas:

Tiempo de retencin del metomilo

Imagen 6. Cromatograma del estndar de metomilo.

10

Imagen 7. Cromatograma de la muestra que presuntamente contiene metomilo.

h

ANLISIS DE RESULTADOS
Comparando el tiempo de retencin del metomilo obtenido a partir del estndar,
podemos identificar a la sustancia en la muestra obtenida de la matriz biolgica
(jitomate).
El tercer pico en el cromatograma de la muestra, presenta un tiempo de retencin de
0.900, similar a 0.933 que es el TR del estndar de metomilo. As que trabajaremos con
los valores de este pico para calcular la concentracin de metomilo en el fruto de la
planta.

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Tabla 1. Relacin de los resultados de la cromatografa de gases del estndar y la muestra.

Tiempo de
retencin

rea

Concentracin de
metomilo (ppm)

Estndar

0.933

2.934

13

Muestra

0.900

42.99

Para poder calcular la concentracin del metomilo se necesita conocer el factor de

respuesta (Fr) del metomilo, el cual se obtiene de la siguiente formula, con los datos
del estndar:
Frmula
rea Fr C
.

Despeje

Sustituyendo

rea
Fr
C

2.934
0.2256
13 ppm

Fr=0.2256
De la frmula anterior, se calcula ahora la concentracin de la muestra problema,
utilizando el rea obtenida en el cromatograma.
Frmula
rea Fr C
.

Despeje

Sustituyendo

rea
C
Fr

42 .99
190 .55 ppm
0.2256

La muestra contiene 190.55 ppm de metomilo.

190 .55 ppm

190 .55 mg
5mL 0.9527 mg 9.52 x10 4 g
1000 mL

Hay 0.9527mg de metomilo en 11.99g de matriz biolgica, por lo tanto:

0.9527 mg
x

11 .99 g
1g

0.9527 mg 1g
0.0794 mg
11 .99 g

Cada gramo de matriz bilgica (jitomate) posee 0.0794mg de metomilo.

CONCLUSIONES
Es importante conocer la concentracin de metomilo en la planta, ya que su nivel de
toxicidad es muy alto y es utilizado como plaguicida en diversos alimentos de
consumo diario, por lo que un exceso en el uso del mismo puede causar daos severos
en la salud de aquellas personas que lo consumen.

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La muestra presenta una concentracin de 0.0794 mg de metomilo por cada gramo

del fruto, es decir, s hay presencia de metomilo. Don Juan no est cumpliendo con la
Normatividad mexicana, por lo que se le puede aplicar una sancin administrativa
como la clausura de su negocio y la prdida total de su cosecha; en los casos en los
que alguien haya resultado afectado en su salud por la ingesta de los frutos de la
cosecha puede levantar una denuncia y se tendra que comprobar la comisin del
delito.
El lmite de residuos de metomilo en jitomate es de 1mg/kg1 y en nuestra muestra hay
79.4 mg/kg del plaguicida; es ms que obvio que la ingesta del fruto puede provocar
intoxicacin, incluso la muerte.
Este tipo de cuantificacin la podemos hacer en nuestro mbito laboral, cuando
tengamos una mezcla, y sospechemos que contiene alguna sustancia no voltil de
nuestro inters, por ejemplo algn veneno en una muestra de alimento o bebida,
algn agente contaminante en el agua para consumo humano, o en la tierra, entre
otras cosas.
BIBLIOGRAFA
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Skoog, D., West, D., Holler, J., Crouch, S. (2005). Fundamentos de Qumica analtica,
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