EspBioq

2015-16

Espectroscopia em Bioqumica 2015/16

Aulas prticas de RPE - Nov/Dez 2015

1 SESSO (26 + 27 Novembro; turnos P1, P2, P3 e P4)
Aula LABORATRIO de RPE 1 piso em simultneo com aula aspectos prticos espectros RPE
2 SESSO (3 e 4 Dezembro; turnos P1, P2, P3 e P4)
Aula resoluo de exerccios e Simulao espectros de RPE 1 piso

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Protocolo Experimental
Aspectos prticos na aquisio de espectros de RPE
- Interpretao de espectros e determinao de parmetros caractersticos

Modo de operao
1- Como ligar o aparelho (ver manual da Bruker)

2- O aparelho de RPE:

Fonte de radiao

Cavidade de ressonncia

Detector

3- Sintonizao da cavidade e optimizao das condies experimentais para aquisio de um
espectro de RPE.
AMOSTRA de um radical: Pitch da Bruker Inc
Aps introduo da amostra na cavidade dever explorar as seguintes condies de aquisio de
sinal:

Janela espectral e campo central

constante de tempo

tempo de varrimento

atenuao da potncia de m.o.

ganho

amplitude de modulao.

4- Determinao da frequncia de micro-ondas exacta do aparelho. Utilizar o espectro de RPE
optimizado do pitch (obtido em 3). Tendo em conta o valor de ge e do campo magntico
correspondente, calcular o valor da frequncia de trabalho.

5- Aquisio e interpretao de espectros a temperatura ambiente.
Optimize as condies experimentais e adquira espectros para as seguintes amostras numa clula
plana:

Io vanadilo em soluo aquosa a pH cido, em glicerol e numa amostra biolgica

(cogumelos)

Radical nitrxido

Radical p-benzo semi-quinona

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6- Aquisio e interpretao de espectros a baixa temperatura

identificao de metais em amostras de materiais de uso comum (ies Mangans e Cobre)

Espectro de soluo de CuEDTA (77K) de concentrao conhecida como padro na

determinao da concentrao de spins numa amostra biolgica

Questionrio:
1- Descreva, exemplificando com os espectros da Pitch, em que medida as condies
experimentais de aquisio modificam o sinal de EPR obtido.
2- Explique os espectro de EPR obtidos, indicando ncleos responsveis pelo o acoplamento do
spin nuclear com o spin electrnico e a razo do nmero de linhas observadas.
Determine para estes espectros:

- valores de g;

- constante de acoplamento hiperfino

Referncias:
- Manual da Bruker disponvel no Clip
- Simulador espectros RPE: http://www.eprsimulator.org