PRACTICA 3

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO Y ENZIMA EN LA

VELOCIDAD DE LA REACCIN
En este ejercicio se observarn los efectos de la variacin de concentracin de enzima y
sustrato en la velocidad de la reaccin enzimtica. La actividad de la enzima se
detectar colorimtricamente.
MATERIAL NECESARIO
1 gradilla
11 matraces erlenmeyer de 50 mililitros
1 bureta para titulacin
11 tubos de ensaye 15 X 150
1 pipeta de 5 o 10 ml
PROCEDIMIENTO
PRIMERA PARTE: EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO
1. Coloque en su gradilla 6 tubos de ensaye de 15 X 150 y nmerelos de alguna
manera para efecto de su identificacin
2. Agregue solucin de Urea al 10% a los tubos de la siguiente manera:
Cantidad
tubo
0.5 ml
1
1.0 ml
2
2.0 ml
3
5.0 ml
4
7.5 ml
5y6
3. Agregue 4 ml e solucin amortiguadora de fosfatos a cada uno de los seis tubos
4. Agregue 4 gotas de solucin de cloruro de mercurio al tubo 6
5. Agregue agua destilada a los tubos, de la siguiente manera:
Cantidad
7.5 ml
7.0 ml
6.0 ml
3.0 ml
0.5 ml

tubo
1
2
3
4
5y6

6. Agite los tubos, golpendolos suavemente con los dedos en la parte inferior y
llvelos al bao de agua controlado a 50 C. Djelos estar por 5 minutos.
7. Despus de los 5 minutos de calentamiento agregue 0.5 ml de Ureasa al 1% a
cada uno de los seis tubos. Agite nuevamente los tubos como en el nmero 6.

8. Despus de 30 minutos y estando los tubos todava en el bao de agua a 50C,

agregue cuatro gotas de solucin de Cloruro de Mercurio a los 5 primeros tubos
9. Mezcle el contenido de cada tubo. El Cloruro de Mercurio detiene
instantneamente la accin de la Ureasa, de manera que ya no ocurrir ningn
cambio enzimtico en el contenido de los tubos.
10. Saque todos los tubos del bao de agua a 50C. Con una pipeta pase 5.0 ml del
contenido del tubo 6 (testigo) a un matraz erlenmeyer de 50 ml.
11. Agrguele 2 gotas del indicador de rojo de metilo y titule con solucin de cido
Clorhdrico 0.1 N, lentamente y agitando el matraz tomando como punto final de
la titulacin un color canela.
12. Repita los pasos 7 y 8 para los tubos 1, 2, 3, 4, y 5
Lo que observ en esta parte del ejercicio fue el efecto de la concentracin del
sustrato en la velocidad de la reaccin enzimtica. A mayor concentracin, mayor
velocidad hasta un mximo.

SEGUNDA PARTE: EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA EN

LA VELOCIDAD DE LA REACCIN
1. Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye de 15 X 150 y numrelos de alguna
forma para su identificacin.
2. Agregue 7.5 ml de solucin de urea al 10% a todos los tubos (5)
3. Agregue 4.0 ml de solucin amortiguadora de fosfatos a los 5 tubos
4. Agregue 4 gotas de Clorurao de Mercurio al 1% al tubo 5
5. Agregue agua destilada, de la siguiente manera
Cantidad
0.9 ml
0.75ml
0.5 ml

tubo
1
2
3y5

6. Mezcle el contenido de cada tubo de la manera indicada antes.

7. Lleve los 5 tubos al bao de agua a 50C
8. Despus de 5 minutos agregue solucin de Ureasa de la siguiente manera:
Cantidad
0.1 ml
0.25 ml
0.5 ml
1.0 ml
0.5 ml

tubo
1
2
3
4
5

9. Mezcle el contenido de los tubos y djelos en el bao por 30 minutos

10. Despus de los 30 minutos, agregue 4 gotas de Cloruro de Mercurio al 1% a
los primeros 4 tubos
11. Titule con solucin de cido Clorhdrico 0.1 N una alcuota de 5 ml del
contenido de cada tubo, en la misma forma que en la primera parte

12. Anote los mililitros de Ac. Clorhdrico gastados en la titulacin de cada tubo.
En esta segunda parte se observ el efecto de la concentracin de la enzima en la
velocidad de la reaccin
FUNDAMENTO DE LA REACCIN
Cul es el fundamento de la determinacin de la actividad enzimtica de la Ureasa?
Cul es el efecto de los metales en la accin de la Ureasa y porque?
De donde se aisla normalmente la Ureasa comercial?
Cules son sus conclusiones finales de este ejercicio?