Alteraes do Material Gentico

Engenharia Gentica:
-Manipulao do DNA: extrai genes e transporta-os para outras
clulas, multiplica genes e transforma em tubo de ensaio,
organismos noutros;
-Permite conhecer algumas doenas humanas;
-Oferece produtos sedutores indstria;
-Liberta a agricultura das suas dependncias em relao aos adubos e
aos pesticidas;

Ferramentas da Engenharia
Gentica
Enzimas de Restrio:
Enzimas que reconhecem determinadas sequncias de DNA e cortam
as molculas nesses locais.
Zonas de Restrio
sequncias de DNA curtas e
simtricas que se leem da
mesma forma nas duas
cadeias na direo 5 3 .

Fragmentos de Restrio
fragmentos de DNA em
dupla hlice com
extremidades em cadeia
simples.

Ligase de DNA:
Enzimas que catalisam a ligao entre fragmentos de DNA.

Vetores:
Entidade, constituda por DNA, que transfere o DNA de uma clula ou
de um organismo dador para uma clula ou organismo recetor.

Tcnicas da Engenharia Gentica

Tcnica do DNA recombinante (rDNA):
-A enzima de restrio corta a molcula de DNA do plasmdeo num
ponto especfico.
-Com enzimas de restrio do mesmo tipo abre-se outra molcula de
DNA, que funciona como dadora, e isola-se o gene que se quer inserir
no plasmdeo.
-O gene a inserir colocado em contacto com o plasmdeo,
juntamente com a ligase de DNA.
-O gene passa a fazer parte do plasmdeo que possui agora, par alm
dos seus genes, o gene estranho que lhe foi inserido, isto , possui
um DNA recombinante.
-O plasmdeo recombinante em contacto com as bactrias introduz-se
em algumas delas.
-Estas bactrias funcionam como clulas hospedeiras e aceitam o
plasmdeo, e com ele o novo gene.
-A partir do DNA recombinante, o gene inserido passa a comandar a
sntese da protena desejada.

Tcnica de DNA complementar (cDNA):

Os procariontes so organismos muito utilizados em Engenharia
Gentica como recetores de DNA estranho porque:
-so fceis de cultivar;
-tm um crescimento rpido;
-tm processos bioqumicos bem conhecidos.
No entanto no processam o mRNA e, quando recebem genes com
intres, estes no so retirados e a protena no funcional.
Os procariontes realizam a transcrio de forma ininterrupta, se o
gene inserido tivesse intres, estes tambm acabariam por ser
traduzidos, originam uma protena diferente da que se pretendia.

Formao de cDNA
-Isola-se uma molcula de mRNA funcional das clulas.
-Adiciona-se transcriptase reversa e nucletidos livres. A
transcriptase reversa catalisa a sntese e uma cadeia simples de DNA
a partir de um molde de mRNA.

-Junta-se a enzima que degrada o mRNA que serviu de molde e

DNA polimerase que catalisa a formao da cadeia complementar
do DNA.

O cDNA uma molcula de DNA sem intres que

diretamente transcrita numa molcula de mRNA funcional.

Reaes de polimerizao em cadeia (PCR):

uma tcnica para clonar DNA de modo a obter grandes quantidades
a partir de uma pequena amostra.
-O fragmento de DNA a amplificar aquecido de modo a separar as
duas cadeias da dupla hlice.
-Adicionam-se nucletidos livres e DNA polimerase resistente ao calor.
A DNA polimerase catalisa a formao das cadeias complementares
reconstituindo a dupla hlice.
-O procedimento repetido e em cada ciclo a quantidade de DNA
duplica.

DNA fingerprint ou impresses digitais

genticas:
Diferentes fragmentos de DNA movimentam-se de modo diferente
quando submetidos a eletroforese (tcnica em que determinadas
molculas so sujeitas ao de um campo eltrico num meio
poroso.

Aplicaes das Tcnicas de

engenharia Gentica:
Tcnica

Aplicaes
Investigao isolamento de genes de
organismos para estudar as suas funes a
nvel molecular.

DNA
recombinante
(rDNA)

Obteno de OGM:
-Produo de alimentos em maior
quantidade e qualidade;
-Produo de grandes quantidades de
substncias com aplicao mdica ou
farmacutica;
-Produo de substncias com aplicao
industrial;
-Biorremediao modificar organismos no
sentido de degradarem poluentes.

DNA
Obteno de cpias de genes que codificam
complementar produtos com interesse produo de
protenas humanas por procariontes.
(cDNA)

Polimerizao
por reao em
cadeia (PCR)
DNA
fingerprint

Obteno de grandes quantidades de DNA

em pouco tempo, a partir de uma
quantidade muito pequena.
Investigao criminal, forense e histrica;
Determinao da paternidade.

Terapia gnica: Consiste na introduo de genes clonados em

clulas de um organismo com o objetivo de curar uma doena.
A terapia gnica uma das mais promissoras tcnicas de tratamento
de doenas que resulta de defeitos genticos.

Vantagens dos OGM

-Tolerncia a Herbicidas Aumento da Produtividade;
-Tolerncia a Insetos Reduo dos Qumicos Usados;
-Melhoria da Qualidade dos Alimentos;
-Produo de Compostos com Interesse Econmico;
-Produo de Medicamentos;
-Acabar com a Fome Mundial;
-Plantaes em ambientes hostis.

Impactos Negativos dos OGM

-Poluio do Ambiente;
-Reduo da Biodiversidade;
-Poluio Gentica;
-Aumento das Alergias;
-Perigo para os agricultores;
-Aparecimento de novas doenas;
-Perigo para a Sade Pblica;
-Resistncia a Antibiticos;
-Insegurana na Utilizao dos Transgnicos;
-Falta de Informao;
-Problemas ticos e religiosos.

Imunidade e Controlo de Doenas

Sistema Imunitrio:
Constituio:
-Clulas;
-Tecidos;
-rgos;

Funes:
-Proteger o organismos de agressores
(Agentes patognicos e Molculas txicas)
-Destruio de clulas envelhecidas,
lesadas e cancerosas

Imunidade

Conjunto de processos fisiolgicos que permitem ao

organismo reconhecer substncias estranhas ou anormais, neutralizalas e elimin-las.

Agente patognico

Organismo vivo capaz de produzir uma

doena infeciosa num hospedeiro.
-Vrus;
-Bactrias;
-Fungos;
-Protozorios;
-Animais parasitas.

Propagao dos agentes patognicos

-Ar;
-gua;
-Alimentos;
-Espirros;

-Tosse;
-Expetorao;
-Animais picadores;
-Relaes sexuais;

Medidas de Preveno
-Espirrar ou tossir para um leno de papel;
-Lavar e desinfetar as mos;
-Uso de mscaras;
-Combate a insetos vetores;
-Uso de repelentes em zonas afetadas;
-Uso de preservativo;

Ao de Agente Patognico
-Ultrapassa diferentes barreiras do organismo e penetra nos
seus tecidos;
-Resiste aos esforos do sistema imunitrio para o neutralizar e
multiplicar-se dentro do hospedeiro;
-Destri diferentes tecidos do hospedeiro.

Vrus
-Seres acelulares (no possuem estrutura celular).
-So parasitas intracelulares obrigatrios (s manifestam
caratersticas vitais dentro de clulas vivas por eles invadidas e
utilizam a maquinaria da clula que invadem para se reproduzirem).

Reproduo dos vrus

-As glicoprotenas do invlucro viral ligam-se a recetores da
membrana da clula;
-Os componentes internos do vrus entram na clula;
-As protenas virais so degradadas;
-O DNA viral replica-se no ncleo da clula em presena de
enzimas celulares;
-O DNA viral transcrito com interveno de enzimas celulares;
-O mRNA viral migra para o citoplasma da clula hospedeira e
liga-se a ribossomas;
-Os ribossomas da clula fazem a traduo do mRNA viral e
produzem as protenas do vrus;
-Protenas formam a cpside que envolve o DNA, formando
novos vrus que abandonam a clula.
Os vrus que no possuem o invlucro nuclear entram na clula
hospedeira por endocitose.

Bactrias

As bactrias que se revelam patognicas podem atacar e destruir

as clulas animais de diversas formas.
-Podem invadir o citoplasma das clulas, onde se alimentam
e multiplicam, conduzindo destruio das clulas hospedeiras.
-Podem produzir toxinas, que provocam a alterao do
metabolismo das clulas e a sua morte.

Reproduo das bactrias

A reproduo das bactrias autnoma e realiza-se, habitualmente,
por diviso binria ou bipartio.

Sistema imunitrio
-rgos linfoides primrios Desenvolvimento e Maturao
dos leuccitos. Ex. Medula ssea e Timo.
-rgos linfoides secundrios Armazenar os leuccitos. Ex.
Bao, Gnglios linfticos, Amgdalas.
-Clulas efetoras Participar na resposta imunitria. Ex.
Leuccitos e clulas que se diferenciam a partir deles (Mastcitos e
Macrfagos).
-Outros constituintes Participar na resposta imunitria. Ex.
Anticorpos, protenas do sistema de complemento.
Nos gnglios linfticos ocorre um processo de limpeza da linfa, pois
ocorre a destruio dos agentes patognicos.

Linfcitos

Leuccitos Granulares
-Ncleo bilobado;
-Funo fagocitria, dirigida principalmente a parasitas;
-Participam em reaes alrgicas;
-Ncleo multilobado;
Neutrfi
-Funo fagocitria;
los
-Primeiros a chegar aos tecidos.
-Ncleo volumoso, de forma irregular, geralmente com o
aspeto da letra S.
Basfilo
-Grnulos enormes com histamina que podem
s
obscurecer o ncleo;
-Funo ao nvel da resposta inflamatria.
Leuccitos Agranulares
-Ncleo ovoide, em forma de rim ou ferradura;
-Circulam no sangue durante poucas horas e depois
Moncit migram para os tecidos, diferenciam-se em macrfagos
os
clulas fagocitrias muito eficientes, de grandes
dimenses;
-Funo ao nvel da resposta imunitria.
Eosinfi
los

Linfcit
os

-Ncleo grande, sendo o citoplasma reduzido a um anel

delgado em volta deste;
-Podem ser de dois tipos B e T (distinguem-se pelos seus
recetores membranares).
-Funo ao nvel da resposta imunitria.

Fagocitose
-Adeso do microrganismo membrana do macrfago;
-O macrfago emite pseudpodes englobam o microrganismo;
-O macrfago engloba o microrganismo num vacolo digestivo ao
qual se fundem lisossomas;
-As enzimas dos lisossomas digerem a bactria, destruindo-a;
-Eliminao dos corpos residuais por exocitose.

Clulas teciduais Mastcitos

-Clulas semelhantes aos basfilos, mas com origem em clulas
precursoras diferentes;
-Embora presentes nos tecidos por todo o corpo, so particularmente
abundantes na derme, nos tratos digestivo e respiratrio;
-Clulas com citoplasma repleto de grnulos, que contm
histamina, a qual promove o aumento da permeabilidade vascular;
-Funo a nvel das reaes alrgicas, da inflamao e da
expulso de parasitas.

Origem e diferenciao dos elementos

Clula
estaminal da
medula
ssea

Percursor
linfide

Linfcito
s

Percursor
mielide

Megacaric
ito

Eritroblast
o

Monoblast
o

Plaqueta
s

Eritrcito
s

Moncito

Precurso
r
granulc
ito
Eosinfil
o

Neutrfil
o

sanguneos
Caratersticas dos leuccitos que explicam as
suas potencialidades
-So clulas circulantes no sangue, na linfa intersticial ou na linfa
circulante;
-Tm a capacidade de se deformar e penetrar entre as clulas da
parede dos vasos capilares (diapedese);
-Apresentam superfcie da membrana glicoprotenas especficas que
funcionam como recetores.

Basfilo

Imunidade Inata
Mecanismo de defesa no especfico funciona de forma
idntica para diferentes tipos de agentes agressores.

Imunidade adaptativa
Mecanismo de defesa especfico dirigido contra
determinados agentes, implicando o reconhecimento desses
agressores por clulas especializadas do sistema imunitrio
(linfcitos).
Mecanismo adquirido ao longo da evoluo das espcies, s
aparecendo nos vertebrados.

Defesa no especfica
Primeira
Linha de
Defesa

Barreiras fsicas e
qumicas que impedem a
entrada de seres
estranhos.

Segunda
Linha de
Defesa

Atua aps a entrada dos

agentes agressores.

-Pele;
-Pelos das narinas;
-Mucosas;
-Secrees gstricas;
-Saliva;
-Lgrimas;
-Muco.
-Fagocitose;
-Resposta
inflamatria;
-Interfero;
-Sistema de
complemento;

Pele
-Primeira barreira mecnica e
qumica para os corpos estranhos;
-A epiderme apresenta clulas com
substncia proteica insolvel e
impermevel;
-Na camada mais externa da
epiderme existem clulas mortas
crnea;
-As secrees das glndulas
(sebcea e sudorpara) conferem
pele um pH entre 3 a 5.

Pelos das narinas

-Primeira barreira entrada dos microrganismos existentes no ar
inspirado.

Mucosas
-Membranas que recobrem o tubo digestivo, as vias respiratrias e
as vias urogenitais.
-Segregam um muco que fixa os microrganismos, dificultando o
contacto com as clulas.
-No muco existe mucina, uma substncia txica para alguns
microrganismos.

Secrees e enzimas
-Glndulas sebceas, sudorparas e lacrimais segregam
substncias txicas para muitas bactrias;
-A lisozima, enzima que se encontra na saliva e nas lgrimas, digere
a parede das bactrias, destruindo-as;
-O cido clordrico e as enzimas do suco gstrico, presentes no
estmago, destroem microrganismos que so ingeridos juntamento
com os alimentos.

Em sntese
Agente de
defesa
Pele
Secrees
cidas da

Funo
Previne a entrada de agentes agressores e
substncias estranhas.
Inibem a crescimento bacteriano da pele.

pele
Pelos nasais
Lgrimas e
saliva
Mucosas

Filtram as bactrias nas passagens nasais.

Lubrificam, limpam e contm lisozima que destri
bactrias.
Previnem a entrada de agentes patognicos.

Suco
gstrico

Concentrado em cido clordrico e protases,

destri agentes patognicos no estmago.

Resposta inflamatria
Ocorre quando os agentes patognicos conseguem ultrapassar as
barreiras de defesa primrias, o que acontece, por exemplo, quando
ocorre um golpe na pele.
-No tecido ferido, os mastcitos produzem substncias qumicas,
nomeadamente histamina, que se difundem para os capilares.
-A histamina provoca a dilatao dos capilares e aumenta a sua
permeabilidade.
-Leuccitos, primeiro os neutrfilos e depois moncitos,
atravessam a parede dos capilares para os tecidos infetados,
processo designado por diapedese.
A migrao dos leuccitos para os locais infetados deve-se a
substncias qumicas libertadas por clulas lesionadas. Esta atrao
qumica designada quimiotaxia.
-Os moncitos diferenciam-se em macrfagos e fagocitam as
bactrias e clulas mortas.
-Cicatrizao com reparao dos tecidos.

Efeitos de uma reao inflamatria

Resposta Sistmica
Quando as infees so mais graves, envolvendo reas mais vastas
do organismo, produz-se uma resposta sistmica.

Interfero
Conjunto de protenas que esto envolvidas na resposta imunitria
no especfica (embora tambm atuem na resposta imunitria
especfica).
-A clula infetada por um vrus produz interfero que libertado.
-O interfero liga-se membrana das clulas vizinhas.
-As clulas vizinhas so estimuladas a produzir protenas
antivirais, que bloqueiam a replicao do vrus.

O interfero no tem uma ao antiviral direta, dado que, no

esta substncia que bloqueia a replicao do vrus. O interfero
estimula as clulas a produzir outras protenas que impedem a
replicao do vrus.

Sistema de complemento
Conjunto de cerca de 20 protenas que so produzidas no fgado,
circulam no plasma na sua forma inativa e so ativadas por
agentes patognicos ou pela ligao de um anticorpo a um
antignio.
A ativao da primeira protena do sistema desencadeia uma cascata
de reaes, na qual cada protena do complemento atua sobre a
seguinte, ativando-a.
Aes no especficas do sistema de complemento:
-Recobrem agentes patognicos dificultando a sua mobilidade
e permitindo que a fagocitose ocorra mais facilmente;
-Provocam a lise da bactria;
-Atraem leuccitos ao local da infeo (quimiotaxia);
-Ligam-se a recetores especficos das clulas do sistema
imunitrio, estimulando a produo de molculas reguladoras e o
desencadear da resposta inflamatria.