EFECTO DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO DE

Terminalia catappa L. almendro de la india FRENTE A

RADICALES
LIBRES
INDUCIDOS
POR
TETRACLORURO DE CARBONO EN CEREBRO DE
Rattus rattus VARIEDAD ALBINUS.
Blgo. Abhel Caldern Docente de Fisiologa y Bioqumica de la Escuela de
Medicina Humana, Universidad Cesar Vallejo.
Mblgo. Patricia Torres Investigadora del Dpto. de Qumica Biolgica y Fisiologa
Animal de la Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional de Trujillo.
Msc. Orlando Pretel, Docente de Fisiologa Animal, Dpto. de Qumica Biolgica y
Fisiologa Animal de la Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional de
Trujillo.
RESUMEN
El extracto hidroalcohlico de las hojas de Terminalia catappa L.
almendro de la india fue ensayado in vivo para determinar su accin
antioxidante a nivel de cerebro en Rattus rattus variedad albinus tratadas con
tetracloruro de carbono. Se trabaj con dos grupos, el control conformado por
un subgrupo control positivo y un subgrupo control negativo a los cuales se les
administr tetracloruro de carbono 1ml/Kg de peso corporal y 2 ml de solucin
salina fisiolgica respectivamente; y, el grupo experimental conformado por dos
subgrupos tratados con el extracto hidroalcohlico de Terminalia catappa: uno
con 0.8mg/kg de peso corporal y el otro con 1.5mg/Kg de peso corporal, por
siete das. En todos los grupos se determinaron la cantidad de radicales libres en
cerebro por la tcnica de las sustancias reactivas al cido tiobarbitrico;
obtenindose en el control negativo una concentracin promedio de 9,76ug
malondialdehdo/g cerebro, en el control positivo una concentracin promedio
de 26,68ug malondialdehdo/g cerebro, y en el grupo experimental tratado con
Terminalia catappa a 0,8mg/Kg de peso corporal y 1,5mg/Kg de peso corporal,
se obtuvo una concentracin promedio de 13,64ug malondialdehdo/g cerebro y
15,80ug malondialdehdo/g cerebro respectivamente. Se encontr que el grupo
tratado con el extracto hidroalcohlico de Terminalia cattappa a la
concentracin de 0,8mg/Kg de peso corporal mostr una significativa inhibicin
de los radicales libres comparado con el control positivo.

ABSTRACT
Hydroalcoholic extract of the leaves of Terminalia catappa L.,
"Indian Almond", was tested in vivo to determine its possible reaction to free
radicals in the brains of albino Rattus rattus. Two groups, control and
experimental, were tested, the control group made up of a positive-control group
and a negative control group to which carbon tetrachloride was administered at 1
millilitre per kilo bodyweight plus two milliltres of physiological saline solution,
respectively. The experimental group was made up of two subgroups treated with
the hydroalcoholic extract of Terminalia catappa for seven days, one with 0.8
milligrammes and the other with 1.5 milligrammes per kilo bodyweight. The
quantity of free radicals in the brains was measured in all groups using
tiobarbiturate acid reactive-substances, giving in the negative-control group an
average concentration of 9.76ug cerebral mg, in the positive-control group an
average concentration of 26.68ug cerebral mg, and in the experimental groups
treated with Terminalia catappa at 0.8 milligrammes and 1.5 milligrammes per
kilo bodyweight an average concentration of 15.80ug cerebral mg respectively. It
was found that the group treated with hydroalcoholic extract of Terminalia
catappa at 0.8 milligrammes per kilo bodyweight showed a significant freeradicals inhibition compared to the positive-control group. It was found that the
hydroalcoholic extract of Terminalia catappa at 0.8 milligrammes per kilo
bodyweight showed a significant free-radicals inhibition in the rats' brains.

I. INTRODUCCIN
Desde hace varios aos se ha incrementado el uso de plantas medicinales,
con el propsito de disminuir la incidencia de enfermedades, as como tambin
contrarrestar en cierto grado la vejez y los efectos que esta conlleva (Pardo, 2003;
Hernndez y Prieto, 2005).
Las plantas son fuentes de nuevos y mas eficientes antioxidantes, a los que la
farmacologa puede recurrir para neutralizar los radicales libres, producidos por el
metabolismo celular y que estn vinculados a diversas enfermedades
(Desmarchelier y Ciccia ,1998).
Muchas de las enfermedades del hombre como cncer, arteriosclerosis,
artritis reumatoide, alzehimer, trauma cerebral izqumico e inclusive la vejez, son
producto del estrs oxidativo, esto ha sugerido la bsqueda de nuevas terapias
alternativas, evalundose extractos de plantas con resultados satisfactorios (Prez,
Snchez y Bu, 1998; Velsquez, 2000; Carbonell, 2001; Cspedes, 2003).
En los ltimos aos se ha registrado gran inters por la funcin que cumplen
los radicales libres en el organismo. Se consideran Radicales Libres a aquellas
molculas que en su estructura atmica presentan un electrn desapareado o impar
en el orbital externo, dndole una configuracin espacial que genera una alta
inestabilidad. Es una entidad qumica que posee un electrn desapareado en su
orbital externo, esto lo hace muy inestable; extraordinariamente reactivo y de vida
efmera, con una enorme capacidad para combinarse inespecficamente en la
mayora de los casos. La formacin de radical libre in vivo ocurre en la va
cataltica de enzimas, durante los procesos de transferencia de electrones que
ocurre en el metabolismo celular, o por la exposicin a factores exgenos. Con
todo, la condicin de pro-oxidante a radical libre puede aumentar debido a la
mayor generacin intracelular o por la deficiencia de los mecanismos
antioxidantes que resultan en la induccin de dao celular por los radicales libres,
este proceso es llamado estrs oxidativo (Desmarchelier y Ciccia, 1996; Prez,
Snchez y Bu, 1998; Pires y Greggi, 1999; Cspedes, 2000; Rodrguez, Menndez
y Trujillo, 2001; Hoyl, 2001; Pardo, 2003).

Existen muchas molculas que pueden disminuir el estrs oxidativo, y por lo

tanto sus efectos. Los tejidos vegetales son los principales sistemas biolgicos que
sintetizan antioxidantes como: a-tocoferol, acido ascrbico y carotenoides, pero
adems son ricos en una amplia variedad de polifenoles. Muchos alimentos de
origen vegetal son ricos en flavonoides hidroxilados y otros compuestos fenlicos
que se encuentran en estado natural en cantidades que van desde trazas hasta
gramos por kilogramo de material fresco, a los que se les ha demostrado
propiedades antioxidantes (Crozier y col. 2000; Urquiaga y Leighton, 2000;
Russo y Esperanza, 2001; Hernndez y col. 2003; Miquel y Ramrez-Bosca).
La familia Combretaceae rene numerosas especies que han sido estudiadas
por su empleo con fines medicinales, entre esta se encuentra Terminalia catappa
L. almendro de la india. Las hojas de T. catappa han sido utilizadas desde hace
mucho tiempo en la india y zonas tropicales y subtropicales, en medicina
tradicional para el tratamiento de dermatitis y la hepatitis. Hoy en da diversos
estudios

le

atribuyen

propiedades

bactericidas,

antivirales

hepatoprotectoras,

antiparasitarias

antiinflamatorias,

(antidisentericas).

Recientes

investigaciones le han otorgado propiedades antidiabetgenas. (Chu y col. 1998;

Fan y col.2003; Hernndez y col. 2003; Nagappa y col. 2003; Babayi y col. 2004;
Tang y col. 2004; Chitmanat, Tongdonmuen y Nunsong, 2005 ).
Las sustancias que le confieren estas propiedades a T. catappa son
fundamentalmente taninos hidrolizables como punicalagina, punicalina, cido
chebulagico, geranina , entre otros (Hernndez, Rojo y Olivares, 2003).
El presente estudio, estuvo orientado a determinar el efecto antioxidante del
extracto de T. catappa, frente a radicales libres inducidos por tetracloruro de
carbono en cerebro de rata.

II. MATERIAL Y MTODO

1. Material.
Hojas de Terminalia catappa recolectadas en el jardn botnico de Bellas
artes; en la Provincia de Trujillo, entre los meses de Mayo Junio del ao
2008.
Rattus rattus variedad albinus, machos, raza Holtzman adquiridas de la
Universidad Peruana Cayetano Heredia. Lima.
2. Procedimiento.
2.1. Obtencin del extracto hidroalcohlico de Terminalia catappa L.:
Las hojas de Terminalia catappa, recolectadas fueron identificadas en
el Herbarium Truxillense de La Universidad Nacional de Trujillo.
La superficie de las hojas se lav con agua corriente, luego con agua
destilada y se desengras con alcohol etlico al 70%, desecndose
completamente en estufa a 50C; luego se procedi a molerlas con la ayuda
de un molino y se tamiz hasta la obtencin de un polvo fino.
Se tom 200g de este polvo fino y luego se procedi a la extraccin de los
compuestos activos mediante maceracin, en una mezcla hidroalcohlica
de 70% de butanol y 30% de agua bidestilada, en frascos mbar de cierre
hermtico, con agitacin por 5 minutos diarios por 10 das.
Luego se filtr al vaci en papel filtro Watman N 1, evaporndose el
filtrado por ventilacin hasta la obtencin de un producto cristalino que fue
conservado en refrigeracin hasta su utilizacin (Kuklinski, 2002).
2.2. Preparacin y administracin de la dosis del extracto hidroalcohlico
de T. catappa L.
Se prepar una solucin del extracto de T. catappa de 10mg /ml en agua
bidestilada.
Dosificacin: se administr va oral mediante sonda gstrica las
concentraciones de 0,8 a un grupo y 1,5mg al otro grupo experimental del

extracto de T. catappa/Kg de peso corporal, por cuatro das consecutivos,

luego despus de media hora de la ltima dosis 8 (cuarto da) se administr
1 ml/kg de peso corporal de tetracloruro de carbono (TTC); continundose
con las mismas dosis de T. catappa del quinto al stimo da
respectivamente.
Para el control positivo: se administr va oral mediante sonda
gstrica la cantidad de 2ml de solucin salina fisiolgica (SSF) durante
cuatro das, al cuarto da despus de media hora de la administracin de
SSF se administr 1 ml/kg de peso corporal de tetracloruro de carbono,
continundose el tratamiento con SSF del quinto al stimo da
Para el control negativo: se administr va oral mediante sonda
gstrica la cantidad de 2ml de SSF/ da durante siete das.
2.3. Determinacin de radicales libres:
Se utiliz el mtodo de las sustancias reactivas al cido tiobarbitrico
(TBARS), usndose 1g de cerebro de R. rattus variedad albinus en 5mL de
solucin Krebs (NaCl: 119mM, KCl: 4.6Mm, NaHCO 3: 15mM, CaCl2:
1.5mM, MgCl2: 1.2mM. NaH2PO4: 1.2mM y glucosa: 11mM), el cual se
homogeniz, en un homogenizador mecnico, luego fue llevado a
incubacin por 30 minutos a 37oC, despus fue desproteinizado con 1mL
de cido tricloroactico al 20%, sometindose a ebullicin en bao mara
por 15 minutos para luego centrifugar a 4000 rpm por 30 minutos. Se
obtuvo el sobrenadante, el cual se separ en otro tubo de ensayo al cual se
le agreg 1mL de cido tiobarbitrico al 1% para determinar la cantidad de
radicales libres (mediante la determinacin de malondialdehdo, compuesto
formado como subproducto de la peroxidacin lipdica causada por los
radicales libres), sometindose tambin a ebullicin en bao mara por 15
minutos, para luego centrifugar a 4000 rpm por 20 minutos; obtenindose
un compuesto cromforo rosado que se midi en espectrofotmetro
a 535nm. Los valores obtenidos en absorbancia, fueron procesados,

expresndose la concentracin de malondialdehdo en ug/g de cerebro

(Desmarchelier y Ciccia , 1996; Moore y Roberts, 1998; Fan y col, 2003;
Hernndez y col., 2006).
2.4. Anlisis Estadstico de datos:
Los datos fueron analizados utilizando el ANAVA (anlisis de
varianza), adems, se utilizaron intervalos confidenciales simultneos para
efectos de tratamientos.

III. RESULTADOS

En las tablas se aprecia que en el control positivo se obtuvo la mayor

concentracin promedio de malondialdehdo (radicales libres) en cerebro

de

Rattus rattus que fue de 26,68ug/g de cerebro; en aquellos individuos que no

recibieron tratamiento, por el contrario, la menor concentracin promedio es de
9,56ug/g de cerebro y en los grupos experimentales, en los individuos a los cuales
se les administro tetracloruro de carbono y que fueron tratadas con una
concentracin del extracto de T. catappa de 0,8mg/Kg y 1.5mg/Kg de peso
corporal respectivamente.
Tabla 1: Concentracin promedio de malondialdehdo (radicales libres) en cerebro de
Rattus rattus var. albinus, en el grupo control negativo, tratado con solucin
salina fisiolgica (SSF); control positivo, tratado con tetracloruro de carbono
(TCC); y grupo experimental tratado con extracto hidroalcoholico de T.
catappa a las concentraciones de 0,8mg/Kg de peso corporal y 1,5mg/Kg de
peso corporal ms tetracloruro de carbono (TCC).

Malondialdehdo (ug/g de cerebro)

Grupo Control

SSF

TCC

9.56

26.68

p<0.05

Grupo Experimental
T. catappa
(0.8mg)
+
TCC

T. catappa
(1.6mg)
+
TCC

13.56

15.82

Figura 1: Grfico de barras que muestra la cantidad de malondialdehdo (radicales

libres) producido en los cuatro grupos de experimentacin.

11

IV. DISCUSIN

Cuando una dosis de tetracloruro de carbono (TCC) va oral entra al

organismo, en un tiempo de tres horas alcanza niveles mximos en sangre,
hgado, rin, cerebro y msculo. Un nmero de sustancias aumentan la
biotransformacin de TCC y refuerzan su intoxicacin; entre stas sustancias se
encuentran la dieta de alto grado en grasas y el etanol, particularmente se piensa
que ste ltimo es responsable de la induccin del isoenzima Citocromo P450
implicado en la bioconversin del TCC a los metabolitos que, en el tejido
inician la lipoperoxidacin (Obi y col. 2001).
El citocromo P450 participa en el metabolismo de sustratos endgenos de
importancia biolgica como el colesterol, cidos biliares, hormonas esteroidales
y cidos grasos. Adems participa en el metabolismo de sustratos de naturaleza
exgena como drogas, pesticidas, procarcingenos, anestsicos, solventes
orgnicos entre muchos otros. El TCC se metaboliza por el citocromo P450, el
cual transfiere un electrn al compuesto, producindose radicales altamente
reactivos. Este proceso de transformacin se realiza en el hgado (Chilo, 1999;
Orellana y Guajardo, 2004).
En el organismo el TCC se disocia en radical triclorometilo (CCL 3) y
radical triclorometil perxido (CClO); la unin covalente de estos radicales con
las protenas y lpidos celulares son considerados como el paso inicial de una
cadena de eventos que conducen a la lipoperoxidacin de la membrana y
finalmente a la necrosis celular. Durante el estrs oxidativo o desequilibrio redox
la produccin de radicales libres y los daos que estos pueden generar,
sobrepasan la capacidad de las clulas para eliminarlos y promover una eficiente
reparacin de sus principales molculas: ADN, protenas y lpidos. La relacin
de este fenmeno con los procesos neurodegenerativos puede estar asociado con
las propias caractersticas del cerebro; un rgano que presenta altos niveles de
cidos grasos fcilmente peroxidables, consume el 20% del oxigeno incorporado
en el torrente sanguneo y, no est especficamente enriquecido con enzimas
antioxidantes (Chilo, 1999; Agencia para Sustancias Txicas y el Registro de
Enfermedades, 2005; Almaguer y Almaguer, 2006).

En la tabla 1, se pudo observar que los animales de experimentacin

tratados con TCC, presentan un incremento en la concentracin de
malondialdehdo (radicales libres, el cual indica un dao celular) altamente
significativo, P<0.01, con respecto al grupo control negativo. En la tabla 2, en el
grupo control negativo, tratado con SSF, se observ que no existe dao celular
aparente. Tambin se pudo observar diferencias altamente significativas, P<0.01,
entre los grupos experimentales y el control positivo (tablas 1, 3 y 4), esto se
debe al efecto protector que poseen los flavonoides, polifenoles, taninos y
muchas especies de molculas presentes en el extracto de T. Catappa (Mauren y
col., 2003). Los flavonoides ejercen su accin antioxidante capturando y
secuestrando a los radicales libres, es decir , se unen a ellos donndoles un
hidrgeno y proporcionndoles por lo tanto estabilidad; los flavonoides tambin
actan inhibiendo los enzimas oxidasas que favorecen la peroxidacin lipdica
tales como la lipooxigenasa, ciclooxigenasa, mieloperoxidasa, NADPH oxidasa
y xantinooxidasa, evitando la generacin de especies reactivas de oxgeno;
tambin inhiben la fosfolipasa A2, mecanismo por el cual los flavonoides
ejercen accin antioxidante. Se seala adems que las propiedades antioxidantes
de los flavonoides estn basadas en su estructura: con un grupo o-difenlico, un
doble enlace conjugado 2-3 y grupos hidroxilos en posiciones 3 y 5 (Prez,
2003; Gao y col. 2004; Moreno, 2004; Guija, Troncoso, Guija, 2005).
No se encontr diferencias estadsticamente significativas entre los
tratamientos con T. catappa 0,8mg/Kg de peso corporal y 1,5mg/Kg de peso
corporal (Tablas 3 y 4), pero se pudo observar mayor inhibicin de la formacin
de radicales libres en el grupo que recibi el tratamiento con T. catappa de
0,8mg/Kg de peso corporal, lo que nos indica que no siempre el uso de dosis
ms elevadas proporciona mayor proteccin antioxidante; cantidades elevadas
de flavonoides pueden tener comportamiento, de cierto modo, prooxidante, ya
que pueden ocasionar una reduccin temporal del Hierro y Cobre, los cuales
sufren una autooxidacin y pueden incluso involucrarse en un proceso redox, as
como tambin pueden afectar a los componentes del sistema de defensa
antioxidante; stos metales adems generan radicales libres mediante la reaccin
de Fenton al formar el complejo Fe ATP/H2O2 (Guija, Troncoso y Guija, 2005;
Torres y col., 2007). Segn un trabajo realizado por Maureen y col, 2003,

demuestran que tanto la Punicalagina como la Punicalina molculas encontradas

en hojas de T. catappa mostraron actividad antioxidante a dosis muy bajas en un
modelo de dao heptico inducido por TCC en ratas.
Terminalia catapa L. a las concentraciones de 0.8 y 1.5mg/ Kg de peso
corporal demostr tener actividad antioxidante frente a los radicales libres
inducidos por tetracloruro de carbono, por lo que se recomienda realizar ms
estudios para determinar otras propiedades medicinales y descartar efectos
colaterales; de tal manera que sea usado como una alternativa para el tratamiento
de enfermedades ocasionadas por los radicales libres.

V. CONCLUSIONES

El extracto butanlico de las hojas de Terminalia catappa L., utilizado a

una concentracin de 0,8mg/Kg de peso corporal, disminuye los radicales libres
inducidos por Tetracloruro de Carbono en cerebro de Rattus rattus variedad
albinus.

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