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Los glucosinolatos son metabolitos secundarios de las plantas amino cidos derivados

se encuentran exclusivamente en las crucferas plantas. La mayora de las plantas


cultivadas que contienen glucosinolatos pertenecen a la familia de Brassicaceae como
las coles de Bruselas , repollo , brcoli y coliflor. estos son la principal fuente de
glucosinolatos en la dieta humana de los cuales unos 120 glucosinolatos diferentes
se han caracterizado . Los glucosinolatos y sus productos de degradacin son de
particular inters debido a sus propiedades nutritivas y antinutricionales , sus efectos
adversos potenciales en la salud , sus propiedades anticancergenas y sabor
finalmente la caracterstica y olor que le dan a muchos vegetales . En este captulo se
revisa la biosntesis , la naturaleza y la ocurrencia de glucosinolatos, su estabilidad en
los sistemas biolgicos , anlisis y efectos biolgicos incluyendo toxicidad.
MTODOS ANALTICOS
La comprensin de la participacin de los glucosinolatos y sus productos de
degradacin activos biolgicos en los diversos campos de la ciencia requiere el
desarrollo de una rpida, fiable y reproducible mtodos para su identificacin y
cuantificacin. Sin embargo, rara vez lo hace un mtodo proporcionar rapidez,
simplicidad, sensibilidad y precisin para discriminar entre todos los compuestos de
inters. Sobre todo porque no se produzca una gran cantidad de diferentes
glucosinolatos en Brassicas y el hecho de que cada uno de glucosinolatos puede
producir diferentes productos de degradacin hace que su anlisis muy complicado.
Los mtodos de anlisis se pueden dividir en aquellos para los glucosinolatos totales,
glucosinolatos individuales y los productos de degradacin. Durante las ltimas cuatro
dcadas, un mayor conocimiento de la la diversidad de los glucosinolatos, su
enzimticamente lanzado productos y factores que influyen su liberacin han dado
lugar a una multiplicidad de mtodos analticos. Griffiths et al. (1998) y Kiddle et al.
(2001) han presentado una extensa visin general de la amplia variedad de mtodos
de anlisis de glucosinolatos en el tejido vegetal.
Desde glucosinolatos coexisten con mirosinasa en la planta, como los procesos de
trituracin o corte de tejido fresco en presencia de agua iniciar una rpida hidrlisis
de estos compuestos.
Para el anlisis de glucosinolatos intactos, la inhibicin de la actividad de la mirosinasa
tanto, es esencial.
Antes de la interrupcin del material, las muestras deben ser completamente secaron
mediante secado por congelacin o congelados en nitrgeno lquido. El uso de
metanol acuoso para la extraccin, en combinacin con altas temperaturas, tambin
inhibe la mirosinasa (Heaney y Fenwick, 1993).
GLUCOSINOLATOS TOTALES
Los glucosinolatos producen cantidades equimolares de glucosa en la hidrlisis con
mirosinasa. Esto es cierto para casi todos los glucosinolatos y los mtodos
espectroscpicos para glucosinolatos totales basados en la medicin de glucosa o
sulfato liberado enzimticamente son relativamente rpida y simple de aplicar
(Schnug, 1987;. Heaney et al, 1988). Van Doorn et al. (1998) se describe una
determinacin ms especfica de la sinigrina glucosinolatos y progoitrin elevando
antisueros a estos glucosinolatos.
Medicin de los niveles totales de glucosinolatos ha recibido menos atencin debido a
la gran progreso en la metodologa analtica para glucosinolatos individuales que
conduce a mucho ms informacin til. Sin embargo, los altos costos y mano de obra

necesarios para la obtencin de glucosinolatos de datos es un hinder grave a la


generacin de grandes conjuntos de muestras, que suele ser necesario en la seleccin
de los programas de mejoramiento. Por lo tanto, el uso de tcnicas analticas rpidas
tales como espectroscopia de infrarrojo cercano (NIRS) como resultado muchas
ventajas ya que el anlisis puede llevarse a con un considerable ahorro de tiempo y
con costes relativamente bajos. Esta tcnica tiene la mayora aplicado para el
contenido en glucosinolatos en las semillas de vegetales Brassica donde estos
compuestos estn presentes en altas concentraciones significativas que las que
normalmente se encuentran en las hojas (Velasco y Becker, 1998; Fuentes et al.,
2004). Fuentes et al. (2005) han descrito la cuantificacin de glucosinolatos en hojas
de Brassica napa por NIRS. Ellos demostraron el potencial de la NIRS para predecir el
contenido total de glucosinolatos, as como los principales glucosinolatos individuales
encontrado en B. napus.
pero tiene algunas limitaciones como algunas cadenas laterales de glucosinolatos (por
ejemplo, indolilo o lado hidroxilado cadenas) producen productos de degradacin poco
voltiles o inestables.
Spinks et al. (1984) desarrollaron un mtodo de HPLC de fase inversa para el anlisis
cuantitativo de desulfoglucosinolates que es, hasta ahora, ms ampliamente utilizados.
Este mtodo utiliza un controlador on-columna tratamiento desulfatacin enzimtica de
extractos de plantas seguido por la deteccin por HPLC de la resultante
desulfoglucosinolates. Para el anlisis, desulfobenzyl o desulfosinigrin se utiliza como
interna factores de respuesta estndar y relativas se determinan con los estndares
purificadas. Validacin de perfiles cromatogrficos se lleva a cabo por correspondencia
de tiempos de retencin de glucosinolatos con extractos estandarizados de colza u
otras normas disponibles. Los glucosinolatos intactos puede ser analizado
directamente por HPLC, aunque esto a menudo da una resolucin pobre.
Desulfatacin resulta en una mejor separacin y muestras limpias y tambin hace que
los compuestos ms fcil analizar mediante tcnicas de HPLC o de espectrometra de
masas. Sistemas de HPLC utilizando un fotodiodo array (PDA) Detector es muy
sensible que permite la deteccin de los niveles de glucosinolatos en el nano-molar
gama. Mientras que los datos espectrales de desulfoglucosinolates individuales
permitirn inicial confirmacin de la clase estructural, adems de la deteccin MS
aumenta el poder discriminatorio de la tcnica an ms (Kiddle et al., 2001).
Hoy en da, la espectrometra de masas se ha convertido en una tcnica poderosa
para la cuantificacin de compuestos bioactivos en matrices biolgicas complejas; Sin
embargo, la mayora de los mtodos eran cualitativa.
Griffiths et al. (1998) reportaron una qumica a presin atmosfrica cromatografa
lquida
espectrometra de masas de ionizacin mtodo (APCI-LC / MS) para determinar
desulfoglucosinolates cuantitativamente.
Song et al. (2005) describieron el anlisis cuantitativo de los glucosinolatos en
extractos vegetales y el plasma sanguneo por electrospray de iones negativos LCMS / MS.
Tanto LC-termospray-MS y LC-APCI-MS se han empleado para desulfoglucosinolates
(Mellon et al, 2002;.. Song et al, 2005) y el ltimo se ha encontrado para dar el mejor
sensibilidad, con al menos un orden de magnitud de mejora sobre la deteccin UV y la
ventaja aadida de confirmacin estructural a partir del espectro de masas. La
sensibilidad puede ser mejorado an ms por el uso de sinttico per-deuterados
desulfoglucosinolates como interna normas.

Tian et al. (2005) mejor el mtodo LC-APCI / MS mediante el uso de lquido


chromatography-ionizacin por electrospray-espectrometra de masas en tndem (LCESI / MS / MS). Este mtodo tiene la ventaja de que los glucosinolatos no requieren
desulfonacin antes del anlisis, mientras que el lmites de deteccin son 10 veces
menor en comparacin con los mtodos de HPLC convencionales.
Lser de desorcin / ionizacin de espectrometra de masas de tiempo de vuelo
asistida por matriz (MALDITOF MS) se introdujo en 1987 y desarrollado para su uso
con voltil y grandes biomolculas (Karas et al., 1987). Tiene algunas ventajas sobre
otros mtodos que incluyen velocidad de anlisis, alta sensibilidad, buena tolerancia
hacia los contaminantes, y la capacidad de analizar mezclas complejas. Por lo tanto
MALDI-TOF MS tiene potencial para el anlisis de planta metabolitos, tanto en la
propia planta y en los productos alimenticios, como un perfil de la muestra se pueden
obtener en slo unos pocos minutos (Karas, 1996). Botting et al. (2002) aplicado
MALDI-TOF para el caracterizacin de un nmero de glucosinolatos intactos. El
mtodo se utiliza para la planta crudo extractos de examinar rpidamente perfiles
glucosinolatos. El mtodo es mucho ms rpido en comparacin con Mtodos LC-MS
y requiere mucho menos de la muestra, pero tiene el inconveniente de no ser
cuantitativa mtodo de anlisis.
Uno de los principales problemas en el anlisis de los glucosinolatos es la escasez de
alta pureza glucosinolatos cromatogrficas estndar disponibles para los
investigadores. Slo un nmero limitado de glucosinolatos estn disponibles
comercialmente. El glucosinolatos 2-propenilo (sinigrina) no es una patrn interno
adecuado debido a la presencia de este compuesto en la mayora brassicaceous
plantas. Por otro lado, benzylglucosinolate (glucotropaeolin) es comnmente no est
presente en Brassicas y se ha utilizado como un estndar interno.
3.5.3 Los productos de degradacin
La aplicacin de HPLC para la investigacin de productos de degradacin de
glucosinolatos ha sido limitado debido a la volatilidad de muchos compuestos.
Adems, tiocianatos y nitrilos son no detectable espectromtricamente.
Los isotiocianatos y nitrilos pueden ser analizados por GC, HPLC con deteccin UV se
puede utilizar para el anlisis de oxazolidinethiones y indoles. Quinsac et al. (1992)
desarrollaron un mtodo para analizar oxazolidinethiones en fluidos biolgicos con un
alto grado de selectividad. Sin embargo, HPLC encuentra ms uso en el anlisis de
glucosinolatos o desulfoglucosinolates intactas. Por identificacin y confirmacin de las
estructuras de ambas tcnicas puede ser acoplado a espectrometra de masas.
Espectroscopa de masas ha demostrado ser una herramienta importante en la
identificacin y elucidacin estructural de glucosinolatos y sus productos de
degradacin.
Zhang et al. (1992a) desarroll una cuantificacin espectroscpica de las TIC
orgnicos. Bajo leve condiciones casi todos los ITC orgnicos reaccionan
cuantitativamente con un exceso de ditioles vecinales a los dar lugar a productos de
condensacin cclicos de cinco miembros, con la liberacin de la correspondiente
aminas libres. El mtodo puede ser usado para medir 1 nmol o menos de las TIC
puros o ITC en crudo mezclas.Song et al. (2005) informaron de un mtodo LC-MS /
MS para el anlisis de las TIC y amina productos de degradacin. Los isotiocianatos
fueron pre-derivatizada y se cuantifica por ion positivo electrospray LC-MS / MS.