Universidad de Chile

Facultad de Medicina
Escuela de Kinesiologa

INTERACCIN DEL SISTEMA NITRIDRGICO EN

EL MECANISMO DE ACCIN DEL PIROXICAM Y
PARECOXIB

RODRIGO LVAREZ IBARRA

CLAUDIO OLMOS GONZLEZ

DIRECTOR DE TESIS
PROF. ASIST. FERNANDO SIERRALTA GARCA, DD.

2006

INTERACCIN DEL SISTEMA NITRIDRGICO EN EL MECANISMO DE

ACCIN DEL PIROXICAM Y PARECOXIB

Tesis
Entregada a la
UNIVERSIDAD DE CHILE

En cumplimiento parcial de los requisitos

para optar al grado de
LICENCIADO EN KINESIOLOGA
FACULTAD DE MEDICINA

por
RODRIGO ALEJANDRO LVAREZ IBARRA
CLAUDIO ROBERTO OLMOS GONZLEZ

2006
DIRECTOR DE TESIS
PROF. ASIST. DR. FERNANDO SIERRALTA G., DD.

PATROCINANTE DE TESIS
DRA. SILVIA ORTIZ ZIGA
FACULTAD DE MEDICINA
UNIVERSIDAD DE CHILE
INFORME DE APROBACIN
TESIS DE LICENCIATURA
Se informa a la Escuela de Kinesiologa de la Facultad de Medicina que la Tesis de
Licenciatura presentada por los candidatos:
RODRIGO ALEJANDRO LVAREZ IBARRA
CLAUDIO ROBERTO OLMOS GONZLEZ
Ha sido aprobada por la Comisin Informante de Tesis como requisito de Tesis para optar
al grado de Licenciado en Kinesiologa, en el examen de defensa de Tesis rendido el
Viernes 15 de Diciembre de 2006
DIRECTOR DE TESIS
PROF. ASIST. DR. FERNANDO SIERRALTA GARCA, DD.
FIRMA
COMISION INFORMANTE DE TESIS
DRA. SILVIA ORTIZ ZIGA
FIRMA
DRA. MARTA ALISTE SILVA
FIRMA
KLGO. MARCELO CANO CAPPELLACCI
FIRMA

DEDICATORIA
Rodrigo lvarez Ibarra

A mi madre por aguantarme y ensearme, gracias por la ayuda todos estos aos, no cabe
en una vida mi gratitud.
A mi padre, gracias por la confianza y de una u otra forma guiar mi camino. A pesar de los
problemas.
A mi amigo Claudio, por los lindos momentos vividos estos cuatro aos, gracias por tu
apoyo sin pedir nada a cambio.
A todos aquellos que han estado a lo largo de mi camino y se sienten parte de m.

Claudio Olmos Gonzlez

A mi padre por mostrarme que no importa cuan alta sea la montaa, si se est decidido a
alcanzar la cima.
A mi madre por entregarme su inmensa luz cada da.
A mi hermano por ensearme desde pequeo, el valor de la Superacin.
A mi amigo Rodrigo por acompaarme sin condicin en nuestro viaje fraternal.

AGRADECIMIENTOS

Claudio y Rodrigo

A Don Jos Lpez y Alejandro Correa por su constante apoyo y

colaboracin desinteresada.

Al Dr. Gianni Pinardi por compartir su experiencia y conocimientos

con nosotros

Al Dr. Fernando Sierralta por compartir su enorme riqueza como

educador y como persona, desde que tom la decisin de encabezar
este trabajo.

A todos quienes conforman el Laboratorio de Neurofarmacologa,

por hacer posible este estudio.

LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo
algesiomtrico de la formalina, primera fase (5 primeros minutos). ..............................36
FIGURA 2 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo
algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 minutos finales). .......................... 36
FIGURA 3 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo
algesiomtrico de la formalina,. primera fase (5 primeros minutos) ............................. 37
FIGURA 4 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo
algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 minutos finales)................................ 37
FIGURA 5 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ L-NAME
en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.).. 38
FIGURA 6 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ L-NAME
en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales)..38
FIGURA 7 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ L-NAME
en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.)........39
FIGURA 8 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ L-NAME
en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales)....................39
FIGURA 9 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ 7-Nitroindazol
en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.)..........40
FIGURA 10 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ 7-Nitroindazol
en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales).............40
FIGURA 11 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ 7-Nitroindazol
en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.)...............41
FIGURA 12 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ 7-Nitroindazol
en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales).41

NDICE
ABREVIATURAS.................i
RESUMEN.....ii
ABSTRACT..........iv
INTRODUCCIN.................................................................................................................1
DEFINICIN DEL PROBLEMA EN ESTUDIO ................................................................1
IMPORTANCIA DEL PROBLEMA EN ESTUDIO Y POSIBLES
LIMITACIONES...............................................................................................................1
MARCO TEORICO...............................................................................................................3
FISIOPATOLOGA DEL DOLOR........................................................................................3
1. Nociceptores.......................................................................................................................4
2. Vas y Sinpsis....................................................................................................................5
3. Vas ascendentes.....6
4. Neurotransmisores..............................................................................................................7
FRMACOS UTILIZADOS EN ANALGESIA...................................................................7
ANTI-INFLAMATORIOS NO ESTEROIDALES...............................................................8
Caractersticas Generales.......................................................................................................8
Parecoxib..13
Piroxicam..14
SISTEMA NITRIDRGICO................................................................................................14
Nos15
Regulacin.15
Nos y su interaccin con los receptores NMDA...16
Mecanismo de accin del NO...16
NO y el SNC.17
Interaccin con frmacos..17
HIPTESIS...........................................................................................................................19
OBJETIVO GENERAL........................................................................................................19
OBJETIVOS ESPECFICOS............................................................................................. ..19
MATERIALES Y METODOS.............................................................................................20
TEST DE LA FORMALINA................................................................................................20
ESTADISTICAS...22
TIPO DE INVESTIGACIN...22
OBTENCIN DE LA MUESTRA.......................................................................................22
VARIABLES........................................................................................................................23
PRESENTACIN Y ANLISIS DE RESULTADOS........................................................24
DISCUSIN.........................................................................................................................29
PROYECCIONES................................................................................................................31
CONCLUSIN.....................................................................................................................31
REFERENCIAS....................................................................................................................32
ANEXO 1 .............................................................................................................................36
ANEXO 2 .............................................................................................................................42
ANEXO 3..44

ABREVIATURAS
7 Ni: 7- Nitroindazol
AINEs: Antiinflamatorios no esferoidales
ATP: Trifosfato de adenosina
Ca: Calcio
cGMP: GMP cclico
CO: Monxido de carbono
COX: Ciclooxigenasa
COX-1: Ciclooxigenasa 1
COX-2: Ciclooxigenasa 2
COX-3: Ciclooxigenasa 3
eNOS: xido ntrico sintasa endotelial
GABA: cido gaba amino butrico
iNOS: xido ntrico sintasa inducible
IP: Intraperiotoneal
Kg: Kilo
Mg: Miligramo
NMDA: N- metil- D Aspartato
nNOS: xido ntrico sintasa neuronal
NO: xido ntrico
NOS: xido ntrico sintasa
NT: Neurotransmisores
PGs: Prostaglandinas
SC: Subcutnea
sGC: Guanidil ciclasa
SNC: Sistema nervioso central
Va NO-GMP: va nitridergica

RESUMEN
El objetivo de este estudio es evaluar el efecto antinociceptivo de los antiinflamatorios noesteroidales parecoxib y piroxicam, y su interaccin con el sistema nitridrgico. Para este
estudio se utiliz ratones de la cepa CF/1 en el test algesiomtrico de la formalina,
midindose el tiempo de lamido que realiza el ratn en su pata izquierda, sitio de inyeccin
de la formalina subcutnea, los primeros 5 minutos (primera fase) y los 10 ltimos minutos,
de 30 que dura el test (segunda fase). Para la evaluacin de las interacciones, se
construyeron curvas dosis-respuesta de los frmacos administrados con un mnimo de 6
animales por cada una de las dosis en estudio, primero individualmente, luego con LNAME, inhibidor no selectivo de la xido ntrico sintasa (NOS) y despus con 7Nitroindazol (7-NI), inhibidor selectivo de la NOS neuronal. La evaluacin de los grupos
control fue idntica a la del resto de los animales tratados. Se les inyect por va
intraperitoneal, parecoxib o piroxicam, 30 minutos antes de la administracin de la
formalina. Para estudiar la participacin del sistema nitridrgico, se administr, por la
misma va, el inhibidor L-NAME o 7-NI, 45 minutos antes de la inyeccin de formalina.
Los resultados obtenidos en este estudio muestran que no hubo diferencias significativas
entre los grupos L-NAME/Parecoxib o Piroxicam y Parecoxib o Piroxicam slo, mientras
que los resultados obtenidos con 7-NI suprimieron por completo la respuesta nociceptiva de
formalina, probablemente debido a lo potente que result ser la dosis empleada (5 mg/kg).
Por esta razn, no podemos concluir si la antinocicepcin mostrada por la interaccin del 7NI/Parecoxib o Piroxicam, se debe a un efecto sinrgico entre este inhibidor de la NOS
central y los AINEs en estudio, o solamente a la accin potente del 7-NI, sinergia que fue

ms marcada con el parecoxib, llevando los valores prcticamente a un tiempo de lamido

igual a cero.
Como conclusin, podemos afirmar que los frmacos empleados en este estudio, parecoxib
y piroxicam, no presentaron una interaccin en la accin antinociceptiva con el sistema
nitridrgico en el ensayo algesiomtrico de la formalina.

ABSTRACT
The objective of this study is the evaluation of the antinociceptive effect of the NSAIDs
parecoxib and piroxicam, and his interaction with the nitridergic system. For this study CF1 mice in the algesiometric test of formalin, were used in this test, after administration of
formalin the time of licked treated mouse did in his left leg the first 5 minutes (first phase)
and the last ten minutes of this test (second phase). To evaluate interactions, dose-response
curves were built with a minimal of 6 animals per dose, before and after injection of LNAME, non-selective inhibitor of nitric oxide sintase enzyme (NOS) and 7-Nitroindazol,
selective inhibitor of neural nitric oxide sintase enzyme (nNOS) pretreatment. The
evaluations of control groups were identical to the other study groups. The mice were
injected intraperitoneally with, parecoxib or piroxicam, 30 minutes before the formalin
shot. To evaluate the participation of nitridergic system, doses of L-NAME and 7Nitroindazol were injected intraperitoneally, 45 minutes before the formalin shot.
The results obtained in this study were, showed no significative differences among groups
injected with parecoxib or piroxicam/L-NAME and parecoxib or piroxicam alone, whereas
the results obtained with 7-NI suppress completely the nociceptive effect of formalin,
probably due to the great dose used (5 mg/kg). For this reason, we cannot conclude if the
antinocicepcin showed by the interaction of 7-NI and parecoxib and piroxicam, is caused
by a synergist effect between this nNOS inhibitor and the NSAIDs in study, or just to the
powerful action of 7-NI, synergy that was more marked with the parecoxib, taking the
values practically to a licking time equally to zero.

In conclusion, these results are not categorical in affirming that the nitridergic system
modulates the antinociceptive effect from the NSAIDs in study, on the algesiometric test
of formalin.

INTRODUCCIN
DEFINICIN DEL PROBLEMA EN ESTUDIO
En el efecto antinociceptivo del piroxicam y parecoxib, interviene el sistema nitridrgico
modulando esta accin?

IMPORTANCIA DEL PROBLEMA EN ESTUDIO Y POSIBLES

LIMITACIONES
Desde que la raza humana existe, el dolor nos ha acompaado como una sensacin
desagradable, molesta y muchas veces invalidante. Sin embargo, pese a la sensacin
dolorosa frente a determinada injuria, es un mecanismo de defensa y/o de proteccin
fundamental para evitar que se dae ms el tejido u rgano afectado por esta noxa. La IASP
(Asociacin Internacional para el Estudio del Dolor) define el dolor como una experiencia
sensorial y emocional desagradable, asociada a un dao tisular actual o potencial. Por esta
razn, probablemente el dolor debe ser uno de los temas ms investigados a nivel mundial y
uno de los que ms preocupa a los cientficos.
Los mecanismos neuromoduladores espinales del dolor se pueden estudiar mediante
la administracin de frmacos analgsicos, ya sean centrales o perifricos, y de los posibles
neurotransmisores, as como neuromoduladores que puedan intervenir en su accin, ya sean
agonistas o antagonistas, as como inhibidores de su sntesis y/o recaptacin de ellos.
Aunque existe una gran cantidad de drogas que producen analgesia, no se ha
identificado en forma completa y detallada el mecanismo de accin farmacolgico
responsable del efecto analgsico. La transmisin del impulso doloroso hacia el SNC
puede estar modulada por una o varias de las siguientes sustancias: neuropptidos
(sustancia

P,

neuroquininas,

etc.),

aminocidos

(l-aspartato,

l-glutamato,

etc.),

neurotransmisores (adenosinrgicos, adrenrgicos, colinrgicos, serotonrgicos, opioides),

y neuromediadores (prostaglandinas, citoquinas, oxido ntrico, etc.) (Miranda, 1998).

Los frmacos que ms se emplean en la prctica clnica, tanto mdica como

kinesiolgica, son los denominados analgsicos perifricos (por su principal mecanismo de
accin a nivel de la gnesis del dolor), o tambin analgsicos antiinflamatorios noesteroidales (AINEs), por sus acciones principales y estructura qumica diferente a los
corticoides, los cuales tiene una industria gigantesca en la que se reconocen diferentes
frmacos ya sea por su naturaleza, como por su accin relativamente especfica.
El presente trabajo intenta contribuir a un mayor conocimiento con respecto a la
participacin del sistema nitridrgico, en la modulacin de la expresin del dolor y cmo se
relaciona ste con los frmacos antiinflamatorios no-esteroidales.

MARCO TEORICO

FISIOPATOLOGA DEL DOLOR

Luego de realizar un diagnstico preciso, el tratamiento del dolor, es sin lugar a
dudas un importante aspecto a considerar para contribuir al bienestar del paciente;
preocupacin importante en la prctica clnica. El enfoque teraputico que se utilizar ser
ms adecuado si se conocen los mecanismos, neuromoduladores y neurotransmisores
involucrados en la conduccin del estmulo doloroso.
Como esquema general, se puede decir que para percibir un dolor es necesario:
a) Una estructura perifrica que acte como receptor
b) Una sinapsis en la mdula espinal
c) Vas de conduccin desde la mdula espinal hasta los centros superiores como
bulbo, diencfalo y corteza
d) Vas descendentes desde los centros superiores: corteza, tlamo y ncleos
reticulares, que acten como mecanismos principalmente inhibitorios, pero tambin
pueden ser facilitadores y provocar dolor. (Paeile, 2005)
En condiciones normales, las seales nociceptivas son producidas por un intenso
estmulo de las fibras terminales sensoriales aferentes A y C, por noxas qumicas, presin
y fro o calor (Chizh y cols., 2000). Las neuronas sensoriales se dividen basndose en su
histologa (tamao de la fibra, grado de mielinizacin, conexiones post sinpticas en la
mdula espinal), caractersticas histoqumicas (presencia de pptidos, canales de iones,
receptores y otros neurotransmisores) segn modalidades sensoriales y velocidad de
conduccin, que no es el objetivo detallar en este trabajo (Christie y cols., 2000). La
nocicepcin es un mecanismo a travs del cual, estmulos nocivos son transmitidos al
sistema nervioso central (SNC) (Paeile, 2005).
La sensacin del dolor que se experimenta llega al SNC el cual discrimina y analiza
la naturaleza, localizacin, intensidad y duracin de la noxa, adems recontribuir a la

evaluacin cualitativa del dolor, gracias a los diferentes haces anatmicos tales como el haz
paleoespinotalmico, el haz neoespinotalmico y haz espinoreticulotalmico (Milln,
1999).
La agresin de una noxa genera en el tejido una serie de cambios bioqumicos, los
cuales desencadenan los mecanismos del dolor. Cuando un estmulo agresor de cualquier
origen daa las membranas celulares, se inicia la sntesis en cascada de una serie de
eicosanoides (prostaglandinas, tromboxanos, prostaciclinas y leucotrienos que se sintetizan
en la zona lesionada), a partir del cido araquidnico. Este es un cido poliinsaturado que
ingresa por la dieta y pasa a formar parte de los fosfolpidos de la membrana celular. Al
hidrolizarse por la fosfolipasa A2 genera diferentes prostaglandinas y leucotrienos, por
accin de las ciclo-oxigenesas o de las lipo-oxigenasas. Las prostaglandinas (PGs) al
romper el ATP, producen cambios en el potencial de membrana, disminuyendo el umbral
de excitacin de los nociceptores y sensibilizando las terminaciones nerviosas aferentes, a
estmulos qumicos o mecnicos. Por otro lado, hay una accin directa de la prostaglandina
E y de la bradicinina sobre los nociceptores y adems hay alteracin de la micro circulacin
de leucocitos, al estimular la circulacin sangunea en la regin inflamada (Ortega, 1995).

Nociceptores
El trmino nociceptor es til para diferenciar las fibras Ab de las A y C que
corresponden a los nociceptores propiamente tales. Cuya caracterstica ms destacada es
poseer un umbral de estimulacin mas alto, en comparacin a las fibras de grueso calibre
que son de umbral muy bajo, ya que ellas transmiten el tacto suave o ligero.
La neurona perifrica o neurona en T presenta en la periferia una arborizacin
plexiforme carente de mielina llamada terminacin libre, estas no presentan especificidad
frente a un estmulo nociceptivo sino que tambin trasmiten tacto leve y presin (Dennis y
Melzak, 1977).
Se encuentran distribuidas en todo el organismo: en la piel y el tejido celular
subcutneo, vsceras, msculos y articulaciones. Son muy abundantes en el humano; en
4

efecto, se calcula un promedio de 200 por cm2, generalmente en torno a arteriolas y vnulas
(Paeile, 2005). Se diferencian de otros receptores, en que su adaptabilidad es muy baja. Y
cualquier estmulo (tacto, presin, calor, etc.) puede constituirse en una sensacin dolorosa.
En general, los agentes que activan a estos receptores se denominan sustancias
alggenas. Se distinguen dos tipos de nociceptores: nociceptores mecnicos de umbral
alto o nociceptores mecano termales, que se relacionan con el dolor agudo, breve, bien
localizado y que dura slo lo que dura el estmulo; y nociceptores polimodales o mixtos,
que se relacionan con el dolor crnico, quemante, sordo, y mal localizado (Vidal y cols.,
2004; Caterina y Julius, 1999).
Es interesante destacar que entre las neuronas perifricas existe un grupo importante
que normalmente no participa constantemente en el procesamiento de la informacin hacia
la segunda neurona, estos nociceptores son llamados silentes y se activarn
fundamentalmente en procesos inflamatorios crnicos (Vidal y cols., 2004)
Vas y Sinpsis
Un estmulo doloroso se sentir primero como dolor agudo, bien localizado,
transmitido por fibras A, seguido despus de un pequeo retardo por un dolor ondulante,
quemante, sordo, mal definido, transmitido por fibras C. Se produce aqu la transmisin
sinptica, desde la primera a la segunda neurona, que puede ser de dos tipos: a) una que es
activada por estmulos nociceptivos propiamente tal y que se llama neurona especfica
(NE); y b) otra que no presenta especificidad, neurona de rango dinmico amplio (ARD)
es multirreceptiva o de segundo orden. Esta primera sinapsis est mediada por la sustancia
P, y aminocidos, como el glutamato, entre otras sustancias (Chizh y cols., 2000).
Muchas fibras nociceptivas, antes de su ingreso a la sustancia gris de la mdula
espinal, emiten colaterales descendentes y ascendentes, constituyendo la parte ms medial
del haz de Lissauer. Estas colaterales tienen la posibilidad de formar sinapsis hasta dos
segmentos medulares superiores o inferiores al del ingreso, lo que significa que la
transmisin de una neurona primaria puede propagarse a varias races vecinas. Esta
interrelacin es de importancia pues la informacin de una neurona en T puede propagarse

a races vecinas, hecho que podra explicar en parte el dolor irradiado y el referido (La
Motte, 1977).
De importancia es tambin la sustancia gelatinosa de Rolando, que corresponde a
la lmina II de Rexed, porque existen pequeas neuronas y de alta densidad caractersticas:
las interneuronas, que de alguna manera modulan estas sinapsis. Estos hechos tienen
importancia, ya que dan una relacin anatomofisiolgica a fenmenos como el dolor
referido y a la modulacin suprasegmentaria, que pueden ejercer centros superiores sobre la
transmisin nerviosa (Paeile, 2005).

Vas ascendentes
Las segundas neuronas dan origen a tres haces ascendentes de ubicacin contra
lateral: a) el neoespinotalmico y b) el paleoespinotalmico, que conforman la va
espinotalmica y c) el espinoreticulotalmico.

El tracto neoespinotalmico de especial desarrollo en los monos sin cola y en el

hombre, es el encargado de

conducir el dolor agudo bien localizado.

Produce de

inmediato, el reflejo de retirada. El tracto paleoespinotalmico, que como su nombre lo

indica es el ms antiguo, es el responsable de los dolores difusos crnicos. Transportado
por receptores polimodales, con axones C, no producen reflejo de retirada, sino ms bien
una inmovilizacin por contraccin muscular (Pinardi, 1993).
El haz neoespinotalmico, proyecta la informacin nociceptiva hacia las reas SI y
SII de la corteza parietal somestsica para elaborar la ubicacin topogrfica del dolor
A su vez, el haz paleoespinotalmico lleva la informacin a zonas de la corteza
frontal no especfica, para efectuar la evaluacin cualitativa del dolor. El haz
espinoreticulotalmico, es el que aporta el componente emocional y afectivo del dolor, por
sus abundantes relaciones sinpticas con la formacin reticular (Paeile, 2005).

Neurotransmisores
La transmisin de informacin nociceptiva entre neuronas se realiza mediante seales
qumicas, mediadas por aminocidos y neuropptidos excitatorios e inhibitorios, los cuales son
producidos, almacenados y liberados en los terminales de aferencias primarias, entre neuronas
del asta dorsal y terminales de fibras descendentes del sistema supraespinal. Los agentes, en los
terminales centrales de aferencias primarias, incluyen aminocidos como aspartato y glutamato
los que excitan los terminales nerviosos de grandes fibras mielnicas, adems estas terminales
primarias liberan sustancias consideradas como neuromoduladores, entre los que se pueden
mencionar

la

somatostatina,

pptido

vasoactivo

intestinal,

galanina,

angiotensina,

colecistocinina, ocitocina, etc. En las neuronas propias del asta dorsal de la mdula espinal se
encuentran neuroqumicos excitatorios de nociceptores tales como sustancia P y neurotensina,
como tambin algunas sustancias inhibitorias de nociceptores como GABA, encefalinas,
endorfinas, somatostatina, y muchos otros (Chizh y cols., 2000).
Tradicionalmente, el asta dorsal medular era considerada como una simple estacin de
relevo, sin embargo hoy se postula como una compleja estructura que contiene una gran variedad
de neuronas y dispositivos sinpticos que no solo permiten la recepcin y transmisin de
aferencias sensitivas, sino que tambin un alto grado de procesamiento sensitivo que incluye la
abstraccin local, integracin, seleccin y una apropiada dispersin de impulsos sensitivos
(Herrero y cols, 2003).

FRMACOS UTILIZADOS EN ANALGESIA

Dentro del plano de la analgesia, podemos encontrar una gran variedad de frmacos
capaces de producir un efecto en la inhibicin de la transmisin dolorosa, tanto a nivel
preclnico, en animales, como a nivel clnico, en el hombre. Dentro de esos se hallan los
frmacos antidepresivos, antiepilpticos, antiinflamatorios no-esteroidales, -adrenrgicos,
serotonrgicos, nitridrgicos, colinrgicos, anestsicos locales, cannabinoides y opioides
(Christie y cols., 2000).

De todos los grupos de frmacos antes citados, los antiinflamatorios no esteroidales

(AINEs) son de los ms usados por la mayora de las especialidades mdicas, tanto en dolor
agudo como crnico, y por lo tanto, tambin los ms estudiados. Sin embargo,
independientemente de su eficacia, presentan una serie de reacciones adversas que limitan
su uso.
Los AINEs, producen varias acciones teraputicas, entre los cuales la analgsia y su
capacidad antiinflamatoria son las de mayor relevancia clnica. En este estudio se evalu la
actividad analgsica de parecoxib y piroxicam. Para ello se utilizar un mtodo
algesiomtrico agudo: el test de la formalina en ratones.
Aunque existe una gran cantidad de drogas que producen analgesia, no se ha
identificado en forma completa y detallada el mecanismo de accin farmacolgico
responsable del efecto analgsico. La transmisin del impulso doloroso hacia el SNC
puede estar modulada por una o varias de las siguientes sustancias: neuropptidos
(sustancia

P,

neuroquininas,

etc.),

aminocidos

(l-aspartato,

l-glutamato,

etc.),

neurotransmisores (adenosinrgicos, adrenrgicos, colinrgicos, serotonrgicos, opioides),

y neuromediadores (prostaglandinas, citoquinas, oxido ntrico, etc.).

ANTIINFLAMATORIOS NO- ESTEROIDALES

Son un grupo de frmacos con estructura qumica diferente, pero con acciones en comn:
analgsicos, antipirticos, antiinflamatorios y en algunos casos uricosricos, adems de ser
antiagregantes plaquetarios (cido acetil saliclico).
Caractersticas Generales
1.- Propiedades Diferenciales
Aunque la mayora de los componentes de este grupo comparten las tres acciones
que los definen (analgsico, antiinflamatorio y antipirtico), su eficacia relativa es diferente

en cada uno de ellos. A su vez la toxicidad puede coincidir con la del grupo o ser ms o
menos especfica. De ah que su uso clnico dependa tanto de su eficacia clnica as como
del grado de reacciones adversas que produzca.

2.- Mecanismo General de Accin

Los efectos teraputicos y muchas de las reacciones adversas de los AINEs se
relacionan con el efecto inhibidor de las ciclooxigenasas (COX), enzimas que convierten el
cido araquidnico en endoperxidos y luego en prostaglandinas y tromboxanos. Algunos
de estos eicosanoides participan en el proceso de la inflamacin, la fiebre y el dolor por lo
que la inhibicin de su sntesis por los AINEs es responsable de su actividad teraputica,
aunque dada su participacin en determinados procesos fisiolgicos, dicha inhibicin es
tambin la causa de diversas reacciones adversas caractersticas de estos frmacos (Florez y
cols., 2003).

Los AINEs inhiben las COXs, y actualmente se describen la existencia de tres

isoformas de estas enzimas: COX-1, COX-2 y COX-3. La COX-1 es de expresin
constitutiva, producto de un gen que transcribe en forma estable y continua y estando
adems implicada en los procesos de proteccin de la mucosa gstrica, funciones renales y
activacin plaquetaria. La COX-2, de expresin inductible y que resulta de un gen con un
elevado nivel de regulacin, y cataliza la produccin local de prostaglandinas en
situaciones tanto fisiolgicas como patolgicas, basalmente su expresin est restringida,
aunque se detectan niveles elevados en sistema nervioso central y corteza renal. Adems, la
expresin de COX-2 es inducida por diversos mediadores asociados con la inflamacin y
crecimiento celular, desempeando un rol esencial en la inflamacin, fiebre, dolor y
proliferacin celular (Florez y cols., 2003). La COX-3 es codificada del mismo gen de la
COX-1. En el hombre es abundante en el tejido cardaco y la corteza cerebral. En estudios
con canes se comprob que la COX-3 es inhibida selectivamente por dipirona y
acetaminofeno, y es potencialmente inhibida por algunos otros AINEs. Se sugiere que esta

tercera forma de COX aparece 48 horas despus de iniciado el proceso inflamatorio y esta
involucrada en la biosntesis de mediadores antiinflamatorios endgenos (Gonzlez y cols.,
2002).
La mayora de los AINEs actualmente disponibles inhiben, a concentraciones
teraputicas, ambas isoformas de COX. Algunos AINEs, como el parecoxib y nimesulida
exhiben una selectividad preferencial por la COX-2. Se ha sugerido que el rofecoxib y el
celecoxib parecen inhibir exclusivamente la COX-2 (Florez y cols., 2003).

3.- Acciones farmacolgicas

3.1.- Accin Analgsica
La actividad analgsica de los AINEs es de intensidad baja a moderada, con un
techo analgsico inferior al de los opioides, no producen alteracin de la percepcin o
sensacin. Los AINEs se prescriben para dolores caracterizados por una participacin
destacada de inflamacin aguda o crnica, como los dolores articulares, musculares,
dentarios y cefaleas. La accin analgsica de los AINEs tiene lugar tanto en tejidos
perifricos, con la inhibicin la sntesis de prostaglandinas, y a nivel central en el SNC,
inhibiendo preferentemente la COX-3.

3.2.- Accin antipirtica

La fiebre es una respuesta autnoma, conductual compleja y coordinada que se
desencadena ante la existencia de una lesin, inflamacin, infeccin, tumores, rechazo de
tejidos, etc., y tienen dos objetivos: alertar sobre una situacin anmala y potencialmente
lesiva, y poner en marcha una serie de mecanismos fisiolgicos para la defensa del
organismo. Su signo cardinal es la elevacin de la temperatura corporal del orden de 1 a 4
C (Florez y cols., 2003). Aunque todos los AINEs tiene la capacidad de ser antipirticos,
por inhibir la PG E2, el ibuprofeno y el paracetamol son los que se utilizan en clnica para
esos propsitos.

10

3.3.- Accin Antiinflamatoria

La inflamacin es una respuesta fisiopatolgica con que cuenta el organismo para
defenderse frente a agresiones producidas por una gran variedad de estmulos (p. ej.,
infecciones, procesos isqumicos, traumas de diverso ndole, etc.) aunque, en ocasiones, su
aumento y permanencia en el tiempo son lesivos para el organismo. La respuesta
inflamatoria se puede dividir en tres fases en las que intervienen mecanismos diferentes:
una Fase aguda, cuyos signos principales son la vasodilatacin local y el aumento de la
permeabilidad capilar; una Fase sub-aguda, en la que se produce infiltracin de clulas
fagocticas y leucocitarias; una Fase crnica, en la cual hay signos de degeneracin y
fibrosis de tejidos afectados (Florez y cols., 2003).
La capacidad de los AINEs para reducir la inflamacin es diferente entre un AINE y
otro, son ms eficaces frente a inflamaciones agudas que crnicas. Al inhibir la sntesis de
PG y tromboxanos, los AINEs reducen su actividad sensibilizadora de la terminaciones
sensitivas, as como la actividad vasodilatadora y quimiotctica, interfiriendo as en uno de
los mecanismos principales de la inflamacin (Florez y cols., 2003).
3.4.- Accin Antiagregante Plaquetaria
No es propia de todos los AINEs. Es producida fundamentalmente por la aspirina
(cido acetilsaliclico) inhibiendo la COX-1 de manera irreversible (Handin y Loscalzo,
1992). Por otra parte la aspirina en bajas dosis tiene un efecto positivo en la profilaxis de
fenmenos tromboemblicos coronarios y cerebro vasculares (Paeile, 2005)

3.5.- Accin Uricosrica

Es consecuencia de la inhibicin del transporte de cido rico desde de la luz del tbulo
renal hasta el espacio intersticial, es un proceso apreciable slo con algunos AINEs y a
dosis elevadas.

11

4.- Reacciones Adversas comunes

4.1.- Gastrointestinales
El mecanismo involucrado es el de la inhibicin en la sntesis de PGE1 y PGE2, las
cuales inhiben la secrecin gstrica y promueven la secrecin de mucus en el aparato
digestivo. Son frecuentes los efectos menores (15-25%) como diarrea, dispepsia, pirosis,
gastritis, o estreimiento. Tambin producen lcera pptica y duodenal.
4.2.- Renales
Los AINEs, debido al bloqueo de la sntesis de PGs, pueden disminuir el flujo renal
y la filtracin glomerular, tambin producen retencin de sodio, agua y potasio, causando
problemas por desbalances de electrolitos. La complicacin ms importante es la
insuficiencia renal aguda.
4.3.- Hematolgicos
Aunque su frecuencia es baja, el amplio uso de los AINEs y la gravedad de alguna
de ellas como la anemia aplsica obliga a tenerlas en cuenta. Alguna de estas reacciones
estn en relacin con las propiedades mencionadas anteriormente, como un efecto en
exceso de la actividad antiagregante plaquetaria. Tambin pueden ocurrir reacciones
adversas de hipersensibilidad (Florez y cols., 2003).
4.4.- Hipersensibilidad
Aparecen en alrededor del 1 a 2% de los pacientes bajo tratamiento con AINEs este
tipo de reacciones (como rinitis alrgica, asma bronquial, hipotensin). Pueden ser de
carcter alrgico, de mecanismo inmunolgico con anticuerpos, o seudo alrgico, que son
ms frecuentes y relacionado con la inhibicin de la sntesis de PGs en conexin con una
sensibilidad individual especial.

12

Parecoxib
Dentro de los AINEs, ste frmaco pertenece al grupo de los inhibidores selectivos de la
COX-2, estos producen a concentraciones teraputicas, una inhibicin selectiva de la
COX-2, con lo que se evitan los efectos secundarios ms frecuentes e importantes de los
AINEs (toxicidad gastrointestinal, renal y problemas hemorrgicos) relacionados con la
inhibicin de la COX-1. (Florez y cols., 2003)
Poseen actividad analgsica, antiinflamatoria y antipirtica comparable a la de los AINEs
convencionales. No poseen efecto antiagregante plaquetario, al no inhibir la sntesis del
tromboxano dependiente de la COX-1 y s la de prostaciclina, dependiente de la COX-2.
Tampoco poseen efecto uricosrico.
Son claramente menos lesivos que otros AINEs para la mucosa gastrointestinal, pero no son
totalmente inocuos. En ocasiones en su administracin crnica se han descrito gastritis,
lceras y hemorragias. Su uso est limitado, con preferencia sobre el resto de los AINEs a
los pacientes con riesgo elevado de padecer reacciones adversas gastrointestinales serias.
Los efectos adversos ms frecuentes son: prurito, dolor abdominal, diarrea, dispepsia,
flatulencia, ostetis alveolar, mareo, insomnio, faringitis, rinitis, sinusitis, infeccin del
tracto respiratorio superior, edemas.
Presentan hipersensibilidad cruzada con otros AINEs. Est contraindicado su uso en
pacientes con alergia a sulfonamidas o a salicilatos o AINEs. Tambin en pacientes que
hayan experimentado asma, rinitis aguda, plipos nasales, edema angioneurtico, urticaria
u otras reacciones de tipo alrgico despus de tomar AINEs. En pacientes afectos de lcera
pptica activa o hemorragia gastrointestinal, enfermedad inflamatoria intestinal,
insuficiencia cardiaca grave (por la posible retencin de lquidos y edemas), insuficiencia
heptica grave, o insuficiencia renal grave.

13

Piroxicam
Pertenece al grupo de los oxicams que son cidos enlicos que se introdujeron a finales de
los aos setenta como AINEs de vida media larga que permitan slo una dosis diaria, esto
es ventajoso para el tratamiento de procesos inflamatorios y en dolores crnicos. Dentro de
este grupo el ms usado y el primero en ser introducido en la teraputica es el piroxicam.
(Florez y cols., 2003)
El piroxicam posee actividad antiinflamatoria, analgsica, antipirtica y antiagregante
plaquetaria. Sufre una importante recirculacin entero heptica que condiciona una
semivida de eliminacin prolongada de aproximadamente 50 horas. Se metaboliza
ampliamente por medio de reacciones de hidroxilacin, de manera que tan slo el 5-10 por
ciento de la dosis administrada se elimina sin metabolizar.
Las reacciones adversas ms frecuentes son las de localizacin gastrointestinal.
Ocasionalmente puede producir edema, prurito, erupciones exantemticas, incremento de
los valores de creatinina srica y de los valores de nitrgeno ureico en sangre, disminucin
de hemoglobina, cefalea, mareos, malestar general y somnolencia.
Est indicado para el tratamiento de enfermedades reumticas como artritis reumatoide,
artritis y espondilitis anquilosante, con slo una dosis de 20 mg/da. Tambin se emplea en
la inflamacin no reumtica (bursitis, capsulitis, tendinitis), en la dismenorrea primaria y en
el ataque agudo de gota. En tratamientos agudos llegan a emplearse 40 mg/da durante 3-4
das. Debe administrarse conjuntamente con las comidas para paliar la posible irritacin
gstrica.

SISTEMA NITRIDRGICO
El xido ntrico (NO) es una pequea molcula que se sintetiza en las clulas del
organismo a partir del aminocido L-arginina y participa como neurotransmisor en el SNC

14

y perifrico entre otras acciones, por lo que tendra una accin neuromoduladora
(Esplugues, 2002). Esta molcula es sintetizada por la xido ntrico sintasa (NOS)
NOS
Esta enzima presenta 2 dominios, un dominio reductasa, con un lugar reconocido por la
calmodulina; y un dominio oxigenasa, con un lugar de unin para L-Arginina (Florez y
cols., 2003).
Existen 3 isoenzimas de la NOS, las cuales presentan diferente localizacin y regulacin:
-

NOS neuronal (nNOS): localizada en neuronas del SNC y perifrico, productora de

un NO neurotransmisor.

NOS endotelial (eNOS): presente en las clulas endoteliales, clulas mesangiales

renales y plaquetas, por lo tanto relacionada con la regulacin de la hemostasia
vascular.

NOS inducible (iNOS): se expresa en muchas clulas cuando entran en contacto

con citoquinas y/o endotoxinas que sintetizan gran cantidad de NO con efecto
citotxico (Florez y cols., 2003).

Regulacin
La isoforma nNOS que ser intervenida en la presente investigacin, se expresa de
forma constitutiva respondiendo a diversos estmulos y producen cantidades pequeas de
NO. Se han identificado 5 tipos de nNOS, de los cuales la nNOSa es la que tiene ms
accin en el SNC (Esplugues, 2002).
El regulador ms importante de la nNOS es el Ca2+ citoslico, el cual se asocia a la
calmodulina, estimula el nNOS, a diferencia de la iNOS que es independiente del Ca2+, la
separacin del Ca2+ con la calmodulina inactiva a la nNOS (Florez y cols., 2003).
Se describe tambin que existe una estimulacin postsinptica de los receptores de
NMDA por un neurotransmisor excitatorio, como el glutamato. Por ltimo el NO efecta
una retroalimentacin negativa que disminuye la accin de esta enzima, actuando sobre los
receptores NMDA (Esplugues, 2002).

15

NOS y su interaccin con los Receptores NMDA

Dentro de las neuronas, la enzima NOS se puede encontrar en el citosol, pero
tambin integrada en diferentes membranas celulares. Parece ser que durante la liberacin
del xido ntrico la enzima se localiza en la membrana plasmtica (por translocacin de la
enzima citoslica a la membrana), en ntima asociacin con receptores de glutamato del
tipo NMDA (estos receptores forman canales inicos permeables al calcio, de manera que
cuando unen glutamato y la neurona est despolarizada, se produce la apertura del canal
con el consiguiente influjo de calcio). Esta estrecha asociacin permite una va directa del
calcio a travs del receptor NMDA hasta la enzima NOS y la liberacin rpida del xido
ntrico (Herman y cols., 1995).
Mecanismo de Accin del NO
El NO slo se sintetiza en respuesta a estmulos, difunde a travs de las membranas
biolgicas ah reacciona con metales de transicin, amina, grupos tiol, radicales libres como
oxgeno y sper xido. Su accin depende principalmente de la disponibilidad de radicales
libres donde acte. Su principal regulador es el mismo NO el cual activa principalmente la
guanidil ciclasa (sGC), la que aumenta los niveles de GMP cclico (cGMP). Esta
distribucin de sGC y cGMP es complementaria a la de nNOS. (Esplugues, 2002).
Nuevas investigaciones demuestran que el NO regula el consumo de O2
mitocondrial inhibiendo a la citocromo oxidasa. Este efecto es competitivo con el oxgeno y
reversible, por lo que sera un regulador crucial en la generacin de energa (Esplugues,
2002).

Adems se relaciona con varios NT, entre los cuales se destacan: opioides,

acetilcolina, noradrenalina, serotonina, glutamato, GABA, ATP, dopamina, CO, y

endotelina. Los mecanismos responsables no estn claros, pero la S-nitrosilacin de los
receptores gatillan la cascada de fosforilacin de la protena GMP-dependiente, la cual
regula la energa neuronal y el efecto modulador de transporte de los neurotransmisores
(Esplugues, 2002).

16

NO y el SNC
El NO es un mensajero intercelular que eleva los niveles de cGMP y tambin activa
los receptores de glutamato. Se encuentra en casi todas las zonas del SNC. Por su parte, la
nNOS tambin se encuentra en una gran cantidad de zonas del SNC pre y post sinpticas y
est relacionada con la plasticidad sinptica, neurotoxicidad, excitacin neural,

modulacin del dolor (Esplugues, 2002).

En relacin a la percepcin del dolor, el NO est implicado en varias vas tanto
perifricas como centrales. Los reflejos nociceptivos involucran la interaccin del NO con
los receptores NMDA antes mencionados y establece que la sntesis de NO aumenta la
facilitacin espinal de los input aferentes de los comportamientos de respuesta. La
inhibicin del NO tiene un efecto antinociceptivo cuando se estimulan los terminales
nerviosos perifricos qumicos y en modelos de hiperalgesia o dolor visceral. A la inversa,
el bloqueo de la sntesis de NO exacerba el dolor en problemas de hiperalgesia mecnica
(Hernandez, 2005).

Interaccin con frmacos

El NO puede ser inhibido o inducida su sntesis con diversos frmacos:
-

Inhibidores de la NOS: actan en diferentes sitios de unin de la enzima.

1.

Existe una familia del L-NAME, el cual compite con la L-arginina por el
sitio de unin y produce inhibicin. Actan preferentemente en procesos con
gran cantidad de NO inhibiendo la iNOS. Al no ser inhibidores especficos
causan gran cantidad de efectos colaterales como por ejemplo el aumento de
la presin arterial (Florez y cols., 2003).

2. El 7-nitroindazol es un inhibidor selectivo de la nNOS. El desarrollo de este

ha permitido explorar in vivo los posibles roles que cumple el NO liberado
por las neuronas, evitando la respuesta hipertensiva que mostraban los
inhibidores inespecficos. Para el presente estudio se utilizar dicho
inhibidor (Nanri y cols., 1998).

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Donantes de NO: conjunto de sustancias que son capaces de liberar NO tras su

administracin en sistemas biolgicos (Florez y cols., 2003).

18

HIPTESIS
La actividad analgsica producida por parecoxib y/o piroxicam en sus diferentes
dosis, est relacionada con el sistema nitridrgico en el ensayo algesiomtrico agudo
experimental de la formalina en ratones de la cepa CF/1.

OBJETIVO GENERAL
Evaluar la relacin de la actividad antinociceptiva de parecoxib y piroxicam en el
sistema de la va NO-GMP cclico, en el ensayo algesiomtrico agudo experimental de la
formalina.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Evaluar el componente de la va NO-GMP cclico, por el pretratamiento con LNAME, en la actividad de parecoxib y piroxicam, mediante el test de la formalina
en ratones de la cepa CF/1.

Evaluar el componente de la va NO-GMP cclico, por el pretratamiento con 7Nitroindazol, en la actividad de parecoxib y piroxicam, mediante el test de la
formalina en ratones de la cepa CF/1.

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MATERIALES Y MTODOS
Se usaron ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) machos y hembras, de 28 a 30
gramos de peso, los cuales fueron criados de acuerdo a las condiciones estndar
internacionales de experimentacin, a temperatura, presin y humedad adecuados,
sometidos a 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, procurando no sobrepasar el numero
de 9 cras. (Sufra, 1998). Luego fueron habituados al ambiente del laboratorio al menos dos
horas antes del experimento, teniendo libre acceso a comida y agua durante ese lapso de
tiempo, para evitar ansiedad y conductas de exploracin durante la realizacin del test. El
cual se realiz de acuerdo a un protocolo aprobado por la Comisin de tica de la Facultad
de Medicina (cada animal recibi solamente una dosis de las drogas, las observaciones
fueron efectuadas en forma ciega y randomizada). Los animales se sacrificaron despus del
experimento mediante dislocacin cervical.
TEST DE LA FORMALINA
Los animales controles fueron inyectados con solucin salina al 0.9 % y los
animales del grupo control/L-NAME y del control/7-Nitroindazol, con una concentracin
de 5 mg/kg de peso. Para estudiar la participacin del sistema del nitridrgico, se
administr, por va intraperitoneal 7-nitroindazol (5 mg/kg), un inhibidor selectivo de la
NOS, especficamente la nNOS, 45 minutos antes de la inyeccin de formalina, o LNAME (5mg/kg), un inhibidor no selectivo de la NOS, 45 minutos antes de la inyeccin de
formalina. Luego, los ratones fueron inyectados por va intraperitoneal (ip) con parecoxib
(0.3, 1, 3 y 10 mg/kg ) y con piroxicam (1, 3, 10 y 30 mg/kg), 30 minutos antes de la
administracin de la formalina, es decir 15 minutos despus de la inyeccin del inhibidor
nitridrgico.
Los frmacos se administraron por va intraperitoneal (ip) en un volumen constante
para todos los frmacos empleados, de 10 ml/kg y el ensayo de la formalina se realiz al
momento de obtenerse el efecto mximo de cada droga.

20

La evaluacin de la actividad antinociceptiva se efectu utilizando el test

algesiomtrico de la formalina, induciendo el estmulo doloroso. Para ello se realiz una
inyeccin subcutnea de 20 L de una solucin de formalina (formaldehdo diluido al 5
%) en la superficie dorsal de la pata izquierda del animal (Abbott y cols, 1995).
Los ratones se colocaron en un cilindro diseado para la observacin y se cont el
tiempo total que ellos se laman la pata inyectada durante los 5 minutos inmediatos a la
inyeccin de formalina, cabe destacar que el evaluador contabiliza slo el lamido en la
pata izquierda del ratn en la zona sin vellos, indicador real de dolor. El lamido en la parte
superior con pelos de la pata y el resto del cuerpo no es contabilizado, debido a que no es
atribuible actividad nociceptiva, sino a conductas de higiene propias de la especie
(Huskaar y cols, 1985). . La conducta ms especfica de manifestacin de dolor es el
aumento de la incidencia de autotoma, en donde el animal rasca y muerde el miembro
denervado y anestesiado. Signos ms generales de dolor espontneo incluyen diferencias
en el patrn de sueo, conducta exploratoria, estado nutricional y conducta social
(Mandegary y cols, 2004).
Por medio de cronmetro digital, se contabiliz la fase algsica aguda (primera
fase). Posteriormente transcurren 15 minutos sin contabilizar, debido a que el ratn se
encuentra en un perodo de quietud. Luego se cont por 10 minutos, a partir de los 20
minutos de la inyeccin y hasta los 30 minutos, el tiempo total durante el cual los animales
se laman la pata inyectada, por medio de cronmetro digital y que corresponde a la fase
inflamatoria y que mide el dolor crnico (segunda fase) (Abbott y cols, 1995).
Para la evaluacin de las interacciones, se construyeron curvas dosis-respuesta de
los AINEs administrados por va intraperitoneal con un mnimo de 6 animales por cada una
de las curvas, de al menos 4 dosis logartmicas diferentes y crecientes, antes y despus del
pretratamiento con L-NAME y con 7-Nitroindazol de los animales.

21

ESTADISTICAS
Para la evaluacin de las drogas, se compar el efecto del frmaco antes y despus
de la administracin tanto del L-NAME y del 7-Nitroindazol, y la significacin estadstica
fue determinada por pruebas t de Student y anlisis de varianza (ANOVA). La significacin
fue considerada a un nivel de 5%.
Para el anlisis estadstico, se utiliz el programa PRIMER, perteneciente al
Laboratorio de Neurofarmacologa Facultad de Medicina de la Universidad de Chile.

TIPO DE INVESTIGACIN
El proyecto utiliza un estudio del tipo explicativo con un diseo experimental de
laboratorio con post-prueba solamente y grupo control.

OBTENCION DE LA MUESTRA
La seleccin de los animales se realiz en forma randomizada y la muestra es del
tipo probabilstica.

22

VARIABLES
PRIMERA VARIABLE

Definicin conceptual: expresada como la interaccin entre el tipo de inhibidor

nitridrgico utilizado y la actividad analgsica de parecoxib y de piroxicam, es decir, si la
inhibicin selectiva y no selectiva de la NOS, influye en el mecanismo de accin
antinociceptivo de los AINEs en estudio.

Definicin operacional: esta variable se medir a travs de un anlisis de las curvas dosis
respuesta de los frmacos administrados va ip.

SEGUNDA VARAIBLE
Definicin conceptual: est expresada como el efecto antinociceptivo del parecoxib y
piroxicam, entendindose por efecto antinociceptivo, a la disminucin de la actividad
dolorosa, expresada por el animal por su lamido de la extremidad inyectada por la solucin
alggena de formalina va sc. La escala de medicin de la variable es de razn y
proporcin.

Definicin operacional: Este efecto se evaluar utilizando el test algesiomtrico de la

formalina.

23

PRESENTACION Y ANALISIS DE RESULTADOS

Para la comparacin de los grupos de estudio con el grupo control salino, se utiliz la
Prueba T (P value < 0,05). Los resultados obtenidos de las mediciones, se acompaan de su
respectivo Error Estndar (ES). Los mismos son presentados en el Anexo 3.
NS: resultados estadsticamente no significativos
p<0.05: resultados estadsticamente significativos

Grupo Control Salino

En el grupo control con suero fisiolgico al 0.9%, se obtuvo durante la primera fase
(0 a 5 minutos), un tiempo promedio de lamidos de 126.38 8.48 segundos. En la segunda
fase (20 a 30 minutos) se obtuvo un tiempo promedio de lamidos de 155.65 10.20
segundos.
Grupo control L-NAME
(Resultados comparados con respecto al Control Salino)
En este grupo durante los primeros 5 minutos, se registr un tiempo promedio de
lamidos de 113,5 15,41 segundos (NS) y durante los ltimos 10 minutos (segunda fase),
el tiempo promedio de lamidos fue de 94 12,91 segundos (p<0.05).

Grupo control 7-Nitroindazol

(Resultados comparados con respecto al Control Salino)
En este grupo se obtuvo en la primera fase un tiempo promedio de lamidos de 1,67
1,09 segundos (p<0.05). En la segunda fase (20 a 30 minutos) se obtuvo un promedio de
lamidos de 0 0,00 segundos (p<0.05).

24

Grupo Parecoxib
(Resultados comparados con respecto al Control Salino)
En la dosis de 0.3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 84.5 16.72 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 117.25 13.2 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 1 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 55.83 12,82 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 126 12.66 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 36.4 15.64 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 119.33 12.5 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 30 10.02 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 81.83 27.88 segundos
(p<0.05).
Grupo Piroxicam
(Resultados comparados con respecto al Control Salino)
En la dosis de 1 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 92.30 9.61 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 99.50 14.85 segundos
(NS).
En la dosis de 3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 81,83 16.71 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 103.75 20.25 segundos
(NS).

25

En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 71.33 19.98 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 94.86 16.36 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 30 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 33.20 18.58 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 96.20 23.44 segundos
(p<0.05).

Grupo Parecoxib- L_NAME

(Resultados comparados con respecto al Grupo Parecoxib)
Cabe recordar que en este grupo se inyect previamente una dosis de 5 mg/kg de
L_NAME.
En la dosis de 0.3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 87.50 10.10 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 101.20 17.05 segundos (NS).
En la dosis de 1 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 68 12.74 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 47.17 14.07 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 64.33 12.40 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 41.67 13.77 segundos
(p<0.05).

En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 78 12,64 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 40.16 20.26 segundos
(p<0.05).

26

Grupo Parecoxib- 7-Nitroindazol

(Resultados comparados con respecto al Grupo Parecoxib)
Cabe recordar que en este grupo se inyect previamente una dosis de 5 mg/kg de 7Nitroindazol.
En la dosis de 0.3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 2 1.60 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 0 0.00 segundos (p<0.05).
En la dosis de 1 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 2 1.50 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 0 0.00 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 3.17 1.45 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 0 0.00 segundos (p<0.05).

En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 2.50 12.64 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 0 0.00 segundos (p<0.05).

Grupo Piroxicam- L_NAME

(Resultados comparados con respecto al Grupo Piroxicam)
Cabe recordar que en este grupo se inyect previamente una dosis de 5 mg/kg de LNAME.
En la dosis de 1 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 83 12.06 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 77.25 14.80 segundos (NS).
En la dosis de 3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 89.83 8.15 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 69.75 19.78 segundos (NS).

27

En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 78.83 5.92 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 47 12.72 segundos (NS).

En la dosis de 30 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 61 11.41 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 42 19.06 segundos (NS).
Grupo Piroxicam 7 Nitroindazol
(Resultados comparados con respecto al Grupo Piroxicam)
Cabe recordar que en este grupo se inyect previamente una dosis de 5 mg/kg de 7Nitroindazol.
En la dosis de 1 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 37 4,78 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 17,17 17,10 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 17 6,68 segundos (p<0.05) y en la segunda fase fue de 0,001 16,89 segundos
(p<0.05).
En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 11,2 4,68 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 0,6 0,60 segundos (p<0.05).
En la dosis de 30 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue
de 2,4 1,47 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 4 2,73 segundos (p<0.05).

28

DISCUSIN
Los principales efectos teraputicos, as como los efectos adversos de los AINEs se
pueden explicar por su efecto inhibidor de las ciclooxigenasas (COX), enzimas que
convierten el acido araquidnico en prostaglandinas (PG) y tromboxanos. Actualmente se
ha demostrado la existencia de tres isoformas de COX, 1, 2 y 3, con funciones fisiolgicas,
patolgicas y ubicacin bien definidas (Chandrasekharan, 2002, Florez, 2003).
La mayora de los AINEs actualmente disponibles inhiben a concentraciones teraputicas,
en forma no-selectiva ambas isoformas de COX, la 1 y la 2, como lo hace el piroxicam,
pero existen AINEs selectivos en su accin sobre las COX-2, como el parecoxib.
El comportamiento de los AINEs en estudio, piroxicam y parecoxib, demostraron
por la curva dosis-respuesta obtenida, su claro efecto analgsico en el test algesiomtrico de
la formalina, corroborando un sinnmero de estudios al respecto. Cabe hacer notar que a
dosis equimolares, la accin antinociceptiva del parecoxib es casi el doble de efectiva que
la accin del piroxicam. Esta diferencia en efectividad antinociceptiva, se explica en parte
por su accin selectiva a nivel de la isoforma COX-2, frente a una noxa de tipo
inflamatorio, como sera el caso de la sustancia alggena utilizada en este test
algesiomtrico (formalina subcutnea).
Por otro lado, es sabido que el oxido ntrico se sintetiza por tres isoformas de oxido
ntrico sintasa (NOS) con funciones y ubicaciones diferentes, y que participa como
neurotransmisor en el SNC y perifrico, siendo la nNOS (neuronal) la mas involucrada en
el proceso de neurotransmisin del dolor a nivel central, interactuando con los receptores de
NMDA y facilitando los input aferentes espinales sobre los reflejos nociceptivos (Espluges,
2002).
Al utilizar L-NAME, un inhibidor no especifico de la NOS, la inhibicin del NO
tiene un efecto antinociceptivo cuando se estimulan los terminales nerviosos perifricos
qumicos y en modelos de hiperalgesia o dolor visceral, pero en cambio exacerba el dolor
en problemas de hiperalgesia mecnica (Hernandez, 2005). En este estudio el L-NAME no
produjo un efecto antinociceptivo, pese a que el test usa un estimulo qumico perifrico
(formalina), y solo logra un cambio significativo en la segunda fase (inflamatoria del test)
revirtiendo el efecto algsico.

29

Con respecto a la interaccin de L-NAME con los AINEs, no se obtuvo ningn cambio
significativo, ni antagonismo ni sinergismo, en la accin antinociceptiva de piroxicam, y
una tendencia significativa a revertir el efecto de la segunda fase en el accionar del
parecoxib, de lo cual se deduce que la inhibicin no selectiva no induce cambios en el
mecanismo de accin de los AINEs en estudio.
El 7-NI es un potente inhibidor mas selectivo para la NOS, accin ejercida sobre la
NOS cerebral y sin afectar las otras dos isoformas perifricas (Wangensteen et al., 2006).
Por otra parte la interaccin entre COX y NO ha sido estudiada en numerosos trabajos,
muchos de los cuales con resultados contradictorios. Algunos estudios indican que el NO
estimula la sntesis de PGs por la COX, mientras que otros observan inhibicin de la
enzima ante el NO (Goodwin y cols., 1999). Otros estudios han demostrado que la
exposicin a NO produce una activacin de la COX-1 y una inhibicin de la COX-2,
explicando los resultados contradictorios de la literatura, a que el NO afectaba a distintas
isoformas de la COX (Clancy y cols., 2000).
Los resultados obtenidos con 7-NI suprimieron por completo la respuesta
nociceptiva de formalina, tanto en la fase algsica, como en la fase inflamatoria, resultado
que est en concordancia con la accin del NO en la respuesta hiperalgsica visceral y en
estmulos perifricos qumicos, y debido a la dosis empleada (5 mg/kg) que result ser muy
potente. Por esta misma razn, en cuanto a la interaccin entre este inhibidor de la NOS
central con los AINEs en estudio, no podemos concluir si la antinocicepcin se debe a la
sinergia entre ambas sustancias, o solamente a la accin potente del 7-NI, sinergia que fue
mas marcada con el parecoxib, llevando los valores prcticamente a un tiempo de lamido
igual a cero.
Por estas razones, nuestra hiptesis es rechazada, aunque los resultados obtenidos
no son categricos ni para afirmar que el sistema nitridrgico modula el efecto
antinociceptivo de los AINEs en estudio, parecoxib y piroxicam, ni tampoco en postular
que el NO no participa modulando la accin de las PG en el mecanismo de accin
antinociceptivo de dichos AINEs. Recientemente, otras investigaciones han propuesto que
el efecto final de la actividad modulatoria del NO en las COXs no es nico, puesto que el
NO endgeno, as como dadores de NO, inician y detienen la va de las COXs,
dependiendo de los niveles basales de NO liberado, de los tipos celulares en los cuales se

30

produce la biosntesis de PGs y de la intensidad del estmulo utilizado para liberar las PGs
(Mollace y cols., 2005).

CONCLUSIN

Tal como ya se ha demostrado antes, corroboramos que Parecoxib y

piroxicam son frmacos que poseen actividad antinociceptiva al ser
administrados por va i.p. lo que demuestra una accin segmentaria.

El efecto antinociceptivo de parecoxib y piroxicam es del tipo dosisdependiente en el test de la formalina, confirmando lo que se ha dicho en un
sinnmero de investigaciones anteriores.

En el efecto antinociceptivo de parecoxib y piroxicam no es posible

demostrar la accin neuromoduladora nitridrgica empleando el test de la
formalina, en las dosis empleadas.

PROYECCIONES
Estudiar la posible interaccin utilizando un antiinflamatorio no-esteroidal
inhibidor especfico de COX-3, para ver si existe relacin en la modulacin del
dolor con L-NAME y con 7-nitroindazol, en el test de la formalina.
Utilizar frmacos inhibidores de COX-1, COX-2 o COX-3, pero con diferentes
ensayos algesiomtricos y as conocer si tienen alguna relacin con el sistema
nitridrgico, utilizando inhibidores de la oxido nitrico sintasa no selectivos y
selectivos. Luego, los resultados entre cada test se pueden comparar para
conocer la especificidad de cada uno de ellos.

31

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comparative physiology. doi:10.1152/ajpregu.00722.2005.

35

ANEXO 1: PRESENTACIN DE RESULTADOS

tiempo Lamidos (seg)

Curva Dosis-Respuesta Piroxicam

0-5 minutos

p<0.05,
respecto al
control salino

150
120
90
60
30
0
Control
Control
Salino

10

30

Dosis (mg/kg)

Grfico 1. Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo algesiomtrico de la

formalina. Primera fase.

Tiempo de Lamidos (seg)

Curva Dosis-Respuesta Piroxicam

20-30 minutos

p<0.05,
respecto al
control salino

180
150
120
90
60
30
0

Control
Control
Salino

10

30

Dosis (mg/kg)

Grfico 2. Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo algesiomtrico de la

formalina. Segunda fase.

36

Tiempo Lamidos (seg)

Curva Dosis-Respuesta Parecoxib

0-5 minutos

p<0.05,
respecto al
control salino

150
120
90
60
30
0

Control
Control
Salino

0,3

10

Dosis (mg/kg)

Grfico 3. Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo algesiomtrico de la

formalina. Primera fase.

Tiempo Lamidos (seg)

Curva Dosis-Respuesta Parecoxib

20-30 minutos

p<0.05,
respecto al
control salino

210
180
150
120
90
60
30
0
Control

Control
Salino

0,3

10

Dosis (mg/kg)

Grfico 4. Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo algesiomtrico de la

formalina. Segunda fase.

37

Piroxicam/L-NAME, 0-5 min

0 - 5 min
Tiempo de Lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Piroxicam

150
100

50
0

10

30

Grfico 5. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/L-Name i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Primera fase.

Piroxicam/L-NAME, 20-30 min

20 - 30 min
Tiempo de Lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Piroxicam

150
100
50
0

10

30

Grfico 6. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/L-Name i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

38

0 - 5 min
Tiempo de Lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Parecoxib

Parecoxib/L-NAME, 0-5 min

150
100
50
0

C 0,3

10

Grfico 7. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/L-Name i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Primera fase.

20 - 30 min
Tiempo de Lamido, s

200

Parecoxib/L-NAME, 20-30 min

150

p<0.05,
respecto al
grupo
Parecoxib

100
50
0

C 0,3

10

Grfico 8. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/L-Name i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

39

0 - 5 min
Tiempo de lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Piroxicam

Piroxicam/7-Nitro, 0-5 min

150
100

50
0

C 1

10

30

Grfico 9. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/7-Nitroindazol i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Primera fase.

20 - 30 min
Tiempo de lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Piroxicam

Piroxicam/7-Nitro, 20-30 min

150
100
50
0

C 1

10

30

Grfico 10. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/7-Nitroindazol i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

40

Parecoxib/7-Nitro, 0-5 min

0 - 5 min
Tiempo de Lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Parecoxib

150
100
50
0
C 0,3

10

Grfico 11. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/7-Nitroindazol i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Primera fase.

20 - 30 min
Tiempo de Lamido, s

200

p<0.05,
respecto al
grupo
Parecoxib

Parecoxib/7-Nitro, 20-30 min

150
100
50
0
C

0,3

10

Grfico 12. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/7-Nitroindazol i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

41

ANEXO

PROTOCOLO

EXPERIMENTAL

TEST

DE

LA

FORMALINA
- Grupo Control Salino
Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) inyectados con una solucin
salina al 0.9%. total de 6 ratones.
- Grupo Control/L-NAME
Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) inyectados con 5 mg/Kg. de LNAME previa a la administracin de formalina. Total de 6 ratones.
- Grupo Control/7- Nitroindazol
Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) inyectados con 5 mg/Kg. de 7nitroindazol previa a la administracin de formalina. Total de 6 ratones
- Grupo Piroxicam/L-NAME
Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5 mg/kg de LNAME y dosis de 1, 3, 10 y 30 mg/kg de piroxicam. Total de 24 ratones.
- Grupo Parecoxib/L-NAME
Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5 mg/kg de LNAME y dosis de 0.3, 1, 3 y 10 mg/kg de parecoxib. Total de 24 ratones.

42

- Grupo Piroxicam/7- Nitroindazol

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5mg/kg 7nitroindazol y dosis de piroxicam de 1, 3, 10 y 30 mg/kg. Total de 24 ratones.
- Grupo Parecoxib/ 7- Nitroindazol
Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5mg/kg 7nitroindazol y dosis de parecoxib de 0.3, 1, 3 y 10 mg/kg. Total de 24 ratones.

43

ANEXO 3:
Tabla 1. Evaluacin del dolor en el ensayo algesiomtrico utilizando
Parecoxib y Piroxicam en presencia o ausencia de L-NAME y 7-Nitro
Grupos

Dosis
(mg/Kg)

Primera Fase de 0 a 5 minutos

Promedio de Lamidos (seg) ES

Segunda fase de 20 a 30 minutos

P

Promedio de Lamidos (seg) ES

Control Salino

126,38 8.48

155,65 10,20

Control L-NAME

113,5 15,41

NS

94 12,91

p < 0.05

1,67 1,09

p < 0.05

0 00

p < 0.05

0,3
1
3
10

84,50 16.72
55,83 12,82
36,40 15,64
30,00 10,02

NS
p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05

117,25 13,20
126,00 12,66
119,33 12,50
81,83 27,88

p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05

1
3
10
30

92,30 9,61
81,83 16,71
71,33 19,98
33,20 18,58

p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05

99,50 14,85
103,75 20,25
94,86 16,36
96,20 23,44

NS
NS
p < 0.05
p < 0.05

0,3
1
3
10

87,5 10,10
68 12,94
64,33 12,40
78 12,64

NS
NS
NS
p < 0.05

101,2 17,05
47,17 14,07
41,67 13,77
40,16 20,26

NS
p < 0.05
p < 0.05
NS

0,3
1
3
10

2 1,60
2 1,50
3,17 1,45
2,5 12,64

p < 0.05
p < 0.05
NS
NS

0 00
0 00
0 00
0 00

p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05

1
3
10
30

83,00 12,06
89,83 8,15
78,83 5,92
61,00 11,41

NS
NS
NS
NS

77,25 14,80
69,75 19,78
47,00 12,72
42,00 19,06

NS
NS
NS
NS

1
3
10
30

37 4,78
17 6,68
11,2 4,68
2,4 1,47

p < 0.05
p < 0.05
NS
NS

17,17 17,10
0,001 16,89
0,6 0,6
4 2,73

p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05
p < 0.05

(c/r al Control Salino)

Control 7 - Nitroindazol
(c/r al Control Salino)

Parecoxib
(c/r al Control Salino)

Piroxicam
(c/r al Control Salino)

Parecoxib/L-NAME
(c/r al Grupo Parecoxib)

Parecoxib/ 7-Nitroindazol
(c/r al Grupo Parecoxib)

Piroxicam/ L-NAME
(c/r al Grupo Piroxicam)

Piroxicam/ 7-Nitroindazol
(c/r al Grupo Piroxicam)

44

45