CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS:
Determinar la presencia de carbohidratos en una muestra
desconocida.
Identificar por mtodos colorimtricos y cualitativos los
principales monosacridos, oligosacaridos (disacridos) y
polisacridos.
Identificar azucares reductores y no reductores.

I. FUNDAMENTO TEORICO.
Los carbohidratos o hidratos de carbono o tambin llamados azcares son los compuestos
orgnicos ms abundantes y a su vez los ms diversos. Estn integrados por carbono, hidrgeno y
oxgeno, de ah su nombre. Definiendo los carbohidratos con mayor precisin en trminos de su
estructura orgnica, son polihidroxialdehidos, polihidroxicetonas o sustancias que, por hidrlisis
forman dichos productos. La qumica de los carbohidratos es, principalmente, la combinacin de la
qumica de dos grupos funcionales: el grupo hidroxilo y el grupo carbonilo. Los carbohidratos estn
distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participacin estructural,
funcional y metablica. En general los carbohidratos se clasifican, de acuerdo con su estructura, en
monosacridos, oligosacaridos y polisacridos.
Los monosacridos se clasifican de acuerdo con el nmero de tomos de carbono presente
en (triosas, tetrosas, pentosas, hexosas, etc.) y depende tambin de que el grupo carbonilo presente
se halle, como un aldehdo (aldosas) o como una cetona (cetosas). Los carbohidratos que no pueden
hidrolizarse se llaman monosacridos o azucares simples. Su formula emprica es (CH2O)n.
En el grupo de los monosacridos, quizs los ms importantes son los que poseen seis
tomos de carbono en su molcula. Existen diecisis aldohexosas (monosacridos de seis carbonos
y un grupo funcional aldehdo) sin embargo, las de mayor importancia son la D-Glucosa, DGalactosa y D-Manosa. Dentro de las cetohexosas (con seis carbonos y grupo funcional cetona), el
ms importante es la D-Fructosa o Levulosa.
Los oligosacaridos son molculas constituidas por la unin de dos a nueve monosacridos
cclicos, mediante enlaces de tipo glucosidico. El enlace glucosidico es un enlace covalente que se
establece entre grupos alcohol de dos monosacridos, con desprendimiento de una molcula de
agua. El grupo ms importante de los oligosacaridos es el de los disacridos, o azcares dobles,
1

que son la unin de dos monosacridos, mediante el enlace glucosidico o prdida de una molcula
de agua formando as un enlace tipo ter.
Si este enlace se efecta entre dos carbonos anomricos, el disacrido no tendr el potencial
aldehdo o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren la
participacin de estos grupos, recibiendo el nombre de azcar no reductor, la sacarosa y la trealosa
son ejemplos de los disacridos no reductores. Todos los disacridos que poseen un carbono
anomrico libre, darn positivas estas reacciones, llamndose azucares reductores debido a que
promueven la reduccin del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayora de los
disacridos carecen de importancia para el hombre con algunas excepciones como la sacarosa, su
estudio se debe a que disacridos como la maltosa y la celubiosa se originan como producto de la
hidrlisis de polisacridos, la maltosa, por ejemplo es el producto de la hidrlisis del glicgeno y el
almidn.
Son disacridos, la lactosa o azcar de leche (glucosa + galactosa), que aparece en los
productos lcteos y se forma por la unin de una molcula de glucosa y otra de galactosa. La
galactosa es una variedad de azcar simple. La sacarosa o azcar de mesa (glucosa + fructosa) que
aparece en los productos azucarados, como la remolacha y la caa. La maltosa (glucosa + glucosa)
obtenida del azcar de malta, est formada por dos molculas de glucosa.
Los polisacridos contienen muchos monosacridos unidos entre si y varan en la longitud
de la cadena y peso molecular. La hidrlisis completa de la mayora de los polisacridos produce
monosacridos.
Los polisacridos son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energa
metablica de fcil aprovechamiento, el almidn (un producto vegetal), constituido por solo
molculas de glucosa la base alimenticia del globo terrestre, especialmente en la poblacin de bajos
recursos. El glucgeno (producto animal) y la celulosa (fibra vegetal). En las molculas de cada uno
de estos, existen enlaces glucosidico. Estos son puentes en el almidn y en el glucgeno, y puentes
en la celulosa.

II. FUNDAMENTOS QUIMICOS

1. PRUEBA DE MOLISH:
La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccin de
Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para cualquier carbohidrato. Se basa en la
accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono. En dicha
reaccin el cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosidico de la muestra y la
deshidratacin a furfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales
se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccin de Molisch) dando un producto de
color violeta en forma de halo o anillo.
La reaccin es la siguiente:
O
OH OH OH OH OH
||
|
|
|
|
|
H2SO4
CH- CH CH CH CH - CH2
Hexosa
3H2O

CH CH O
||
||
//
HOCH2C O C C H
Hidroximetil Furfural

Figura N 1. Anillos color violeta como presencia de carbohidratos

2. PRUEBA DE BARFOED:
El reactivo de Barfoed es dbilmente acido y solamente puede ser reducido por
Monosacridos. Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de hidrolizar disacridos
dando as reacciones falsamente positivas. El fundamento radica en la reduccin del acetato cprico
a oxido cuproso

3. PRUEBA DE BIAL O DE ORCINOL-HCL:

Cuando se calientan pentosas con HCl concentrado, se forma Furfural que se condensa con
Orcinol en presencia de iones frricos para dar un color verdoso
O

OH OH OH OH
||
|
|
|
|
CH- CH CH CH CH2
Ribosa

HCl
3H2O

CH CH
||
||
COC
Furfural
3

4. PRUEBA DE SELIWANOFF:
La reaccin se basa en la formulacin del 5-hidroximetil furfural, mediante el calentamiento
de la Fructosa con el acido. El 5-Hidroximetil furfural da con la resorcina (meta dihidroxibenceno)
un producto de condensacin de color rojo cereza.

OH O OH OH OH OH
|
|| |
|
|
|
HCl
CH2- C - CH CH- CH- CH2

CH CH O
||
||
//
HOCH2C O C C H +
OH
Fructosa

Figura N 2. Color rojo cereza como presencia de cetohexosas

5. PRUEBA DE LUGOL:
La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de
la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un
compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la
coloracin azul violeta. Es una prueba que se usa para identificar almidn. El color azul se debe
posiblemente a la formacin de un complejo: Yoduro de almidn

Figura N 3. Identificacin de un polisacrido

6. PRUEBA DE BENEDICT:
La solucin de Benedict contiene un tomo de cobre unido a un anin complejo y es un
agente oxidante selectivo. Es una prueba especfica para las sustancias reductoras con grupos
carboxilos libres como los aldehdos pero no para cetonas, en la reaccin forma un precipitado rojo,
amarillo o amarillo verdoso dependiendo de la naturaleza y cantidad del agente reductor presente.

CuSO4

Cu(OH)2
+
Hidrxido
Cprico

+ NaOH

Cu(OH)2 + Na2SO4

RCH
Aldehdo

Cu2O +
Oxido
Cuproso

R COOH +
H2O
Acido Carboxlico

7. PRUEBA DE FENILHIDRAZINA
La Fenilhidrazina reacciona con el grupo carbonilo de los azucares dando la Fenilhidrazona
que a su vez reacciona con dos molculas ms de Fenilhidrazina para formar las osazonas.
CHO
|
CHOH + H2N NH C6H5
|
R
Aldosa
Fenilhidrazina

CH=N-NH-C6H5
|
CHOH + H2O
|
R
Fenilhidrazona

CH = NNHC6H5
|
CHOH + H2NNH C6H5
|
R
Fenilhidrazina

CH = N NH C6H5
|
C = NNHC6H5 + C6H5NH2 + NH3
|
R
Fenilhidrazona Ozasona

Glucosazona
(Agujas o Plumas)
(Cristales en forma de palma)

Arabinosazona
(Agujas agrupadas en bolas no muy densas)

Maltosazona
(Agujas aplanadas)
(Cristales en forma de flor)

Galactosazona
(Agujas aplanadas)
(Cristales en forma de estrella)

Lactosazonas
(Agujas finas agrupadas en bolas)
(Cristales en forma de nido)

Xilosazonas
(Agujas largas y finas)

Fig. N 4. Apariencia cristalina de las osazonas vistas al microscopio

III. PREPARACION DE REACTIVOS.

1. SOLUCION DE MOLISH: - Naftol al 10% en Etanol. (Pesar 10 g de - Naftol y diluir
en 100 ml de Etanol)
2. SOLUCION DE BARFOED: Pesar 13,3 g Acetato de Cobre cristalizado y diluir en 200 ml
de H2O destilada, filtrar si es necesario. Aadir 1,8 ml de Acido Actico glacial
(CH2COOH).
3. SOLUCION DE BIAL: Preparar 300 ml de HCl concentrado en 250 ml de H 2O destilada,
aadir 1,5 g de Orcinol y 8 gotas de Cloruro Frrico (FeCl3.6H2O) al 1%.
4. SOLUCION DE SELIWANOFF: Pesar 0,05 g de Resorcina y diluir en 100 ml de Acido
Clorhdrico al 20%
5. SOLUCION DE LUGOL: En 100 ml de agua destilada se disuelven 20 g de Yoduro de
Potasio y 10 g de Yodo.
6. SOLUCION DE BENEDICT: Disuelva 173 g de Citrato de Sodio y 100 g de Carbonato de
Sodio en aproximadamente 800 ml de agua destilada caliente, filtre a travs de papel de
filtro en un cilindro graduado de 1000 ml y completa con agua hasta 850. Por separado,
disuelva 17,3 g de Sulfato Cprico en aproximadamente 100 ml de agua destilada y
complete hasta 150 ml. Vierta la primera solucin en un vaso de precipitado de 2 litros y
aada lentamente la solucin de Sulfato de Cobre agitando continuamente.
7. SOLUCION DE FENILHIDRAZINA:
FENILHIDRAZINA: Se mezcla Fenilhidrazina, con Acido Actico Glacial y Agua
destilada en una proporcin de 1:1:4
CLORHIDRATO DE FENILHIDRAZINA: Mezclar 2 g de Clorhidrato de
Fenilhidrazina, 3 g de Acetato de Sodio y 15 ml de agua destilada. Si es necesario filtre
con la ayuda de Carbn Activado.

IV. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

7

MATERIALES

REACTIVOS

Tubos de ensayo
Gradilla
Esptula
Propipeta
Pipetas graduadas de

1, 5 y 10 ml
Pisetas
Pinzas para tubos de
ensayo

-Naftol
Etanol
Acido Sulfrico
Acetato de Cobre
Acido Actico
Acido Clorhdrico
Orcinol
Cloruro Frrico
Yodo
Yoduro de Potasio
Sulfato Cprico
Citrato de Sodio
Carbonato de Sodio
Anhidro
Fenilhidrazina

EQUIPOS

Agitador de
tubos de ensayo
Campana de
Extraccin.
Bao de mara
Microscopio o
Lupa

Clorhidrato de

Fenilhidrazina
Resorcina
Glucosa
Xylosa
Galactosa
Maltosa
Lactosa
Fructosa
Arabinosa
Sacarosa
Almidn

V. PARTE EXPERIMENTAL I
PRUEBA
Identificacin de
Carbohidratos con la
Prueba de Molish

Identificacin de

PROCEDIMIENTO
En un tubo de ensayo por separado colocar:
Sustancia problema al 1%

CANTIDAD
1 ml

- Naftol
2 gotas c/tubo
Agitar. Luego cuidadosamente dejar caer por
0,5 ml
las paredes del tubo Acido sulfrico
concentrado. La formacin de un anillo color
violeta en la interface indica la presencia de
carbohidratos Ver Figura N 1
Sustancia problema al 1%
1 ml
8

Monosacridos con la
Prueba de Barfoed

Identificacin de
Pentosas con la
Prueba de Bial

Reactivo de Barfoed
Mezclar y calentar en bao hirviente,
contando los minutos y sacar del bao cada
tubo inmediatamente despus que haya
aparecido el precipitado rojo ladrillo de Oxido
Cprico. Anotar el tiempo que corresponde a
cada carbohidrato. La aparicin de un
precipitado antes de los 6 minutos indica la
presencia de un monosacrido, un escaso
precipitado rojo a los 9 y 12 minutos indica la
presencia de Lactosa o Maltosa.
Sustancia problema al 1%

2,5 ml

Reactivo de Bial
Llevar a bao hirviente durante 3 minutos. La
aparicin de un color verde, indica la
presencia de una Pentosa.

1,5 ml

1 ml

PARTE EXPERIMENTAL II
PRUEBA

PROCEDIMIENTO
Colocar en tubos de ensayo por separado:
Identificacin
de Sustancia problema 1%
Cetosas o azucares no
reductores con la Reactivo de Seliwanoff
Prueba de Seliwanoff Agitar y llevar a bao Mara a 90C durante
5 min. La aparicin de un color rojo cereza,
indica la presencia de un azcar no reductor
(Ver figura N 2 )
Identificacin de
Sustancia problema al 1%
Polisacridos con la
Prueba de Lugol
Reactivo de Lugol
Mezclar y observar. La aparicin de una

CANTIDAD
1 ml
2 ml

2 ml
1 gota
9

coloracin azul indica la presencia del

almidn y una coloracin roja, indica el
Glicgeno, si el color no cambia el
carbohidrato es un Mono o Disacrido (Ver
figura N 3)
Identificacin
de Sustancia problema al 1%
Azcares Reductores
con la Prueba de Reactivo de Benedict
Benedict
Llevar a bao de mara a 90C durante 5 min.
La aparicin de un precipitado, verde,
amarillo o rojo indica la presencia de un
azcar reductor.
Identificacin
de Sustancia problema al 1%
Osazonas
con
la
Prueba
de Reactivo de Fenilhidrazina
Fenilhidrazina
Mezclar bien. Colocar los tubos en bao
Mara hirviente durante10 min. Enfre los
tubos con agua de chorro, sin agitar. Dejar en
reposo durante 5 min. Luego observar al
microscopio las osazonas, colocando una
gota en el portaobjeto y cubrir con el cubre
objeto evitando daar los cristales con
movimientos bruscos o exceso de muestra.
(Ver figura N 4)

1 ml
2 ml

2 ml
0,5 ml

VI. MARCHA ANALITICA

SUSTANCIA PROBLEMA
PRUEBA DE MOLISH

(-) INCOLORA
NO ES CARBOHIDRATO

(+) ANILLO
VIOLETA
PRUEBA DE BARFOED

(+) Prec. ROJO LADRILLO antes

de 6 minutos
MONOSACARIDO

(+) Prec. ROJO LADRILLO de 9 a 12

minutos
DISACARIDOS Y POLISACARIDOS

10

(-) OTRO COLOR

HEXOSA

(+) ROJO O AMARILLO OSCURO

GLUCOGENO

(+) VERDE
PENTOSA

(+) ROJO
FRUCTOSA

(+) AZUL O NEGRO

ALMIDON

(-) INCOLORO O LEVE

COLORACION
GLUCOSA O GALACTOSA

PRUEBA DE LUGOL

P. DE SELIWANOFF

PRUEBA DE BIAL

(-) AMARILLO
DISACARIDO
P. BENEDICT

(+) CRISTALES
EN FORMA DE
PALMA
(Glucosazona)
GLUCOSA

P. DE FENILHIDRAZINA

(+) CRISTALES
EN FORMA DE
ESTRELLA
(Galactosazona)
GALACTOSA

(+) Prec. ROJO

REDUCTOR

(-) NO CAMBIA
NO REDUCTOR
SACAROSA

P. DE FENILHIDRAZINA

(+) CRISTALES EN
FORMA DE NIDO
(Lactosazona)
LACTOSA

(+) CRISTALES EN
FORMA DE FLOR
(Maltosazona)
MALTOSA

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