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DE PRCTICAS
DE
LABORATORIO
BIOQUIMICA METABOLICA
PRESENTADO A:
JAIRO GRANADOS
MORENO
MARIA GABRIELA
ROMERO
DIAGRAMA
UREASA
Titulando
hidroxido de
amonio
Es util para
ph ooptimo
7,0
Con metodo
estequimoetric
o
Determinar
urea en sangre
incubacion
25c
producen 2
moles de
NH4OH
Determinar
urea en orina
Constante de
michel de
10.mmol/L
2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Materiales y equipos requeridos
Gradilla
Pinzas para bureta
Elenmeyer de 125
ml
Pipetas de 5 a 10 ml
Ureasa
Urea
Cloruro de mercurio
cido clorhdrico
Buffer fosfato
Conc.
0.1%
0,25M
CO(NH2)
2
HgCl2
HCl 0,1N
1%
pH
7.0
Indicador de Tashiro
2. 3 Procedimiento
2.3.1 En campo: Realizar toma de muestra de
forraje o de suelo calculando el peso en
gramos.
Agregar 1o
ml de Na Cl
al 1 %
Agitar
Centrifugar a
3500 rpn
Medir,
descartar
Filtrar medir
en probeta
Pasar a tubo
de ensayo
Rotular
Agregar 1,0 g
de muestra
Determinar
urea en el
suelo
Determinar
urea en
materia
Organica
Tubos de ensayo
Frmula
2.3.2 En el laboratorio:
Muestra
vegetal
Solucin de
bufer
Reactivo
Obtener
extracto
Indicadore
s
Wm (g)
Vf (mL)
V HCl
(mL)
Muestras analzadas
Forraje
Concen
trado
Suelo
Origen
4. RESULTADOS ESPERADOS
Al aparecer y permaner un color rosadoviolceo. Esto indica que los equivalentesgramo del hidrxido de amonio fueron
neutralizados por los equivalentes-gramo del
cido clorhdrico.
5. GLOSARIO
TITULACIN: es un mtodo de anlisis
qumico cuantitativo en el laboratorio, que
se
utiliza
para
determinar
la concentracin
desconocida
un reactivo conocido
de
UREASA:
es
una enzima que cataliza la hidrlisis de urea a
dixido de carbono y amonaco.
CENTRIFUGACIN: Es un mtodo por el cual
se pueden separar slidos de lquidos de
diferente densidad por medio de una fuerza
giratoria.
REFERENCIAS
https://es.wikipedia.org/wiki/An
%C3%A1lisis_volum%C3%A9trico
https://es.wikipedia.org/wiki/Centrifugaci
%C3%B3n
Jairo Enrique Granados Moreno. MSc.
Protocolo de prctica. Bioqumica Metablica.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
UNAD.
2014
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001
/GUIA_ACTIVIDADES_MOMENTO_3_2015_Contextualizacion_practica_-BM-2X.pdf
embudos
Pipetas graduadas de
10 ml
Esptula metlica
Agitador de vidrio
Probeta graduada de
100 ml
Equipo de titulacin
Espectrofotmetro
Bureta de 25 ml
muestras de suelo
Soporte universal
Beaker de 250 ml
Potencimetro
Balanza analtica
celdas
espectrofotomtricas
Papel filtro
SUELO
BALANCE
ELECRROLITICO
MATERIA
ORGANICA
HUMOS
HUMINAS
MICROOR
GANISMOS
ACIDO
ORANICO
RESULTADO
DE
PROCESOS
BIOQUIIMICO
S
1. MATERIALES Y METODOS
REACCION
ES
BIOQUIMIC
AS
ENZIMATIC
AS
Dicromato
potasio
de
H2SO4
concentrad
o
K2Cr2O7
1N
Difenilamin
a
Sulfato de hierro
Hidrxido
de
sodio
cido
Clorhidrico
FeSO4
NaOH
1N
0,1
N
HCl
0,1N
Fenolftale
na
C20H14O4
C6H4COOC(C6
H4--HOH)2
Agua
destilada
HPO4/H3PO4
Solucin
buffer
fosfato
2.3 Procedimiento
2.3.1 En el campo : Realizar toma de
muestra
2.3.2 En el laboratorio: Para Carbono
Orgnico (CO), aplicar el Mtodo de
titulacin volumtrica, Para Carbono
Orgnico (CO) Mtodo
Espectrofotomtrico, para La
Capacidad amortiguadora el Mtodo
Potenciomtrico.
2. DIAGRAMA DE FLUJO
ADICIONAR +/- 20
GRAMOS DE SUELO
Y 40 ML DE AGUA
DESTILADA
ESPERAR 60
SEGUNDOS TOMAR
EL PH
AGREGAR 5 ML DE
NAOH 0,1N ,
AGITAR MEDIR PH
AGITAR EN
AGITADOR
MAGNTICO POR
5MIN
TERCER Y CUARTO
BEAKERS,
ADICIONAR 20ML
DE AGUA
DESTILADA Y 20 ML
DE SOLUCIN
BUFFER PH 7,0,
REGISTRAR TODOS
LOS VALORES
ESPERAR 60
SEGUNDOS Y
OBSERVAR EL PH,
CON EL
ELECTRODO DEL
POTECIOMETRO
AGREGAR 5 ML DE
NAOH 0,1N ,
AGITAR DE NUEVO
POR UN MINUTO Y
MEDIR EL PH2
TABLA DE DATOS
Carbono orgnico, mtodos volumtricos y
espectrofotomtrico.
Muestras
Peso
(Wm)
VFeSO4
(mL)
Absorbancia
(A)
M1
M2
Blanco ()
Peso
(Wm)
Vol
(mL)
pH1
pH2
GLOSARIO
ESPECTROFOTMETRO : es un instrumento
usado en el anlisis qumico que sirve para
medir, en funcin de la longitud de onda, la
relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica
relativos
a
dos
haces
deradiaciones y la concentracin o reacciones
qumicas que se miden en una muestra.
CAPACIDAD AMORTIGUADORA: La
capacidad amortiguadora de un tampn es la
cantidad de cido o de base que se puede
agregar, antes de que el pH comience a
cambiar de modo apreciable, y est
determinada por el valor real de las
concentraciones de los componentes del par
cido/base conjugado.
MTODO POTENCIOMTRICO: Sirve para
medir el Ph de una solucin.
Suelo 2
Agua
destilada
Solucin
Buffer
5 REFERNCIAS
(mEq
HCl
/pH)
(mEqN
aOH
/pH)
P
()
H
Cl
P ()
NaO
H
Harina
Forraje
3. RESULTADOS ESPERADOS
Al Colocar el Erlenmeyer beaker que
contiene la solucin diluida de suelo debajo de
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot
%C3%B3metro
http://docencia.udea.edu.co/cen/QuimicaAn
aliticaII/pot1.html
Jairo Enrique Granados Moreno. MSc.
Protocolo de prctica. Bioqumica Metablica.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
UNAD.
2014
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001
/GUIA_ACTIVIDADES_MOMENTO_3_2015_Contextualizacion_practica_-BM-2X.pdf
Bao termostato
Papel filtro
Gradilla
Frmula
C6H5OH
H2SO4
NaOH
Concentracin
5%
1N
O,6N
H2O
20 mL
1%
C6H12O6.
2.3 Procedimiento
III. DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS
NO ESTRUCTURALES (CNE), EN
FORRAJES, POR EL MTODO DE NELSONSOMOGYI
INTRODUCCIN
Las plantas vegetales estan compuestos por
carbohidratos estructurales y no estructurales,
los no estructurales se almacenan en rganos
vegetativos como races, rizomas, estolones,
coronas y parte inferiores del tallo Los
principales CNET en los tejidos de especies
forrajeras son monosacridos como glucosa y
fructosa, disacridos como sucrosa y maltosa y
polisacridos como almidones y fructosanos.
1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL
DIAGRAMA
METODO
DE FENOLACIDO
sULFURIC
O
CARBOHID
RATOS NO
ESTRUCTU
RALES
MONOSAC
ARIDOS
FLUCTOSA
GLUCOSA
BASA SU CONTENIDO EN
ALMIDONES HIDROLIZABLES
Y AZUCARES SOLUBLES
REALIZANDO
MEZCLA DE
REACTIVOS PARA
LECTURA
ESPECTROFOMETRI
CA
MATERIALES Y METODOS
Lectura espectrofometrica:
varilla de vidrio
3 DIAGRAMA DE FLUJO
PESAR
+/- 2.0G
DE
MUESTR
AY
REGISTR
AR
ADICIONAR A
STE 5ML DE
NAOH 0,6N,
AGITAR POR 15
SEGUNDOS
AGREGAR
50 ML DE
SOLUCIN
DE HCL
0,6N
MEDIR EL
VOLUMEN
DEL
FILTRADO(VF)
Y PASAR 5ML
A UN TUBO
DE ENSAYO
AGITAR
DURANTE
3
MINUTOS
DEJAR
ENFRIAR
POR 5 MIN
Y FILTRAR
SOBRE
PAPEL
FILTRO
LLEVAR EL
BEAKER CON
LA SOLUCIN
AL BAO
TERMOSTATAD
O
CALENTAR
A
90C,DURA
NTE 20 MIN
TAPAR Y
ROTULAR
4. TABLA DE DATOS
Datos para la cuantificacin de CNE
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr
%C3%ADa
Indicadores
wm
Descripcin
Peso de la
muestra
VF
Volumen del
filtrado
A st
Absorbancia del
estndar
Am
Absorbancia del
tubo que contena
el FFCNE
Valor
5. RESULTADOS ESPERADOS
La determinacin cantidad de carbohidratos
totales No estructurales, basndose en su
contenido de almidones hidrolizables y
azcares solubles
6. GLOSARIO
ALMIDONES HIDROLIZABLES: Son los que
producen azcares (principalmente, glucosa)
MTODO
PERMANGANOMTRIC
O
DIAGRAMA
CATALASA
SE OBTIENE A PARTIR
DE
MICROORGANISMOS
INHIBE LAS
REACCIONES
OXIDATIVAS
GENERA POR LA
OXIDACIN DE CIDOS
GRASOS(AG) EN LOS
PEROXISOMAS
2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Materiales y equipos
Soporte Universal
Bureta
Pinzas
Elenmeyer
Montaje de Titulacin
0,01M
(ECAT)
Pipeta graduada
Probeta graduada
beaker de 400mL
Tubo de ensayo
Gradilla
PESAR MS O
MENOS 2G DE
MUESTRA PICADA
PULVERIZADA
FILTRAR Y MEDIR
SU VOLUMEN,
REGISTRARLO
COMO: VF
TOMAR 5 ML
,DEPOSITARLO EN
UN TUBO DE
ENSAYO, TAPARLO,
ROTULARLO.
REGISTRAR EL
VALOR COMO: WM
CENTRIFUGAR A
2500RPM DURANTE
5MIN
COLOCARLOS EN
BAO DE HIELO
COLOCARLA EN UN
TUBO DE
CENTRIFUGA
ADICIONAR 10ML
DE SOLUCIN FRA
DE BUFFER
FOSFATO 0,05M,
PH=6,8-7,0, AGITAR
4. TABLA DE DATOS
Muestras /
tubos
Indicadores
Wm (g)
Frmula
Perxido de
Hidrogeno
cido sulfrico
H2O2
H2SO4
Concentraci
n
2N
gr
2.3 Procedimiento
KMnO4
INTRODUCCIN
1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL
Perganmanato
de potasio
Extracto de
catalasa
Suelo
Harina
Forraje
Verdura
Blanco
Vf (mL)
VKMnO4
(mL)
4. RESULTADOS ESPERADOS
Se determin la actividad de la catalasa por
mtodo permanganomtrico, y se cuantifico la
actividad enzimtica de la catalasa en
muestras de origen vegetal
5. GLOSARIO
CATALASA La catalasa es una catalaza
perteneciente
a
la
categora
de
las oxidorreductasas que cataliza la
descomposicin
delperxido
de
hidrgeno (H202) en oxgeno y
H2O
REACCIONES OXIDATIVAS:
Es una reaccin qumica en la que uno o
ms electrones se
transfieren
entre
los
reactivos,
provocando
un
cambio
en
sus estados de oxidacin
6 REFERENCIAS
https://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa
Fuente Internet:
http://www.2bachillerato.es/biologia/tema13/te
ma13.pdf
Es propiedad:
www.profesorenlinea.Cl
- Registro N 188.540
Granados Moreno. Jairo Enrique MSc.
Protocolo de prctica. Bioqumica Metablica.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
UNAD.
2014
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001
/GUIA_ACTIVIDADES_MOMENTO_3_2015_Contextualizacion_practica_-BM-2X.pdf
CUANTIFICACIN DE
NITROGENO NO
PROTEICO
FORRAJES Y SUELO
(FRACCIN A DE
VAN SOEST )
PUEDE SER
ASIMILADO O NO
ASIMILADO POR EL
ANIMAL
2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Materiales y equipos
TEMA V: CUANTIFICACIN DE
NITRGENO NO PROTECO EN
SUELOS Y PASTOS, MTODO ATA,
DE VAN SOEST
Balanza Analtica
Vaso de precipitado
tubo de ensayo
nevera
espectrofotmetro
Frmula
cido
Tricloroactico
(ATA
( Cl3-CCOOH )
INTRODUCCIN
Los
pastos
contienen
compuestos
nitrogenados de origen proteico y no proteico,
que pueden variar dependiendo de la madurez
de la planta (Church y Fontenot, 1979, el
contenido total de este nitrgeno (N) no
siempre resulta completamente utilizable a
nivel digestivo, ya que parte de este N se
encuentra incrustado en la pared celular
indigestible (Pichard y Van Soest, 1977; Van
Soest, 1982), lo que puede reducir el
aprovechamiento del nitrgeno ingerido. En
este laboratorio se pretende cuantificar por el
mtodo de Van Soest el nitrgeno no proteico
contenido en una muestra de forraje.
1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL
DIAGRAMA
Concentraci
n
Al 10 %
Agua destilada
2.3 procedimiento
En el campo: Toma de muestras
En el laboratorio: Extraccin con cido
Tricloroactico (ATA)
Pesar +/- 2,0 g de muestra (Suelo, forraje)
(picada pulverizada) , en balanza
analtica y registrar como ( y colocar en
vaso de precipitado
Adicionar 20 mL de agua destilada fra,
agitar por 1min
Dejar reposar la mezcla por 15 min
Adicionar 30 mL de sol.
Reposar a Temperatura ambiente por 20
min
Filtrar sobre papel filtro en probeta
3. DIAGRAMA DE FLUJO
PESAR +/- 2,0
G DE
MUESTRA
(SUELO,
FORRAJE)
MEDIR
VOLUMEN
FILTRADO
ROTULAR Y
GUARDAR
REFRIGERADO
REGISTRAR Y
COLOCAR EN
VASO
PRECIPITADO
FILTRAR
APLICAR
SOLUCION
INDICADA
ADICIONAR 20
ml DE AGUA
DESTILADA
FRIA
REPOSAR OR
20 MINUTOS
OBTENER
ABSORVANCIA
DEJAR
REPOSAR POR
15 MINUTOS
ADICIONAR 30
ml DE
SOLUCIN DE
ATA Y AGITAR
POR UN
MINUTO
4. TABLA DE DATOS
Datos para Nitrgeno no proteico
(NNP)
Muestras /
tubos
Indicadores
Wm
(g)
Suelo
Forraje
Standar
Tipo de
muestras
analizadas
Vf (mL)
Absorbancia
(A)
5. RESULTADOS ESPERADOS
Cuantificar el nitrgeno no proteico (NNP).
Determinacin del contenido de NNP y
Protena verdadera (PV) en forrajes y
concentrados.
GLOSARIO
ANLISIS KJELDAHL: Las determinaciones de
nitrgeno de Kjeldahl se realizan sobre una
variedad de sustancias alimentarias. El mtodo
Kjeldahl se puede desglosar en tres pasos
principales: digestin, destilacin y valoracin.
NITRGENO NO PROTEICO: Se denomina
Nitrgeno no proteico a los compuestos de
nitrgeno que pueden ser convertidos en protenas
por algunos organismos vivos. Muchos organismos
superiores no pueden obtener aminocidos de otras
formas, ms que absorbindolos de la dieta. Los
cuales pueden ser convertir algunos aminocidos
en otros diferentes. Los compuestos que forman el
NNP
son
los
que
contienen amonaco, nitritos y nitratos y otros como
la urea, el biuret o el cido rico. Los organismos
que puede utilizar el NNP son los hongos,
las plantas y algas, bacterias y organismos que
viven en simbiosis con ellos.
BIBLIOGRAFIA
http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_tec/c
eniaphoy/articulos/n8/arti/obispo_n/obispo_n.ht
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