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PREINFORME

DE PRCTICAS
DE
LABORATORIO
BIOQUIMICA METABOLICA

PRESENTADO A:
JAIRO GRANADOS
MORENO
MARIA GABRIELA
ROMERO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA


ESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS , PECUARIAS Y DE MEDIO AMBIANTE
PROTOCOLO PREINFORME DE PRACTICA DE LABORATORIO
BIOQUIMICA METABOLICA

TEMA 1: ACTIVIDAD URESICA EN


MUESTRAS DE ORIGEN BIOLGICO
INTRODUCCIN
La ureasa se encuentra presente en varios
tejidos pertenecientes a los vegetales, por lo
tanto es fcil su determinacin de urea
existente en diferentes materias primas
vegetales, por el mtodo de Kjeldhal o por
titulacin del amonio liberado, titulando
hidrxido de aluminio que es producido por la
hidrolisis, utilizando el mtodo estequiometrico
ya que se producen producen 2 moles de
NH4OH por cada mol de urea desdoblada.
1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL

DIAGRAMA

UREASA

Titulando
hidroxido de
amonio

Es util para

ph ooptimo
7,0

Con metodo
estequimoetric
o

Determinar
urea en sangre

incubacion
25c

producen 2
moles de
NH4OH

Determinar
urea en orina

Constante de
michel de
10.mmol/L

2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Materiales y equipos requeridos

Gradilla
Pinzas para bureta
Elenmeyer de 125
ml
Pipetas de 5 a 10 ml

Ureasa
Urea
Cloruro de mercurio
cido clorhdrico
Buffer fosfato

Conc.
0.1%
0,25M

CO(NH2)
2
HgCl2
HCl 0,1N

1%
pH
7.0

Indicador de Tashiro

2. 3 Procedimiento
2.3.1 En campo: Realizar toma de muestra de
forraje o de suelo calculando el peso en
gramos.

Peso muestras: Wm; Extraccin con NaCl 1%;


Centrifugacin;
Filtracin;
medida
sobrenadante: Vs; Titulacin con HCl; Registro
de mL gastados: VHCl; Tabla de datos
3. DIAGRAMA DE FLUJO
En tubo
centrifuga

Agregar 1o
ml de Na Cl
al 1 %

Agitar

Centrifugar a
3500 rpn

Medir,
descartar

Filtrar medir
en probeta

Pasar a tubo
de ensayo

Rotular

Agregar 1,0 g
de muestra

Determinar
urea en el
suelo
Determinar
urea en
materia
Organica

Tubos de ensayo

Frmula

2.3.2 En el laboratorio:

Muestra
vegetal

Solucin de
bufer

Reactivo

Matraz aforado de 100


ml
Bao termostato
beaker de 400mL
bureta de 25mL
Soporte universal.

Obtener
extracto

Indicadore
s
Wm (g)

2.2 Reactivo requeridos

Vf (mL)
V HCl
(mL)

Muestras analzadas
Forraje
Concen
trado

Suelo

Origen

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BIOQUIMICA METABOLICA

4. RESULTADOS ESPERADOS
Al aparecer y permaner un color rosadoviolceo. Esto indica que los equivalentesgramo del hidrxido de amonio fueron
neutralizados por los equivalentes-gramo del
cido clorhdrico.
5. GLOSARIO
TITULACIN: es un mtodo de anlisis
qumico cuantitativo en el laboratorio, que
se
utiliza
para
determinar

la concentracin
desconocida
un reactivo conocido

de

UREASA:
es
una enzima que cataliza la hidrlisis de urea a
dixido de carbono y amonaco.
CENTRIFUGACIN: Es un mtodo por el cual
se pueden separar slidos de lquidos de
diferente densidad por medio de una fuerza
giratoria.
REFERENCIAS
https://es.wikipedia.org/wiki/An
%C3%A1lisis_volum%C3%A9trico
https://es.wikipedia.org/wiki/Centrifugaci
%C3%B3n
Jairo Enrique Granados Moreno. MSc.
Protocolo de prctica. Bioqumica Metablica.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
UNAD.
2014
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001
/GUIA_ACTIVIDADES_MOMENTO_3_2015_Contextualizacion_practica_-BM-2X.pdf

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2.1 Materiales y equipos


Elenmeyer de 125 ml

embudos

Pipetas graduadas de
10 ml
Esptula metlica
Agitador de vidrio
Probeta graduada de
100 ml
Equipo de titulacin
Espectrofotmetro

Bureta de 25 ml

muestras de suelo

Soporte universal
Beaker de 250 ml
Potencimetro
Balanza analtica
celdas
espectrofotomtricas
Papel filtro

2.2. Reactivos requeridos


TEMA II. CARBONO ORGNICO, MATERIA
ORGNICA Y CAPACIDAD
AMORTIGUADORA () DE SUELOS
INTRODUCCIN
El Suelo posee una composicin de materia
orgnica e inorgnica, presentes en todos los
estados de la materia, cada uno de estos
cumple una funcin y est concentrada gracias
a la actividad microbiana es por ello que puede
generar vida a las plantas y nutrirlas por medio
de humus, numinas y cidos hmicos.
Para lograr un perfecto balance se requiere
una buena capacidad amortiguadora, o
potencial qumico que tienen los sistemas
edficos para regular y controlar su pH,
cuando son sometidos a procesos de
acidificacin o alcalinizacin.
MENTEFACTO O DIAGRAMA CONSEPTUAL
HUMNEDA
D

SUELO

BALANCE
ELECRROLITICO
MATERIA
ORGANICA

HUMOS

HUMINAS

MICROOR
GANISMOS

ACIDO
ORANICO
RESULTADO
DE
PROCESOS
BIOQUIIMICO
S

1. MATERIALES Y METODOS

REACCION
ES
BIOQUIMIC
AS
ENZIMATIC
AS

Dicromato
potasio

de

H2SO4
concentrad
o
K2Cr2O7

1N

Difenilamin
a
Sulfato de hierro
Hidrxido
de
sodio
cido
Clorhidrico

FeSO4
NaOH

1N
0,1
N

HCl

0,1N

Fenolftale
na

C20H14O4
C6H4COOC(C6
H4--HOH)2

Agua
destilada
HPO4/H3PO4
Solucin
buffer
fosfato
2.3 Procedimiento
2.3.1 En el campo : Realizar toma de
muestra
2.3.2 En el laboratorio: Para Carbono
Orgnico (CO), aplicar el Mtodo de
titulacin volumtrica, Para Carbono
Orgnico (CO) Mtodo
Espectrofotomtrico, para La
Capacidad amortiguadora el Mtodo
Potenciomtrico.
2. DIAGRAMA DE FLUJO

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BIOQUIMICA METABOLICA

ADICIONAR +/- 20
GRAMOS DE SUELO
Y 40 ML DE AGUA
DESTILADA

ESPERAR 60
SEGUNDOS TOMAR
EL PH

AGREGAR 5 ML DE
NAOH 0,1N ,
AGITAR MEDIR PH

AGITAR EN
AGITADOR
MAGNTICO POR
5MIN

TERCER Y CUARTO
BEAKERS,
ADICIONAR 20ML
DE AGUA
DESTILADA Y 20 ML
DE SOLUCIN
BUFFER PH 7,0,

REGISTRAR TODOS
LOS VALORES

ESPERAR 60
SEGUNDOS Y
OBSERVAR EL PH,
CON EL
ELECTRODO DEL
POTECIOMETRO

AGREGAR 5 ML DE
NAOH 0,1N ,
AGITAR DE NUEVO
POR UN MINUTO Y
MEDIR EL PH2

TABLA DE DATOS
Carbono orgnico, mtodos volumtricos y
espectrofotomtrico.

Muestras

Peso
(Wm)

VFeSO4
(mL)

Absorbancia
(A)

M1
M2
Blanco ()

Datos potenciomtricos para capacidad


amortiguadora de Suelos
Muestras
Suelo 1

Peso
(Wm)

Vol
(mL)

pH1

pH2

GLOSARIO

ESPECTROFOTMETRO : es un instrumento
usado en el anlisis qumico que sirve para
medir, en funcin de la longitud de onda, la
relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica
relativos
a
dos
haces
deradiaciones y la concentracin o reacciones
qumicas que se miden en una muestra.
CAPACIDAD AMORTIGUADORA: La
capacidad amortiguadora de un tampn es la
cantidad de cido o de base que se puede
agregar, antes de que el pH comience a
cambiar de modo apreciable, y est
determinada por el valor real de las
concentraciones de los componentes del par
cido/base conjugado.
MTODO POTENCIOMTRICO: Sirve para
medir el Ph de una solucin.

Suelo 2
Agua
destilada
Solucin
Buffer

5 REFERNCIAS

TABLA 3. Valores de capacidad y potencial


amortiguador para las muestras analizadas.
Muestra
s

la bureta y Titular lentamente, adicionando el


sulfato sobre la solucin hasta debe aparecer y
permanecer un color verde esmeralda brillante.
Carbono orgnico
Materia Orgnica
Nitrgeno total.

(mEq
HCl
/pH)

(mEqN
aOH
/pH)

P
()
H
Cl

P ()
NaO
H

Harina
Forraje

3. RESULTADOS ESPERADOS
Al Colocar el Erlenmeyer beaker que
contiene la solucin diluida de suelo debajo de

https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot
%C3%B3metro
http://docencia.udea.edu.co/cen/QuimicaAn
aliticaII/pot1.html
Jairo Enrique Granados Moreno. MSc.
Protocolo de prctica. Bioqumica Metablica.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
UNAD.
2014
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001
/GUIA_ACTIVIDADES_MOMENTO_3_2015_Contextualizacion_practica_-BM-2X.pdf

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BIOQUIMICA METABOLICA
vaso de precipitado
beaker de 400 ml
Tubo de ensayo

Bao termostato
Papel filtro
Gradilla

2.2 Reactivos requeridos


Reactivo
Fenol
cido sulfrico
Hidrxido de
sodio
Agua destilada
Glucosa

Frmula
C6H5OH
H2SO4
NaOH

Concentracin
5%
1N
O,6N

H2O

20 mL
1%

C6H12O6.
2.3 Procedimiento
III. DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS
NO ESTRUCTURALES (CNE), EN
FORRAJES, POR EL MTODO DE NELSONSOMOGYI
INTRODUCCIN
Las plantas vegetales estan compuestos por
carbohidratos estructurales y no estructurales,
los no estructurales se almacenan en rganos
vegetativos como races, rizomas, estolones,
coronas y parte inferiores del tallo Los
principales CNET en los tejidos de especies
forrajeras son monosacridos como glucosa y
fructosa, disacridos como sucrosa y maltosa y
polisacridos como almidones y fructosanos.
1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL

DIAGRAMA

METODO
DE FENOLACIDO
sULFURIC
O
CARBOHID
RATOS NO
ESTRUCTU
RALES
MONOSAC
ARIDOS

FLUCTOSA

GLUCOSA

BASA SU CONTENIDO EN
ALMIDONES HIDROLIZABLES
Y AZUCARES SOLUBLES
REALIZANDO
MEZCLA DE
REACTIVOS PARA
LECTURA
ESPECTROFOMETRI
CA

MATERIALES Y METODOS

2.3.1 En el campo: Realizar toma de muestras


2.3.2 En el laboratorio:
Pesar +/- 2.0g de muestra en balanza
analtica
y
registrar
como:
(Wm),
depositarla luego en un vaso de precipitado
y agregar 50 mL de solucin de HCl 0,6N.
Agitar constantemente con la varilla de
vidrio durante 3 minutos.
Llevar el beaker con la solucin al bao
termostatado y calentar a 90C,durante 20
min
Dejar enfriar por 5 min y filtrar sobre papel
filtro.
Medir el volumen del filtrado(Vf) y pasar
5mL a un tubo de ensayo, adicionar a ste
5mL de NaOH 0,6N, agitar por 15
segundos, tapar y rotular as: FFCNE:
Filtrado de forraje para carbohidratos no
estructurales.

Lectura espectrofometrica:

Alistar el espectrofotmetro a una , calibrar


el aparato con el tubo blanco, ajustando a
100% de Transmitancia (%T) y 0,000 de
Absorbancia (A)

2.1 Materiales y equipos


Balanza analtica

varilla de vidrio

Leer la Absorbancia (A) de los tubos st y m;


registrar en su tabla de datos

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3 DIAGRAMA DE FLUJO
PESAR
+/- 2.0G
DE
MUESTR
AY
REGISTR
AR

ADICIONAR A
STE 5ML DE
NAOH 0,6N,
AGITAR POR 15
SEGUNDOS

AGREGAR
50 ML DE
SOLUCIN
DE HCL
0,6N

MEDIR EL
VOLUMEN
DEL
FILTRADO(VF)
Y PASAR 5ML
A UN TUBO
DE ENSAYO

AGITAR
DURANTE
3
MINUTOS

DEJAR
ENFRIAR
POR 5 MIN
Y FILTRAR
SOBRE
PAPEL
FILTRO

LLEVAR EL
BEAKER CON
LA SOLUCIN
AL BAO
TERMOSTATAD
O

CALENTAR
A
90C,DURA
NTE 20 MIN

TAPAR Y
ROTULAR

para el metabolismo. Este grupo incluye


azcares simples, sacarosa y algunos
almidones que son fcilmente digeridos en el
intestino delgado y producen fluctuaciones en
la glucosa en sangre despus de ingerirlos.
ESPECTROFOTOMTRICA: Es la medicin
de la cantidad de energa radiante que absorbe
o transmite un sistema qumico en funcin de
la longitud de onda; es el mtodo de anlisis
ptico ms usado en las investigaciones
qumicas y bioqumicas.
El espectrofotmetro es un instrumento que
permite comparar la radiacin absorbida o
transmitida por una solucin que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que
contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.
http://www.horse1.es/es/inicio/39publicaciones/cientificos/117-los-carbohidratos

4. TABLA DE DATOS
Datos para la cuantificacin de CNE

https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr
%C3%ADa

Indicadores

Jairo Enrique Granados Moreno. MSc.


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wm

Descripcin
Peso de la
muestra

VF

Volumen del
filtrado

A st

Absorbancia del
estndar

Am

Absorbancia del
tubo que contena
el FFCNE

Valor

5. RESULTADOS ESPERADOS
La determinacin cantidad de carbohidratos
totales No estructurales, basndose en su
contenido de almidones hidrolizables y
azcares solubles
6. GLOSARIO
ALMIDONES HIDROLIZABLES: Son los que
producen azcares (principalmente, glucosa)

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TEMA IV: ACTIVIDAD CATALTICA DE LA


CATALASA

La catalasa se obtiene fundamentalmente a


partir de microorganismos y su funcin es
convertir el agua oxigenada (H2O2) en agua
(H20) y oxgeno
El uso de esta enzima permite alargar la vida
til de zumos de ctricos, cerveza y vino ya
que, al degradar el agua oxigenada (un agente
oxidante) en sustancias no reactivas (agua y
oxgeno) se inhiben las reacciones oxidativas
sin problemas secundarios.

MTODO
PERMANGANOMTRIC
O

DIAGRAMA

CATALASA

SE OBTIENE A PARTIR
DE
MICROORGANISMOS

INHIBE LAS
REACCIONES
OXIDATIVAS

GENERA POR LA
OXIDACIN DE CIDOS
GRASOS(AG) EN LOS
PEROXISOMAS

2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Materiales y equipos
Soporte Universal
Bureta
Pinzas
Elenmeyer
Montaje de Titulacin

0,01M

(ECAT)

Pipeta graduada
Probeta graduada
beaker de 400mL
Tubo de ensayo
Gradilla

2.3.2 En el laboratorio Pesar ms o menos 2g


de muestra picada pulverizada, registrar el
valor como: Wm y colocarla en un tubo de
centrifuga, luego adicionar 10mL de solucin
fra de buffer fosfato 0,05M, pH=6,8-7,0, agitar,
con agitador de vidrio (3min) y centrifugar a
2500rpm durante 5min. Sacar el sobrenadante,
filtrar y medir su volumen, registrarlo como: Vf
y tomar 5 mL de ste para depositarlo en un
tubo de ensayo, taparlo, rotularlo como:
EVCAT(extracto de verdura para catalasa )
EFCAT(extracto de fruta para catalasa),
ECCAT (extracto de concentrado para
catalasa), ESCAT, colocarlos inmediatamente
en bao de hielo.
DIAGRAMA DE FLUJO

PESAR MS O
MENOS 2G DE
MUESTRA PICADA
PULVERIZADA

FILTRAR Y MEDIR
SU VOLUMEN,
REGISTRARLO
COMO: VF

TOMAR 5 ML
,DEPOSITARLO EN
UN TUBO DE
ENSAYO, TAPARLO,
ROTULARLO.

REGISTRAR EL
VALOR COMO: WM

CENTRIFUGAR A
2500RPM DURANTE
5MIN

COLOCARLOS EN
BAO DE HIELO

COLOCARLA EN UN
TUBO DE
CENTRIFUGA

ADICIONAR 10ML
DE SOLUCIN FRA
DE BUFFER
FOSFATO 0,05M,
PH=6,8-7,0, AGITAR

4. TABLA DE DATOS
Muestras /
tubos

Indicadores
Wm (g)

2.2 Reactivos requeridos


Reactivo

Frmula

Perxido de
Hidrogeno
cido sulfrico

H2O2
H2SO4

Concentraci
n

2N

gr

2.3 Procedimiento

ENZIMA, QUE PERMITE


PERDURAN LA VIDA DE
ALGUNOS ALIMENTOS

KMnO4

2.3.1 En el campo: Recoger las muestras

INTRODUCCIN

1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL

Perganmanato
de potasio
Extracto de
catalasa

Suelo
Harina
Forraje
Verdura
Blanco

Vf (mL)

VKMnO4
(mL)

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BIOQUIMICA METABOLICA
Tipo de
muestras
analizadas

Origen, ubicacin geogrfica,


regin, agroclimatologa

4. RESULTADOS ESPERADOS
Se determin la actividad de la catalasa por
mtodo permanganomtrico, y se cuantifico la
actividad enzimtica de la catalasa en
muestras de origen vegetal
5. GLOSARIO
CATALASA La catalasa es una catalaza
perteneciente
a
la
categora
de
las oxidorreductasas que cataliza la
descomposicin
delperxido
de
hidrgeno (H202) en oxgeno y

H2O

REACCIONES OXIDATIVAS:
Es una reaccin qumica en la que uno o
ms electrones se
transfieren
entre
los
reactivos,
provocando
un
cambio
en
sus estados de oxidacin
6 REFERENCIAS
https://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa
Fuente Internet:
http://www.2bachillerato.es/biologia/tema13/te
ma13.pdf
Es propiedad:
www.profesorenlinea.Cl
- Registro N 188.540
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ACIDO
TRICLOROACTICO
(ATA) AL 10% ( CL3C-COOH )
REACTIVOS
AGUA DESTILADA

CUANTIFICACIN DE
NITROGENO NO
PROTEICO
FORRAJES Y SUELO

(FRACCIN A DE
VAN SOEST )

PUEDE SER
ASIMILADO O NO
ASIMILADO POR EL
ANIMAL

2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Materiales y equipos

TEMA V: CUANTIFICACIN DE

NITRGENO NO PROTECO EN
SUELOS Y PASTOS, MTODO ATA,
DE VAN SOEST

Balanza Analtica
Vaso de precipitado
tubo de ensayo

nevera
espectrofotmetro

2.2 2 Reactivos requeridos


Reactivo

Frmula

cido
Tricloroactico
(ATA

( Cl3-CCOOH )

INTRODUCCIN
Los
pastos
contienen
compuestos
nitrogenados de origen proteico y no proteico,
que pueden variar dependiendo de la madurez
de la planta (Church y Fontenot, 1979, el
contenido total de este nitrgeno (N) no
siempre resulta completamente utilizable a
nivel digestivo, ya que parte de este N se
encuentra incrustado en la pared celular
indigestible (Pichard y Van Soest, 1977; Van
Soest, 1982), lo que puede reducir el
aprovechamiento del nitrgeno ingerido. En
este laboratorio se pretende cuantificar por el
mtodo de Van Soest el nitrgeno no proteico
contenido en una muestra de forraje.
1. MENTEFACTO
CONSEPTUAL

DIAGRAMA

Concentraci
n
Al 10 %

Agua destilada

2.3 procedimiento
En el campo: Toma de muestras
En el laboratorio: Extraccin con cido
Tricloroactico (ATA)
Pesar +/- 2,0 g de muestra (Suelo, forraje)
(picada pulverizada) , en balanza
analtica y registrar como ( y colocar en
vaso de precipitado
Adicionar 20 mL de agua destilada fra,
agitar por 1min
Dejar reposar la mezcla por 15 min
Adicionar 30 mL de sol.
Reposar a Temperatura ambiente por 20
min
Filtrar sobre papel filtro en probeta

Medir el volumen del filtrado(Vf)

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Recolectar 5 mL del filtrado, colocarlos


en un tubo de ensayo y rotularlo: FFNNP:
filtrado de forraje para nitrgeno no
proteico o FSNNP (Filtrado de suelo para
nitrgeno no proteico
Tapar los tubos y guardar en nevera a
refrigeracin, hasta ser utilizados en la
mezcla reactiva.

3. DIAGRAMA DE FLUJO
PESAR +/- 2,0
G DE
MUESTRA
(SUELO,
FORRAJE)

MEDIR
VOLUMEN
FILTRADO

ROTULAR Y
GUARDAR
REFRIGERADO

REGISTRAR Y
COLOCAR EN
VASO
PRECIPITADO

FILTRAR

APLICAR
SOLUCION
INDICADA

ADICIONAR 20
ml DE AGUA
DESTILADA
FRIA

REPOSAR OR
20 MINUTOS

OBTENER
ABSORVANCIA

DEJAR
REPOSAR POR
15 MINUTOS

ADICIONAR 30
ml DE
SOLUCIN DE
ATA Y AGITAR
POR UN
MINUTO

4. TABLA DE DATOS
Datos para Nitrgeno no proteico
(NNP)
Muestras /
tubos

Indicadores
Wm
(g)

Suelo
Forraje
Standar
Tipo de
muestras
analizadas

Vf (mL)

Absorbancia
(A)

Origen, ubicacin geogrfica,


regin, agroclimatologa

5. RESULTADOS ESPERADOS
Cuantificar el nitrgeno no proteico (NNP).
Determinacin del contenido de NNP y
Protena verdadera (PV) en forrajes y
concentrados.

GLOSARIO
ANLISIS KJELDAHL: Las determinaciones de
nitrgeno de Kjeldahl se realizan sobre una
variedad de sustancias alimentarias. El mtodo
Kjeldahl se puede desglosar en tres pasos
principales: digestin, destilacin y valoracin.
NITRGENO NO PROTEICO: Se denomina
Nitrgeno no proteico a los compuestos de
nitrgeno que pueden ser convertidos en protenas
por algunos organismos vivos. Muchos organismos
superiores no pueden obtener aminocidos de otras
formas, ms que absorbindolos de la dieta. Los
cuales pueden ser convertir algunos aminocidos
en otros diferentes. Los compuestos que forman el
NNP
son
los
que
contienen amonaco, nitritos y nitratos y otros como
la urea, el biuret o el cido rico. Los organismos
que puede utilizar el NNP son los hongos,
las plantas y algas, bacterias y organismos que
viven en simbiosis con ellos.
BIBLIOGRAFIA
http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_tec/c
eniaphoy/articulos/n8/arti/obispo_n/obispo_n.ht
m

Granados Moreno. Jairo Enrique MSc.


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