I.

Efecto de la temperatura
Objetivos:
Determinar la temperatura de muerte trmica de los microorganismos estudiados
tratados a 40C y 65C durante diferentes intervalos de tiempo.
Determinar el nmero de microorganismos supervivientes resistentes al
tratamiento trmico.

II. Accin de la presin osmtica

Objetivo:
Determinar la concentracin de NaCl que afecta el crecimiento microbiano.

Accin de agentes qumicos sobre los microorganismos

I. Efecto de la concentracin de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos.

Objetivo:
Determinar el efecto del pH en el crecimiento y desarrollo microbiano.

II. Accin de los desinfectantes y antispticos.

Objetivo:
Observar y comparar el efecto de los desinfectantes y antispticos en el desarrollo
microbiano.

Pruebas de diferenciacin bioqumica

Objetivo:
Caracterizar a los microorganismos en funcin de su capacidad fermentativa de
diferentes carbohidratos.

3) Metodologa
I. Efecto de la temperatura
Materiales:

Cepas de Escherichia coli y

Staphylococcus aereus

II. Accin de la presin osmtica

Materiales:

Cepa de Escherichia coli de 24 horas de edad crecida en

caldo de cultivo.
4 Placas Petri

5%,10%,20%,40% en medio base Agar Nutritivo)

1 Placa con Agar Nutritivo.
Asa de siembra
Encendedor

(concentraciones

de

NaCl

al

III. Efecto de la concentracin de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos.

Materiales:

Cultivos de 24 horas de edad de Escherichia coli.

Tubos con caldo nutritivo estril previamente ajustados con HCl 1 N y NaOH 1Na
valores de pH de 3, 5 , 7 , 9 , 11 (1 de cada una).

IV. Accin de los desinfectantes y antispticos.

Materiales:

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus

Medio de cultivo: Agar nutritivo.

Desinfectantes:
Leja 10%
Cresol 5%
Pinesol

Antispticos:
Alcohol 70%
Agua oxigenada
Merthiolate
Jabn medicado(Protex)

Otros
Disco de papel filtro, pinzas.
Plumn indeleble.

V. Prueba de diferenciacin bioqumica

Materiales:

Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus.

Caldo base rojo fenol
Carbohidratos: glucosa, sacarosa y lactosa

Pipetas estriles.
Plumn indeleble

Procedimiento
I. Efecto de la temperatura

EFECTO DE LA
TEMPERATURA

CULTIVO

Escherichiacoli

Sthaphylococcusa

SOMETEMOS

40C y
65C
CADA
0, 40y 80 y
100
HACEMOS DILUCIONES
SERIADAS (1ML) DE CADA
CULTIVO (10-3)
SEMBRAMOS 0,1 ML DE CULTIVO POR
DIFUSIN EN MEDIO DE AGAR NUTRITIVO

ROTULAMOS LAS PLACAS

DE MANERA ADECUADA

INCUBAR A 28C por 48

HORAS EN POSICION
INVERTIDA
II. Accin de la presin osmtica

ACCIN DE
PRESIN
OSMTICA
SEMBRAMOS E. Coli POR ESTRIADO
SIMPLE EN PLACAS

BASE DE AGAR CON

NaCl
CONCENTRACIN

5%

10%

20%

40%

ROTULAMOS LAS
PLACAS DE
MANERA
INCUBAR POR 48
HORAS A 28C

COMPARAMOS
RESULTADOS DE
CRECIMIENTO

ACCION DE AGENTES QUIMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS

III. Efecto de la concentracin de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos.

EFECTO DE LA
CONCENTRACION DE
PH EN LOS
MICROORGANISMOS

INOCULAMOS E. Coli CON

AGUJA DE NICROM
CIRCULAR
SOBRE
TUBOS EN
CONCOTENIDO DE
CALDO NUTRITIVO
CON

PH 3

PH 5

PH 7

PH 9

PH 11

INCUBAMOS A 28C por

48 HORAS

ANOTAMOS
OBSERVACIONES

IV. Accin de los desinfectantes y antispticos.

ACCION DE LOS
DESINFECTANTES Y
ANTISEPTICOS

AGENTES
DESINFECTANTES

3
DIVISIONE
S

AGENTES
ANTISEPTICOS

DIVISION DE
PLACAS CON
MARCADOR

4
DIVISIONES

1 ml de
cultivo +
Agar
nutritivo

.LEJIA AL
10%
.CRESOL
. PINESOL

1 ml de
cultivo +
Agar
nutritivo

SEMBRAMOS S.
AUREUS POR
DIFUSION

CON UN PINZA
ESTERIL
COLOCAMOS UN
DISCO DE PAPEL
FILTRO
PREVIAMENTE
EMBEBIDO EN
SOLUCION SOBRE

.ALCOHOL AL
70%
.AGUA
OXIGENADA
.
MERTHIOLATE
.JABON

INCUBAMOS A
28CPOR 48
HORAS

V. Prueba de diferenciacin bioqumica

INOCULAMOS 1
ML DE CADA
CEPA

Escherichiacoli

Staphylococcus
aureus

EN
CALDO DE ROJO
FENOL
CON

GLUCOS
A

LACTOS
A

SACARO
SA

INCUBAR LOS
TUBOS A 28C
POR 48 HORAS

CUESTIONARIO
5. Cul es la razn de usar alcohol de 70C?
El mecanismo de accin de los alcoholes es la desnaturalizacin de las protenas de los
microorganismos. La desnaturalizacin proteica slo es posible en presencia de agua; por
este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las
mezclas de alcoholes con agua, por esta razn se utiliza alcohol a 70C.
Podra tener cierta accin bacteriosttica al inhibir la produccin de metabolitos esenciales
para la divisin celular rpida.
Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a bacterias Gram positivas y Gram
negativas, incluyendo patgenos multirresistentes (Staphylococcus aureus resistente a
meticilina, Enterococcus).
El alcohol al 70% puede matar al 90% de las bacterias de la piel si sta se mantiene
hmeda (con el antisptico) durante dos minutos. La friega con algodn humedecido en
etanol que se deja secar sobre la piel mata como mximo al 75% de las bacterias.

6. En un proceso productivo de derivados de frutas, Cul sera el agente contaminante

principal? Cul sera su agente qumico de control? Qu funcin cumplira este agente?
Proponga un ejemplo.

Zumos de fruta
Los zumos de frutas son en su mayora productos cidos, de pH inferior a 4,0. Esta
caracterstica normalmente impide que proliferen en ellos microorganismos patgenos,
sobre todo despus de someter el producto a los tratamientos trmicos habituales durante
su proceso de produccin.
Los jugos de frutas, conservas y concentrados de frutas. Su contenido en carbohidratos
varia de 40 a 60 %, entre los microorganismos que pueden estar presentes como agentes
patgenos son solo los mohos aciduricos, las levaduras y las bacterias (L actobacillus,
Acetobacter), que poseen la capacidad para causar descomposicin si no se usan buenos
mtodos de conservacin.
Agente qumico de control
Funcin del cido ctrico
Saborizante y regulador del pH; incrementa la efectividad de los conservantes
antimicrobianos.

7. Explique el efecto de los desinfectantes y antispticos en el desarrollo microbiano.

Efecto de los desinfectantes:

El desinfectante tpico detiene el crecimiento de las bacterias matndolas.
Un segundo tipo de desinfectante, el inhibidor, previene que las bacterias crezcan
en el lugar donde se aplica el qumico.

 El desinfectante conocido como "agente bacteriosttico" no mata las bacterias,

sino que detiene temporalmente el crecimiento bacteriano.

Efecto de los antispticos:

Los antispticos son sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo o sobre
la piel para reducir la posibilidad de infeccin,sepsis o putrefaccin. Algunos antispticos
son autnticos germicidas, capaces de destruir microbios (bactericidas), mientras que
otros son bacteriostticos y solamente previenen o inhiben su crecimiento.
El mecanismo de accin de los antispticos y desinfectantes depende de tres
mecanismos bsicos: Capacidad de coagular y precipitar protenas, alterar las
caractersticas de permeabilidad celular y toxicidad o envenenamiento de los sistemas
enzimticos de las bacterias, que a su vez dependen del grupo qumico. stos pueden
producir la muerte o inhibicin celular de las bacterias por oxidacin, hidrlisis o
inactivacin de enzimas, con prdida de los constituyentes celulares. Son ms selectivos.
Sin embargo se han hecho estudios sobre las resistencias que presentan ciertos
microorganismos a antispticos y desinfectantes.Las bacterias Gram negativas por lo
general son ms resistentes a los antispticos y desinfectantes que las Grampositivas.
Se han hecho estudios donde se midieron las concentraciones mnimas inhibitorias (CIM)
que presentan tanto las Grampositivas como las Gram negativas, y se estableci que hay
diferencias marcadas entre Staph. Aureus y E. coli esto porque la membrana externa de
las bacterias Gram negativas acta como una barrera que limita la entrada de varios tipos
de agentes antibacterianos sin relacin qumica.

8. De acuerdo a la capacidad fermentativa de los carbohidratos por las bacterias

estudiadas. Indique los alimentos que pueden ser potencialmente deteriorados por
esta actividadMetablica. Por qu?
Alimentos potencialmente deteriorados
Existen diversos alimentos asociados debido a la capacidad fermentativa de diversos
carbohidratos de e. coli, la fuente ms frecuente es la carne de vacuno y los productos
crnicos de vacuno (hamburguesas, carne picada, etc.) que hayan sido poco cocinados,

as como la leche cruda sin pasteurizar y los productos elaborados con ella (queso,
nata)etc(lactosa).

Bibliografa

http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/4274/Capitulo1.pdf

La resistencia de bacterias a antibiticos, antispticos y desinfectantes una

manifestacin de los mecanismos de supervivencia y adaptacin CRISTINA
EUGENIA CABRERA, M.SC. 1, ROMMEL FABIN GMEZ, B.SC. 2, ANDRS
EDMUNDO ZIGA, B.SC. 3

https://books.google.com.pe/books?isbn=8495447592