I.

DETALLES EXPERIMENTALES

1. Materiales de laboratorio
- Vasos de precipitado
- Probetas
- Embudo
- Cocinilla
- Pisceta
2. Reactivos
- Cloruro de Sodio al 10%
- Solucin saturada de Sulfato de Amonio
3. Material qumico
- Huevos frescos de gallina
- Carne molida desgrasada
- Leche fresca de establo
- Harina de trigo
4. Procedimiento Experimental
a. voalbmina
Se separ la clara de la yema de huevo fresco de gallina. La
solucin no se diluy.
b. Solucin diluida de albmina de huevo
Despus de separar la clara, se bati energticamente y se
mezcl en un matraz con un volumen de agua destilada 10
veces mayor. La solucin se filtr a travs de una gasa doble
previamente remojada en agua.

c. Protenas de
Se colocaron
desgrasada;

la carne
g de carne molida
se aadieron mL

de cloruro de sodio al 10% y se dej reposar la mezcla por 15 a

20 minutos agitando frecuentemente. Le filtr el lquido rojo a
travs de una gasa doble.

d. Protenas de la
leche
A la leche de
establo,
se
aadi un volumen igual de solucin saturada de sulfato de
amonio. La solucin saturada consisti en aproximadamente 19
g de sulfato de amonio en 25 mL de agua. Se form un
precipitado blanco que luego se filtr utilizando una doble gasa.

e. Albmina vegetal
Se mezclaron 25g de harina de trigo en con 100 mL de agua
destilada. Se agit la mezcla energticamente durante 30
minutos. Se filtr luego la solucin con ayuda de una gasa doble.

cuestionario
1. Qu efecto tienen las sales concentradas y las sales
diluidas en la solubilidad de las protenas?
Cuando se aade una sal a una solucin de protena ocurre un
incremento en la solubilidad y esto se conoce con el nombre de

solubilizacin por salado (salting in). Este incremento inicial en la

solubilidad se debe a la estabilizacin de la protena efectuada
por un descenso en el coeficiente de actividad de los grupos
ionognicos. A medida que se aumenta la fuerza inica, se
obtiene un mximo en la solubilidad seguido por un descenso en
la misma que se conoce como insolubilizacin por salado
(Salting out). Durante la insolubilizacin por salado, ocurre
probablemente una competencia entre la protena y la solucin
salina por las molculas de agua disponibles para su
solvatacin, y entonces las interacciones protena-protena se
hacen ms importantes.
La relacin entre la solubilidad (S) y la fuerza inica (I) en la
regin de la insolubilizacin por salado es:
log S=K s I

donde es el logaritmo de la solubilidad hipottica cuando I = 0

y Ks es el coeficiente de insolubilizacin. Un pequeo cambio en
I puede, por lo tanto causar un cambio considerable en S. El
valor de Ks, es semejante para la mayora de las protenas en
una solucin salina dada, mientras que es dependiente de
cada protena en particular. Por lo tanto, las cuatro protenas de
una mezcla como se muestra en la figura siguiente, pueden ser
separadas recogiendo los precipitados que se forman en
diferentes intervalors de fuerza inica.

En la prctica, no ocurre la separacin completa de las protenas

puesto que hay siempre alguna superposicin de las curvas de
solubilidad de las protenas en una mezcla. Sin embargo, la
precipitacin por sal constituye un mtodo muy valioso cuando
se usa conjuntamente con otros mtodos.
2. Qu entiende por precipitacin reversible e irreversible de
las proteinas?
El proceso de precipitacin est relacionado con la
desnaturalizacin, siendo la fuerza inica el agente
desnaturalizante qumico. Entonces, una precipitacin reversible
es aquella precipitacin en la cual el precipitado de protena
formado inicialmente vuelve a su estado inicial mediante
cambios en:
- La polaridad del disolvente.
- La fuerza inica.
- El pH.
- La temperatura.

Un aumento de la fuerza inica del medio (por adicin de sulfato

de amonio, urea o cloruro de guanidinio, por ejemplo) tambin
provoca una disminucin en el grado de hidratacin de los
grupos inicos superficiales de la protena, ya que estos solutos
(1) compiten por el agua y (2) rompen los puentes de hidrgeno
o las interacciones electrostticas, de forma que las molculas
proteicas se agregan y precipitan. En muchos casos, la
precipitacin provocada por el aumento de la fuerza inica es
reversible. Mediante una simple dilisis se puede eliminar el
exceso de soluto y recuperar tanto la estructura como la funcin
original. A veces es una disminucin en la fuerza inica la que
provoca la precipitacin. As, las protenas que se disuelven en
medios salinos pueden desnaturalizarse al dialisarlas frente a
agua destilada, y se renaturalizan cuando se restaura la fuerza
inica original.

Reacciones de precipitacin de protenas

Instrumental y reactivos :
Papel de filtro , solucin de protenas: pectona, gelatina ,
albumina , casena
embudo de vidrio tubos de vidrio
sulfato de amonio ,acido actico (1%,10%), cloruro de
sodio ,hidrxido de sodio (10%), acido ntrico , acido
sulfrico y actico (cc), acido tricloroacetico-(5%) acido
sulfisalicilico (20%) , sulfato de cobre , acetato de plomo
5%,nitrato de plata (5%),cloruro mercurioso(2%), cloruro
frrico , acido piccrico, acido clorhdrico 5%, etanol , acido
sulfrico(0.66N).

Sedimentacin de
amonio

protenas

con sulfato de

Curso de determinacin: en un tubo de ensayo colocamos

1.5ml de solucin proteica , agregamos un volumen igual
de solucin saturada de sulfato de amonio y suavemente
agitamos la
mezcla .apareci un sedimento
de la
precipitacin de las globulinas , filtrar el liquido atravez de
un filtro seco
, a una parte del filtrado trasparente
calentamos hasta ebullicin y observamos la coagulacin
de las albuminas que se encuentran en la solucin . a la
otra parte agregamos un exceso de sulfato de amonio con
agitacin constante hasta la
interruccion de su
disolucin , aparece una turbidez o copos de la albumina
que se precipita (comparamos con el filtrado inicial ) , la
precipitacin
de protenas con sales
es un proceso
reversible
y con la adicin de aguas las protenas
nuevamente se disuelven . en solucin acuosa las

partculas proteicas estn cargadas e hidratadas lo que

determina la estabilidad de sus soluciones . pero a alta
concentracin de sales , los iones que tambin estn
hidratados producen la destruccin de la capa acuosa de
las molculas proteicas ya que con los iones de la sal , se
qita la carga de la protena que se absorbio de en ella .
como resultados de estos dos procesos las soluciones
proteicas pierden su estabilidad , las particulas de la
protena se pegan unas con otras , se agrandan y , al final,
caen en forma de precipitado .