1.

CONCEPTO Y FUNDAMENTO
Es la operacin por la que se unen tejidos procedentes de plantas distintas para formar una
sola planta capaz de crecer y desarrollarse como tal. El injerto est compuesto por dos partes:
una parte superior que dar lugar al tronco y copa de la planta, que se llamar variedad; y una
parte inferior formada por el sistema radicular, que se nombrar pie, patrn o portainjerto.
Mediante el injerto se mantienen las caractersticas genticas, edad fisiolgica y estado
sanitario de la planta madre de la que procede. Por ello es un buen mtodo para perpetuar
clones, generalmente de especies frutales y ornamentales que, propagados por semilla tendran
caracteres juveniles y/o habra una dispersin gentica.
Los tejidos que se sueldan cuando se ponen en contacto son los de crecimiento en grosor
del tallo, (el cmbium). Una vez prendida la pa o la yema, el patrn alimenta el injerto, que se
desarrolla normalmente reproduciendo con toda fidelidad los caracteres de la planta de la cual se
ha sacado.
o
o

El portainjerto: es la planta en la que se va a realizar el injerto y sobre la que se soldar la

pa o yema. El portainjerto o patrn es la parte que posee las races.
El injerto: es el fragmento de la variedad que se desea propagar y que se suelda en el
portainjerto. El injerto es la parte area del ensamblaje. Tambin es la ms frgil, puesto
que generalmente ya slo se alimenta de sus propias reservas de savia.

2. OBJETIVOS DEL INJERTO

1) Sustituir las tcnicas de reproduccin vegetativa tales como el esqueje, el acodo simple
o areo u otra semejante en las especies y variedades que presentan problemas de radicacin
porque tienen un crecimiento y por lo tanto, florecen y fructifican muy tarde.
2) Dotar a la variedad seleccionada de un aparato radical adaptado a las caractersticas del
terreno.
3) Sustituir al aparato radical de una variedad sujeto a patologas especficas, por el que
un portainjerto que por el contrario, sea inmune a las mismas.
4) Introducir rpidamente en el jardn y en el huerto las nuevas variedades con la ventaja
de tener plantas adultas ya ambientadas.
5) Cambiar variedades con injertos en plantas adultas.
6) Producir variedades distintas en una misma planta, obviando la escasez de terreno y
favoreciendo la polinizacin cruzada necesaria para las variedades y por lo tanto con fines
productivos.
7) Reducir el vigor vegetativo que en las plantas en general y en los frutales, en particular
es inversamente proporcional a la floracin. Un excesivo vigor reduce la produccin y retrasa su
inicio de maduracin.
8) Rejuvenece rboles viejos y en particular los frutales en fase productiva descendente.
)

9) Restablecer la circulacin de la savia en el tallo y en las ramas obstaculizada por

traumas, heridas o por la incompleta soldadura del injerto.
10) Influenciar el desarrollo de la variedad segn el patrn elegido.

3. CONDICIONES PARA UN BUEN INJERTO

Para que la operacin del injerto tenga xito deben darse una serie de condiciones:
a. Compatibilidad: Las dos partes patrn e injerto deben ser afines. Ms adelante
ampliaremos el tema de compatibilidad.

b. Intimo contacto: Las zonas cambiales de patrn e injerto deben tener un contacto
ntimo. Un buen atado ser el que no oprima cortando el paso de sabia, ni se dilate
permitiendo la entrada de humedad que pueda favorecer la entrada de hongos
patgenos. El material utilizado habitualmente usado son las tiras de plstico. La
rafia se sigue utilizando para el reinjerto, o cambio de variedad, ya que los
patrones suelen ser gruesos y exigen ms presin en el atado y sujecin del injerto.

c. poca adecuada: El estado vegetativo de la pa y del patrn deben ser

prcticamente el mismo, en todo caso si no fuera as es preferible que la pa est
en estado vegetativo ms retrasado.

d. La planta madre: Debe encontrarse en un estado sanitario y nutritivo bueno. El

material debe ser de la misma variedad que deseamos propagar y ha de manifestar
todas las caractersticas varietales tpica de esta.

4. COMPATIBILIDAD E INCOMPATIBILIDAD

4.1 COMPATIBILIDADES (influencia)

Efectos del patrn sobre la variedad. El patrn influye sobre la variedad de varias formas,
entre ellas pueden citarse:
o
o
o
o
o

Tamao y hbito de crecimiento.

Precocidad de fructificacin: nmero de aos que transcurren desde el injerto
hasta que se inicia la floracin y fructificacin.
Intensidad de fructificacin y cosecha.
Tamao, calidad y poca de maduracin del fruto.
Resistencias: a fro, salinidad, clorosis, enfermedades, etc.

Efectos de la variedad sobre el patrn: Los efectos de la variedad sobre el patrn son
menos conocidos, sin embargo, est comprobado que la variedad influye sobre el desarrollo,
ramificacin, etc., del sistema radicular.

A pesar de la antigedad de la tcnica y su uso cotidiano, actualmente permanecen

desconocidos muchos aspectos de la fisiologa del injerto como los relacionados con la posibilidad
o no de que se formen uniones variedad/patrn estables.
El injerto est limitado a las dicotiledneas y a las conferas; en ambos casos las plantas
tienen una capa de cmbium vascular que se extiende entre el xilema y floema.
Entendemos que existe afinidad o compatibilidad entre dos materiales cuando puestos en
contacto el cambium de ambos es posible su soldadura para formar un solo individuo.
La unin por injerto slo es adecuada cuando existe entre ambas plantas una cierta
afinidad. Generalmente esta afinidad es mayor cuando las plantas estn botnicamente ms
cercanas sin que existan reglas seguras. Actualmente slo el ensayo experimental es seguro.

Patrn

Variedad
Tomate

Berenjena

Pimiento

Tomate

!!!!

!!!!

Berenjena

!!!!

!!!!

!!!!

!!!

!!

Pimiento
Nicotiana xanti

!"#$"%&%'()*"+,#,$,-"-.%!!!!%)/0%#/12"3%!!!%#/12"3%!!%)1-,(4513%!%)"$"%

La experiencia demuestra que no se pueden injertar plantas que pertenezcan a familias

diferentes.

Patrn

Variedad
Manzano

Peral

Membrillero

Nspero

Manzano

Peral

Membrillero

2-3 (!)

Espino albar

Nspero

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?%@"$"3%A!B%81CD2%E"5,1-"-18%

)
)
Albaricoquero

Almendro

Cerezo

Ciruelo

Melocotonero

Albaricoquero

SI

NO

NO

SI (3)

SI

Almendro

NO

SI

NO

SI

SI/NO

Cerezo

NO

NO

SI/NO (2)

NO

NO

Ciruelo

SI

SI (4)

NO

SI

SI (1)

Melocotonero

SI

SI

NO

SI

SI

!"#$"%=%'()*"+,#,$,-"-%-1%,2F15+(%12+51%75/+"$18%-1%9G/18(:3%18*14,18%-1$%CH215(%>5/2/8%A&B.%
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A?B%<,2%1)#"5C(%"$C/2"8%E"5,1-"-18%4()(%L18)"0(3%M155"-/1$%0%'5,8+()(5+(%8(2%,24()*"+,#$18I%%

)
Clones de ciruelo (patrn)

Injerto de melocotonero

Injerto de almendro

Mirobolan B

Muy incompatible

Incompatible

Mirobolan Wibaut

Incompatible

medio compatible

Mirobolan P 1254

medio incompatible

bastante compatible

Mariana 2624

ligeramente incompatible

Compatible

Mirobolan 2032

Compatible

Muy compatible

!"#$"%?%'()*"+,#,$,-"-%-1%)1$(4(+(215(%0%"$)12-5(%,2F15+"-(%8(#51%-,71512+18%4$(218%-1%4,5/1$(%A*"+5N2BI%

De forma similar la variedad y el patrn deben tener un vigor similar, o en todo caso la
variedad debe ser ms vigorosa, si fuera muy diferente la unin no suele ser muy duradera.
Cuando el patrn es muy vigoroso tiende a emitir rebrotes que compiten con la copa.
Una diferencia importante de vigor entre el patrn y la variedad puede producir
miriaques con sobrecrecimiento de uno o de otro segn los casos, que con el tiempo, produce
estrangulamientos de vasos conductores. Ejemplo satsuma injertada en citrange troyer y limonero
verna sobre naranjo amargo.

4.2 INCOMPATIBILIDADES

La unin por injerto slo es adecuada cuando existe entre ambas plantas una cierta
afinidad. Generalmente esta afinidad es mayor cuando las plantas estn botnicamente ms
cercanas sin que existan reglas seguras. La experiencia demuestra que no se pueden injertar
plantas que permanezcan a familias diferentes. Dentro de la misma familia el xito es ms fcil
entre plantas de una misma especie que entre plantas de un mismo gnero y que entre dos
plantas de gneros diferentes, aunque siempre existen algunas excepciones. Por ello vamos a
distinguir distintos tipos de incompatibilidades:
Aquellos casos en que los sntomas se translocan a travs de un intermediario, es decir,
que la presencia de un injerto intermedio de compatibilidad reconocida con patrn y variedad no
evita los sntomas. A este tipo de incompatibilidad se denomina normalmente TRASLOCADA. Las
combinaciones que presentan este tipo de incompatibilidad no tienen solucin en la prctica por
lo que deben evitarse: ejemplo tpico es el almendro o melocotonero injertados sobre mirabolano.

El empleo de un intermediario, compatible con la variedad y con el patrn, no evita la

incompatibilidad.
Casos en los que los sntomas de desavenencia se localizan en la unin del injerto. A este
tipo se le denomina incompatibilidad LOCALIZADA. Este tipo de incompatibilidad se presenta con
alguna frecuencia dando lugar a roturas por la unin del injerto. Las superficies presentan un
aspecto muy caracterstico.
Existen casos en los que existe una diferencia importante de crecimiento bien del patrn o
de la variedad, lo que puede producir miriaque, lo que significa que ese excesivo desarrollo bien
de la variedad o del patrn producir un estrangulamiento de los vasos conductores. Este efecto
puede evitarse utilizando madera intermedia.

5. TCNICAS Y MATERIALES PARA LA REALIZACIN DEL INJERTO.

5.1 MATERIALES PARA LA REALIZACIN DEL INJERTO.

a. Elementos de corte: sierras, navajas, hendidores, injertador, tijeras, etc. Siempre

deben estar muy bien afilados para que los cortes san limpios y fcil de realizar. En
ciertos casos se requiere desinfeccin (leja, alcohol, etc.), para evitar posibles
infecciones entre plantas.

b. Elementos para atado: plstico elstico, gomas, pinzas, etc. De dimensiones y

resistencias acordes con el tipo de injerto. Su finalidad es que haya la mxima

unin entre patrn y variedad, adems de impedir que entre suciedad, agua, aire,
etc.

5.2 ELECCIN DE LA VARIEDAD, PATRN Y MADERA INTERMEDIA.

La variedad a injertar se elegir tras un estudio del mercado de frutos, plantas

ornamentales, hortalizas, etc; adems se tendr en cuenta el clima y mdios tcnicos de los que
se dispone.

El patrn se elegir entre los que se adapten sobre todo al tipo de suelo que se dispone
(salinidad, sequa, encharcamiento, etc), produccin, precocidad, tamao del fruto y resistencia
o tolerancia a agentes patgenos.

Antes de elegir la variedad y patrn tenemos que tener en cuenta los posibles problemas
de incompatibilidades, para poder cambiar de patrn, variedad o poner madera intermedia.

5.3 RECOLECCIN, PREPARACIN Y ALMACENAMIENTO DE INJERTOS.

Los injertos se deben recolectar de rboles madre que sean de la variedad deseada
(autenticidad varietal) y que exista constancia de ello, especialmente en el caso de profesionales
viveristas. Adems deben estar libres de virus y de otras plagas o enfermedades que se pueden
transmitir por el injerto o que afectan al vigor de ste.

La poca de recoleccin puede ser en el momento de realizar el injerto o en otro

momento. Generalmente para los injertos que se han de realizar en primavera cuando la mayora
de las yemas estn recin brotadas y no se pueden aprovechar, los injertos se recolectan en
invierno, antes de la brotacin y se almacenan en frigorfico (5-10C segn la especie y 80-90 %
HR) hasta su empleo. Los injertos que se realizan en agosto-septiembre (dormidos) pueden ser
recolectados directamente de las ramas del rbol madre ya que stos suelen estar bien dotados.

Se elegir la rama o vareta adecuada al tipo de injerto, generalmente ramas de 1 ao o

menos. Si tiene hojas se quitarn inmediatamente, al igual que si tiene espinas. Se recortan las
varetas a un longitud adecuada para su manejo y se desechan los trozos que sean muy delgados o
muy gruesos o que no tengan yemas bien desarrolladas. A continuacin se envuelve en telas
limpias hmedas y se llevan al lugar de injerto. Si se han almacenado conviene realizar una
desinfeccin con fungicida de amplio espectro.

5.4 PRCTICAS DE CULTIVO ADECUADAS PARA EL XITO DEL INJERTO.

Si el tipo de injerto requiere levantar la corteza para llegar al cambium en la variedad o en

el patrn esto se logra mejor, adems que sea la poca del ao adecuada, si previamente (7-10
das) se realiza un riego a las plantas madres y al patrn (rbol receptor) de los injertos para
activar los pasos de savia. Cuando se injertan rboles viejos es conveniente realizar un
tratamiento con fungicida sistmico (Fosetil-Al) para evitar posibles exudaciones gomosas por las
heridas realizas al realizar el injerto. Una vez realizado el injerto no se deben realizar riegos
areos, ya pueden producir posibles pudriciones o ataque de hongos en el injerto, lo que hara
fracasar la prctica realizada.

5.5 POCA DE REALIZACIN DEL INJERTO.

a. A ojo velando u ojo vegetante, cuando se realizan en primavera o principios de

verano y la yema se desarrolla en pocas semanas. Si en verano si hay un poco de
madera bajo de la yema, se llama chip o June bud.
b. A ojo dormido, cuando se realizan al finalizar el verano. Las yemas injertadas
brotarn en la siguiente primavera, tras invernar soldadas al patrn.

5.6 REALIZACIN Y TIPOS DE INJERTOS.

INJERTOS DE YEMA

5.6.1.- Injerto de escudo o escudete o T

Se corta la corteza del patrn en forma de T, se levantan los dos lados de sta con la
parte de la navaja especial para ello y nunca con el filo, para evitar que se astille el leo.
La yema se cortar insertando el filo de la navaja por la parte superior de sta y se
descender paralelamente a la estaca hasta que la parte inferior de la yema, donde se cortar
clavando el cuchillo.
Una vez extrada la yema se sacar la pequea porcin de madera que queda debajo de
ella, siempre que resulte fcil de realizar.
Cuando ya tenemos el patrn y la yema preparados se proceder a introducir la yema entre
la corteza y el leo del patrn, procurando que la yema quede al exterior. A continuacin se atar
la zona del injerto, pero sin cubrir la yema. A veces el corte sobre el pie se hace de forma de T
invertida, esta variante presenta ventajas en aquellas especies que cuando se les daa la corteza
tienen tendencia a exudar goma. En el caso de la T invertida la goma se acumulara en la parte
inferior del injerto, ya que es la zona de ms herida; mientras que en la T la goma se acumula
en la parte superior pudiendo llegar a ahogar la yema.

5.6.2.- Injerto de plancha o parche.

En el patrn se extirpa una porcin de corteza rectangular y se le sustituye por una porcin
de corteza con yemas (normalmente 2). Se intentar que la porcin de de corteza con yemas
procedente de la variedad sea un poco ms grande que el rectngulo realizado en el patrn, con
la finalidad de que la parte de la variedad quede por de bajo de la corteza sobre la que
injertamos. Se sujetar bien y se atar. Es un tipo de injerto que se puede realizar cuando el
patrn tiene una corteza ms gruesa que la variedad.

Escudo procedente de la variedad

INJERTOS DE PA

Son aquellos en que la variedad est constituida por una porcin entera de brote provisto
de una o ms yemas. Al igual que el injerto de yema, conviene que el patrn est en situacin
vegetativa ms avanzada que la pa a injertar. Se utiliza en aquellos casos que interesa injertar
rboles adultos por distintos motivos: cambiar de variedad una plantacin, introducir variedades
polinizadorasrestaurar partes de un rbolTambin se utiliza para injertar rboles jvenes.

5.6.3.- Injerto de hendidura

Se realiza un corte transversal al patrn previamente decapitado, donde se insertarn una
o dos pas. La pa se modela con dos cortes en la base a bisel, quedando muy afiladas.
Posteriormente se ata.

5.6.4.- Injerto de incrustacin.

En el patrn se hace una hendidura radial, donde se colocar la pa. La pa queda
formada por una larga cua lateral.

5.6.5.- Injerto ingls.

Al patrn y a la variedad se le hacen los mismos cortes. Se cortan a bisel y despus se les
hace un corte en sentido inverso pero con orientacin paralela al primer corte. As se forma un
lengeta en ambas partes, que al hacer el injerto se entrecruzarn aumentando mucho la
superficie de zona cambial en contacto y, por lo tanto, sus probabilidades de xito. Para llevar a
trmino este tipo de injerto, el patrn y la pa debern un dimetro similar.

5.6.6.- Injerto lateral

La hendidura se realiza lateralmente sobre el patrn, sin la decapitacin de ste, y se le
inserta una pa cortada a bisel por los dos laterales.

INJERTOS DE APROXIMACIN

Injertos en los que tanto el rbol como la variedad permanecen enraizados mientras el
injerto no se haya soldado. Una vez verificada su soldadura, la variedad se separa de sus races.

5.6.7.- Injerto simple

Se extrae una porcin igual de corteza y algo de madera en ambas partes donde se desea
la unin, se ponen en contacto y se atan.

Injerto por aproximacin

5.6.8.- Injerto ingls

Las muescas que se practican en cada una de las partes son iguales a las descritas
anteriormente en el injerto ingls de pa. La nica diferencia es que en este caso el patrn y la
variedad estn enraizados.

5.7 REALIZACIN DEL INJERTO, TIPO ADECUADO.

El injerto se realiza generalmente en el campo, aunque a veces se realiza en taller. Antes

de realizar el injerto, se prepara el patrn quitando las hojas de la zona de injerto, lo que se
hace, generalmente, con tijeras de podar. De forma inmediata se efecta el injerto, haciendo
cortes limpios, poniendo en contacto ntimo ambas zonas de cambium y atando, a continuacin,
con una cinta elstica. Cuando se cubra el injerto con cinta elstica, hay que ser precavidos
cuando los injertos son de yema, ya que si el injerto se realiza en poca de mucho calor, la cinta
puede actuar sobre la yema aumentando la temperatura y escaldandola; sin embargo si el injerto
lo realizamos a ojo velando es conveniente cubrir tambin las yemas.

5.8 CUIDADOS POSTERIORES

Generalmente se debe mantener una ligera humedad en el suelo, lo que facilita el agarre
del injerto.
A los 20-25 das aproximadamente, se quitan las ligaduras para comprobar prendimiento
(en injertos de pa se debe esperar ms). En caso afirmativo se hace una incisin anular por
encima del injerto de yema (no es preciso en los de pa), que abarque un 75% del dimetro a fin
de evitar la bajada de auxinas y, por tanto, estimular la brotacin del injerto a esta prctica se le
denomina cotana.
El patrn a medida que vaya creciendo la variedad se ir recortando. A veces conviene
entutorar el joven brote si no se sostiene por s mismo o para que crezca verticalmente.

7+,%)IF)T&$.1-.1-%;%$&'(F)0#/3&41)&()4&3.1F)

1. MICROPROPAGACIN

La micropropagacin es un conjunto de tcnicas especiales de cultivo de tejidos, que

consisten en producir plantas a partir de porciones muy pequeas de ellas, de tejidos o clulas
cultivadas aspticamente en un tubo de ensayo o en otro recipiente en que se puedan controlar
estrictamente las condiciones del ambiente y la nutricin. La capacidad de ciertos tejidos vegetales, as como de varios rganos de plantas (tallos, flores, races, embriones, polen, tejidos,
etc.), de crecer de manera ms o menos indefinida, se ha utilizado durante muchas dcadas en
los laboratorios cientficos como un instrumento de investigacin por genetistas, botnicos o
fitopatlogos.
Estas tcnicas se emplean para multiplicar plantas asexualmente en forma rpida,
eficiente y en grandes cantidades. La micropropagacin se utiliza para multiplicar o propagar
plantas nuevas, tales como aquellas creadas por ingeniera gentica, mutagnesis o mejoramiento
gentico. Se utiliza tambin la micropropagacin para obtener plantas libres de enfermedades
(tales como virosis) u obtener grandes cantidades de plantas que no se propagan eficientemente.

Los tipos de explantes que se pueden usar para llevar a cabo la micropropagacin, pueden
ser:
"
"
"

rganos: Meristemos, pices, Yemas axilares y Nudos, Races, Anteras y Polen, Hojas,
Embriones.
Clulas: Callo y suspensiones celulares.
Protoplastos: Un protoplasto vegetal puede definirse como: La parte de la clula
vegetal que est delimitada e incluida dentro de la pared celular y que puede ser
plasmolisada y aislada por eliminacin mecnica o enzimtica de la pared celular. El
protoplasto es por lo tanto una clula desnuda, rodeada por su membrana plasmtica,
potencialmente capaz de regenerar la pared celular, crecer y dividirse.

A estos mtodos se les ha denominado colectivamente cultivo de tejidos, una expresin

que en ocasiones se usa como sinnimo de micropropagacin. Los procedimientos de cultivo de
tejidos utilizan un sistema de produccin in vitro que requiere instalaciones de tipo laboratorio y
tcnicas aspticas similares a las empleadas para cultivar hongos, bacterias y otros
microorganismos (autoclave para esterilizar, cmara o cabina de flujo laminar, cmara de cultivo
con temperatura, etc.).
La propagacin de las plantas superiores por medio de las tcnicas de cultivo celulares invitro, iniciadas en la dcada de los aos cincuenta, ha conocido un gran auge y desarrollo a partir
de los setenta, producindose anualmente millones de plantas con estas tcnicas. En material de

tipo forestal no se ha usado hasta el momento de forma masiva o comercial, nada ms que a
escala de experiencias y en todo caso en especies endmicas, raras o amenazadas de extincin.
Tanto por la complejidad de las instalaciones que tienen que estar montadas de forma muy
completa y perfecta, as como por la necesidad de especializacin que debe tener el viveristamicropropagador hacen que su uso sea por el momento muy restringido, en el mbito forestal. De
todas formas, estimamos que en un futuro, y para plantas de difcil reproduccin por semilla
(siempre que no sea de forma masiva), se aplicar este mtodo, dadas las siguientes ventajas:
-

Velocidad de propagacin.
Eliminacin de enfermedades y organismos patgenos.
Rentabilidad en algunas especies.
Reduccin del banco de plantas madre.
Conservacin prolongada.
Revigorizacin y rejuvenecimiento.
Independencia de ciclos estacionales.
Permite propagar plantas estriles.

Sin embargo tiene algunos inconvenientes, que debemos resear, como son:
-

Baja rentabilidad en muchas especies.

Dificultades en la aclimatacin al ambiente natural.
Rejuvenecimiento a veces no deseado.
Variacin gentica no deseada.
Las races obtenidas in vitro a veces no son funcionales.
La capacidad regenerativa se acaba perdiendo.

)
O$/8+5"4,N2%&.%Tcnico manipulando material en cabina de flujo laminar

La propagacin in-vitro se basa en los mismos principios que la multiplicacin vegetativa

tradicional (en la capacidad de diferenciacin de las clulas vegetales), en un medio sinttico y
estril.

El buen resultado de la multiplicacin in-vitro depende de cuatro factores que se deben

controlar y afinar al mximo:

a.
b.
c.
d.

Estado ptimo de la planta madre

Esterilidad del material de partida
Pulcritud en la limpieza de las instalaciones y esterilidad en las manipulaciones
Establecimiento de un correcto equilibrio entre los distintos componentes del
medio cult.

El ambiente de cultivo deber presentar una serie de caractersticas:

-

Luz, no la necesita para la fotosntesis, sino para regular el proceso de iniciacin de brotes
y races. El periodo diario de luz generalmente es de 16 horas.
Temperatura generalmente alrededor de 25C

Otra cosa que caracteriza a la propagacin in-vitro y la diferencia de los dems sistemas de
propagacin es el medio nutritivo, que estar formado por:
-

Sales inorgnicas, distintas composiciones

Sustancias orgnicas
Carbohidratos: sacarosa.
Vitaminas: tianina, inosital, aminocidos.
Reguladores de crecimiento: Auxinas, citoquininas, giberelinas y complejos orgnicos.

Dentro del proceso de micropropagacin se pueden diferenciar varias fases o etapas:

I.
II.
III.
IV.
V.

Desinfeccin de las yemas de la planta y/o desinfeccin de semillas

Introduccin del material seleccionado in Vitro
Multiplicacin de brotes
Enraizamiento
Aclimatacin

Esta secuencia de etapas abarca el ciclo completo de la multiplicacin de plantas in vitro y

puede ser aplicada a diferentes especies vegetales.

Preparacin de la planta madre

Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantos con
un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para obtener estos explantos es
recomendable mantener a las plantas madre, es decir la planta donante de yemas, durante un
perodo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses en un invernadero bajo condiciones
controladas. En ese ambiente se cultiva la planta en condiciones sanitarias ptimas y con un

control de la nutricin y riego adecuados para permitir un crecimiento vigoroso y libre de

enfermedades.

Desinfeccin del material vegetal

Una vez elegida la planta madre, se extraern los fragmentos a partir de los cuales se
obtendrn los explantos. Los explantos pueden ser yemas, trozos de hojas, porciones de races o
semillas. Antes de extraer los explantos se har una desinfeccin de los fragmentos de planta
madre para eliminar los contaminantes externos. Los contaminantes ms comunes son los hongos
y las bacterias que habitan en forma natural en el ambiente. Una vez desinfectado el material
vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia. A efectos de obtener tales condiciones, se
trabaja en cabinas de flujo laminar para extraer los explantos a partir del material vegetal. Estos
explantes se introducirn en un tubo de cultivo conteniendo medio de cultivo para poder
controlar la sanidad y la viabilidad, luego de realizar la desinfeccin del material con hipoclorito
de sodio (agua clorada comercial), pura o diluda durante un perodo de 5 a 15 minutos, seguido
por 3 a 4 enjuagues en agua esterilizada.

)
O$/8+5"4,N2%6.%Explantes de Marantha contaminados (a) por una deficiente desinfeccin y quemados (b) por exceso%

Introduccin del material in vitro

Luego de la desinfeccin superficial, las semillas o las yemas dependiendo del material
seleccionado, se ponen en medio de cultivo estril. En un perodo de una semana o quince das,
comienza el proceso de germinacin o regeneracin de nuevos tejidos vegetales, iniciando el ciclo
de cultivo in vitro.

)
O$/8+5"4,N2%=.%Fitotron o cmara de cultivo%

Multiplicacin de los brotes

Durante esta fase se espera que los explantes que sobrevivieron las fases anteriores
originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas. En la base de cada hoja hay
una yema que se desarrollar luego de ser puesta en contacto con el medio de cultivo.
Peridicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y
resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la
cmara de flujo laminar o en un lugar aislado que nos permita mantener las condiciones de
asepsia. De esta forma aumenta el nmero de plantas en cada repique o divisin de las plantas. El
nmero de plantas que se obtiene depender de la especie vegetal y de las condiciones del medio
de cultivo. El nmero de plantas que se obtiene por la va de la micropropagacin permite
alcanzar incrementos exponenciales, considerando que todos los factores que afectan el
crecimiento hayan sido optimizados.

)
O$/8+5"4,N2%?.%Explantes de Begonia formando callo organognico (a) y Yema de Marantha desarrollada en medio base (b)%

Eleccin de un medio de enraizamiento de los explantes

Para enraizar los explantos se utilizan principalmente plantas individuales de un tamao

aproximado de 2 cm. Los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin se transfieren a un
medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo de las auxinas.
Algunas especies de plantas no necesitan pasar por esta etapa y emiten sus races en el mismo
medio de cultivo donde desarrollan yemas nuevas, por lo tanto el proceso de multiplicacin y
enraizamiento transcurren en forma simultnea.

O$/8+5"4,N2%P.%Explantes de Begonia desarrollando sistema radicular%

Aclimatacin de los explantos enraizados

Los explantos recin enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, de manera
que el xito o el fracaso de todo el proceso depende de la aclimatacin. En esta etapa las plantas
sufrirn cambios de diferente tipo que permitirn la adaptacin de las mismas a vivir en
condiciones naturales. En el momento en que se extraen los explantos o plantas enraizados de los
frascos, estn poco adaptados a crecer en un invernculo, ya que estos explantes han enraizado y
crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas
(estructuras responsables de regular la transpiracin y prdida de agua en la planta) que no son
completamente funcionales frente a descensos de la humedad relativa, y por lo tanto demasiado
lentos para evitar la desecacin del explante. Por otra parte, crecer en ambientes tan hmedos
tambin suele implicar la falta de una cutcula con cera bien desarrollada, que representa la
barrera fsica para evitar la perdida de agua a lo largo de toda la superficie de la planta. Las
plantas enraizadas, deben ser aclimatadas a las condiciones de humedad del invernadero
disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la
intensidad de luz. Estas plantas se plantarn en contenedores (almacigueras) cubiertos por un
plstico, para mantener la humedad relativa elevada. La eleccin de un sustrato con buenas
caractersticas fsicas, es clave para el xito de esta etapa. Para el trasplante, elegimos un
sustrato suelto, poroso, con mezcla de arena turba, cscara de arroz quemado, para permitir un
desarrollo y crecimiento de races muy rpido. Las mezclas son diferentes y muy variadas de
acuerdo a la especie con la que estamos trabajando. Despuss de retirar cuidadosamente el agar
de las races para evitar daarlas, las plantas se enjuagan y se colocan en almacigueras con la
mezcla de sustratos seleccionada y cubiertos con nylon. Todos los das se debe controlar el nivel
de humedad en las almacigueras. Si es necesario, se aplica un riego con una pulverizadora
manual, para mantener un ambiente hmedo a nivel del sustrato. A los 15 das del trasplante, se
puede comenzar a levantar la cobertura de nylon en las horas de menor calor (temprano en la
maana o en la ltima hora de la tarde). Al comienzo las plantas se dejan media hora por da
destapadas. A la semana siguiente se dejan destapadas durante una hora. Al mes del trasplante,
se dejan tapadas durante la noche y si hay crecimiento de nuevas hojas, las plantas pueden
permanecer destapadas. Las condiciones del cultivo in vitro, generan cambios en algunos aspectos
anatmicos y fisiolgicos de las plantas, por esta causa, durante la aclimatacin, los cambios
deben ser muy graduales, para minimizar el estrs y tener mayor tasa de supervivencia.