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2014
ESTEROIDES
EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE
COLESTEROL DE LA YEMA DEL HUEVO
INFORME DE LABORATORIO N 3
PROFESOR: Roberto Martnez
ALUMNOS:
Alviar Suarez Martha
Briceo Flores Eduardo
Fernndez Astete Lizeth
Pea Ayala Juan Carlos
Pea Fernndez Juana Mara
GRUPO: Sbados
HORA: 15 h 30 min 17 h 10 min
2014-09-27
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NDICE
OBJETIVOS
INTRODUCCION
MARCO TERICO
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
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RESULTADOS
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DISCUSIN
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CONCLUSIONES
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CUESTIONARIO
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BIBLIOGRAFA
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ANEXOS
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OBJETIVOS
Extraer esteroide como: el colesterol de la yema del huevo a partir de una serie de
procedimientos y reacciones.
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INTRODUCCIN
Lpidos son aquellas sustancias orgnicas extrables de tejidos animales o vegetales, por
medio de solventes orgnicos como ter, cloroformo; tetracloruro de carbono, benceno, etc.
Los lpidos extrados de material biolgico representan una gran variedad de molculas,
estructuralmente diferentes, pero que comparten la propiedad de ser solubles en solventes
orgnicos, llamados por eso, solventes de las grasas. Entre los lpidos existen molculas no
polares, como los triacilglicerol, o triglicridos, y molculas polares como los
fosfogliceridos, o fosfolipidos, y los esfingolipidos, y molculas de tipo terpenoide los
esteroides, los terpenos y algunas vitaminas.
En el reino animal, el esteroide ms abundante es el colesterol. El colesterol no se precipita
del ter por la acetona, y como es insaponificable, puede extraerse con ter, despus del
tratamiento con hidrxido de potasio. El colesterol, generalmente, cristaliza como placas
rmbicas blancas. No tiene olor ni sabor. Si se expone a la luz y al aire, se oxida
lentamente, formando una mezcla de productos que bajan su punto de fusin y cambian sus
reacciones de solubilidad.
Es insoluble en agua, cidos, y lcalis. Sus principales propiedades qumicas se relacionan
con su grupo hidroxilo secundario y su doble ligadura.
La demostracin de la presencia del colesterol se hace por medio de la reaccin de
Libermann-Burchard, que es especfica para esteroles con instauracin en los anillos A, B o
C. Esta prueba se realizo en el laboratorio identificando esteroides en el aceite, cebo de
vaca, cebo de cerdo.
En el presente laboratorio tambin se realizo la identificacin de colesterol en el huevo, esta
prueba se realiza en etanol-ter 2:1 (en el laboratorio se realizo con etanol y cloroformo),
esta prueba adems nos ayuda a extraer lectinas que queda en los solventes orgnicos,
mientras el colesterol queda junto a sustancias de menor concentracin.
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MARCO TERICO
1. LPIDOS
Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas bsicamente por carbono e hidrgeno y
generalmente tambin oxgeno; pero en porcentajes mucho ms bajos. Adems pueden
contener tambin fsforo, nitrgeno y azufre. (1)
establecer una definicin desde el punto de vista qumico, en el caso de los lpidos esta
tarea entraa una mayor dificultad, ya que constituyen un grupo de sustancias
qumicamente muy heterogneo que no se caracteriza, como otras biomolculas, por la
posesin de un determinado conjunto de grupos funcionales. Por ello, resulta mucho ms
conveniente identificarlos sobre la base de una de sus propiedades fsicas: su mayor o
menor solubilidad en distintos tipos de disolventes. As, se considera que los lpidos son un
grupo de biomolculas que se caracterizan por ser poco o nada solubles en agua y, por el
contrario, muy solubles en disolventes orgnicos no polares. Los lpidos desempean en las
clulas vivas una gran variedad de funciones, entre las que destacan las de carcter
energtico y estructural. (2)
Dada la naturaleza de estas estructuras se pueden dar las siguientes clasificarlas:
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1.2. Fosfolpidos:
Los fosfoglicridos (FFGs) son componentes esenciales de las membranas biolgicas. Se
trata tambin de steres del glicerol, pero slo poseen dos grupos acilo unidos a los tomos
de oxgeno de los carbonos 1 y 2 del glicerol, mientras que el tercer hidroxilo est
esterificado con el cido fosfrico, el cual a su vez se encuentra unido a un resto X de
distinta naturaleza, resto que da nombre al FFG. (5)
1.3. Glucolpidos:
Estos lpidos contienen, a semejanza de los fosfoesfingolpidos, la molcula base de
ceramida y conforman conjuntamente un grupo denominado esfingolpidos, sin embargo
carecen de grupo fosfato y su grupo polar est formada por una o varias unidades de
monosacridos (de 1 a 6), que pueden ser D-glucosa, D-galactosa o derivados como N7
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Figura 5.
1.4. Terpenos:
Son un grupo de lpidos que no contienen cidos grasos y son por lo tanto no
saponificables. Estn formados por la polimerizacin de un hidrocarburo de 5 tomos de
carbono llamado isopreno (2-metil-1,3-butadieno) (ver Figura 6). Los terpenos existentes
en la naturaleza contienen un nmero variable de unidades de isopreno polimerizadas.
Generalmente la "cabeza" de cada unidad de isopreno est unida con la "cola" de la
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Figura 6.Isopreno
1.5. Prostaglandinas:
Son una clase especial de cidos grasos insaturados. Son hormonas locales sintetizadas en
el mismo lugar donde ejercen su accin a partir de los lpidos de las membranas. Son
vasodilatadores arteriales relacionados con inflamaciones. Provocan agregamiento
plaquetario e intervienen en la contraccin de la musculatura lisa.
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2. ESTEROIDES
Los esteroides son un grupo de lpidos de estructura compleja que tampoco contienen
cidos grasos y por lo tanto tambin son no saponificables. Estn relacionados
estructuralmente
con
el
hidrocarburo
tetracclico
denominado
Segn su estructura qumica y tambin por sus funciones dentro del organismo se clasifican
en:
a) Hormonas sexuales como la testosterona (hormona sexual masculina), el estradiol
(hormona sexual femenina), y la progesterona (hormona progestgena). (2)
b) Hormonas adrenocorticales como la aldosterona y el cortisol, que regulan diferentes
aspectos del 12 metabolismo. (2)
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3. COLESTEROL
El colesterol es una sustancia similar a la grasa e indispensable para la vida. Se encuentra
en las membranas celulares de nuestros organismos, desde el sistema a nervioso al hgado y
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al corazn. El cuerpo necesita colesterol para fabricar hormonas, cidos biliares, vitamina
D, y otras sustancias. (7)
Sntesis biolgica del colesterol
El colesterol desde un punto de vista simplificado es un polmero de Acetil CoA, por tanto
su sntesis de colesterol tendr dos fases importantes:
1. Fase anaerobia. Polimerizacin anaerobia de Acetil CoA. Se llevar a cabo hasta llegar a
una estructura de 30 carbonos: el escualeno.
2. Fase aerobia. Ciclacin y transformacin del escualeno en colesterol. Requiere oxgeno.
Fase anaerobia
La sntesis comienza en el citosol con Acetil CoA, que procede tanto de hidratos de
carbono, como de lpidos y protenas. El objetivo de esta fase es, partiendo de Acetil CoA,
dar lugar a Escualeno
1. Se unen dos molculas de Acetil CoA para dar lugar a Acetoacetil CoA, reaccin que
libera una CoASH. La enzima que cataliza esta reaccin es la -cetotiolasa.
2. Se incorpora al Acetoacetil CoA otra molcula de Acetil CoA para dar lugar a
hidroximetilglutaril CoA, lo que libera una CoASH. La enzima encargada de la sntesis es
la HMG CoA-sintasa. Hasta este paso la sntesis de colesterol coincide con la sntesis de
cuerpos cetnicos, y se produce en el citosol (a diferencia de la sntesis de cuerpos
cetnicos que era mitocondrial).
3. A la HMG CoA se le reduce su grupo carboxilo unido a la CoA, liberndose esta, y
quedando reducido este grupo carboxilo a un grupo alcohol. El producto de esta reaccin es
el Mevalonato un importante intermediario de la sntesis de colesterol, y la enzima es la
HMG CoA reductasa. Esto gasta 2 molculas de poder reductor en forma de NADPH+H+.
4. Se activa el mevalonato mediante tres reacciones sucesivas de fosforilacin, lo que gasta
3 ATP. Esta reaccin da lugar a 3-fosfo-5-pirofosfomevalonato y transcurre gracias a
quinasas sucesivas.
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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Para la extraccin del colesterol se hizo dos ensayos se tom 3 huevos crudos que luego
se pas a su coccin en agua hervida. Para luego extraer solamente la yema y pesarlo.
Peso de la
yema 45.5 gr
Se mantuvo
en reflujo por
10 min
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3. Una vez que paso los 10 minutos en reflujo lo sacamos de la cocina para enfriar y
posteriormente filtrarlo.
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COLESTEROL
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7. Luego que se haya activado las placas se pas hacer la corrida en la placa
cromatografa con cloroformo y metanol 9:1.
AZUL
ROJO
VERDE
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RESULTADOS
ESPECTRO IR:
En el espectro IR podemos observar las bandas ms importante segn el tipo de enlace que
tiene la estructura de la molcula y las vibraciones de las mismas. En el siguiente cuadro se
colocan las ms importantes:
Tabla2: bandas ms importantes del colesterol
TIPO DE ENLACE
O-H
C-H
C=C
RANGO cm-1
3600 3400
2900 - 2700
1720 - 1600
Se resalta que el doble enlace tiene una baja absorbancia, por ello solo observamos una
pequea pronunciacin en el espectro.
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ESPECTRO UV-VIS:
En el espectro UV-VIS observamos absorbancia en un rango de 240 a 290nm, Debido la
presencia del doble enlace el cual por los saltos electrnicos respectivos nos da un una
absorbancia en este rango.
ESPECTRO DE MASAS:
Podemos empezar a desfragmentar comenzando por regla del 13, luego desfragmentamos
logrando los picos obtenidos en el espectro.
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DISCUSIN
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CONCLUSIONES
La biosntesis del Colesterol y sus se puede dividir en cuatro etapas que son:
Sntesis de mevalonato, conversin de mevalonato en unidades activas de isopreno,
formacin de escualeno por condensacin de unidades de isopreno activo y
finalmente ciclizacin de escualeno y transformacin en colesterol.
Se puede extraer esteroides como: el colesterol de la yema del huevo a partir de una
serie de procedimientos y reacciones y tambin gracias a una propiedad fsica del
colesterol que es la solubilidad en etanol cloro formo.
La cromatografa en capa fina (TLC) es una tcnica que permite separar una mezcla
de dos o ms compuestos en base a su solubilidad en la fase mvil. En este caso se
separaron mezclas de lpidos, que tienen carcter apolar, por lo que se us como
fase mvil un solvente orgnico; por consiguiente, el compuesto ms apolar tendr
una Rf mayor por ser ms soluble en la fase mvil que otro polar o menos apolar.
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CUESTIONARIO
1. Explique la biosntesis del colesterol?
a) Acetil CoA, cuyos grupos acetilos proveen todos los carbonos del colesterol
b) ATP, como fuente de energa
c) NADPH.H+ como proveedor de los equivalentes de reduccin necesarios para el
proceso de sntesis.
La sntesis de colesterol es un complejo proceso que puede dividirse en varias etapas para
su estudio:
Sntesis de mevalonato
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La acetil-CoA que se utiliza para la biosntesis del colesterol se deriva de una reaccin de
oxidacin (los cidos grasos o piruvato) en las mitocondrias y es transportada al citoplasma
por el mismo proceso que esta descrito para la sntesis del cido grasos (vase la figura
abajo). La acetil-CoA se puede tambin derivar de la oxidacin citoplsmica del etanol
catalizada por la acetil-CoA sintetasa.
Todas las reacciones de la reduccin de la biosntesis del colesterol utilizan NADPH como
cofactor. Los intermediarios isoprenoides de la biosntesis del colesterol se pueden ser
dirigidos a otras reacciones de sntesis, tal como para el dolicol (usado en la sntesis de
glicoprotenas N-ligadas, coenzima Q (de la fosforilacin oxidativa) o la cadena lateral del
heme-a. Adems, estos intermedios se utilizan en la modificacin con lpidos de algunas
protenas.
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Va de la biosntesis del colesterol. La sntesis comienza con el transporte del cetil. CoA
desde la mitocondria al citoplasma. El paso limitante ocurre en la reaccin catalizada por la
3 hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) reductasa, (HMGR). Las reacciones de la
fosforilacin son necesarias para solubilizar los intermedios isoprenoides de la va. Los
intermedios de la va son usados para la sntesis de protenas preniladas, del dolicol, de la
coenzima Q y de la cadena lateral del heme a. Colocar el cursor sobre los nombres de los
metabolitos intermedios para ver la estructura. PP = pirofosfato; rxn = reacciones.
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BIBLIOGRAFA
1. http://www.ceidis.ula.ve/cursos/nurr/bioquimica/tema_2/sesion_3/pdf/lipidos_sesion3.pdf
2. http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema06.pdf
3. http://www.edu.xunta.es/centros/iespuntacandieira/system/files/03_L%C3%ADpidos.pdf
4. http://saber.ucv.ve/jspui/bitstream/123456789/6103/6/Unidad%205.%20LIPIDOS.pdf
5. http://www.uhu.es/08007/documentos%20de%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_03_lipidos.p
df
6. http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/fisiologia-general/materiales-de-clase-1/tema-1.introduccion-al-estudio-de-la-fisiologia/Tema%202D-Bloque%20I-Lipidos.docx.pdf
7. https://www.colesterolfamiliar.org/formacion/guia.pdf
8. http://www.veoapuntes.com/MEDICINA/1/BIOQUIMICA%20METABOLICA/Bioquimic
a%20metabolica_L12.Metabolismo%20del%20colesterol.pdf
9. http://www.sanutricion.org.ar/files/upload/files/nutrientes_huevo.pdf
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ANEXOS
REACCIONES
Identificacin del colesterol mediante el reactivo lieberman-bouchard.
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