Compuestos fenlicos, actividad antioxidante,

contenido de resveratrol y componentes del aroma de 8

vinos peruanos
Phenolic compounds, antioxidant activity, resveratrol content and volatile
components of 8 peruvian wines

Rodrigo Salazar1; Giovana Espinoza2; Candy Ruiz2; Mara de Ftima

Fernndez2; Rosario Rojas*1,2
Departamento de Ciencias Farmacuticas, Facultad de Ciencias y Filosofa,
Universidad Peruana Cayetano Heredia, Av. Honorio Delgado 430, Lima 31,
Per,rosario.rojas@upch.pe
2
Unidad de Investigacin en Productos Naturales. Laboratorios de Investigacin y
Desarrollo, Facultad de Ciencias y Filosofa. Universidad Peruana Cayetano Heredia.
1

RESUMEN
El presente trabajo de investigacin tuvo como objetivo conocer las propiedades
fisicoqumicas, actividad antioxidante, componentes del aroma y contenido de
resveratrol y quercetina de 8 vinos peruanos. Se encontr que las densidades
relativas de los vinos estn dentro del rango de 0,9916 a 1,0174 g/mL, mientras
que los valores de pH varan de 3,18 a 3,97. Mediante mtodos
espectrofotomtricos se pudo cuantificar la concentracin de fenoles totales
(2374,25 a 3610,43 mg/L), flavonoides totales (1869,19 a 3138,85 mg/L) y
antocianinas totales (102,64 a 317,50 mg/L). Por medio de cromatografa lquida de
alta performance (HPLC) se pudo detectar la presencia del compuesto transresveratrol en 6 de los 8 vinos peruanos evaluados. El vino Tabernero Malbec-Merlot
contiene la mayor concentracin de dicho compuesto (0,56 0,03 g/mL) y,
adems, es el que presenta la mejor actividad antioxidante en el test de DPPH. Por
medio de cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas (GC-MS) se
pudo determinar que los compuestos voltiles de mayor concentracin en el aroma
de los vinos fueron el cido srbico, feniletanol, cido propanoico y monoetil ster
del cido butanodioico.
Palabras clave: vinos, trans-resveratrol, actividad antioxidante, quercetina,
flavonoides.

ABSTRACT
The aim of this investigation was to evaluate some physicochemical properties, the
antioxidant activity, the aroma components and resveratrol and quercitin contents

of 8 Peruvian wines. We found that the density of the selected wines was in the
range of 0,9916 1,0174 g/mL, while the pH values were between 3,18 and 3,97.
Spectrophotometric methods were used to determine the concentrations of total
phenolics (2374,25 3610,43 mg/L), flavonoids (1869,19 3138,85 mg/L) and
anthocyanins (102,64 317,50 mg/L). The compound trans-resveratrol was
detected by means of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) on 6 of the
8 Peruvian wines selected for the present study. The Tabernero Malbec-Merlot wine
had the highest concentration of this compound (0,56 0,03 g/mL) and the best
antioxidant activity on the DPPH test. GC-MS studies on the aroma of the evaluated
wines showed that the major compounds were sorbic acid, phenylethyl alcohol,
propanoic acid and ethyl hydrogen succinate.
Key words: wines, trans-resveratrol, antioxidant activity, polyphenols, quercetin,
flavonoids.

INTRODUCCIN
El vino es un licor que se obtiene por fermentacin del jugo de uva.1 Su consumo
est asociado a la disminucin del riesgo coronario y prevencin de enfermedades
crnicas asociadas al estrs oxidativo (arterioesclerosis, artritis, demencia,
cncer).2,3 Las propiedades beneficiosas del vino aparentemente se deben a su
capacidad antioxidante por su alto contenido de compuestos fenlicos.
Se ha demostrado que algunos compuestos fenlicos presentes en el vino, como el
resveratrol, cido glico y quercetina, tienen actividades contra alergias,
inflamacin, hipertensin, artritis y carcingenos.4
El trans-resveratrol (3,5,4-trihidroxiestilbeno) es producido naturalmente por la
especie Vitis vinifera en respuesta a situaciones de estrs, tal como son las
infecciones microbianas e irradiacin UV. Esta fitoalexina es usada para el
tratamiento de varias enfermedades, incluyendo la dermatitis, gonorrea, fiebre,
hiperlipidemia, arterioesclerosis e inflamaciones.5
Otro de los compuestos importantes en el vino es la quercetina, un flavonol que se
genera ampliamente en plantas y tiene una presencia significante en el vino tinto.6

Hasta principios del siglo XX el olor del vino se atribua a una sola sustancia, el
cido enntico; con los avances de la tecnologa se ha llegado a identificar a
ms de 1000 compuestos en el aroma; sin embargo, an no se tiene una tarjeta de
identidad para cada tipo de vino.1 Hasta la fecha, no se han reportado trabajos
previos sobre los compuestos voltiles de vinos peruanos.
En el presente trabajo, adems de evaluar la actividad antioxidante, el contenido
total de fenoles, flavonoides, antocianinas y quercetina en 8 vinos peruanos, se
puso nfasis en determinar el contenido de resveratrol y la composicin qumica de
sus aromas, con el objetivo de contribuir al desarrollo futuro de protocolos de
control de calidad.
PARTE EXPERIMENTAL

Aparatos.
Espectrofotmetro Shimadzu Uv/Vis 1240. Cromatgrafo lquido de alta
performance (HPLC), Elite LaChrom: bomba L-2130, detector DAD L-2455, Software
EZChrom Elite Client/Server versin 3.2. La columna analtica utilizada fue
Purospher STAR RP-18e (250 mm x 4,6 mm, 5 m de tamao de partcula).
Cromatgrafo de gases Agilent Technologies 7890A acoplado a un detector selectivo
de masas Agilent Technologies 5975. Se emple un columna capilar polar HP-FFAP
(30 m x 250 m x 0,25 m).
Reactivos.
1,1-difenil-2-picril-hidrazilo, Folin-Ciocalteu y quercetina fueron obtenidos de
Sigma- Aldrich, mientras que trans-resveratrol fue gentilmente donado por el Dr.
Fabricio Medina-Bolvar, profesor asociado del Arkansas Biosciences Institute,
Arkansas State University.
Muestra.
Se analizaron 8 vinos peruanos de los cuales 6 fueron adquiridos en cadenas de
supermercados en Lima y 2 en el valle de Lunahuan. En la tabla 1 se muestran los
vinos adquiridos segn las variedades de uvas utilizadas en su elaboracin, marca y
lugar de procedencia.

Determinacin de la densidad relativa.

Para determinar la densidad de los vinos, se utiliz un picnmetro con termmetro
incorporado. Se calcul la densidad del vino de la siguiente manera:

Donde P.P. es el peso del picnmetro lleno con la muestra (agua o vino).
Determinacin del pH.
Se tom 30 mL de cada vino en un matraz erlenmeyer de 50 mL y se midi el pH
con un potencimetro (Hanna Instruments) calibrado en el rango de 4 a 7.
Determinacin de compuestos fenlicos.
Se aplic el mtodo de Folin-Ciocalteu descrito por Gracia et al.7 Se utiliz una
curva de calibracin de cido glico cuyo rango de concentraciones fue de 2 a 4
mg/L. Las muestras de vinos fueron diluidas al 2% con H20 mili-Q. Las absorbancias
respectivas fueron medidas a 760 nm en un espectrofotmetro. Los vinos fueron

analizados por triplicado y los resultados fueron expresados en mg de cido glico/L

de vino.
Determinacin de flavonoides.
El contenido de flavonoides en 1 mL de vino sin diluir fue determinado mediante el
ensayo colorimtrico con AlCl3 propuesto por Ivanova et al.8 Para la cuantificacin
se elabor una curva de calibracin de quercetina a concentraciones entre 180 a
360 mg/L. Las lecturas de absorbancia fueron realizadas en un espectrofotmetro a
la longitud de onda de 510 nm. El contenido de flavonoides totales fue expresado
como mg de quercetina por litro de vino.
Determinacin de antocianinas totales.
La determinacin de antocianinas totales se hizo usando el mtodo propuesto por
Di Stefano et al.9, descrito por Ivanova et al.8 Se mezcl 200 L de cada vino con
4 ml de una solucin de etanol/H2O/HCl conc. (70:30:1) e inmediatamente despus
se midi la absorbancia a 540 nm en un espectrofotmetro. Debido a la falta del
estndar malvidin-3-glucsido, el contenido total de antocianinas se calcul usando
la siguiente ecuacin propuesta por Di Stefano:

Determinacin de quercetina y trans-resveratrol.

Las concentraciones de quercetina y resveratrol en los vinos fueron determinadas
por HPLC bajo las condiciones cromatogrficas del mtodo propuesto por LamuelaRavents et al.10 El flujo fue de 1,5 mL/min y la fase mvil consisti de una mezcla
de eluyente A (1% de cido actico en agua) y eluyente B (1% de cido actico en
acetonitrilo) bajo la siguiente condicin de gradiente: 10 min, 82% A : 18% B; 10
min, 60% A : 40% B; 10 min, 100 % A. Longitud de onda de monitoreo:
resveratrol a 306 nm y quercetina a 370 nm.
Las muestras fueron pasadas por un filtro Whatman 0,45 m y luego inyectadas
directamente al HPLC.
Se realizaron las curvas estndar para resveratrol y quercetina, cuyos rangos de
concentracin fueron de 0,06 - 3 ppm y 0,1 - 5 ppm, respectivamente. Las
determinaciones por HPLC fueron realizadas por triplicado.
Componentes del aroma.
Se utiliz el mtodo descrito por Ortega et al.11 En un tubo de centrfuga de 15 mL
se coloc 4,5 g de (NH4)2SO4, 3 mL de vino, 7 mL de H2O mili-Q y 1mL de
diclorometano. Se agit cada tubo por 1 hora y luego se centrifug a 2500 rpm por
10 minutos. Luego de la visualizacin de 2 fases, se inyect la fase de
diclorometano en el GC-MS. La temperatura del horno del cromatgrafo de gases se
mantuvo a 60 C por 3 minutos, para luego iniciar un gradiente de temperatura (4
C/min) hasta alcanzar 170 C, manteniendo esta temperatura final por 12
minutos. El gas de arrastre usado fue helio a un flujo de 0,6 ml/min. El volumen de
inyeccin fue 3 L con un split ratio 1:5.

Actividad antioxidante (test de DPPH).

Se us la tcnica descrita por valos et al.3 para determinar la actividad
antioxidante de los vinos. Las mezclas de reaccin estaban compuestas de 1,5 ml
de DPPH (3,6 mg/100mL etanol) y 0,1 mL de las muestras de vino diluidas en un
rango de concentracin de 0,5 a 16%. La mezcla de reaccin fue leda a los 30
minutos en un espectrofotmetro a 517 nm.
Para calcular la actividad antioxidante de los vinos se utiliz la siguiente frmula:

Donde AM es la absorbancia de la muestra + DPPH, AB es la absorbancia del blanco

(muestra + etanol) y AC es la absorbancia del blanco del reactivo (DPPH + etanol).

RESULTADOS Y DISCUSIN
La densidad relativa de los vinos estudiados se encontr en el rango de 0,99161,0174 g/cm3. Los valores de pH encontrados estn dentro del rango de 3 a 4,
siendo el vino Borgoa (SQ) el de pH ms cido (tabla 2).

En la tabla 3 se resume los contenidos totales de compuestos fenlicos, flavonoides

y antocianinas obtenidos por mtodos espectrofotomtricos para los 8 vinos
estudiados; as como sus actividades antioxidantes cuantificadas mediante el test
de DPPH.

La concentracin de los compuestos fenlicos de los vinos estuvo en el rango de

2370 a 3610 mg/L, siendo los vinos La Casona del Valle (Borgoa) y Santiago
Queirolo (Tannat) los de ms alto contenido. Muoz et al.4 observaron en otros
vinos peruanos concentraciones entre 627 a 3321 mg/L de fenlicos totales,
mientras que Ivanova et al.8 obtuvieron valores ms bajos (entre 1119 y 1515
mg/L de contenido fenlico total) en vinos serbios.
La concentracin de flavonoides totales estuvo en el rango de 1870 a 3139 mg/L,
con el vino Tacama (M/T/S) presentando el mayor contenido de dichos compuestos.
Asimismo, el vino Tacama (M/T/S) fue el que present la mayor concentracin de
antocianinas (317,50 mg/L). En general, son los vinos tintos los que presentan la
mayor cantidad de antocianinas, tal como reportan los estudios de Ivanova et al.8
(237 a 267 mg/L) y Radovanovic et al.12 (205,88 a 1940,28 mg/L).
El flavonoide quercetina posee propiedades antioxidantes ya reconocidas en
estudios previos,3 por lo que es importante cuantificar su presencia por mtodos
analticos como la cromatografa lquida de alta performance (HPLC). Como se
puede observar en la tabla 4, todos los vinos estudiados presentaron niveles
detectables de dicho compuesto, siendo el vino Santiago Queirolo (Shiraz) el que
present la mayor concentracin (3,23 0,29 g/mL). Muoz et al.4, obtuvieron
valores similares del contenido de quercetina en otros vinos peruanos (0,19-7,74
g/mL).

El compuesto trans-resveratrol es de gran inters en la salud humana debido al

efecto benfico que tiene en la reduccin del riesgo de enfermedades

cardiovasculares en los consumidores moderados de vino.2 Estudios hechos por

Lamuela-Ravents et al.,10 obtuvieron concentraciones de trans-resveratrol entre
0,60 y 8 g/mL en vinos de Espaa, mientras que los vinos italianos estudiados por
Careri et al.5 mostraron valores de 0,56 a 2,63 g/mL. No existen estudios previos
sobre el contenido de resveratrol en vinos peruanos. En el presente estudio, 2 de
los 8 vinos escogidos no mostraron niveles detectables de dicho compuesto,
mientras que en los restantes se observaron valores relativamente bajos (tabla 4).
El vino Tabernero (M/M) fue el que present el mayor contenido de transresveratrol (0,56 0,03 g/mL).
En general, los vinos con mayor concentracin de compuestos fenlicos presentan
mayor actividad antioxidante in vitro. El vino Tabernero (M/M), que present una
alta concentracin de compuestos fenlicos y el mayor contenido de resveratrol, fue
el que mostr mayor actividad antioxidante (tablas 3 y 4).
El estudio de los compuestos voltiles de los vinos por medio de cromatografa de
gases acoplada a espectrometra de masas (GC-MS) mostr como componentes
principales al etil-succinato, cido srbico, feniletanol y cido propanoico (tabla 5)

El monoetil ster del cido butanodioico se forma de manera lenta durante la

fermentacin del vino y sirve como conservante del vino ante la formacin de
bacterias.13 El cido srbico es un aditivo utilizado en los vinos como preservativo
por sus propiedades antimicrobianas, antifngico y antibacteriano. El feniletanol es
un alcohol que adems de poseer propiedades antimicrobianas, presenta un olor
aromtico a rosas. El cido propanoico es utilizado como preservativo e inhibe a
mohos y bacterias.14
Esta es la primera investigacin que reporta el contenido de trans-resveratrol y los
componentes del aroma de vinos producidos en el Per.
CONCLUSIONES
El anlisis de la composicin qumica de los vinos peruanos evaluados mostr una
concentracin de fenoles totales dentro del rango de 2374,25 a 3610,43 mg/L; una
concentracin de flavonoides totales de 1869,19 a 3138,85 mg/L, y una
concentracin de antocianinas totales de 102,64 a 317,50 mg/L. En general, los
vinos tintos presentaron un mayor contenido de compuestos fenlicos y mayor
actividad antioxidante que los vinos rosados. Se ha podido detectar por medio de
HPLC la presencia del compuesto transresveratrol en 6 de los 8 vinos peruanos
evaluados. El vino Tabernero (Malbec-Merlot) contiene la mayor concentracin de
dicho compuesto (0,56 0,03 g/mL) y adems, es el que presenta la mejor
actividad antioxidante en el test de DPPH. En el anlisis del aroma de los vinos por

GC-MS se encontr que los compuestos voltiles que estn en mayor concentracin
son el cido srbico, feniletanol, cido propanoico y etil-succinato. Esta metodologa
podra ser usada como un elemento adicional para el control de calidad de los
vinos.

AGRADECIMIENTO
Al Dr. Francisco Medina-Bolvar del Arkansas Biosciences Institute, Arkansas State
University por la donacin del estndar trans-resveratrol.

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CUANTIFICACION DE RESVERATROL EN VINOS

MEDIANTE HPLC

Atma-Sol Bustos;a cJuan C. Calisaya;a c Carolina Paredes;a c Gimena

Duran;b Marco Taquichiri;b Juan A. Alvarado;a J. Mauricio Pearrieta;ac
Centro de Investigaciones en Qumica de Alimentos, Carrera de Ciencias Qumicas,
FCPN, UMSA, La Paz - Bolivia,
b
Departamento de anlisis CEANID, Departamento de Fsica UAJMS, Tarija - Bolivia,
c
Instituto de Investigaciones en Productos Naturales (IIPN), Carrera de Ciencias
Qumicas, Universidad Mayor de San Andrs, Calle Andrs Bello y Calle 27 Cota
Cota, Edificio FCPN, 2 piso, La Paz- Bolivia.
a

*Corresponding author:atma_sol@hotmail.com
Accepted: 12/11/12
Published: 09/12/12

ABSTRACT
Resveratrol, a phenolic compound, was quantified in wines from Tarija - Bolivia by a
method by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The
method was validated considering parameters such as standard deviation (S),
coefficient of variation (CV), linear correlation coefficient (R), limit of detection
(LOD) and limit of quantitation (LOQ). The amount of resveratrol found in the wines
analyzed is somewhat high compared to vales reported worldwide, giving an
average of 7.7 0.9 mg/L.

RESUMEN
El Resveratrol, un compuesto fenlico, fue cuantificado en vinos procedentes de
micro vinificacin en Tarija -Bolivia mediante un mtodo por cromatografa Lquida
de Alta Resolucin con siglas en ingls HPLC en fase reversa. El mtodo fue
validado considerando parmetros de desviacin estndar (S), coeficiente de
variacin (CV), coeficiente de correlacin lineal (R), lmite de deteccin (LOD) y
lmite de cuantificacin (LOQ). La cantidad de resveratrol hallada en los vinos
analizados es algo elevada comparada con valores reportados a nivel mundial,
dando como promedio 7,7 0,9 mg/l
Keywords: Resveratrol, Vinos, HPLC.

INTRODUCCIN
En los ltimos aos muchos estudios han demostrado que el consumo moderado de
vino es beneficioso para la salud, relacionndolo con la prevencin de trastornos
degenerativos como la enfermedad de Alzheimer o demencia senil entre otros [1]
[2] [3] [4]. El compuesto vinculado con estos efectos es el resveratrol [2] [3] [4].
El resveratrol, un compuesto fenlico categorizado como fitoalexina, se encuentra
en mayor cantidad en races de Polygonum cuspidatum, planta utilizada en oriente
contra males cardiovasculares [5] [2]; tambin se encontraron en uvas y en
productos producidos con stas como el vino [3] [4] [6]; otras fuentes de obtencin
son el cacao y sus derivados, pistacho, granulados de lpulo (en la cerveza se
encuentra en muy poca cantidad), granos de man y en mantequilla de los mismos,
arndano y otros [2] [6] [7]. El ismero hallado con mayor frecuencia es el trans
- resveratrol [2]. Usualmente, se encuentra acompaado de su derivadoglicosilado
(trans - piceado).

Estos compuestos se encuentran significativamente en los vinos tintos. La

concentracin de estos compuestos en el vino depende de varios factores, como
son la variedad de uva, las condiciones del suelo, el clima, la radiacin UV y otros
[2]. Por estas razones se propone la hiptesis de que los vinos producidos en
Bolivia (vinos de altura) presentan mayor contenido de resveratrol, lo que impulsa a
que esta variable sea investigada en los mismos. La tcnica analtica escogida para
realizar este anlisis fue la del HPLC debido a que sta es rpida, reproducible,
confiable y no necesita gran cantidad de analito en comparacin con tcnicas
clsicas [8]. Dependiendo del detector que presenta el equipo HPLC (DAD o UVVIS) la interpretacin de los espectros vara ligeramente, por lo que en el presente
trabajo se tomaron en cuenta ambos casos haciendo uso de dos diferentes equipos
de HPLC: Agilent (con detector DAD) y Perkin Elmer (con detector UV-VIS). Al
mismo tiempo de indicar la metodologa utilizada para interpretar los espectros se
da a conocer el tratamiento estadstico mnimo que validad el mtodo de HPLC
empleado.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
Curva estndar y validacin del mtodo de HPLC empleado:

La curva estndar promedio es la siguiente:

Los parmetros que validan el mtodo son los presentados a continuacin:

El CV recomendado es entre 1 y 20 % [2]. Nuestro valor se encuentra dentro de lo

permitido. El bajo valor de variacin se debe en su mayora al manipuleo humano
ya que las mediciones que realizan este tipo de equipos no presentan grandes
errores, por lo general el CV de lectura de un HPLC suele ser entre 1 y 2 % [2]. El
valor de R es superior a 0,999 que es el rango aceptable propuesto [2] [9]. El valor
de LOD encontrado est por debajo del hallado por Lamuela-Ravenotos et al. en
vinos, quien report un LOD de 3 ppm [2] lo que indica una mayor sensibilidad del
equipo.
Identificacin de resveratrol en vinos mediante HPLC:
A continuacin se muestra, mediante cromatogramas, las dos maneras de
cuantificar resveratrol en vinos: por comparacin con el tiempo de retencin del
patrn (Figura 2) y por el mtodo de adicin estndar (Figura 3) dependiendo del
detector del equipo HPLC

Como se ve en la Figura 3, bajo este mtodo es factible la identificacin de

compuestos. Muchas veces no es suficiente comparar el tiempo de elucin debido a
que este puede salir ligeramente diferente cuando se analizan muestras complejas,
o en todo caso puede ser confundido con la seal de otro analito por su proximidad
a la seal deseada, bajo este mtodo se aclara el espectro y se puede hacer la
correspondiente integracin del pico.

Cuantificacin de resveratrol en vinos mediante HPLC: Realizando la

correspondiente integracin se obtiene:

Los valores obtenidos son superiores al lmite de cuantificacin del HPLC empleado
en este anlisis cuantitativo (ver Tabla 1), a pesar de que el parmetro de lmite de
cuantificacin aun est en discusin por la comunidad cientfica, nos da cierta
confiabilidad en el anlisis realizado. Para comparar los resultados con otras
regiones del mundo se disea la siguiente tabla:

Como se observa en la Tabla 3, el valor promedio de resveratrol en vinos tintos en

Bolivia es algo elevado en relacin a otros pases. Sin embargo, es necesario
realizar mayor cantidad de mediciones y ampliar de universo de muestras para
poder sacar conclusiones significativas.

SECCIN EXPERIMENTAL.
Reactivos.
Resveratrol fue comprado de ChromaDex (Irvine, CA, USA).y metanol grado HPLC
de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Mtodo HPLC.

El compuesto Resveratrol fue separado utilizando un HPLC Agilent que contiene un

desgasificador (G1322 A), un sistema de suministro de solvente (QuatPumpG1311A) una ALS autoinyector (ALS G1329A), un horno de columna (Colcom G1316A) y un detector de arreglo de diodos (G1315B). Por otro lado, se utiliz un
equipo HPLC Perkin Elmer Total Chrom (v6. 2.0.0.1), que cuenta con un
degasificador, bomba cuaternaria, autoinyector, horno de columna y detector
mltiple de UV/Vis (series 200), del Centro de Anlisis Investigacin y Desarrollo
CEANID de la ciudad de Tarija. En ambos equipos se utiliz una columna de fase
reversa Kromasil 100-5C18 (250 x 4,6 mm) protegida por una pre-columna de 10
mm (Scantec Lab, Svedalen, Suecia).
El mtodo empleado es el presentado por Pearrieta et al., 2011 [9]. El volumen de
inyeccin es de 20 l y el flujo de 0,8 ml/minuto. La temperatura de la columna se
mantiene constante a 25 C.
Para la fase mvil se utiliza un sistema de flujo binario que consiste en:
Solvente A: 1% de cido actico/agua
Solvente B: Metanol
El tiempo de elusin es de 17 minutos bajo el siguiente gradiente:

La longitud de onda a la que se trabaja es de 310 nm considerando que este

corresponde al mximo de absorbancia de la molcula de resveratrol.
El software empleado para controlar el equipo HPLC Perkin Elmer es el TotalChrom
Workstation, versin 6.3. Y para controlar el HPLC Agilent se utiliza el Chemstation
Revisin B.04 2009.
Curvas estndar.
Las curvas estndar son preparadas con soluciones de diferente concentracin de
resveratrol patrn disuelto en metanol.
Al considerar el rea de los picos obtenidos se tienen las ecuaciones que rigen el
comportamiento del rea del pico respecto a la concentracin.
Otra utilidad que se les da a las soluciones patrn es que la seal emitida por stas
indica el tiempo de elucin caracterstico de cada compuesto segn el mtodo
empleado, por lo que facilita la deteccin del compuesto en una muestra.

Validacin del mtodo en HPLC.

Para esto se realizan 4 curvas estndar en el HPLC Agilent. Con estos valores y
mediante mtodos estadsticos calculados por Microsoft Excel se puede obtener
reproducibilidad, linealidad, lmite de deteccin y lmite de cuantificacin.
Reproducibilidad.
Para evaluar este factor en el HPLC se inyectan 4 soluciones de resveratrol disuelto
en metanol a 75 ppm. La reproducibilidad o precisin se expresa como la desviacin
estndar (S) o el coeficiente de variacin (CV) [10].
Linealidad.
La linealidad se determina mediante la inyeccin de las siguientes 5
concentraciones de soluciones de resveratrol en ppm: 10, 25, 50, 75 y 100. Para
cada concentracin se realiza cuatro medidas que posteriormente son promediadas
para construir la curva de calibracin y obtener el coeficiente de correlacin lineal
(R).
Lmite de Deteccin (LOD) y Lmite de Cuantificacin (LOQ).
El lmite de deteccin del analito es aquella concentracin que proporciona una
seal en el equipo significativamente diferente a la del blanco. En trminos
prcticos, es la concentracin de analito que proporciona una seal igual a la
emitida por el blanco ms 3 veces la desviacin estndar del mismo [10]. Haciendo
las consideraciones adecuadas, este valor se puede obtener a partir de la ecuacin
lineal y los errores asociados a la misma [10].
El de cuantificacin es el lmite inferior para medidas cuantitativas precisas. El LOQ
se considera igual a la seal del blanco ms 10 veces la desviacin estndar del
blanco [9], pero de igual manera que el LOD, puede ser hallado a partir de la
ecuacin lineal que proporciona la curva estndar [10].
Identificacin de resveratrol en vinos mediante HPLC.
En el caso de contar con un detector arreglo de diodos (DAD), las seales emitidas
por el resveratrol pueden ser identificadas directamente del espectro obtenido del
HPLC, donde se puede observar sin ningn problema el espectro UV-VIS de cada
componente separado mediante el equipo.
Cuando slo se tiene un detector UV-VIS el resveratrol presente en los vinos se
identifica por comparacin con el tiempo de retencin del patrn (cosa que tambin
se hace con el DAD) y por el mtodo de adicin estndar que consiste en dopar la
muestra, es decir, se le agrega una solucin de resveratrol al vino para despus
observar cul es el pico que se incrementa y as poder asegurarnos que es el
compuesto buscado.
Cuantificacin de resveratrol en vinos mediante HPLC.
En el presente trabajo se analizan 9 tipos de vinos obtenidos de una
microvinificacin realizada el 2011 por el departamento de fsica de la Universidad
Autnoma Juan Misael Saracho (UAJMS), los cdigos de los vinos son 1E0, 2E1,
3E2, 7E0, 8E1, 9E2, 10E0, 11E1, 12E2. El resveratrol presente en cada muestra es
identificado con un detector arreglo de diodos. Una vez identificados los picos se

prosigue a la integracin de los mismos para despus remplazar el rea obtenida de

cada pico en la ecuacin resultante de la curva estndar.

CONCLUSIONES.
El mtodo empleado al ser validado satisfactoriamente demostr ser eficiente para
la determinacin del resveratrol. Los resultados obtenidos sugieren que los vinos
producidos en altura tienen un contenido algo elevado en comparacin con otras
latitudes del planeta, aunque ms estudios son necesarios para establecer esta
diferencia. Enfocndonos en lo que es el equipo HPLC se puede decir que un
detector arreglo de diodos (DAD) es mejor a uno UV/VIS. Con el detector DAD nos
evitamos el trabajo de realizar adicin estndar para la identificacin de picos,
ahorrndonos tiempo y material de anlisis.

RECONOCIMIENTOS
Este trabajo fue financiado por la Agencia de Cooperacin Sueca ASDI.
Las pruebas en el HPLC Perkin Elmer, fueron realizadas en el Laboratorio CEANID de
la Universidad AutnomaJuan Misael Saracho UAJMS de Tarija.

REFERENCIAS
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