Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones

qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles: Una enzima hace

que una reaccin qumica que es energticamente posible, pero que transcurre
a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir, transcurra a
mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las
enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se
convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los
procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas
significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina
reacciones enzimticas.

Las velocidades de las enzimas dependen de las condiciones de la solucin y

de la concentracin de sustrato. Aquellas condiciones que desnaturalizan una
protena, como temperaturas elevadas, pH extremo o altas concentraciones de
sal, dificultan o impiden la actividad enzimtica, mientras que elevadas
concentraciones de sustrato tienden a incrementar la actividad. Para encontrar
la mxima velocidad de una reaccin enzimtica, la concentracin de sustrato
se incrementa hasta que se obtiene una tasa constante de formacin de
producto.

Para la experimentacin se utilizaron 5 frijoles de soya con 15 ml de etanol esto

se hizo porque los frijoles de soya tiene una sustancia llamada ureasa esta
se utiliza mucho como agente cataltico para la medicin cuantitativa de la
urea. El hidrxido de amonio que se forma puede titularse y puede
relacionarse, estequiometricamente, con la cantidad de urea presente en una
muestra. Y el etanol es porque es soluble en alcohol. Al tener eso lo separamos
teniendo el extracto enzimtico ureasa, despus experimentamos el efecto del
pH sobre la velocidad de reaccin, a un tubo este es el blanco, utilizamos urea,
solucin buffer a pH de 4.5, 6, 7.2, 8.5 y 10 tambin agregamos bicloruro de
mercurio e incubamos a 50C y despus agregamos ureasa e igual incubamos
a la misma temperatura por 50 minutos y ahora en el tubo problema
cambiamos las condiciones para agregar bien en este tubo agregamos urea,
solucin buffer a pH ya antes mencionados y lo dejamos incubar a 50C por 5
minutos y pasado el tiempo agregamos ureasa e incubamos a la misma
temperatura por 30 minutos pasados esos minutos agregamos el bicloruro de
mercurio, bien pero porque es diferente el orden de agregado de las soluciones
bien el factor importante es el bicloruro de mercurio ya que es un inhibidor de
la accin de ureasa, este presenta grupos -SH (sulfhdrico), estos son
provenientes de aminocidos de cistena que forman parte de su cadena

peptdica. El bicloruro de mercurio se une irreversiblemente a los grupos-SH y

lo inactiva y as se detiene la actividad enzimtica de la ureasa es por ello que
el en el tubo blanco se utiliza primero este tipo de inhibidor irreversible para
que no actu la ureasa en la urea, despus de tener los tubos problema y
blanco listo pasamos a agregar 2 gotas de rojo de metilo este es un indicador
con cambio de vire es de 4.4 a 6.2 y titulamos con HCL hasta que vire de un
color rojo canela despus de esto se hizo los clculos correspondientes para las
moles de urea hidrolizada/30 minutos y lo datos arrojo que en el pH 7.2 hay
mayor moles de urea esto se debe a que la ureasa tiene un pH ptimo de 7.2
por lo cual en la grfica 1, este valor de pH es mayor con un valor de 115
moles de urea hidrolizada a comparacin de los dems pH restantes.
Quedando como el pH ptimo de 7.2 para un buen efecto en la velocidad de
reaccin. Ahora la estructura tridimensional (estructura terciaria) de una
enzima de origen proteico determina su sitio cataltico y, por lo tanto, su
actividad. Dicha estructura se encuentra estabiliza por una serie de enlaces no
covalentes( hidrofbicos, puentes de hidrogeno, atracciones electrostticas) y
covalente ( puentes de disulfuro) que existen entre los grupos R de los
aminocidos, los cambios de pH modifican las cargas de los grupos R de los
aminocidos que no son neutros(como el asparto, la lisina, la arginina y el
glutamato), e interfieren con las atracciones electrostticas y su estabilidad
estructural tridimensional, lo que provoca una prdida total o parcial de la
actividad enzimtica. Por lo cual cada enzima tiene un pH optimo en relacin
con la actividad. (Quezada mora, 2007)

Para el efecto del tiempo en la velocidad de reaccin para este mtodo se

hicieron igual dos tubos un tubo blanco y otro problema al igual se utiliz para
el tubo blanco urea solucin buffer de pH de 7.2, agua destilada y bicloruro de
mercurio dejamos incubar a 50C, 5 minutos y agregamos extracto de ureasa y
dejamos incubar a la misma temperatura ahora para el tubo problema fueron
las mismas caractersticas del tubo blanco con excepcin de agregar las gotas
de bicloruro de mercurio como ya mencionamos la ureasa es inhibida por
metales pesados que en este caso sera el mercurio, despus de dejarlos
incubar a los 10 minutos se tomaron 3 ml de cada sistema y se les agrego
gotas de bicloruro de mercurio y gotas de rojo de metilo. con lo cual
procedimos a titular con HCl, esto lo repetimos a los 20, 30, 40, 50 minutos ya
al graficar los datos correspondientes del tiempo vs moles de urea
hidrolizada observamos que a los 30 , 40 y 50 minutos la grfica se mantena
estable los moles de urea esto se puede ver en la grfica 2, bien pero porque
a ese tiempo empez a ser estable la concentracin esto se debe a que toda la
reaccin enzimtica no es consumida ni sufre modificacin alguna, de manera
que puede continuar transformando otra molcula de sustrato en producto, por
lo tanto, si se garantiza que la concentracin de sustrato no ser un elemento
limitante esto quiere decir que no se agotara, lo que da que a mayor tiempo de

reaccin, mayor ser la formacin del producto o de la degradacin del

sustrato.(Quezada mora, 2007) as que el tiempo de reaccin ptimo para que
la ureasa pueda hacer su trabajo es de 30 minutos y entre mas tiempo pueda
estar la ureasa mayor producto tendr en esta reaccin.

Ahora para el efecto de la temperatura en la velocidad de reaccin se

realizaron 4 tubos blancos y 4 tubos problemas los tubos blancos contenan
urea, solucin buffer pH 7.2, bicloruro de mercurio e incubamos a diferentes
temperaturas estas son 0C,temperatura ambiente,50C Y 80C por 5 minutos
despus agregamos el extracto de ureasa y volvimos a incubar 30 minutos a
las temperaturas ya descritas, para los tubos problemas tambin se agreg
urea, solucin buffer pH 7.2, dejamos incubar a las temperaturas descritas en
los tubos blancos por 5 minutos, agregamos extracto de ureasa y volvimos a
incubar despus de esto agregamos gotas de bicloruro de mercurio despus
acto seguido separamos 5 ml del tubo blanco y problema para ponerlos por
separado y agregar 2 gotas de rojo de metilo, as para proseguir a titular con
HCl hasta que cambie a un color canela, al tener los resultados
correspondientes la grfica 3 nos muestra que la temperatura ptima para la
enzima es a 50C a la cual es la velocidad de reaccin mxima, a temperatura
por debajo de esta temperatura, la frecuencia de choques entre la enzima y el
sustrato es baja y, por lo tanto, la velocidad de reaccin tambin lo es.
Conforme se incrementa la temperatura, aumenta la frecuencia de choques y
se favorece la velocidad de reaccin (la formacin del producto). Pero, si la
temperatura es muy elevada, puede romperse las fuerzas de van der Waals y
los puentes de hidrogeno que estabilizan la estructura terciaria y cuaternaria
de las enzimas; como consecuencia, se produce su desnaturalizacin y la
perdida de la actividad enzimtica. (Quezada mora, 2007)

Para el efecto de la concentracin de sustrato de la velocidad de reaccin

utilizamos 5 tubos blanco que contenan urea, buffer de fosfatos pH 7.2 agua
destilada, bicloruro de mercurio e incubamos a 50C durante 5 minutos pasado
el tiempo agregamos ureasa ahora para los tubos problemas agregamos en 5
tubos urea buffer de fosfatos pH 7.2 y agua destilada incubamos a 50C por 5
minutos y agregamos ureasa despus volvimos a incubar a la misma
temperatura por 30 minutos despus agregamos el bicloruro de mercurio
separamos las muestras y agregaos gotas de rojo de metilo para titular con HCl
hasta que vire a un color rojo canela. Teniendo los datos y valores hicimos la
grfica 4 de moles de urea vs concentracin inicial de urea en moles/ml ya
que la grfica es de doble recprocos (ecuacin de lineweaver-burk) obtuvimos
la Km donde nos da una idea de la afinidad que tiene la enzima por su sustrato,
cuando es mayor la Km es menor la afinidad esto quiere decir que predomina

las formas de enzima y sustrato libres, pero cuando es menor la Km este es

mayor la afinidad y predomina la especie enzima-sustrato la Km resultante es
de 0.0809 esto quiere decir que hay un predomino entre enzima-sustrato
tambin con esta ecuacin obtuvimos la Vmx, este es una estimacin de
numero de centros activos de la enzima, la Vmx tiene como definicin como la
velocidad que se puede obtener cuando toda la enzima se encuentra unida al
sustrato y esta depende de dos cosas, la cantidad de enzima presente y la
capacidad cataltica del enzima, es decir la velocidad con que transforma al
sustrato. Por lo cual nos dio una Vmx de 0.5808 y est seria la velocidad
mxima en la transformacin del sustrato. Observando que a la concentracin
de 1250 moles/ml de urea es la concentracin ptima para que tenga un
efecto de la velocidad de reaccin, esto se debe a que toda reaccin
enzimtica, si se incrementa la concentracin de enzima, se forma mayor
cantidad de producto por unidad de tiempo. Bien el incremento en la velocidad
de reaccin es directamente proporcional al incremento en la concentracin de
enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante.

Bibliografia.
Silvia Quesada Mora,(2007) Manual de experimentos de laboratorio para
bioqumica. 2Ed Editorial Universidad Estatal. Pginas consultadas 35-47
BECKER. W.M. (2012). Biologa celular y molecular. Primera edicin, Editorial
Pearson Educacin, Mxico. Pags. Consultadas: 176-187