Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Qumica
Grupo: 38
Qumica Orgnica
Laboratorio
Prctica 7: Cromatografa en columna.
Integrantes:
Pastrana Ortega Carlos Alberto.
Pluma Ortiz Valeria Vania.
Profesor: Agustn Palma de La Cruz

2016-1

Objetivos:

Comprender la tcnica de cromatografa en columna, sus caractersticas y

los factores que en ella intervienen.
Emplear la tcnica de cromatografa en columna para la separacin de un
compuesto orgnico.
A travs de cromatografa en capa fina controlar la cromatografa en
columna.

Antecedentes:
-Cromatografa en columna. Para que sirve y sus aplicaciones.
Es el mtodo ms general para la separacin y purificacin de compuestos
orgnicos, slidos o lquidos a escala preparativa. Las aplicaciones prcticas de la
cromatografa se encuentran por ejemplo en la produccin, donde se usa la
cromatografa para la limpieza y aislamiento de sustancias. Por otro lado, en la
analtica qumica se usa la cromatografa para separar mezclas en compuestos
homogneos.
-Cromatografa de adsorcin, de particin o reparto.
La cromatografa de particin, se carateriza por emplear una fase estacionaria
lquida, anclada a un soporte slido, y una fase mvil tambin lquida. Existen dos
tipos de cromatografa de particin: normal o de fase inversa.

Cromatografa normal
La fase estacionaria est constituida por un lquido de carcter polar.
Como fase mvil se emplean mezclas de disolventes apolares
(hexano o ciclohexano), con disolventes polares conocidos como
modificadores polares.
Generalmente se utiliza para la separacin de mezclas de
compuestos muy polares.
La retencin de un soluto se explica en base a la competicin que se
establece entre la afinidad del grupo polar (X) presente en la fase
estacionaria por el modificador polar (P) presente en la mezcla
hexano-P y por los solutos a separar (S); as como a la solvatacin
de estos ltimos por el modificador polar (P) en la fase mvil.
Por lo tanto, la retencin de un soluto aumenta cuanto menor sea la
proporcin de modificador polar en la fase mvil. El orden de elucin
est gobernado por interacciones de tipo polar: los solutos ms
polares quedan ms retenidos.
Cromatografa en fase inversa
La fase estacionaria est constituida por un lquido de carcter
apolar. Como fase mvil se emplean mezclas de agua con
disolventes polares miscibles.

Se emplea generalmente para la separacin de mezclas de

compuestos de polaridad baja y para la separacin de compuestos
de una misma serie homloga.
La retencin de un soluto se explica en base a una adsorcin
preferencial del disolvente menos polar de la fase mvil a la
superficie de las cadenas apolares que constituyen la fase
estacionaria, de manera que se establece un mecanismo complejo
que supone una combinacin de equilibrios de solubilidad (particin
de la mezcla que se cromatografa entre la fase lquida adsorbida a
la fase estacionaria y la fase mvil. Por otra parte, los solutos menos
polares se ven ms excluidos de la fase mvil (efecto hidrfobo) y se
adsorben preferentemente a las cadenas hidrocarbonadas de la fase
estacionaria.
Los compuestos ms polares estarn menos retenidos que los
menos polares.
-Factores que influyen en una separacin por cromatografa en columna.

El dimetro de la columna
La altura de la fase estacionaria en la columna est relacionada con
la diferencia de los valores de R f de los componentes de la mezcla;
adems de estar relacionado con la cantidad de muestra a separar.
Dimetro de la columna (cm)
1
2
3
4
5

Cantidad de la muestra
Rf > 0.2
Rf < 0.2
100
40
400
160
900
360
1600
600
2500
1000

Fase estacionaria
Se recomienda rellenar la columna a una altura entre 15-20 cm de
gel de slice. Para separaciones de mayor dificultad se recomienda
incrementar la altura de relleno hasta 20-25 cm

-Seleccin de eluyentes y adsorbentes para la separacin de compuestos

por cromatografa en columna.
Para elegir el disolvente, previamente se lleva a cabo una cromatografa en capa
fina de la muestra a analizar. El disolvente tiene que conducir a una buena
separacin de los componentes de la mezcla en la placa (R f >0) y situar el
componente menos polar a un Rf aproximado de 0.3. La separacin de una
mezcla en una columna ser poco eficaz si se utiliza un disolvente que site los
componentes a separar a un valor de R f superior a 0.3. Para columnas pequeas
es mejor utilizar un eluyente menos polar que el obtenido del resultado de la placa

Parte Experimental:
-Material

1 Agitador de vidrio

1 Piseta de 125 mL con eluyente

1 Colector
1 Columna para cromatografa

1 Refrigerante para agua con

mangueras
1 T de destilacin

1 Embudo de vidrio

1 Tapn esmerilado

2 Frascos para cromatografa

1 Tubo capilar

8 Frascos viales

2 Vasos de precipitados de 100 mL

1 Matraz redondo de fondo plano de

50mL
1 Pipeta de 5 mL

1 Vidrio de reloj

4 Portaobjetos

2 Pinzas de tres dedos con nuez

1 Probeta de 25 mL

1 Parrilla con agitacin mgnetica

1 Esptula

-Material adicional
1 Lmpara de luz UV onda larga y onda
corta.
1 Cmara oscura para lmpara de luz UV

1 Cmara de yodo

-Sustancias y reactivos
Gel de slice para columna

Acetato de etilo

Gel de slice para cromatografa en capa

fina

Hexano

Yodo

1 Tableta de algn medicamento

Procedimiento.
I. Purificacin del principio activo de un medicamento.
a) Se coloca la columna de cromatografa en un soporte con ayuda de unas
pinzas de tres dedos, de tal forma que se encuentre totalmente vertical y
con una altura al tamao de los frascos viales.
b) Para empacar la columna, se coloca la llave de la columna en posicin de
cerrado (si la llave es de vidrio, se deber engrasar ligeramente). Se

c)
d)
e)
f)
g)

h)

introduce hasta el fondo un pequeo pedazo de algodn con ayuda de una

varilla de vidrio o de metal y se agregan 5 mL del eluyente (AcOEt), se
presiona suavemente el algodn para eliminar las burbujas.
Se prepara una suspensin de slica gel para columna, 6 g en 30 mL de
eluyente y se agita la suspensin hasta que no se observen burbujas de
aire.
Con ayuda de un embudo de vidrio se vierte la suspensin en la columna lo
ms rpido posible y se golpea ligeramente la columna con los dedos para
que el empaquetamiento sea uniforme.
Abrir la llave para eliminar el exceso de disolvente cuidando de no dejar
secar la silica gel, se debe mantener el eluyente aproximadante a 0.5 cm
arriba de la slica.
Pulverizar la pastilla y pesar 100 g e introducirlos en la columna. Se abre la
llave para colectar el eluyente y que se adsorba la muestra aplicada, se
debe tener cuidado de que la columna no se seque.
Marcar los frascos viales a 6 mL y colectar las fracciones (eluatos), verificar
la separacin realizando cromatoplacas (preparar las cromatoplacas y
capilares previamente como la prctica anterior). En cada cromatoplaca
aplicar 4 de sus fracciones y un testigo.
Se eluyen las cromatoplacas en una mezcla del eluyente utilizado y se
observa en cuales fracciones hay presencia del compuesto separado
revelando con una cmara de UV o una cmara de yodo. En cada
cromatoplaca se debe observar el cambio de coloracin de la mancha del
producto principal (a menor concentracin menor intensidad de color).
Manejo de residuos.
D1. Capilares y cubreobjetos
D5. Gel de slice para la
columna
D2. Acetato de etilo
D6. Metanol/acetona
D3. Hexano-acetato de etilo
D7. Papel filtro y muestra
problema
D4. Gel de slice para placa
-Tratamiento.

D1 y D7: Empacar cuidadosamente para incineracin.

D2, D3 y D6: Secar y destilar para recuperar.
D4: Se puede recuperar para usarla nuevamente previo lavado y secado
D5: Cernir, lavar y secar para usarla nuevamente, previo lavado y secado.

Resultados y discusin:
Al momento de realizar la cromatografa de capa fina, se observ que el
compuesto utilizado (cido acetilsaliclico) no eluy durante las primeras 16
fracciones (eluatos). Se realizaron 8 eluatos ms cambiando el eluyente utilizado

anteriormente (AcOEt) en la columna de cromatografa por metanol, con lo que en

las nuevas fracciones 2 y 3 se observ un pequeo desplazamiento de la fraccin
(figura 1 y 2), el cual, comparado con el testigo, se determin que no se trataba del
mismo compuesto y que las fracciones no llegaron a contener el cido
acetilsaliclico.
Datos:
Distancia del
eluyente= 5.5
Distancia de las
muestras=1
Rf (fraccin 2 y 3)=

1
=0.18
5.5

Distancia del
estndar = 3
3
Rf (estndar) = =0.54
5.5

Figura 1

Figura 2

Se sabe que el tiempo en el que eluye un compuesto es fuertemente influido por la

polaridad del compuesto, como regla general, las molculas que contienen grupos
funcionales polares se adsorben ms fuertemente y por tanto emigran con mayor
lentitud por la fase estacionaria con respecto a las molculas no polares. Al
considerar la frmula del cido acetilsaliclico se puede ver que es una molcula
muy polar, debido a la presencia de dos dobles enlaces con un oxgeno y de un
OH. Al ser el acetato de etilo un compuesto con menor polaridad, no tiene la
suficiente fuerza para desplazar al cido acetilsaliclico, por lo que se requiri el
uso de un compuesto ms polar (metanol), el cul, como se mencion
anteriormente, permiti observar un pequeo desplazamiento en dos de las
cromatoplacas. El cido acetilsaliclico se hidroliza fcilmente a cido saliclico y
anhdrido actico (compuestos de los cuales, en presencia de cido sulfrico como
catalizador, se sintetiza el cido acetilsaliclico), por lo que consideramos que lo
mostrado en las cromatoplacas es alguno de estos dos compuestos y no el cido
acetilsaliclico como tal.

cido acetilsaliclico.

Acetato de Etilo.

Metanol.

Al momento de la destilacin, se obtuvieron 8 mL de cuerpo y cola, mientras que,

al tratar de obtener un slido evaporando el lquido de la mezcla de las fracciones
2 y 3, no se logr observar slido alguno, esto debido a que, el cido
acetilsaliclico se solubiliza muy fcilmente en alcohol, al igual que el cido
saliclico y el anhdrido actico, considerndolos como alguno de los productos en
la cromatografa.
Conclusin:
Se logr relacionar ambas cromatografas y sobre todo ver la relacin que existen
entre estas, ya que sin la cromatografa de capa fina, la de columna no estara
completa, mientras que la de capa fina no requiere a la otra. Se reforz el
concepto de la relacin que existe entre la polaridad y el desplazamiento visto en
cada una de las cromatoplacas, adems de que se aprendieron algunas de las

caractersticas del compuesto utilizado (cido acetilsaliclico) as como su

comportamiento con los distintos eluyentes. Se concluye que la cromatografa en
columna requiere de mucha observacin y de informacin previa acerca del
compuesto que se quiere purificar, es un proceso fcil y rpido pero del cual se
llegan a tener algunos problemas si no se lleva a cabo el procedimiento exacto.
Cuestionario:
1. Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografa de adsorcin.
Aplicaciones de la Cromatografa Lquida de Adsorcin en Capa Fina
-Es una tcnica cualitativa que se utiliza para los siguientes fines:
-Monitorizacin de una reaccin, poniendo un punto en el
cromatograma cada cierto tiempo.
-Identificacin de un compuesto, comparando el Rf del compuesto a
investigar con el del compuesto conocido.
-Comprobacin de la pureza del compuesto, comprando la muestra
con el producto puro.
-Eleccin del disolvente adecuado para cromatografa preparativa.
-Anlisis de fracciones recogidas en una cromatografa en columna

Cromatografa Lquida de Adsorcin en Columna

La Cromatografa en Columna se usa slo con fines preparativos,
siendo el mtodos ms general para la separacin y purificacin de
compuestos orgnicos, tanto slidos como lquidos.

2. Diga cul es la diferencia entre una cromatografa en capa fina y la de

columna.
Que en la cromatografa en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en
una capa delgada de un adsorbente (como por ejemplo gel de slice,
almina o celulosa) depositada sobre un soporte plano como una placa de
vidrio, o una lmina de aluminio o de plstico mientras que la cromatografa
en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un
soporte slido adsorbente (fase estacionaria), la muestra que se quiere
separar se deposita en la parte superior de este soporte y el resto de la
columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase mvil)
que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a travs de la
columna.
3. Qu debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para un
compuesto que se purificara en cromatografa en columna?
De acuerdo a la polaridad de la muestra se determina la polaridad del
eluyente y determinar las dems fases que rodean la columna para evitar
que la muestra no se desplace ms de lo necesario o en caso contrario,
que no logre desplazar.

4. Por qu es necesario realizar una cromatografa en capa fina a los eluatos

obtenidos de la columna cromatogrfica?
Porque la cromatografa en columna va de la mano con la de capa fina,
esto para poder observar la separacin y purificacin de compuestos, sin
ella no se tendra completa la cromatografa en columna.
5. Escriba una lista de eluyentes utilizados en cromatografa en columna en
orden de polaridad creciente. Anote su bibliografa.
Orden de elucin de los compuestos orgnicos
Polaridad
Orden de elucin
Tipo de compuestos
Menor
Menor retencin (eluyen
Alcanos
antes)
Alquenos
Dienos
teres
Hidrocarburos
halogenados
Hidrocarburos
aromticos
Aldehdos y cetonas
steres
Aminas
Alcoholes y tioles
Mayor
Mayor retencin (eluyen
Fenoles
despus)
cidos carboxlicos
cidos sulfricos
Fuente: Csk A.G. Tcnicas experimentales en sntesis orgnica. 2ed. Espaa:editorial
sntesis

Bibliografa:
1. Durst H.D. Qumica orgnica experimental. Barcelona: editorial Revert,
1985. PP. 111-13
2. Andrejus Korolkovas, Joseph H. Burckhalter, Compendio esencial de
qumica farmacutica, Editorial Revert, 1983, P. 182
3. Csk A.G. Tcnicas experimentales en sntesis orgnica. 2ed.
Espaa:editorial sntesis, 2002. P.P 176-178, 181-182