ARTCULO

Germn Kaiser
Nicols Mucci
Universidad Nacional de Mar del Plata

Adrin Mutto
Universidad Nacional de San Martn

Produccin de bovinos

bitransgnicos y clonados

para la produccin de leche maternizada

La produccin bovina hoy
El uso de tcnicas biolgicas reproductivas durante los
ltimos cincuenta aos ha provocado un impacto de enorme magnitud en la produccin animal con consecuencias
directas tanto en la calidad como en la cantidad de los alimentos. Hoy en da (2012), se inseminan artificialmente
ms de 100 millones de bovinos en todo el mundo con
el fin de incrementar su produccin de carne y leche. La
inseminacin artificial constituy, en realidad, la primera
generacin de biotcnicas reproductivas usada en programas de mejora gentica en animales y la que cambi drsticamente las posibilidades de produccin de las especies
domsticas. La siguieron la induccin y sincronizacin de
celos asociadas a la inseminacin a tiempo fijo, la utilizacin de la superovulacin y transferencia de embriones, y la
produccin in vitro de embriones. Todas ellas potenciaron
marcadamente el impacto de la inseminacin artificial.
La ltima generacin de biotcnicas reproductivas la
constituye la transgnesis, o sea, la transferencia directa
de genes al nuevo animal. En realidad es una herramien-

ta que va ms all de la mejora cualitativa y cuantitativa

de la produccin, ya que puede convertir a las especies
animales en productores de alimentos con cualidades especiales (nutricuticos) as como productores de componentes medicinales trascendentes para la salud animal
y humana (farmacuticos). La generacin de animales
transgnicos se utiliza para producir ejemplares con mejor performance (crecimiento rpido), como modelos
de estudio en patologas humanas, para la produccin
de rganos compatibles al de un paciente humano que
as lo requiera (trasplante de un animal a un humano),
para la expresin gnica, la regulacin de promotores y
secuencias codificantes as como la generacin de animales para la produccin de protenas de inters. En este
ltimo caso, la produccin de protenas de uso farmacolgico en un sistema de glndula mamaria ciment el
uso del trmino gene-pharming o granja gnica, acuado a
principios de los aos 80. Conejos, ovejas, cabras, vacas
y cerdos transgnicos que expresan protenas para varios
usos fueron desarrollados exitosamente por varios grupos de investigacin. La produccin de biofarmacuticos

De qu se trata?
De insertar en el ncleo de una clula genes que expresen caractersticas deseadas y clonarla luego
para que el animal tenga una propiedad buscada.
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es til para una gran variedad de propsitos: tratamiento

de enfermedades como esclerosis mltiple, hepatitis, fibrosis qustica, varios tipos de cncer, hemofilia, trombosis, desrdenes del crecimiento y para la expresin de
enzimas importantes en la nutricin humana.

Cmo lograr un animal transgnico?

Existen diferentes tcnicas para lograr individuos
transgnicos, pero la ms utilizada a nivel mundial es la
transformacin de clulas somticas con dotacin gentica completa y posterior transferencia nuclear (NT, por
su sigla en ingls). La generacin de individuos transgnicos por NT implica que se toma una clula donante,
se la modifica genticamente y se la transfiere a vulos
(ovocitos) previamente vaciados de su ncleo para reconstruirlos, en un proceso que se denomina clonacin. El
uso de esta tcnica para generar animales transgnicos
asegura que todos los individuos nacidos porten la modificacin gentica. A pesar de esta ventaja, la tcnica no
deja de tener problemas; el ms importante es su baja
eficiencia pues la frecuencia de gestaciones y de anima-

les nacidos es reducida debido al estrs a que son sometidos tanto la clula donante modificada como el ovocito.
La metodologa es altamente demandante, tanto desde el
punto de vista tcnico como econmico.
La clonacin por medio de la transferencia nuclear de
clulas somticas fue el hito que precedi a la transgnesis
animal. El nacimiento de la oveja Dolly anunciado por el
escocs Ian Wilmut en 1997 confirm que poda hacerse
en mamferos lo que el ingls John Gurdon, premio Nobel
de medicina 2012, haba iniciado en la dcada del 70 del
siglo XX en la rana africana Xenopus laevis, y que fue demostrar que era posible obtener individuos genticamente
idnticos a partir de clulas de un animal adulto. A partir
de esto las posibilidades se multiplicaron. La trascendencia
de esta tcnica no slo se basa en permitir multiplicar animales de alto valor productivo o afectivo, sino que a travs
de la inclusin de genes forneos en las clulas donantes
del ncleo se pueden generar animales modificados genticamente para la produccin de protenas.

Buena leche

Desde que el hombre comenz la crianza de animales para mejorar su situacin alimentaria comenz a seleccionarlos mediante
el cruzamiento destinado a transferir
Lactoferrina
los caracteres deseados. Un paso ms
avanzado en la seleccin dentro de una
especie es la incorporacin a esta de
genes de inters presentes en otra. Esta
Funcin principal
alternativa ha sido posible mediante la
ingeniera gentica. Estos organismos
genticamente modificados, comnmente denominados transgnicos, son orCapturar 2 iones Fe+
ganismos vivos a los que se ha insertado
o eliminado gen o genes de su repertorio gentico, generando as un animal
con nuevas caractersticas fenotpicas de
utilidad para los humanos.
La insercin de genes que modifiMetabolismo del hierro
Funciones secundarias
quen la produccin, particularmente
de la leche, que constituye el 30% de
las protenas consumidas por el hombre, es la forma ms conocida de uso
Inmunomodulador
Antiparasitario
de esta biotecnologa. La leche de vaca
carece, en forma total o significativa, de
Odontognesis
Antiviral, antifngico y antibacteriano
algunos componentes importantes de
la leche humana como es el caso de dos
protenas: la lactoferrina y la lisozima
Inhibidor de proteasas
Promicrobiano
C. Introducir los genes necesarios para
producir estas protenas humanas en la
Granulopoyesis
Antitumoral
leche de vaca es muy relevante por los
efectos sobre la salud de la poblacin
Figura 1. Roles de la lactoferrina, adaptado de Farnaud y Evans, 2003.
que un producto animal as acarreara.
14

ARTCULO
La secrecin lctea de las glndulas mamarias de los
mamferos es un lquido de composicin compleja cuyo
propsito natural es la alimentacin de la cra durante los primeros meses de vida. La composicin porcentual promedio de las leches de las diferentes especies de
mamferos vara en el contenido proteico, lipdico y de
azcares. Las principales protenas en la leche son las casenas y entre ellas las ms ubicuas en la leche de los
bovinos son las beta-casenas, que en humanos se hallan
en menor concentracin. Estas protenas actan sobre
el neonato como fuente de aminocidos, los ladrillos a
partir de los cuales se construyen las protenas. Hay otras
protenas que se encuentran en las leches y que presentan variacin en las diferentes especies de mamferos son
la lactoferrina, la lactoperoxidasa y la lisozima. Esta ltima est presente en la leche humana y en la de otras especies. En los bovinos su actividad es indetectable, pero
en cambio son muy activas en el humano donde tienen
propiedades antibacterianas de amplio espectro. Asociada con la lactoferrina, por ejemplo, es efectiva contra la
bacteria Escherichia coli, responsable del sndrome urmico
hemoltico y la salmonella.
Por otro lado, la lactoferrina interviene activamente
en el metabolismo del hierro y pertenece a la familia de
las transferrinas, capaces de combinarse con iones frricos para neutralizar su toxicidad (molculas que capturan iones). Esta protena es de suma importancia para el
neonato humano ya que es la responsable del ingreso de
hierro al organismo y, debido a los receptores presentes
en la superficie de las clulas del intestino (enterocitos),
su actividad es especie especfica. Si bien an restan por
aclarar muchos aspectos acerca de los mecanismos de
accin exactos de esta protena, se ha demostrado que
es fundamental en los procesos de defensa del husped
ante patgenos. Posee, adems, otras funciones secundarias (figura 1) actuando como agente antibacteriano,
antifngico, antiviral, promotor de la odontognesis y
de la maduracin de las clulas del epitelio intestinal.
Promueve el crecimiento de especies de Bifidobacterium,
bacterias que predominan en la flora intestinal de los
infantes y actan en los procesos inflamatorios e inmunes. La lactoferrina es importante en el sistema inmune, donde acta como inmunomodulador reduciendo la
respuesta inflamatoria de modo dosis dependiente frente
a un posible dao en el tracto digestivo.
Hasta el da de hoy, el modelo de transgnesis en glndula mamaria se utiliz para la produccin de protenas
recombinantes humanas, por ejemplo, a-antitripsina, el
factor IX, la antitrombina III y las inmunoglobulinas. A
quienes trabajamos en el Laboratorio de Biotecnologa
Aplicada a la Reproduccin Animal del IIB-INTECH perteneciente a la UNSAM y el Laboratorio de Reproduccin
Animal del INTA Balcarce se nos ocurri que estbamos
en condiciones de elevar el valor nutricional a la leche
bovina. La razn es simple: el humano es la nica especie

Figura 2. Ternera bitransgnica (Rosita ISA) a los cuatro meses de edad.

Nuevas tcnicas de ingeniera

gentica en transgnesis

esde el nacimiento de Dolly (el primer mamfero clonado)

hasta la fecha, se han generado cientos de animales
modificados genticamente, los cuales contienen genes no
propios de una amplia variedad de funciones, farmacutica,
industriales, salud y aquellos que benefician la nutricin
humana. Si bien en China existen vacas transgnicas para
lactoferrina y lisozima humanas, a diferencia de Rosita
ISA, estas protenas se encuentran en animales diferentes.
El logro generado por la UNSAM y el INTA de Balcarce se
basa principalmente en la utilizacin de nuevos mtodos de
ingeniera gentica para generar animales multitransgnicos
en un solo sitio de modificacin del ADN, con lo que conllev
a obtener una vaca que expresa dos protenas humanas que
eleven el valor nutricional de la leche bovina en un solo paso.

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Produccin paso a paso

de la ternera doble transgnica

Se obtuvo el primer bovino capaz de generar en su leche dos

protenas de inters nutricional para infantes humanos.
Clonacin por transferencia nuclear

Generacin de una clula transgnica

1

Genes humanos
Con mtodos de ingeniera
gentica se prepar un
vector portador de los dos
genes humanos de inters.

Muestra
Se seleccion
una vaca Jersey
como especimen
a clonar. Se tom
una muestra de
piel del pabelln
auricular.

Cultivo
La muestra de piel
se proces en
laboratorio
y se estableci un
cultivo primario
de clulas llamadas
fibroblastos.

Fibroblastos

Ovocito

Ovocito
Se obtuvieron ovocitos
de vacas faenadas
y fueron madurados
in vitro en estufa de cultivo.

Enucleacin
Mediante micromanipulacin
se extrajo el ncleo del ovocito,
eliminando de este modo
toda su informacin gentica.

Transferencia nuclear
Se incorpor la clula
transgnica al ovocito y
se fusionaron con un pulso
elctrico. El ncleo del
ovocito se transform en
ncleo embrionario y se
gener un embrin.

Ncleo

Vector
con genes
4

transfectado con
el vector. El material
gentico fue
arrastrado hacia el
ncleo de las clulas.

Clula
transgnica

Transferencia del embrin

y gestacin
8

Vientre
Luego de siete
das en cultivo,
el embrin fue
transferido a una
vaca receptora,
sincronizada con
la edad del embrin,
para continuar su
gestacin.

Transgnesis
El cultivo de
fibroblastos fue

Clula
transgnica

Nuevo
ncleo
Ovocito

Embrin
transgnico

Nacimiento y control
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Rosita ISA
Nueve meses despus
naci por cesrea.
Durante sus
primeros meses
de vida recibi asistencia
y cuidados especiales.
Rosita ISA adulta

Verificacin
A Rosita ISA le realizaron
anlisis que certificaron el
xito de la transgnesis y
la clonacin. Porta en su
genoma los dos genes
humanos de inters.
10

Funcionalidad
Todo indica que, al madurar,
Rosita ISA debera
producir naturalmente
leche con las protenas
humanas lisozima
y lactoferrina.

Reproduccin
Por la forma en que se realiz
la transgnesis, los dos genes humanos
quedaron incorporados al genoma de
Rosita. Esto indica que su descendencia
podra heredar esos dos genes.

Hija natural de Rosita ISA

Fuente: Revista RIA, INTA.

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ARTCULO
que consume leche siendo adulto y que ingiere leches de
otras especies; de ellas, la ms consumida en el mundo es
la leche de vaca. Esto la hace deficiente nutricionalmente para los neonatos que no cuentan con leche de sus
madres. La idea es introducir los genes de inters, por
primera vez en el mundo, en un bovino de raza Jersey.

Otra vaca argentina

Se utiliz un concepto innovador en el que el vector
(vehculo gentico) construido por mtodos de ingeniera
gentica permiti la expresin de dos protenas humanas
en un mismo ARN mensajero (los organismos eucariotas
en su gran mayora expresan una protena por cada ARN
mensajero) y, adicionalmente, se lograron optimizar los
procesos de insercin (transfeccin) en lneas celulares reduciendo el nmero de inserciones necesarias para la produccin de dos protenas al mismo tiempo. El desarrollo de
esta tecnologa, que se cuenta rpido pero que llev meses
de prueba y error, constituye una importante plataforma
para el desarrollo de nuevos trabajos mediante la inclusin
de otros genes al genoma bovino. A raz de estos resultados,
la Argentina se ha posicionado en el mundo como lder en
biotecnologas aplicadas al mejoramiento gentico animal.
La ternera fue bautizada como Rosita ISA por el acrnimo entre INTA y San Martn. Esta ternera posee la ca-

LecturAs suGeriDAs
DUNN D et al., 2005, Foundation review: Transgenic
Animals and their impact on the drugs discovery
industry, Drug Disc Today, http://www.sciencedirect.com/
science/article/pii/S1359644605034525.
PALMA G, Biotecnologa de la reproduccin,
http://www.reprobiotec.com.ar.

pacidad de producir leche con dos enzimas humanas, las

ya mencionadas lisozima y lactoferrina, elevando el valor
nutricional para los seres humanos (figura 2).
El nacimiento de esta ternera, que produce leche bovina con el agregado de dos protenas de alto valor en
cuanto a la prevencin de enfermedades del tracto digestivo de los lactantes, tiene una aplicacin inmediata, que
es la posibilidad de una mejora en la calidad de vida de los bebs
que por alguna razn no pueden acceder a la leche materna. Esto, sin
embargo, es solo el comienzo; es necesario an discutir
acerca del uso de este tipo de tecnologas y sus productos para la nutricin humana. Mientras se da este debate se debe notar que una ventaja de producir protenas
eucariotas recombinantes en animales transgnicos es la
posibilidad de realizar modificaciones postraduccionales en individuos donde los sistemas de expresin, tanto
bacterianos como levaduras, es deficiente o directamente
no existe, lo que hace a sus productos no funcionales.
Para estos individuos la incorporacin de las protenas a
travs de la leche significa una solucin sencilla y de fcil
acceso. Esto, a su vez, nos lleva al tema de los costos; producir estos animales modificados es, en inversin, muy
inferior al costo de sistemas de produccin en clulas
eucariotas en cultivo. Adicionalmente, al utilizar esta tecnologa como plataforma productiva, se tiene la posibilidad de cubrir altas demandas de protenas tanto de uso
medicinal como nutricuticas con un escaso nmero de
animales en produccin.

Adrin Mutto
Doctor en biotecnologa y biologa molecular, Universidad
Nacional de San Martn.
Jefe de trabajos prcticos, UNSAM.
Jefe del Laboratorio de Biotecnologa Aplicada a la
Reproduccin Animal, IIB-INTECH.
amutto@unsam.edu.ar

SCOTT G, Developmental biology, http://www.ncbi.nlm.

nih.gov/books/NBK9983/.
SeNGer PL, Pathways of pregnancy and parturition,
http://www.2shared.com/document/hzE9k2tI/Pathways_
to_Pregnancy_and_Part.html.

Germn Kaiser
Mster en produccin animal, Universidad
Nacional de Mar del Plata.
reproduccion@balcarce.inta.gov.ar

Nicols Mucci
Mster en produccin animal, UNMDP.
nmucci@balcarce.inta.gov.ar

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